CC BY
10
дет до 2 см от верхнего края окиси алюминия. Далее пластинку сушат при комнатной температуре до полного удаления растворителей (отсутствие запаха) и проявляют в эксикаторе в парах йода (30 мин.). Репеллент в пробе устанавливают по наличию пятна на хроматограмме с соответствующим Количество репеллента в пробе определяют сравнением размера и интенсивности окраски полученного пятна со стандартным. Для повышения точности определения интенсивность окраски пятен рекомендуется сравнивать при просвечивании на ультрахемископе.
При исследовании смывов с кожи или какой-либо другой поверхности пробу, снятую ватным тампоном (0,5 г), заливают 5 мл ацетона и из полученной вытяжки отбирают пробу для хроматографирования по описанной выше методике.
Содержание репеллента в пробе (в мг):
д А-Б-К 4 0,01 »
где А — объем ацетонового раствора биологического материала смыва (в мл)\ Б — содержание репеллента в стандартном пятне, размер и окраска которого соответствуют исследуемой пробе (в мг)-, К — степень извлечения репеллента.
ЛИТЕРАТУРА
А х р е м А. А., Кузнецова А. И. Тонкослойная хроматография. М., 1964.
Поступила 15/1V 1971 г.
УДК 615.91.015.35.076.9
ОБ ОПРЕДЕЛЕНИИ ПОРОГОВ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ МЕТОДОМ «ЖИВЫХ ЭЛЕКТРОДОВ»
Канд. биол. наук С. В. Сперанский
Научно-исследовательский санитарный институт, Новосибирск
Определение порога однократного действия ядов при ингаляционных затравках является важным элементом токсикологического эксперимента. Около 2 десятилетий наиболее универсальным методом установления порога токсического действия был метод, предложенный Е. И. Люблиной (по изменению характеристик сгибательного рефлекса у кроликов). Он апробирован на громадном экспериментальном материале. В 1962 г. нами был предложен метод определения периферической двигательной возбудимости с помощью «живых электродов».
Многочисленные исследователи и, в частности, Ю. Н. Уфлянд отмечают чрезвычайную вариабельность порогов раздражения двигательных нервов и мышц электрическим током. Подобная вариабельность в значительной мере объясняется трудностью соблюдения постоянства условий при обычном способе измерения возбудимости, когде электроды (или же один активный электрод) располагаются в «двигательной точке», в непосредственной близости от возбудимого объекта. В этом случае даже небольшие перемещения электродов, изменения степени их прикасания, влажности и т. п. резко меняют условия прохождения тока именно в районе раздражения, что приводит к симуляции значительных (иногда в десятки раз) колебаний возбудимости.
Идея предложенного нами метода заключается в том, что для уменьшения возможности артефактов следует не искать двигательные точки, а напротив, удаляться от них, с тем чтобы силовые линии электрического тока сами находили путь к возбудимому объекту в соответствии со стабильными анатомическими особенностями животного. Метод разработан на кроли-
ках. Участками тела, наиболее удаленными от эффекторных двигательных элементов, являются, очевидно, верхушки ушей животных. Оба свинцовых электрода, симметрично прилегаемых к верхней трети ушей животных, сделаны максимально широкими, типа «индифферентных». Можно было предполагать, что плотность тока в месте приложения таких электродов будет невелика и порог раздражения двигательных элементов где-то в районе основания ушных раковин будет ниже, чем порог рефлекторной реакции. Экспериментальные данные подтвердили это предположение. При описанном способе раздражения наблюдалось 2 основных типа пороговых двигательных реакций — вздрагивание мускулатуры в области шеи или же движения ушных раковин (также типа вздрагивания).
Нерефлекторный характер обеих реакций доказывался очень простым способом. Кроликов убивали в станке посредством газовой эмболии. Реакции описанного типа после остановки сердца и полного прекращения рефлекторных реакций сохранялись в течение десятков минут, причем порог их значительно медленнее возрастал при раздражении продолжительными импульсами, чем кратковременными (картина, характерная для изменений возбудимости периферических нервов после клинической смерти животных). Таким образом, свинцовые электроды действительно выступали в роли индифферентных. Активными же электродами, т. е. проводниками, непосредственно подводящими ток к возбудимому объекту, являлись уши животного, его живые ткани (отсюда и название метода «живых электродов»).
