CC BY
20
21. Dostovalov E.V. Use of probiotic fodder additive "Lactur" in rations of young cattle: dis. ... candidate of agricultural sciences: 06.02.08. - Kurgan, 2015. - 123 p.
22. Mudarisov F.Zh. Use of mineral and synbiotic additives in the improvement of technologies for the reproduction of flocks, growing calves and producing milk: dis. ... candidate of agricultural sciences: 06.02.10. -Kazan, 2016. - 118 p.
23. Chekhranova S.V. Efficiency of premixes in feeding dairy cows: dis. ... candidate of agricultural sciences: 06.02.08. - Volgograd, 2014. - 109 p.
УДК 579.841
НОВЫЙ ВАКЦИННЫЙ ШТАММ MANNHEIMIA HAEMOLYTICA ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ МАНХЕЙМИОЗА
ЛАИШЕВЦЕВ А.И.,
старший научный сотрудник, лаборатории микробиологии с музеем типовых культур ФГБНУ фНц ВИЭВ РАН; e-mail: [email protected], тел. 8-926-461-41-76.
ЯКИМОВА Э.А.,
аспирант, лаборатория микологии и антибиотиков им. А.Х. Саркисова ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН, e-mail: [email protected], тел. 7-495-970-03-68.
КАПУСТИН А.В.,
заведующий лабораторией микологии и антибиотиков им. А.Х. Саркисова, кандидат ветеринарных наук, доцент, ФГБНУ ФНЦ ВИЭВ РАН; e-mail: [email protected], тел. 7-926-347-82-81.
Реферат. В работе представлены свойства нового производственного штамма Mannheimia haemolytica «КЛ-ВИЭВ», депонированного в Государственной коллекции ФБУН «ГНЦ ПМБ», с регистрационным номером B8139 от 25.07.2017. Культура обладает типичными для вида морфологическими, тинкториальными и ферментативными свойствами. При определении серологических свойств установлено, что культура относится к серотипу А1. Вирулентность штамма по показателю LD50 составляет 3,5* 108 при интраназальном заражении белых мышей, предварительно подвергшихся иммуносупрессии. При определении антибиотикоре-зистентности было установлено, что высокая чувствительность проявляется в отношении стрептомицина, триметроприма, имипенема, амоксиклава, ампициллина, полимиксина-В, ко-тримоксазола, доксициклина, ципрофлоксацина, энрофлоксацина, моксифлоксацина, цефалексина, цефоперазона и цефтриаксона. При секвенировании последовательности гена 16S рРНК показана 100 % гомология анализируемой последовательности образца с нуклеотидной последовательностью гена 16S рРНК Mannheimia haemolytica (GenBank KU517779.1, CP005972.1 и др.). При определении антигенных свойств штамма было установлено, что использование монопрепарата выполненного на основе масляного адъюванта Montanide ISA 70 при подкожном способе введения на крупном рогатом скоте позволило получить средний титр антител равный 1:320, при повторной вакцинации средний титр антител составил 1:1360. Иммунизация мелкого рогатого скота монопрепаратом позволила получить средний титр антител равный 1:295, при повторной вакцинации средний титр антител составил 1:1080.
Ключевые слова: вакцина, биопроизводство, биопрепараты.
THE NEW VACCINE STRAIN OF MANNHEIMIA HAEMOLYTICA
FOR THE PRODUCTION OF PREPARATIONS AGAINST MANHEIOMYOSIS
LAISHEVTSEV A.I.
Senior Researcher of the Laboratory of microbiology with a museum of type cultures, All-Russian Scientific Research Institute of Experimental Veterinary Sciences named after K.I. Scryabin and Y.R. Kovalenko e-mail: [email protected], +7-926-461-41-76.
YAKIMOVA E.A.
