CC BY
41
УДК 615.415-093+615.454
О ПРОБЛЕМЕ ОБЕСПЕЧЕНИЯ МИКОЛОГИЧЕСКОЙ СТАБИЛЬНОСТИ ПРИ РАЗРАБОТКЕ СОСТАВОВ ТРАНСДЕРМАЬНЫХ МАЗЕЙ
Н. А. Парамонова, М. В. Дементьева, С. О. Лосенкова, В. С. Дукова, О. В. Азовскова
Смоленская государственная медицинская академия
Обеспечение микробиологической стабильности является одним из главных вопросов при изготовлении и дальнейшем хранении лекарственных препаратов(ЛП). Оптимальным решением данной проблемы является введение консервантов (в технологии мягкихЛФ - это спирт этиловый, спирт бензиловый, нипагин, нипазол).
В решении проблемы качества выпускаемых лекарственных препаратов (ЛП) не последнее место занимает вопрос, связанный с обеспечением их микробиологической стабильности. Доказано, что в ряде случаев микробиологическая нестабильность выражается в микробном разрушении действующих веществ, снижении их активности, возможном повышении токсичности и пирогенности, изменении технологических и органолептических свойств лекарственных форм (ЛФ). Препараты, загрязненные патогенными микроорганизмами родов Staphylococcus, Pseudomonas, Salmonella, могут вызвать различные заболевания у людей.
По литературным данным, мягкие ЛФ (мази, линименты и др.), не стерилизуемые в процессе производства, нередко бывают контаминирова-ны микроорганизмами, причём количественный и видовой состав микрофлоры, обнаруживаемой в препаратах как аптечного, так и промышленного производства, весьма разнообразен: это споровые палочки, грибы, стафилококки, растительные бактерии, псевдомонады, листерии и др. В отечественной и зарубежной литературе имеются сведения о длительном сохранении и увеличении в процессе хранения числа микроорганизмов в готовых лекарственных средствах (ЛС). Микроорганизмы, присутствующие в мягких ЛФ могут спровоцировать не только разрушение композиции, но и вызвать самостоятельные поражения кожи (грибковые, стафилококковые, аллергические). Интенсивность разрушения ЛФ и веществ, входящих в ее состав, зависит от концентрации микроорганизмов, природы и степени первоначальной контаминации, температурного режима хранения, а также влажности [3].
Трансдермальные мази, относимые ранее к мазям резорбтивного действия, являются представителями трансдермальных ЛФ. В качестве мазевых основ в настоящее время используются различные полимеры как гидрофобной природы (полиэтилен, полипропилен, сополимеры этилена с пропиленом, полиэтиленсилоксаны), так и гидрофильные (производные целлюлозы, поли-этиленгликоли, полиэтиленоксиды, поливинил-пирролидон и др.). В экспериментальной работе нами сконструированы и исследованы мазевые композиции (МК) с мексидолом. Препарат относится к группе антиоксидантов и антигипоксантов с церебропротекторной активностью.
Целью работы явилось конструирование тран-сдермальной мази, свободной от микрофлоры или содержащей её в допустимых количествах, и повышение микробиологической стабильности ЛФ при хранении.
Материалы и методы исследования. Мазевая композиция с мексидолом (состав №1): мек-сидол, поливинилпирролидон К-30 (ПВП К-30) Biochemica (с молекулярной массой 40 000), по-лиэтиленгликоль 400 (ПЭГ-400), глицерин. Мек-сидол растворили в глицерине, прибавили ПЭГ-400, тщательно перемешали, добавили ПВП К-30. Мазевая композиция с мексидолом (состав №2) отличается тем, что введён диметилсульфоксид (димексид), который обладает антимикробным действием и как вспомогательное вещество является «энхансером» проницаемости кожных покровов. Приготовление мазевых форм проводили в асептических условиях, используя стерильные инструменты, стеклянные флаконы и другие вспомогательные материалы. Для изучения микробиологической стабильности составов №1 и
54
Вестник Смоленской Медицинской Академии № 3, 2008
№2 были приготовлены образцы весом 5 грамм для анализа через 3, 6, 12 месяцев хранения в естественных условиях при температуре 20±2еС в защищенном от света месте. Трансдермальная мазь, согласно действующей Государственной фармакопеи (ГФ), должна отвечать требованиям микробиологической чистоты готовых ЛС категории 2: общее микробное число (суммарное число бактерий и грибов) не более 101 в 1 г/мл, отсутствие санитарно-показательных микроорганизмов: энтеробактерий, P. aeruginosae, S. aureus [1].
