CC BY
22
augmentation procedures on peri-implant health or disease: A systematic review and meta-analysis. // Clin. Oral Implants Res. - 2018; 29 (Suppl 15): 32-49.
10. Barootchi S., Tavelli L., Zucchelli G., Giannobile W. V., Wang H.L. Gingival phenotype modification therapies on natural teeth: A network meta-analysis. // J. Periodontal. -2020; 91 (11): 1386-1399.
11. Zucchelli G., Tavelli L., McGuire M.K., Rasperini G., Feinberg S.E., Wang H.L., Giannobile W.V. Autogenous soft tissue grafting for periodontal and peri-implant plastic surgical reconstruction. // J. Periodontal. - 2020; 91 (1): 9-16.
12. Tavelli L., Barootchi S., Avila-Ortiz G., Urban I.A., Giannobile W. V., Wang H.L. Peri-implant soft tissue phenotype modification and its impact on peri-implant health: A systematic review and network meta-analysis. // J. Periodontal. - 2021; 92 (1): 21-44.
13. Долгалев А.А., Цогоев В.К., Брусницын Д.А., Аветисян З.А., Чагаров А.А. Метод направленной тканевой регенерации для увеличения площади прикрепленной слизистой полости рта // Пародонтология. - 2017. -Т. 22. - № 4 (85). - С. 73-76. [Dolgalev A.A., Cogoev V.K., Brusnitsyn D.A., Avetisyan Z.A., Chagarov A.A. The method of increasing the volume of the attached oral mucosa in the area of implants. // Parodontologija. - 2017; 22; 4 (85): 73-76. (In Russ.)]
14. Семенцов И.В., Пешко А.П., Гоман М.Ю. Закрытие донорского участка небного аутотрансплантата фи-бриновой мембраной // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2020. - № 2. - С. 92-93. [Sementsov I.V., Peshko A.P., Goman M.Yu. Closing a donor site of a palate autograft with a fibrin membrane. // Pacific Medical Journal. - 2020; 2: 92-93. (In Russ.)]
15. Ксембаев С.С., Бушеев Д.О., Валиева И.И., Ха-лиуллина А.А., Хафизова Л.Н. Мукогингивальные аномалии как этиопатологенетический фактор развития рецессии десны // Проблемы стоматологии. - 2021. - Т. 17. - № 2. -С. 14-18. [Ksembaev S.S., Busheev D.O., Valieva I.I.,
Khaliullina A.A., Khafizova L.N. Mucosal abnormalities as an etiopathogenetic factor in the development of gingival recession. // Problemy stomatologii. - 2021; 17; 2: 14-18. (In Russ.)]
16. Amaliya A., Muhaimina R.K., Susanto A., Sutjiatmo A.B. Histological Assessment of Palatal Donor Site Wound Healing after Application of Moringa oleifera Lamarck Leaf Extract in Rats. // Eur. J. Dent. - 2019; 13 (2): 248-254.
17. Kadkhoda Z., Tavakoli A., Chokami Rafiei S., Zolfaghari F., Akbari S. Effect of Amniotic Membrane Dressing on Pain and Healing of Palatal Donor Site: A Randomized Controlled Trial. // Int J. Org. Transplant Med. - 2020; 11 (2): 55-62.
18. Sezgin Y., Qetin M.B., Bulut S., Alptekin N.Ö., Börjek P. Evaluating the Effects of a Topical Preparation with Dexapanthenol, Silbiol, Undecylenic Acid, and Lidocaine on Palatal Mucosa Wound Healing in a Rat Model. // Balkan Med. J. - 2019; 36 (2): 88-95.
19. Едранов С.С., Керзиков Р.А. Морфогенез свободного десневого трансплантата // Российский стоматологический журнал. - 2017. - Т. 21. - № 2. -С. 111-116. [Edranov S.S., Kerzikov R.A. Free gingival graft morphogenesis. //Rossiiskii stomatologicheskii zhurnal. -2017; 21; 2: 111-116. (In Russ.)]