Так как поверхности индифферентных свинцовых электродов весьма значительны (15—20 см2), сопротивление в месте их приложения невелико и участки контакта свинца с поверхности кожи не являются «узким» местом для электрического тока. Большее или меньшее прижатие свинцовых пластинок к коже, небольшие колебания в их положении, различия во влажности прокладок могли лишь незначительно изменять режим тока в местах раздражения. Все это приводило к значительно большей стабильности результатов, чем при определении возбудимости в «двигательных точках».
На 5 веществах (диэтилбензоле »—ДЭБ, металлилхлориде — МАХ, окиси мезитила — ОМ, этиленхлоргидрине — ЭТХГ и дихлордиметиловом эфире — ДХДМЭ) мы определили пороги токсического действия по методу Е. И. Люблиной и по предложенному нами методу «живых электродов». Каждое из веществ было испытано на 4—6 кроликах. При воздействии каждой концентрации яда показатели по обоим методам определялись динамически с интервалом в 5 мин. Общая продолжительность каждой затравки составляла 40 мин. Токсический эффект оценивался путем сравнения данных с контрольными определениями (без воздействия яда).
Следует отметить значительно меньшую вариабельность величин порога двигательной реакции (метод «живых электродов») по сравнению со «временем рефлекса» и «силой рефлекса» (метод Е. И. Люблиной). В первом случае размах колебаний показателя в контрольных опытах не превышал 5—10% средней величины, во втором составлял 20—30%, а в третьем достигал 40—50%. Отличия связаны, по-видимому, с характером исследуемых показателей (нерефлекторные реакции стабильнее рефлекторных).
Результаты определения порогов представлены в таблице.
Отличие ряда средних значений ,Ь|П1л от 1 высоко достоверно (Р <
<0,002). Можно с уверенностью говорить о неслучайном характере превышения абсолютных величин пороговых концентраций 5 веществ, полученных с помощью метода Е. И. Люблиной, по сравнению с таковыми, которые определены методом «живых электродов». Как видно из представленного материала, пороги токсического действия, установленные с помощью «живых электродов», хорошо кореллируют с порогами, определенными методом Е. И. Люблиной. Если испытанные вещества расположить в порядке убывания средних величин пороговых концентраций, то 2 ряда, полученные по 2 методам, окажутся тождественными (ДЭБ—<-МАХ—>-ОМ-»-ЭТХГ-*-
Сравнение пороговых концентраций, полученных по методу Е. И. Люблино» (Л) и методу
«живых электродов» (ЖЭ)
Л« кролика ДЭБ МАХ ом этхг дхдмэ
Л
Л ЖЭ Л ЖЭ ЖЭ л жэ л жэ
1 6,0 2,0 0,3 0,1 0,01 0,03 15 8 6
2 2,5 1,0 0,1 0,1 0,06 0,06 20 20 15 9
3 7,5 4,0 0,2 0,1 0,09 0,02 16 7 13 2,5
4 4,0 2,4 0,3 0,05 0,15 0,03 31 24 15 9
5 4,8 1,8 0,1 0,1 0,03 0,01 — _ >35 11,5
6 — — 0,2 0,15 — — — — — —
М 4,96 2,24 0,2 0,1 0,068 0,030 20,5 14,7 14,3 7,7
(без № 5)
Ь1гпжэ 2,2 2,0 2,3 1,4 1,9
П р и м е ч а н и е. Концентрации первых 3 веществ приведены в миллиграммах на 1 л, двух последних — в миллиграммах на 1 л3. Номера кроликов условны: различные вещества были испытаны на разных животных.
-*-ДХДМЭ). Соотношение средних величин пороговых концентраций для испытанных [веществ ) варьирует незначительно и составляет в сред-
нем 2.
Поскольку 5 испытанных веществ относятся к 5 разным классам химических соединений, можно сделать вывод, что оба метода дают ту же (качественно) характеристику действия ядов на нервную систему. При этом метод «живых электродов» примерно в 2 раза более чувствителен, чем метод Е. И. Люблиной. Это значит, в частности, что результаты определения порогов токсического действия методом «живых электродов» можно подставлять в формулы для расчета ориентировочной ПДК вещества в воздухе рабочих помещений вместо величин, предусматривающих оценку порога по показателям сгибательного рефлекса. Для этого только необходимо полученное значение пороговой концентрации умножить на 2.