Определение микробиологической чистоты мазевых композиций с мексидолом. Необходимо проверить мазевые композиции с мексидолом на антимикробное действие, чтобы избежать неправильной трактовки результатов. Для проведения анализа образец композиции №1 и №2 разводили нагретым до 40-45еС буферным раствором в соотношении 1:10, далее в течение 5 минут нагревали на водяной бане, периодически встряхивая, до растворения образца. В 4 пробирки с 4,0 мл питательной среды помещалась по 0,1 мл суточной бульонной тест-культуры в разведении 1:1000. Использовались тест-штаммы культур из международной коллекции штаммов: Candida albicans, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. Культуры засевались соответственно на среду Сабуро, среду с глюкозой и поплавками, среду обогащения для псевдомонад и солевую среду с маннитом. Далее в 1 и 2 пробирки (опытные) каждого из четырех рядов вносили по 1 мл разведения мазевой композиции с мексидолом. В пробирки 3 и 4 (контрольные) каждого из 4-х рядов вносили по 1 мл стерильного фосфатного буфера. Штатив с пробирками инкубировали в термостате 24 ч, а ряд пробирок с Candida albicans на среде Сабуро дополнительно стояли еще 4 суток при комнатной температуре.
Далее проводилось определение микробиологической чистоты свежеприготовленных мазевых композиций с мексидолом. Определение общего числа бактерий (ОМЧ): 1 мл разведения МК 1:10, вносили в 4,0 мл расплавленного и охлажденного до 45 еС питательного агара в каждую из двух чашек Петри. Равномерно распределяли верхний слой и давали ему застыть. Чашки инкубировали при температуре 37еС 5 суток. Затем подсчитывали число колоний для 2-х чашек и находили среднее арифметическое. Далее высчитывали количество бактерий в 1 г/ мл образца [1]. Определение бактерий семейства Enterobacteriaceaе: 1 мл разведения МК 1:10 вносили в 9 мл среды накопления (глюкозо-пеп-тонная среда), перемешивали и инкубировали при 37еС 24-48 ч. При наличии роста и газооб-
разования делали пересев на среду Эндо. Определение бактерий Staphylococcus aureus: по 1 мл разведения МК вносили в 9 мл среды накопления для Staphylococcus aureus, инкубировали при температуры 37еС 24-48 ч. При наличии роста производили пересев петлей на чашку Петри с солевым агаром и маннитом.[2]. Определение бактерий Pseudomonas aeruginosa: по 1 мл разведения МК вносили в 9 мл среды накопления для Pseudomonas aeruginosa, инкубировали при температуре 370С 24-48 ч. При наличии роста производили пересев петлей на чашку Петри на ЦПХ агар [2].
Результаты и их обсуждение. Результаты определения антимикробной активности мазевых композиций №1 и №2 представлены в таблице 1.
Таблица 1. Определение антимикробной активности мазевых композиций №1 и №2.
Состав №1 Состав №2
Опыт Контроль Опыт Контроль
№ пробирки Тест Культуры 1 2 3 4 1 2 3 4
Candida albicans + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
Escherichia coli + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
Pseudomonas aeruginosa + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
Staphylococcus aureus + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
Примечание; «+» - рост тест-культуры, «-» - рост тест-культуры отсутствует
Полученные результаты свидетельствуют о том, что мазевые композиции с мексидолом №1 и №2 не обладают выраженным антимикробным действием: тест - культуры Candida albicans, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus размножались как в опытных пробирках №1 и №2, содержащих ЛФ, так и в пробирках, где она отсутствует (№3, №4). Однако можно заметить, что степень мутности, обусловленная интенсивностью роста микроорганизмов, более высокая при наличии в среде мазевой композиции №1.Композиция №2 с диметилсуль-фоксидом в одинаковых условиях испытания проявляет слабое антимикробное действие: фун-гистатическое в отношении Candida albicans и бактериостатическое в отношении Pseudomonas aeruginosa [2].