Post-graduate student, Laboratory of mycology and antibiotics named after O.Kh. Sarkisova, All-Russian Scientific Research Institute of Experimental Veterinary Sciences named after K.I. Scryabin and Y.R. Kovalenko; e-mail: [email protected], тел. 7-495-970-03-68.
KAPUSTIN A.V.
Head of the laboratory of mycology and antibiotics named after O.Kh. Sarkisova, Candidate of Veterinary Sciences, Associate Professor, All-Russian Scientific Research Institute of Experimental Veterinary Sciences named after K.I. Scryabin and Y.R. Kovalenko; e-mail: [email protected], +7-926-347-82-81.
Essay. The properties of new production strain Mannheimia haemolytica "KL-VIEV" deposited in the State Collection of the FBIS «State Research Center For Applied Biotechnology & Microbiology», with the registration number B8139 dated July 25, 2017 are presented in the work. The culture possesses morphological, tinctorial and enzymatic properties typical for the species. During determining the serological properties, it is established that the culture belongs to the serotype A1. The virulence of the strain according to LD50 indicator is 3.5 * 108 with intranasal infection of white mice previously subjected to immunosuppression. During determining antibiotic resistance, it was found that high sensitivity is manifested to streptomycin, trimethoprim, imipenem, amoxiclav, ampicillin, polymyxin-B, co-trimoxazole, doxycycline, ciprofloxacin, enrofloxacin, moxifloxacin, cephalexin, cefoperazone and ceftriaxone. During sequencing the 16S rRNA gene sequence, 100 % homology of the analyzed sample sequence with the nucleotide sequence of the 16S rRNA gene of Mannheimia haemolytica (GenBank KU517779.1, CP005972.1, etc.) was shown. When determining the antigenic properties of the strain, it was found that the use of the mono-preparation, based on the oil adjuvant Montanide ISA 70, on cattle with subcutaneous route of administration, allowed to obtain an average antibody titer of 1: 320, with a secondary vaccination the average antibody titer was 1: 1360. Immunization of small cattle with mono-preparation allowed to obtain the average antibody titer of 1: 295, with a secondary vaccination the average antibody titer was 1: 1080.
Key words: vaccine, bioproduction, biological preparations.
Введение. Вакцинопрофилактика инфекционных патологий животных является наиболее эффективным способом обеспечения эпизоотического благополучия Российской Федерации. Кроме того, именно благодаря вакцинообработкам отечественная экономика сохраняет и преумножает прибыль животноводческой отрасли. Ввиду вышесказанного, стоит понимать важность разработки новых отечественных биопрепаратов, отвечающих требованиям современной эпизоотической обстановки.
Эффективность любого иммунобиологического препарата в первую очередь зависит от качества производственных штаммов микроорганизмов, используемых при его изготовлении [1]. Именно поэтому научные работы по выделению и технологическому подбору новых производственных штаммов микроорганизмов является приоритетной задачей для профильных научно-исследовательских институтов. В настоящей работе нами приведены результаты подбора производственно-контрольного штамма Mannheimia haemolytica предназначенного для производства иммунобиологических средств против манхеймиоза крупного и мелкого рогатого скота [2].
Цель работы - описать свойства и характеристики нового вакцинного штамма Mannheimia haemolytica «КЛ-ВИЭВ», пригодного для использования в качестве производственной культуры при изготовлении средств специфической профилактики манхеймиоза крупного и мелкого рогатого скота.
Материал и методика исследования. Научная работа является частью государственного задания «Разработка технологии изготовления и методов контроля инактивированной вакцины против манхеймиоза крупного и мелкого рогатого скота» (№ 0578-2016-0002), которая проводится на базе ФГБНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени
Я.Р. Коваленко, а также на опытной базе Вышневолоцкого филиала ВИЭВ (о. Лисий).
Микробиологическое исследование с целью выделения из патологического и клинического материала бактерий вида Mannheimia spp., были проведены согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностике пастереллёзов животных и птиц № 22-7/82 от 20.08.1992 г.».