20. Chiu T.S., Chou H.C., Kuo P. J., Liang J.Y., Chiu H.C. A novel design of palatal stent to reduce donor site morbidity in periodontal plastic surgery. // J. Dent. Sci. - 2020; 15 (2): 136-140.
21. Keskiner I., Lutfioglu M., Aydogdu A., Saygun N.I., Serdar M.A. Effect of Photobiomodulation on Transforming Growth Factor-beta1, Platelet-Derived Growth Factor-BB, and Interleukin-8 Release in Palatal Wounds After Free Gingival Graft Harvesting: A Randomized Clinical Study. // Photomed Laser Surg. - 2016; 34 (6): 263-271.
22. Zhu T., Park H.C., Son K.M., Yang H.-C. Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model. // BMC Oral Health. - 2015; 15: 60.
УДК 616.366-003.7-089 DOI 10.24412/2220-7880-2022-1-75-79
НОВЫЙ СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПОРТАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ НА ЖИВОТНЫХ
Федосеев А.В., Бударев В.Н.
ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России, Рязань, Россия (390026, г. Рязань, ул. Высоковольтная, 9), e-mail: rzgmu@rzgmu.ru
Цель: разработать способ создания полноценной, доступной, легко воспроизводимой экспериментальной модели портальной гипертензии на базе организма лабораторного животного - домашней свиньи. После анализа используемых в настоящее время способов формирования портальной гипертензии у лабораторных животных был разработан пригодный для работы на домашних свиньях метод. В условиях операционной вивария Рязанского государственного медицинского университета был проведен эксперимент на шести животных. Портальная гипертензия формировалась за счет контролируемого частичного сдавления элементов печеночно-двенадцатиперстной связки пластиковым хомутом с многопозиционной защелкой. Результатом проведенных действий было формирование у животных портальной гипертензии, что подтверждалось выявлением у них варикозного расширения вен пищевода. Созданная модель была признана доступной и достаточно функциональной, подтверждена возможность проведения на ней эндоскопических исследований и манипуляций.
Ключевые слова: портальная гипертензия, экспериментальная модель, домашняя свинья.
A NEW METHOD FOR MODELING PORTAL HYPERTENSION ON ANIMALS
FedoseevA.V., Budarev V.N.
Ryazan State Medical University named after academician I.P. Pavlov, Ryazan, Russia (390026, Ryazan, Vysokovol'tnaya St., 9), e-mail: rzgmu@rzgmu.ru
The objective of the research is to work out a method for creating a complete, accessible, easily reproducible experimental model of portal hypertension based on the organism of a laboratory animal - a domestic pig, to be exactly. After analyzing the currently used methods for the development of portal hypertension in laboratory animals, a method suitable for domestic pigs was worked out. In the operating room of the animal house of Ryazan State Medical University, an experiment on six animals was carried out. Portal hypertension was developed in the animals by clamping the hepatoduodenal ligament with a plastic clamp. Portal hypertension was confirmed by detection of esophageal varicose veins dilatation. The designed model was recognized as accessible and sufficiently functional. The possibility of endoscopic examinations and manipulations on the described model was confirmed.
Keywords: portal hypertension, experimental model, domestic pig.
Введение
Актуальность проблемы портальной гипер-тензии и связанных с ней осложнений не вызывает сомнений. При этом разработка и внедрение новых методов борьбы с данными патологическими состояниями - достаточно сложная задача [1]. Одним из вариантов ее упрощения может стать применение экспериментальных моделей для апробации разрабатываемых методик [2]. Этот путь имеет целый ряд важных преимуществ. Модель позволяет вносить в разрабатываемую методику изменения по ходу эксперимента, анализируя накапливающуюся информацию. По объективным причинам получение разрешения на работу с животными проще, чем в случае клинических исследований с участием людей. Указанные выше факторы наделяют научных работников большей свободой действий для поиска новых решений [3, 4].
