CC BY
15
же, как и в первом случае при исследовании воды. Проведенные нами параллельные исследования отдельных проб пищевых продуктов по методам М. А. Драгомировой и Е. Н. Беляевой убедили нас в достоверности полученных результатов, которые представлены в табл. 3.
Выводы
1. Изучена целесообразность использования метода Е. Н. Беляевой для определения йода в воде и испытана возможность его приспособления для определения йода в пищевых продуктах.
2. Потеря йода в контрольных анализах со стандартным раствором йодистого калия по методу Е. Н. Беляевой была несколько меньше, чем по методу М. А. Драгомировой, и колебалась соответственно от 2,7 до 5,8% и от 3,4 до 6,8%.
3. Параллельное исследование воды на содержание йода по методам М. А. Драгомировой и Е. Н. Беляевой показало, что расхождение результатов находилось в пределах допустимой ошибки анализа от 2,4 до 7%.
4. Определение йода в одних и тех же пробах пищевых продуктов по методам М. А. Драгомировой и Е. Н. Беляевой показало, что расхождение результатов колебалось от 2 до 7,8%, т. е. в пределах допустимой ошибки.
5. Для определения йода в воде и пищевых продуктах можно рекомендовать использование метода Е. Н. Беляевой как наиболее доступного, относительно точного и быстрого.
ЛИТЕРАТУРА
Драгомирова М. А. Труды биогеохимической лаборатории АН СССР, 1944, т. 7, стр. 5. — Она же. Там же, стр. 19. — Беляева Е. Н. Гиг. и сан., 1957, № 6, стр. 72.
Поступила 14/1II I960 г.
•Ь -к it
НЕКОТОРЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ВРЕДНЫХ ВЕЩЕСТВ
Кандидат биологических наук М. Л. Рылова Из Ленинградского института гигиены труда и профессиональных заболеваний
В токсикологической лаборатории института в течение ряда лет разрабатываются методы исследования хронического действия вредных веществ. Основные принципы, из которых исходили при этих исследованиях, развиты Н. В. Лазаревым в докладе на XIII Всесоюзном съезде гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов (1956), в котором было отмечено, что проблема хронического отравления выходит далеко за пределы интересов промышленной токсикологии и становится общегигиенической проблемой.
Большое значение имеют при этом так называемые интегральные методы исследования, так как они позволяют обнаружить наличие сдвигов, которые уже возникли под влиянием яда, но не выявляются при изучении его действия на отдельные легко доступные регистрации функции органов или систем. Эти методы дают возможность оценивать состояние организма в целом (Л. П. Брюллова и М. П. Любимова, 1931; М. Л. Рылова, 1957, 1958). К интегральным методам могут быть отнесены также некоторые методы изучения хронического влияния ядов на центральную .нервную систему (А. А. Голубев, 1958; Е. И. Люблина,
1957, 1959). Очень эффективным оказалось применение некоторых функциональных проб (Е. И. Люблина, 1957а; М. Л. Рылова, 1958а).
Продолжая поиски в указанном направлении, мы попытались определить пригодность для наших целей метода измерения спонтанной суточной двигательной активности животных. В обзорной статье Н. И. Калабухова (1940) приведены многочисленные литературные данные и результаты исследований автора об особенностях суточного ритма двигательной активности различных видов животных, о влиянии ыа этот ритм физиологического состояния организма и факторов внешней среды (освещения, температуры и влажности воздуха, сроков приема пищи и т. д.). Ряд работ, посвященных проблеме суточной мотор ной активности животных и человека, был выполнен под руководством А. Д. Слонима (К. М. Быков, 1949, 1953). Эти работы расширили наши знания о значении для двигательной активности различных условий жизни. Данные работ лабораторий указанных авторов, подтвержденные исследованиями более позднего времени, показали, что качественные и количественные характеристики двигательной активности животных очень лабильны и легко изменяются под влиянием внутренних и внеш них раздражителей.
Для определения чувствительности метода измерения спонтанной двигательной активности нами было проведено несколько серий опытов на белых мышах, подвергавшихся хроническому воздействию таких промышленных ядов, как ацетон, а-метилстирол, октан, спирт и окись углерода в концентрациях, превышающих предельно допустимую для каждого из них лишь в 10 раз1. В первой серии опытов мышей одной из двух групп отравляли по 7 часов ежедневно парами ацетона в концентрации 2 мг/л, другой — парами а-метилстирола в концентрации 0,5 мг/л.