При проведении комплексного микробиологического исследования использованы следующие питательные среды: желатиновая среда, модифицированный эскулиновый агар, эскулиновый бульон, среда Кларка, нитратный бульон, агар с мочевиной Кристенсена, трехсахарный агар с железом, агар МакКонки, агар с феноловым красным, колумбийский агар, сердечно-мозговой агар, бульон с феноловым красным, эугоник агар, эугоник бульон, агар с бромкрезоловым пурпурным, бульон с бромкрезо-ловым пурпурным, мясо-пептонный агар, мясо-пептонный бульон, полужидкий агар, пептонная вода с индикатором Андреде, триптон соевый бульон, триптон соевый агар, триптон-цистиновый агар, бульон Хоттингера производства ООО «ХайМедиа-Лабс» и фирмы «Oxoid» (Великобритания).
Для родовой и видовой идентификации выделенных изолятов бактерий семейства Pasteurellaceae, использованы коммерческие тест системы: RapID NF Plus Panel (R8311005), API® NH, API® 20 E, API® 20 NE - ID 32 E с сопутствующими расходными материалами и электронной базой для интерпретации полученных результатов. Помимо коммерческих тест-систем были использованы углеводы в дисках: адонит, арабиноза, галактоза, D-глюкоза, дульцит, инозит, инулин, ксилоза, мальтоза, маннит, манноза, раффиноза, рамноза, салицит, сорбит, сахароза, трегалоза, фруктоза, целлобиоза производства Himedia.
Серотипирование изолятов манхемий проводили в реакции непрямой гемагглютинации по капсуль-ному антигену методом, предложенным Biberstein EL [3].
Определение патогенных, вирулентных и имму-ногенных свойств штаммов манхемий проводили в виварии Вышневолоцкого филиала ВИЭВ с использованием белых мышей массой 16-18 гр., и морских свинок массой 350-400 гр.
Объектом исследования стал штамм «КЛ-ВИЭВ», который был депонирован в государственной коллекции ФБУН «ГНЦ ПМБ» с регистрационным номером B8139 от 25.07.2017 г.
Результаты исследования. Штамм Mannheimia haemolytica «КЛ-ВИЭВ» выделен в 2016 году из лёгочной ткани теленка, принадлежащего одному из животноводческих хозяйств Белгородской области, и павшего с признаками респираторной патологии. Выделение и идентификацию изолята проводили в лаборатории микробиологии с музеем типовых культур ФГБНУ ВИЭВ имени Я.Р. Коваленко. В ходе проведения работы были установлены следующие свойства и характеристики культуры.
Культуральные особенности: на кровяном агаре колонии гладкие, полупрозрачные, блестящие, диаметром 1-2 мм, с проявлением зоны ß-гемолиза в размере 1-1,5 мм вокруг всей колонии (рисунок 1). На агаре МакКонки наблюдается рост в виде мелких полупрозрачных колоний. На мясо-пептонном агаре бактерии демонстрируют скудный рост мелких, размерами 0,5-1 мм, выпуклых, полупрозрачных колоний, легко снимающихся бактериальной петлёй или пастеровской пипеткой. На среде для культивирования гемофилюсов и актинобациллюсов (Haemophilus test medium HTM base, Oxoid) бактерии образовывают обильный рост гладких, прозрачных, блестящих колоний размером 1-1,5 мм. В бульонных средах (мясопептонном бульоне, триптон-соевом бульоне, бульоне Хоттингера, Эугоник бульоне, а также в сердечно-мозговом бульоне) наблюдается равномерное помутнение среды спустя 10-12 часов культивирования. Рост в полужидком агаре проявляется только по ходу укола петлёй.