Если говорить конкретно о проблеме портальной гипертензии, оптимальным вариантом явилось бы применение экспериментальных моделей, созданных на базе организма домашней свиньи. Эти животные обладают очень высокой физиологической схожестью с человеком, доступны и достаточно дешевы для работы в вивариях, обладают размерами тела, сопоставимыми с человеческими. Последний фактор принципиально важен, если, например, исследовать варикозную трансформацию вен пищевода эндоскопическими методами. Проблема в том, что описываемые в литературе методы формирования портальной гипертензии рассчитаны на совершенно других животных (мыши, крысы, кролики) и не могут без изменений использоваться на свиньях. Однако необходимость получения полноценной экспериментальной модели заставила искать обходные пути для решения данной проблемы.
Цель: разработать способ создания полноценной, доступной, легко воспроизводимой экспериментальной модели портальной гипертензии на базе организма лабораторного животного - домашней свиньи.
Материал и методы
Объект экспериментальной деятельности - домашние свиньи породы крупная белая, шесть единиц. Масса тела животных 30-35 кг, все самки. Местом проведения эксперимента стала ветеринарная опера-
ционная вивария Рязанского государственного медицинского университета. За сутки до запланированной операции животные доставлялись в виварий из сертифицированного животноводческого комплекса.
Анестезиологическое пособие животному представляло собой комбинированный наркоз, включающий внутримышечное введение препарата «Золетил» из расчета 15 мг/кг массы тела и ингаляцию через маску препарата «Севофлуран» в смеси с кислородом в режиме спонтанного дыхания.
Каждое животное подвергалось двум операциям. Во время первичной создавались условия для развития портальной гипертензии и раскрытия пор-токавальных шунтов. Во время повторной операции визуально контролировалось достижение заданных результатов эксперимента. Также животным производилась эзофагоскопия с помощью фиброэзофагога-стродуоденоскопа Olympus GF-T1.
Ключевым моментом первичной операции, проводимой животным, являлось частичное сужение просвета воротной вены за счет наложения пластикового хомута с многопозиционной защелкой. Были использованы хомуты промышленного изготовления длиной 290 мм и шириной 5 мм. На одном конце хомута имелось сужение, на другом - защелка. На поверхности хомута с одной стороны находились многочисленные борозды, расположенные с шагом 1 мм, входящие в зацепление с язычком защелки. Такая конструкция позволяла замыкать хомут в кольцо с варьируемым диаметром.
Рис. 1. Внешний вид пластикового хомута с многопозиционной защелкой
Техника операции была следующей. Выполнялась верхнесрединная лапаротомия, визуализировалась печеночно-двенадцатиперстная связка. После надсечения брюшины с помощью диссектора выделялся и брался на держалку холедох. Оставшийся массив связки со всеми ее элементами охватывался и зажимался хомутом. При этом производилось пошаговое перемещение защелки, постепенно уменьшающее длину окружности хомута. Когда появлялось наблюдаемое визуально изменение кровенаполнения печени, хомут считался достаточно затянутым. При этом частично пережималась не только воротная вена, но и печеночная артерия, хотя полного прекращения кровотока по ней не происходило. На заключительном этапе операции оставшийся свободным конец хомута скусывался кусачками, лапаротомная рана ушивалась.
Рис. 2. Печеночно-двенадцатиперстная связка с затянутым на ней пластиковым хомутом (обозначен стрелкой)
Ряд количественно оцененных во время повторной операции параметров был подвергнут статистической обработке, производился расчет t-критерия Стьюдента для зависимых выборок.