Через 40 дней от начала периода отравлений мы приступали к регистрации двигательной активности животных. Для этой цели была использована методика актографии. В нашем распоряжении имелось 3 барографа, приспособленных для получения актограмм. Каждый пишущий механизм соединяли с легкой клеткой (сделанной из проволочной сетки), размер которой равнялся 10,5X10,5X4 см. Записи колебаний клетки (прикрепленной к отрезку гофрированной трубки) при движениях мыши, находящейся в ней, наносили на движущийся барабан с бумажной лентой. Запись может производиться чернилами или же на закопченной ленте. Барабан совершал полный оборот в течение 24 часов. В клетке находился суточный запас пищи и воды для мыши Опыт проводили одновременно на 3 мышах (по одной в каждой клетке), 2 подвергавшихся воздействию отравления и одной контрольной — в одном и том же помещении, где соблюдали относительную тишину, постоянство освещения и температуры воздуха. Ьарографы и клетки с животными были отгорожены от остальной части помещения ширмой
Приводим 2 актограммы, из которых а — относится к контроль ной мыши, а б — к мыши, в течение Р/г месяцев отравляемой парами а-метилстирола (см. рисунок). Актограммы показывают, что в течение суток движения мыши чередуются с большими или меньшими промежутками покоя. Большая часть общего периода покоя приходилась на ночные часы. При отравлении а-метилстиролом активность жи вотных значительно снижалась не только ночью, но и днем.
В табл. 1 представлены величины суточной двигательной активности для мышей трех групп.
1 К сожалению, автор работал с высокими концентрациями, не представляющими гигиенического интереса. — Ред.
Как видно из табл. 1, подвергавшиеся отравлению мыши были менее активны, чем контрольные- При вариационно-статистической обработке по методу Стьюдента и Фишера (метод описан А. В. Соколовым, 1954) разность средних величин двигательной активности, отно
а
и»»* н I т ни» » финн I ........... Ч"1111 ции^^^с^ т #» ■ «»*>
—'—|—|—'—I—I—I—I—1—I—I—I—I—I_I_I_I_I......|
13 Ч 15 16 17 18 19 го 21 22 23 24 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
часы суток /
уМ"|'И 1ИТ 'ЦПИГ'" '"ЦГ1 'Г1""—
• _I_I_I_I_1_I_I_1_I_1_I_I_I_1_I—I—I—I—I—I—I_I_I
п 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
ча сы суток
Актограмма двигательной активности мышей. а — суточная активность контрольной мыши № 18 (вес 23 г) через 46 дней от начала опыта; б — суточная активность подопытной мыши № 49 (вес 22 г) через 49 дней от начала периода отравления парами д-метилстирола (0,5 мг'л). Продолжительность отравления 7 часов
ежедневно.
сящихся к контрольным животным и к мышам, подвергавшимся хроническому действию паров а-метилстирола, оказалась достоверной1 (Р<0,05 или <5%), а разность средних величин, относящихся к кон-
Таблица 1
Длительность спонтанной двигательной активности белых мышей в течение суток (через 42—61 день от начала экспериментального периода)
Длительность двигательной активности
у мышей, подвергавшихся отравлению
у контрольных мышей
ацетоном а-метилстиролоы
15 часов 32 минуты
16 18
19
20 20 20
8 минут 36 » 26 » 25 » 29 > 54 минуты
14 часов 53 минуты
15 » 23 »
16 » 3 »
17 » 21 минута
18 » 10 минут
19 > 12 »
20 » 4 минуты
11 часов 47 минут
14 > 39 »'
15 » 40 »
16 » 11 »
16 » 42 минуты
16 » 48 минут
17 » 26 »
18 » 51 минута 18 » 55 минут
Всего мышей
трольным мышам и к мышам, подвергавшимся воздействию паров аце тона, — вероятной (Р<10>5% или Р<0,1 >0,05%).
Уменьшение суточной двигательной активности происходило зг счет увеличения числа часов, в течение которых подвергавшиеся отравлению мыши двигались не больше 30 минут за час, и уменьшения числа часов, когда в час движения регистрировались в течение 49—60 минут. По показателю двигательной активности пары а-метилстирола ока зались токсичнее паров ацетона.
Во второй серии опытов чувствительность метода измерения двигательной активности проверяли в экспериментах с хроническим воздей-
ствием паров октана и спирта. Концентрация паров октана составляла 2,75 мг/л, а паров спирта — 11,25 мг/л, это были удвоенные пороговые концентрации. Их определяли в опытах на кроликах по методу Е. И. Люблиной (1948). Концентрация паров октана в этих опытах была несколько ниже 10-кратной предельно допустимой (в пересчете на углерод предельно допустимая концентрация составляет 0,36 мг/л). а концентрация паров спирта несколько выше 10-кратной (1 мг/л).
В этой серии опытов мы сравнивали величины двигательной активности за 20 часов в сутки. Активность животных, подвергавшихся отравлению парами спирта, была меньше, чем контрольных и мышей, подвергавшихся воздействию паров октана.