Результаты определения микробиологической чистоты мазевых композиций с мексидолом представлены в таблице 2.
Таблица 2. Определение микробиологической чистоты мазевых композицицй с мексидолом.
Микробиологические показатели Мазевые композиции с мексидолом ОМЧ (общее количество бактерий грибов в 1 г (мл)) БГКП (энтеробактерии в 1 г (мл)) Staphylococcus aureus в 1 г (мл) Pseudomonas aeruginosa в 1 г (мл)
№1 Сплошной рост по всей чашке (представлен Грам+ спороносной палочкой) Рост отсутствует Рост отсутствует Рост отсутствует
№2 20 (что соответствует ОМЧ=2Ч10) Рост отсутствует Рост отсутствует Рост отсутствует
Таким образом, мазевая композиция №1 не соответствует требованию микробиологической чистоты по ОМЧ, тогда как санитарно-показатель-ные микроорганизмы в ней отсутствуют. Поэтому композиция №1 не может быть оставлена для дальнейшего исследования на микробиологическую стабильность без выяснения причин микробного загрязнения. Для установления причины микробного загрязнения композиции №1 были проведены исследования по определению микробиологической чистоты каждого компонента мазевой композиции. Результаты проведенного эксперимента по определению ОМЧ указали на то, что каждый компонент состава №1 (глицерин, ПВП К-30, ПЭГ-400, мексидол) отвечают требованиям ГФ XI изд. Согласно литературным данным источниками микробной контаминации ЛФ могут быть не только исходные лекарственные и вспомогательные вещества, но и воздух помещений, дисперсионные среды, вспомогательные материалы и посуда (ступка, вата, марля), упаковочный материал, сам провизор. В связи с этим были приняты дополнительные меры, обеспечиваю-
щие микробиологическую чистоту состава. Мазевая композиция №1 была приготовлена с соблюдением строгих правил асептики и антисептики с добавлением 1 мл спирта этилового 96%. По мнению многих исследователей, использование консервантов (в технологии мягких ЛФ это спирт этиловый, спирт бензиловый, нипагин, нипазол) является оптимальным решением проблемы предотвращения микробной контаминации ЛС. В таком составе композиция №1 оставлена на хранение в естественных условиях при комнатной температуре 20±2°С и будет подвергнута испытаниям через 3, 6, 12, 18 месяцев хранения. Мазевая композиция с мексидолом №2 соответствует требованиям микробиологической чистоты и также оставлена на длительное хранение.
Заключение. Таким образом, при приготовлении мазевой композиции №1 необходимо добиваться ее микробиологической чистоты по ОМЧ и санитарно-показательным микроорганизмам введением консерванта, что обеспечит микробиологическую чистоту и, возможно, продлит срок ее хранения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственная фармакопея XI, вып. 2, с. 198.
2. Дукова В. С.Микробиология. Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. - Смоленск, 2008.
3. Панкрушева Т. А., Курилова О. О., Рудько Е. А. О проблеме обеспечения микробиологической стабильности при разработке суппозиториев //Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики: Материалы регион. науч.-практич. конф. (с международ. участием), посвящённой 40-летию фарм. факультета КГМУ // Курск: КГМУ, 2006. - С.178-179.
4. Фармакопейная статья 42-2980-98 Диметилсульфоксид.
5. ФСП 42-0346356702 раствор мексидола 5% в ампулах.
6. ФС 42-1242-96 полиэтиленгликоль 400 низкомолекулярный.
7. ФС 42-2238-84 поливинилпирролидон среднемолекулярный 40000.
8. Экспериментальное обоснование составов и разработка мягких лекарственных форм с химиотерапев-тическими препаратами и биологически активными препаратами / Никитина Н. В., Кечатова Н. А., Богданов А. Н., Кулибаба Н. И. и др. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. (ПятГФА). - Вып.60. - Пятигорск, 2005. - С.132-133.