Морфологические признаки: клетки манхемий представляют собой грамотрицательные коккоба-циллы, размеры клеток находятся в диапазоне 0,31,0 х 1,0-2,0 мкм (рисунок 2). Расположение клеток в мазке чаще одиночное, реже парное, наличие цепочек и нитей не зафиксировано. При окрашивании культур манхемий методом Романовского-Гимза клетки тёмно-синего цвета с розовой капсулой.
Биохимические свойства: культура каталаза и оксидаза положительная; лизиндекарбоксилаза, ор-нитиндекарбоксилаза и аргининдекарбоксилаза отрицательная; восстанавливает нитрат; не образует углекислый газ и индол, ОНПГ положительная, уреаза отрицательная, реакция Фогес-Проскауэра отрицательная, желатиназа отрицательная, гидролиз эскулина отрицательная. Ферментирует с образованием кислоты без газа следующие углеводы: D-глюкозу, D-арабинозу, декстрин, фруктозу, D-галактозу, глицерол, лактозу, мальтозу, D-маннитол, D-сорбитол, сахарозу, раффинозу, D-ксилозы. Не ферментирует: D-адонитол, L-арабинозу, арбутин, целлобиозу, дульцитол, инулин, D-маннозу, мелици-тозу, мелибиозу, L-рамнозу, салицин, трегалозу, L-сорбозу.
При идентификации наборами Remel RapID NF Plus: Aliphatic thiol (TRD), triglyceride (EST), tryptophane P-naphthylamide (TRY), N-Benzyl-arginine-P-naphthylamide (BANA), p-Nitrophenyl-N-acetyl-P,D-glucosaminide (NAG), p-Nitrophenyl-p,D-glucoside (PGLU), proline-P-naphthylamide (PRO), pyrrolidine-P-naphthylamide (PYR) отрицательны; p-Nitrophenyl-phosphoester (PHS), p-Nitrophenyl-a,D-glucoside (aGLU), y-Glutamyl P-naphthylamide (GGT) положительны [3].
Серологические свойства: Штамм Mannheimia haemolytica «КЛ-ВИЭВ» относится к серотипу А1
[5].
Вирулентность для лабораторных животных: лабораторные животные не восприимчивы к данному виду бактерий, тем не менее при интрана-зальном заражении белых мышей, предварительно подвергшихся иммуносупрессии, LD50 составляет 3,5*108 [5].
Рисунок 1 - Рост культуры Mannheimia haemolytica «КЛ-ВИЭВ» на кровяном агаре
Рисунок 2 - Морфологические и тинкториальные свойства клеток Mannheimia haemolytica «КЛ-ВИЭВ»
Устойчивость к антибактериальным препаратам: штамм является резистентным к амикаци-ну, гентамицину, неомицину, рифампицину, ван-комицину, меропенему, клиндамицину, линкоми-цину, кларитромицину, эритромицину, тетрациклину, цефепиму, цефтазидиму; промежуточная чувствительность проявляется в отношении кана-мицина, фосфомицина, бензилпенициллина, карбе-нициллина, норфлоксацина, пефлоксацина, цефазо-лина, цефотаксима; высокая чувствительность проявляется в отношении стрептомицина, триметро-прима, имипенема, амоксиклава, ампициллина, по-лимиксина-В, котримоксазола, доксициклина, ци-профлоксацина, энрофлоксацина, моксифлоксаци-на, цефалексина, цефоперазона, цефтриаксона [6].
Генетические характеристики. При секвени-ровании последовательности гена 16S рРНК показана 100 % гомология анализируемой последовательности образца с нуклеотидной последователь-
ностью гена 16S рРНК Mannheimia haemolytica (GenBank KU517779.1, CP005972.1 и др.).