Таблица 2
Величины двигательной активности белых мышей за 20 часов в сутки через 27—47 дней от начала затравок
№ п/п
Величина двигательной активности
у контрольных нышей
у мышей, подвергавшихся отравлению парами
спирта
2
3
4
5
6
7
8
9
10 11
11 часов 34 минуты
12 » 19 минут
19 минут 37 » 51 минута
14 минут
15 » 36 »
44 минуты 48 минут
10 часов 45 минут
11 » 4 МИНУТ
11 12 12 12 14 14 16 18
4 минуты 1 минута 13 минут 51 минута 28 минут 46 » 51 минута 33 минуты
10 часов 45 минут
11 11 11 12 12 13 13
13
14 14
16 17 » 39 » 20 »
24 минуты 11 минут
25 » 31
7 57
минута минут
Всего мышей
11
Как видно из табл. 2, в контрольной группе было лишь 2 мыши (22,2%), которые находились в движении меньше 124/2 часов (из 20 часов), тогда как среди подвергавшихся отравлению парами этилового спирта таких животных было 6 (54,5%).
Эти данные согласуются с результатами опытов И. В. Олюнина (Е. И. Люблина и И. В. Олюнин, 1957). Здесь следует отметить, что наша работа проводилась одновременно с исследованием И. В. Олюнина и при совершенно идентичных условиях (в том числе при одинаковых концентрациях паров октана и спирта, при одной и той же длительности экспериментального периода, при одинаковой ежедневной экспозиции, в одних и тех же камерах).
В опытах И. В. Олюнина у мышей, вдыхавших пары октана, наблюдалось привыкание к его действию. Это сказывалось в увеличении пороговых концентраций октана, ухудшающих способность центральной нервной системы, мышей суммировать подпороговые импульсы. В то же время мыши, подвергавшиеся воздействию паров этилового спирта, становились более чувствительными к его действию. Как было выявлено И. В. Олюниным, привыкание к парам наркотических веществ, в частности октана, вело к повышению устойчивости животных и к некоторым другим вредным влияниям, а повышение чувствительности к этиловому спирту было связано с пониженной сопротивляемостью организма. Поэтому трудно было ожидать существенного снижения двигательной активности у мышей, вдыхавших пары октана.
В третьей серии опытов метод измерения двигательной активности в течение 18 часов за сутки был применен на мышах, подвергавшихся
действию окиси углерода в концентрации 0,3 мг/л, всего 8—15 дней по 6 часов ежедневно. Полученные результаты показали, что мыши подвергнутые отравлению, были несколько менее подвижны, чем контрольные. Сумма часов с пониженной активностью (не выше 30 минут за час) в подопытной группе была больше, чем в контрольной (соответственно 25 и 15). При действии окиси углерода в концентрации 0,03 мг/л (в тех же условиях опыта) закономерной разницы в активности контрольных и подопытных мышей не отмечалось.
Во всех сериях опытов вес животных, подвергавшихся отравлению, по ходу экспериментального периода мало отличался от веса контрольных животных.
Спонтанную двигательную активность животных можно регистрировать в течение очень небольших отрезков времени. Изучая хроническое действие паров хлороформа в концентрации 0,5 мг/л (10-кратная предельно допустимая), мы применили регистрацию движений белых мышей по методу, предложенному А. А. Голубевым (1956). Отдельную мышь помещали в небольшую клетку, которую подвешивали к отрезку гофрированного шланга, соединенного с мареевской капсулой Последнюю в свою очередь соединяли посредством электрической передачи со счетчиком контактов. Таким образом, колебания клеток, вызываемые движениями животных, автоматически регистрировались счетчиком. Располагая двумя такими установками, мы имели возможность одновременно учитывать двигательную активность 2 мышей — контрольной и подопытной.
По прекращении периода отравлений регистрировали количество движений, произведенных каждой мышью в течение 30 минут. Всего было 9 контрольных и 9 подопытных мышей.
Таблица 3
Количество движений в течение 30 минут у каждой контрольной и подопытной мыши.
Отравление парами хлороформа в концентрации 0,5 мг/л в течение 46 дней
по 7 часов ежедневно
Контрольные мыши 138 210 239 321 340 487 606 727 787
Подопытные мыши . . . 30 58 84 108 166 180 231 245 496
Из табл. 3 видно, что мыши, подвергавшиеся отравлению, были значительно менее активны, чем контрольные. При вариационно-стати-стической обработке полученных данных по методу Стьюдента и Фишера разность средних величин количества движений контрольных и подопытных животных оказалась достоверной.
В результате проведенной работы мы считаем возможным рекомендовать измерение суточной двигательной активности белых мышеи как довольно чувствительный метод при исследовании хронических воздействий промышленных ядов. Этот метод является весьма портативным и не требует дорогостоящих животных и оборудования (М. Л. Ры-лова, 1959).