Преимуществом метода «живых электродов» является то, что работа с ним требует применения специальной аппаратуры. Кроме того, при работе по методу Е. И. Люблиной нередко требуется предварительно отбирать животных, приучать их к станку, в ходе каждого опыта выжидать, пока установится ровный фон определяемых показателей. Величины порогов периферической двигательной возбудимости значительно меньше зависят от случайных факторов, что облегчает и ускоряет проведение экспериментов.
Изложенные соображения позволяют нам рекомендовать определять у кроликов пороги однократного действия ядов методом «живых электродов».
Необходимо подчеркнуть, что рекомендация метода определения порогов токсического действия с помощью «живых электродов» оставляет возможность сопоставления данных, полученных этим способом, с данными, накопленными при работе по методу Е. И. Люблиной. Основой для такого
сопоставления является средняя величина коэффициента V"", равная 2.
ытжэ
Именно научная обоснованность метода Е. И. Люблиной позволила нам на основе сравнения с ним предложить свой вариант исследования кейро-тропных эффектов. Следует, однако, оговориться, что применение коэффициента 2 правомерно лишь для ядов, не оказывающих узко специфического действия на определенный отдел нервной системы. При наличии такого действия совместное использование обоих методов может дать материалы к вопросу о локализации поражений.
В заключение приведем техническое описание подготовки к работе по методу «живых электродов». Два одинаковых электрода овальной формы (меньший диаметр — 4 см, больший — 6 см) приготовляются из толстого листового свинца и перегибаются по меньшему диаметру. К наружной части сгиба подпаиваются тонкие электрические провода, идущие от им-пульсаторов. Провода с электродами укрепляются на универсальном штативе.
Перед началом опыта кролика фиксируют в станке обычным способом. Затем протирают верхние трети ушей физиологическим раствором и обматывают марлей, также смоченной в таком растворе. Поверх марли каждое ухо зажимают свинцовым электродом, после чего с помощью универсального штатива подтягивают провода так, чтобы уши кролика находились в вертикальном положении, не провисая под тяжестью электродов. Поверх электрода и марлевой прокладки надевают резиновый колпачок (его удобно изготовить из большого пальца резиновой перчатки). Колпачок служит для предохранения прокладки от подсыхания и предохранения свинцовых электродов от возможных контактов. Закреплять колпачок удобно с помощью надрезанного вдоль кусочка резиновой трубки.
После этого приступают к определению порогов возбудимости по одной из возможных двигательных реакций (вздрагивание ушей или мускулатуры в области шеи, мигание). Исходные значения порога определяют с интервалом в 3—4 мин., до получения устойчивого фона: 5—6 близких по величине результатов. В ходе действия яда производят определения каждые 5 мин. Параллельно учитывают частоту дыхания кролика (визуально или на кимографе).
Пороги могут определяться при одной или нескольких длительностях импульсов. Последний вариант позволяет регистрировать изменение временной характеристики возбудительного процесса, что, однако, не приводило в наших опытах к существенному повышению чувствительности метода.
ЛИТЕРАТУРА
Люблина Е. И. В кн.: Сборник работ токсикологической лаборатории Ленин-градск. научно-исслед. ин-та гигиены труда и профессиональных заболеваний. Л., 1948, в. 5, с. 51. —С п е р а н с к и й С. В. В кн.: Промышленная токсикология и клиника профессиональных заболеваний химической этиологии. М., 1962, с. 63.— У ф л я н д Ю Н. Теория и практика хронаксиметрии. Л., 1938.
Поступила 30/XI 1971 г.
УДК в 15.47 1: [6 14.71$ + 613.6331-07
РЕГУЛИРУЕМЫЙ ОДНОКАСКАДНЫЙ ИМПАКЮР
Е. П. Вишневский (Ленинград)
Принцип работы. Среди множества известных методов определения дисперсного состава аэрозолей особое место занимают способы, основанные на инерционном осаждении частиц, которые позволяют получать надежные результаты с помощью достаточно простых средств. Для осаждения аэрозольных частиц при этом используется кинетическая энергия, приобретаемая ими в процессе движения совместно с потоком воздуха. Как показано на рис. 1, по выходе из канала частицы, обладая некоторой инерцией, смещаются с линий тока, стремясь сохранить прямолинейное движение, в результате чего они встречают на своем пути преграду и ударяются о нее.
Размер частиц, достигающих преграды, определяется плотностью, а также скоростью воздуха на выходе из канала (У0), диаметром последнего (Э) и отстоянием среза канала от преграды (Б).
