CC BY
844
УДК 615.453.6:615.454.1:616.697
ОЦЕНКА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЧИСТОТЫ МЯГКОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ С КАТИАЗИНОМ
©Ивахненко Е.Л., Стрилец О.П., Стрельников Л.С., Кустова С.П.1
Кафедра биотехнологии Национального фармацевтического университета, Харьков, Украина; 1 Институт проблем эндокринной патологии им. В.Я. Данилевского Национальной академии медицинских наук Украины, Харьков, Украина
E-mail: biotech ukrfa@mail.ru
С целью стандартизации показателей качества разрабатываемого лекарственного средства для коррекции сперматогенеза проведено определение микробиологической чистоты мягкой лекарственной формы с катиазином в течение предлагаемого срока хранения. В состав мази эмульсионного типа «масло/вода» для нанесения на неповрежденную кожу мошонки входят: эмульгатор № 1, масло вазелиновое, глицерин, смесь консервантов (нипагин : нипазол), диме-тилсульфоксид и действующее вещество (катиазин). Экспериментально установлено отсутствие бактерий Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa. Содержание аэробных микроорганизмов и плесневых и дрожжевых грибов определено методами прямого, глубинного и двухслойного посевов и соответствует требованиям Государственной фармакопеи Украины при хранении лекарственного средства в течение 27 месяцев в диапазоне температур от 2 до 25°С.
Ключевые слова: микробная контаминация, микробиологическая чистота, катиазин, мазь, хранение.
EVALUATION OF MICROBIOLOGICAL PURITY OF SOFT MEDICINAL FORM WITH KATHIAZINUM
Ivakhnenko E.L., Strilets O.P., Strelnikov L.S., Kustova S.P.1
Department of Biotechnology of the National University of Pharmacy, Kharkov, Ukraine;
1 V.Ya. Danilevsky Institute for Endocrine Pathologies of National Academy of Medical Sciences of Ukraine, Kharkov, Ukraine
In order to standardize the quality indicators of the developed drug for the correcting spermatogenesis the microbiological purity of soft dosage form with kathiazinum was conducted during the proposed shelf life. The composition of emulsion-type ointment "oil / water" to be applied to intact skin of the scrotum includes: emulsifier № 1, mineral oil, glycerin, a mixture of preservatives (nipagin: nipasol), dimethylsulfoxide and the active substance (kathiazinum). Absence of bacteria Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa was experimentally proved. The content of aerobic microorganisms and mould and yeasts was determined by direct, deep and double-layered inoculation and meets the requirements of the State Pharmacopoeia of Ukraine during the drug storage for 27 months at a temperature range from 2 to 25°C.
Keywords: microbial contamination, microbial purity, kathiazinum, ointment, storage.
На сегодняшний день на фармацевтическом рынке Украины и стран СНГ присутствует определенный дефицит фармацевтических препаратов для регуляции и коррекции нарушений сперматогенеза. Современная консервативная медицина предлагает в основном использование в терапии патоспермий мужского бесплодия гормональных препаратов, имеющих определенные ограничения к применению и побочные эффекты, среди которых следует указать: нарушение гормонального фона, стимуляцию развития очагов рака простаты, гинекомастию [7, 8, 9, 10]. Для решения задач по созданию новых лекарственных препаратов негормонального происхождения для коррекции сперматогенеза на кафедре биотехнологии Национального фармацевтического университета (г. Харьков, Украина) совместно с ГУ «Институт проблем эндокринной патологии им. В.Я. Данилевского АМН Украины» (г. Харьков, Украина) проводится работа по созданию мягкой лекарственной формы с катиазином - новым биологиче-
ски активным веществом, способным в малой дозе стимулировать сперматогенез [1]. Проведенными ранее исследованиями установлено, что оптимальный состав мази эмульсионного типа масло/вода включает в себя: эмульгатор № 1, масло вазелиновое, глицерин, смесь консервантов (нипагин:нипазол), диметилсульфоксид (ДМСО) и действующее вещество (катиазин) [6]. Была изучена и доказана эффективность выбранных консервантов по методике, рекомендуемой Государственной фармакопеей Украины первого издания (ГФ Украины 1 изд.) [3, 5].