К- Г. Васильевым и Е. И. Люблиной (1957) для фармакологических исследований был разработан метод учета времени восстановления прямолинейного поступательного движения после кратковременного воздействия на белую мышь радиального ускорения. Последнее создавалось путем вращения мыши в центрифуге в течение 3—15 секунд. Максимальная скорость вращения центрифуги составляла 500—2500 об/мин. при наибольшем числе оборотов длительность вращения мышей была наименьшей. В каждый патрон центрифуги помещали по одной мыши. Одновременно вращали равное количество контрольных и подопытных-животных; мыши, извлеченные из патронов после окончания вращения
5 Гигиена и санитария. № 12
65
центрифуги, не могли сразу двигаться по прямой линии. Они вращались вокруг продольной оси своего туловища или совершали манежные движения (по кругу). Восстановление способности к нормальным движениям наступало в среднем через 6—11 минут.
В настоящее время в нашей лаборатории применяется следующий вполне оправдавший себя режим опыта. Мышей вращают 20 секунд: 10 секунд при включенной центрифуге с максимальной скоростью до 700—800 об/мин и 10 секунд при выключенной центрифуге со зсе убывающей скоростыд. Скорость вращения центрифуги при ее включении не может быть постоянной, так как она не сразу достигает максимума. Описанный метод был с успехом применен Е. И. Люблином и И. В. Олюниным при исследовании повторных и хронических воздействий некоторых наркотических веществ; опыты проводили однократно по прекращении периода затравок.
Метод учета соотношения между силой раздражения кожи голени и силой рефлекторного сгибания лапы кролика, примененный Е. И. Люблиной в 1952 г., оказался довольно чувствительным. Силу сгибательного рефлекса определяли при раздражении кожи голени индукционным током при трех различных расстояниях между катушками, например, 13, 14 и 15 см, т. е. применяли три величины раздражающего тока. Опыт проводился в течение часа. Каждые 10 минут производили раздражения разной силы. Порядок нанесения этих раздражений менялся. Так, если в первые 10 минут величины раздражающего тока располагались в восходящем порядке, то в следующие 10 минут — в нисходящем порядке, и наоборот. Следовательно, за опыт наносили 18 раздражений по 6 для каждой силы тока.
Полученные данные обрабатывали путем вычисления коэффициента корреляции между силой раздражения и силой сгибания или более упрощенными приемами. Этот метод был применен в опытах с хроническим действием паров ацетона, ксилола, окиси углерода. Коэффициент положительной корреляции при обработке данных, относящихся к животным, подвергавшимся отравлению, был ниже такового для величин, относящихся к контрольным кроликам. Этим методом были выявлены изменения в состоянии центральной нервной системы, возникшие в течение первого месяца хронических отравлений окисью углерода в концентрации 0,03 мг/л.
Неоднократное применение перечисленных методов в нашей лаборатории показало их пригодность для исследования хронических воздействий промышленных ядов на центральную нервную систему.
ЛИТЕРАТУРА
Брюллова Л. П. и Любимова М. П. Цит. по Н. В. Лазареву «Бензин как промышленный яд». М.—Л., 1931, стр. 187. — Быков К. М. (ред.) 1) Опыт изучения периодических изменений физиологических функций в организме. М., 1949; 2) Опыт изучения регуляций физиологических функций в естественных условиях существования организмов. М.—Л., 1953, т. 2. — Васильев К. Г., Карев И. С., Лазарев Н. В. и др. Гиг. труда и профзаболевания, 1957, № 2, стр. 19. — Голубев А. А. Труды научной сессии Ленинградского ин-та гиг. труда и профзаболеваний, посвящ. итогам работы за 1956 г. 1958, стр. 231. — Ка лабух о в Н. И. Успехи совр. биол., 1940, 12, в. 1, стр. 1. — Люблина Е. И. В кн.: Исследования в области промышленной токсикологии. Л., 1948, в. 5, стр. 51. — Она же. Тезисы докл. 5-й Ленинградск. конференции по вопросам пром. токсикологии. Л., 1957, стр. 33. — Она же. Международный симпозиум о предельно допустимых концентрациях токсических веществ в промышленности. Прага, 1959, стр. 21. — Рыло в а М. Л. Труды научной сессии Ленинградск. ин-та гиг. труда и профзаболеваний, посвящ. итогам работы за 1955 г. 1958, стр. 190. — Она же. Труды научной сессии Ленинградск. ин-та гиг. труда и профзаболеваний, посвящ. итогам работы за 1956 г. 1958, стр. 226.— Она же. Тезисы докл. научной сессии, посвящ. вопросам мед. обслуживания рабочих химической промышленности. Горький, 1959, стр. 77. ■—Соколов А. В. В кн.: Агрохимические методы исследования почв. М., 1954, стр. 476.
Поступила 15/1 1960 г
■Й- -¡¡Г -А-