Фрагмент анализируемой нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК штамма КЛ-ВИЭВ:
CGGTAGCTAATACCGCGTAATGTCTTAGGACTAAAGGGTGGGACCATTTGGCCACCTGCC ATAAGATGAGCCCAAGTGGGATTAGGTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGCCCGCGA TCTCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCC TACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGGGGAACCCTGATGCAGCCATGCCG CGTGAATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTTCTTTCGGTGACGAGGAAGGCGATTGTT TTAATAGAACAGTCGATTGACGTTAATCACAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGC AGCCGCGGTAATACGGGGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATAACTGGGCGTAAAGGGCACGC AGGCGGTTGTTTAAGTGAGGTGTGAAAGCCCCGGGCTTAACCTGGGAATTGCATTTCAGA CTGGACAACTAGAGTACTTTAGGGAGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTA GAGATGTGGAGGAATACCGAAGGCGAAGGCAGCCCCTTGGGAATGTACTGACGCTCATGT GCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGCTGT CGATTTGGGGATTGGGGTTTAACTCTGGTGCCCGTAGCTAACGTGATAAATCGACCGCCT GGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTG GAGCATGTGGTTTAATTC
Антигенная активность. Иммунизация крупного рогатого скота монопрепаратом, произведённым из штамма КЛ-ВИЭВ на основе масляного адъюванта Montanide ISA 70 при подкожном способе введения позволила получить средний титр антител равный 1:320, при повторной вакцинации средний титр антител составил 1:1360. Иммунизация мелкого рогатого скота монопрепаратом, произведённым из штамма КЛ-ВИЭВ на основе масляного адъюванта при подкожном способе введения позволила получить средний титр антител равный 1:295, при повторной вакцинации средний титр антител составил 1:1080.
Вывод. Новый штамм Mannheimia haemolytica «КЛ-ВИЭВ», в ходе проведения исследования, продемонстрировал высокие антигенные свойства, в случае изготовления из него вакцинопрепарата, кроме того штамм обладает соответствующими для вида культуральными, морфологическими, тинкториальными и биохимическими свойствами. Ввиду этого описанный в работе штамм может использоваться для производства и контроля иммунобиологических средств против манхеймиоза крупного и мелкого рогатого скота.
Список использованных источников
1. Капустин А.В. Технологическая селекция иммуногенных изолятов Staphylococcus hyicus subs. hyicus, перспективных для конструирования вакцинных препаратов // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 2017. - № 5. - С. 120-126.
2. Kapustin A.V., Laishevtcev A.I. Pasteurellosis of cattle caused by Mannheimia haemolytica // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2016. - Т. 52. - № 4. - С. 3-12.
3. Biberstein E.L., Gills M., Knight H. Serological types of Pasteurella hemolytica. // Cornell Veterinarian 1960;50: 283-300.
4. Laishevtcev A.I. Features of biochemical identification and differentiation of Mannheimia haemolytica // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2016. - Т. 54. - № 6. - С. 70-77.
5. Лаишевцев А.И. Результаты подбора нового производственного штамма бактерий Mannheimia haemolytica "КЛ - ВИЭВ" для изготовления средств специфической профилактики манхеймиоза крупного и мелкого рогатого скота // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2017. -Т. 67. - № 7. - С. 288-297.
6. Антибиотикорезистентность эпизоотических изолятов Mannheimia haemolytica, выделенных на территории Российской Федерации / А.И. Лаишевцев, А.В. Капустин, Э.А. Якимова и др. // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2017. - Т. 70. - № 10. - С. 327-330.
List of sources used
1. Kapustin A.V. Technological selection of immunogenic isolates Staphylococcus hyicus subs. hyicus, promising for the design of vaccine preparations // Veterinary medicine, zootechny and biotechnology. - 2017. -No. 5. - P. 120-126.
2. Kapustin A.V., Laishevtcev A.I. Pasteurellosis of cattle caused by Mannheimia haemolytica // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. 2016. T. 52. - № 4. - P. 3-12.
3. Biberstein E.L., Gills M., Knight H. Serological types of Pasteurella hemolytica. // Cornell Veterinarian 1960; 50: 283-300.