На сегодняшний день одним из важных аспектов при разработке новых лекарственных препаратов является их стандартизация и всесторонняя оценка показателей качества лекарств, что гарантирует их безопасность и стабильность в течение всего срока годности. Также известно, что наряду с положительными сторонами мягких лекарственных форм с большим содержанием водной фазы (пролонгированность действия,
удобство в использовании, отсутствие окклюзив-ного эффекта), существует большая вероятность развития посторонней микрофлоры в благоприятной дисперсионной среде и появление токсических продуктов метаболизма микроорганизмов [2]. В связи с этим целью данной работы была оценка микробиологической чистоты нестерильного мягкого лекарственного средства с катиази-ном в течение 27 месяцев, что превышает планируемый срок годности препарата (2 года).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектами исследования были образцы мази с катиазином для нанесения на неповреждённую кожу мошонки, приготовленные общепринятым методом «инверсии фаз», в состав которых входили: действующее вещество - катиазин, вспомогательные вещества: эмульгатор № 1, масло вазелиновое, глицерин фармакопейный, ДМСО, нипа-гин, нипазол и вода. Микробиологическую чистоту выбранных образцов определяли сразу после приготовления, через 6, 12, 18, 24 и 27 месяцев хранения в условиях холодильника (температура от 2 до 8°С) и при температуре от 15 до 25°С.
При анализе микробиологической чистоты использовались методы, предлагаемые ГФ Украины 1 изд.: определение общего числа жизнеспособных аэробных мезофильных бактерий и грибов - метод глубинного посева, метод поверхностного посева (европейская часть), метод двухслойного посева (национальная часть), определение наличия бактерий Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa [3].
Для проверки пригодности методик определения общего числа жизнеспособных аэробных микроорганизмов в качестве тест-штаммов использовали следующие микроорганизмы из американской коллекции культур: Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Bacillus subtilis ATCC 6633, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 [4].
В соответствии с рекомендациями использовали следующие плотные и жидкие питательные среды: соево-казеиновый агар (для определения количества живых бактерий), сабуро-декстрозный агар (для определения количества грибов), соевоказеиновый бульон (для предварительного инкубирования при определении наличия определенных видов микроорганизмов), маннитно-солевой агар (для идентификации Staphylococcus aureus), агар для выявления пигмента пиоцианина (для идентификации Pseudomonas aeruginosa) [3]. При исследовании использовали не меньше 6 чашек
Петри с каждой питательной средой, и результат определяли как среднее арифметическое значение числа колоний, которые выросли на всех параллельных чашках. Чашки с соево-казеиновым агаром инкубировали при температуре 30-35 °С 5 суток, чашки с сабуро-декстрозным агаром - при температуре от 20 до 25 °С - 7 суток.
Отобранную пробу мази (10 г) разбавляли в буферном растворе с натрия хлоридом и пептоном рН 7,0, получая разведение 1:10, которое и использовали для посева.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В соответствии с требования ГФ Украины 1 изд., 1 г (мл) готового лекарственного средства для наружного применения должен содержать не больше 102 аэробных микроорганизмов и 101 дрожжевых и плесневых грибов, а также должны отсутствовать Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa [3]. С целью предупреждения ошибок, возможных при проявлении антимикробной активности препаратом, предварительными исследованиями было установлено, что данную мазь можно охарактеризовать как «не проявляющую антимикробного действия» [4]. Результаты определения микробиологической чистоты образцов мази с катиазином сразу после приготовления и через каждые 6 месяцев в процессе хранения при различных температурных режимах представлены в табл. 1 и 2.
Данные результаты показывают отсутствие в разрабатываемом препарате грамположительных кокков Staphylococcus aureus и грамотрицатель-ных бактерий Pseudomonas aeruginosa при хранении в течение 27 месяцев в диапазоне температур от 2 до 25°С. Определение микробиологической чистоты методами поверхностного и глубинного посева показало содержание бактерий - 20 колониеобразующих единиц в 1 г (КОЕ/г), грибов -10 КОЕ/г. При определении микробиологической чистоты методом двухслойного посева было установлено, что содержание грибов и бактерий в 1 г препарата после 27 месяцев хранения при температуре от 2 до 25°С составляет - до 10 КОЕ/г и 10 КОЕ/г соответственно.
Таким образом, на основании проведенных экспериментальных исследований по определению микробиологической чистоты разрабатываемого топического лекарственного средства для коррекции нарушений сперматогенеза было доказано, что подобранный состав при соблюдении технологических условий производства обеспечивает микробиологическую стабильность готового продукта в течение всего предлагаемого
Таблица 1
Результаты контроля микробиологической чистоты 0,5 % мази с катиазином при хранении при температуре от 2 до 8 °С
Наименование показателя Срок хранения, мес.
0 6 12 18 24 27
TAMC, ШЕ/г* Метод глубинного посева До 10 До 10 20 20 20 20
Метод поверхностного посева До 10 До 10 10 10 20 20
Метод двухслойного посева До 10 До 10 10 10 10 10
TYMC, ШЕ/г Метод глубинного посева До 10 До 10 До 10 До 10 10 10
Метод поверхностного посева До 10 До 10 До 10 До 10 10 10
Метод двухслойного посева До 10 До 10 До 10 До 10 До 10 До 10
Наличие бактерий Staphylococcus aureus отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют
Pseudomonas aeruginosa отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют
Примечание: KGF/г - колониеобразующие единицы в 1 г препарата.
Таблица 2
Результаты контроля микробиологической чистоты 0,5 % мази с катиазином при хранении при температуре от 15 до 25 °С
Наименование показателя Срок хранения, мес.
0 6 12 18 24 27
TAMC, ШЕ/г* Метод глубинного посева До 10 До 10 20 20 20 20
Метод поверхностного посева До 10 До 10 20 20 20 20
Метод двухслойного посева До 10 До 10 До 10 20 10 10
TYMC, ШЕ/г Метод глубинного посева До 10 До 10 До 10 До 10 10 10
Метод поверхностного посева До 10 До10 До 10 10 10 10
Метод двухслойного посева До 10 До 10 До 10 До 10 До 10 До 10
Наличие бактерий Staphylococcus aureus отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют
Pseudomonas aeruginosa отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют отсут- ствуют
Примечание: KGF/г - колониеобразующие единицы в 1 г препарата.
А61К 31/16, С07С 61/06, С07D 277/00 /
Ф. Яременко, I. Свидло, В. Вакула [та ш.] -№ 2000063139 ; заявлено 01.06.00 ; опубл. 15.05.01, Бюл. № 4. - 6 с.
2. Гунар О.В. Риск получения ложных микробиологических результатов при контроле качества лекарственных средств // Фармация. - 2005. - № 2. -С. 29-31.
срока хранения - двух лет в диапазоне температур от 2 до 25 С, что соответствует требованиям ГФ Украины 1 изд. [3].
ЛИТЕРАТУРА
1. 3-(4,5-дигідротіазол-3-іл)-амідцис-1,2,2-триметил-циклопентан-1,3-дикарбонової кислоти, що стимулює сперматогенез: пат. 38130А Україна, МПК 7
3. Державна фармакопея України /Державне підприємство «Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів». -1-евид. - Доповнення 4. - Харків: Державне підприємство Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів». 2011. -540 с.
4. Жемерева Е.Г., Кобарь А.И., Хованская Н.П. К вопросу контроля микробиологической чистоты лекарственных средств в соответствии с требованиями ГФУ. Сообщение 1. Проверка пригодности методик определения общего числа жизнеспособных аэробных микроорганизмов // Фармаком. -2002. - № 3. - С. 51-55.
5. Івахненко О.Л., Стрілець О.П., Стрельников Л.С., Кустова С.П. Обгрунтування вибору антимікробних консервантів при розробці складу та технології м’якої лікарської форми для корекції порушень репродуктивної системи чоловіків // Український журнал клінічної та лабораторної медицини. - 2012. - Т. 7, № 2. - С. 48-52.
6. Спосіб одержання м’якої лікарської форми 3-(4,5-
дигідротіазол-2-іл)амідуцис-1,2,2-триметилцикло-пентан-1,3-дикарбонової кислоти : пат. б5485 Україна, МПХ АбЖ 9/0б (200б.1) / С.П. ^стова, О.Л. Івахненко, М.О. Бойко [та ін.]. -
№ u 2011055бб; заявлено 04.05.11; опубл. 12.12.11, Бюл. № 23. - 4 с.
7. Сухих Г.Т., Божедомов В. А. Мужское бесплодие -М. : Эксмо, 2009. - 240 с.
S. Юшко Е.И., Бондарев А.В., Строцкий А.В. Мужская инфертильность в бесплодных браках // Репродуктивное здоровье. - 2011. - №4. - С. 108-114.
9. Brezina P.R., Yunus F.N., Yulian Z. Effects of Pharmaceutical Medications on Male Fertility // Journal Reproductive Infertility. - 2012.- Vol. 13 (i). -P. 3-11.
10. Mishra R.K., Verma H.P., Singh N., Singh S.K. Male infertility: lifestyle and oriental remedies // Journal of Scientific Research. - 2012. - Vol. 56 - P. 93-101.