4. Laishevtcev A.I. Features of biochemical identification and differentiation of Mannheimia haemolytica // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2016. - T. 54. - № 6. - P. 70-77.
5. Laishevtsev A.I. The results of the selection of a new production strain of the bacteria Mannheimia haemolytica "KL - VIEV" for the preparation of means for specific prevention of manheimia of large and small cattle // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2017. - T. 67. - No. 7. - P. 288-297
6. Antibiotic resistance of epizootic isolates of Mannheimia haemolytica, isolated in the territory of the Russian Federation / A.I. Laishevtsev, A.V. Kapustin, E.A. Yakimova et al. // Russian Journal of Agricultural and Socio-Economic Sciences. - 2017. - T. 70. - No. 10. - P. 327-330.
УДК 636.32./38
ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ КОРРЕЛЯЦИИ И НАСЛЕДУЕМОСТЬ ПРИЗНАКОВ ЧИСТОПОРОДНЫМ И ПОМЕСНЫМ МОЛОДНЯКОМ С РАЗНОЙ КРОВНОСТЬЮ ПО АВСТРАЛИЙСКОМУ МЯСНОМУ МЕРИНОСУ
ЧЕРНОБАЙ Е.Н.,
кандидат сельскохозяйственных наук, доцент кафедры кормления животных и общей биологии ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный аграрный университет».
АНТОНЕНКО Т.И.,
кандидат сельскохозяйственных наук, доцент кафедры кормления и общей биологии ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный аграрный университет».
ЕФИМОВА НИ.,
кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник отдела овцеводства ВНИИОК-филиал ФГБНУ «Северо-Кавказский ФНАЦ».
ГУЗЕНКО В.И.,
доктор сельскохозяйственных наук, профессор.
Реферат. В статье изучена корреляция между фенотипическими хозяйственно-полезными признаками овец, рассчитаны коэффициенты наследуемости овец по основным хозяйственно-полезным признакам. Цель научного исследования, заключалась в выявлении характера взаимосвязи между хозяйственно-полезными признаками, для более эффективного ведения селекции в овцеводстве. Было установлено, что самой высокой корреляционной связью между показателями крови и живой массой характеризовались помесные ярки, полученные в различных сочетаниях при скрещивании пород австралийский мясной меринос, советский меринос и ставропольской тонкорунной. Животные с кровностью ЛСМ х 'ЛАММ в 4,5 месячном возрасте имели лучшую корреляционную связь по уровню гемоглобина и общему белку, соответственно, г=0,46 и 0,42, а помесные животные по ставропольской породе, полученные от маток с тониной шерсти 20,6-23,0 мкм, уступали незначительно животным с кровностью ЛСМ х ЛАММ соответственно на 0,01 ед. Высокая положительная связь отмечена между признаками настрига мытой шерсти с ее длиной, длина шерсти с тониной, которая колеблется в пределах г = +0,36 до +0,87 и г = +0,36 до +0,59. Тогда как корреляция между живой массой и настригом мытой шерсти среди чистопородных животных была положительной средней величины г = +0,20 до +0,45, а среди помесных - слабоотрицательной по ставропольской породе г = -0,06 до -0,04 и слабоположительной по породе советский меринос г = +0,13 до +0,19. Самой низкой корреляционной связью по советскому мериносу характеризовались чистопородные животные (СМ), у которых показатели составляли по количеству эритроцитов, уровню гемоглобина, общему белку и лизоцимной активности, соответсвенно, г=0,37; 0,39; 0,35 и 0,36.Сравнивая чистопородных (СТ) и помесных животных между собой, установлены лучшие показатели у животных полученных от маток с более грубой тониной шерсти 20,6-23,0 мкм.
Коэффициент наследуемости живой массы в 4,5 месячном возрасте потомством разной кровности, полученного от скрещивания маток породы советский меринос и ставропольской породы, имеющих разную тонину шерсти с баранами-производителями породы австралийский мясной меринос, был дос-