Результаты и их обсуждение
В настоящее время наиболее распространенным способом формирования портальной гипертензии является стенозирование воротной вены [5]. Поскольку ее полная перевязка в большинстве случаев приводит к гибели животного, применяется метод лигирования на пелоте. На выделенную хирургическим путем воротную вену перед перевязкой укладывается пелот -цилиндрический предмет определенного диаметра (обычно это игла). После затягивания лигатуры пе-лот вытягивается из-под нее, и таким образом формируется небольшое свободное пространство, позволяющее вене частично расправиться и обеспечить некоторый приток крови к печени [6, 7]. Однако для свиньи данная методика неприменима. У этого животного воротная вена имеет очень короткий ствол, быстро распадаясь на более мелкие ветви. Чётко дифференцировать ее в условиях in vivo крайне тяжело. Раздельное лигирование ветвей очень трудоемко. В случае, если какие-то ветви останутся незамеченными, портальная гипертензия просто не возникнет. К тому же для свиней, даже в пределах одной линии, характерен больший разброс размеров тела, чем для
крыс и мышей. Соответственно, становится невозможным использование одного пелота стандартного диаметра для получения искомого эффекта.
Именно указанные выше факты стали причиной того, что для работы на домашней свинье потребовалась разработка сильно отличающегося от привычных способа формирования портальной гипертензии. Отработанная в ходе эксперимента методика, основанная на применении пластикового хомута, продемонстрировала перед «лигатурным» способом следующие преимущества:
1. Становится возможным порционное пережатие нескольких ветвей воротной вены без необходимости поиска ее основного ствола.
2. Эффективность метода не подвержена влиянию такого фактора, как различия в диаметре сосудов у животных с разными размерами тела.
3. Отсутствие необходимости создания набора пелотов разного диаметра. Один размер хомута подходит для животных разных размеров.
4. Благодаря тому, что хомут имеет значительную ширину (5 мм), он не прорезает ткани и делает возможным пережатие печеночно-двенадцатиперст-ной связки en masse. Указанное обстоятельство позволяет избежать необходимости в выделении из толщи связки отдельных сосудов.
Из шести животных, включенных в эксперимент, первые два были использованы для отработки техники операции, апробации различных способов сдавления воротной вены, поиска необходимой степени ее сужения. На животных с № 3 по № 6 эксперимент был выполнен в полном объеме, в соответствии с изложенным выше алгоритмом. Именно они использовались для констатации результатов эксперимента.
После проведения первичной операции, направленной на формирование портальной гипертен-зии, на операционном столе производилась фибро-эзофагоскопия с целью контроля исходного состояния нижней трети пищевода (при этом ни у одного животного не было обнаружено наблюдаемых визуально через слизистую оболочку вен), после перевода свиньи в вольер - инфузионная, антибактериальная, анальгетическая терапия. Исходя из дизайна исследования, длительность наблюдения в послеоперационном периоде составила трое суток. Главный итог этого наблюдения - все шесть животных остались живы и могли быть подвергнуты на четвертые сутки повторному оперативному вмешательству. В указанный срок выполнялась релапаротомия, проводилась ревизия.
В зоне наложения хомута на элементы печеноч-но-двенадцатиперстной связки картина была идентичной у животных № 3-6. Сама связка визуально была не изменена. Хомут лежал на том же участке, где и был затянут, признаков его миграции не было. Отмечалось неглубокое «врезывание» хомута в ткани связки без явного повреждения последних.
К признакам портальной гипертензии, обнаруживаемым визуально при ревизии брюшной полости, можно отнести два пункта.
Во-первых, имел место асцит. Исходно в брюшной полости животных отмечалось скудное количество прозрачной серозной жидкости, с трудом аспи-рируемой в отлогих местах живота (в количестве не более 8 мл). После операции количество выявляемого прозрачного светло-желтого выпота колебалось от
140 до 190 мл. Различия по количеству асцитической жидкости статистически достоверны (^ = 15,1, ^ = 5,84, р <0,01).
Во-вторых, отмечено венозное полнокровие селезенки. Ее цвет стал насыщенно бордовым с фиолетовым оттенком, что явно контрастировало с типичной окраской этого органа.
Наиболее важным для нас компонентом ревизии стала оценка состояния вен пищевода. Последовательно производились фиброэзофагоскопия и гастро-томия в верхней трети тела желудка с продлением разреза до кардиоэзофагеального перехода и стенки абдоминального отдела пищевода. При этом нижняя треть пищевода раскрывалась и становилась возможной визуальная оценка состояния ее слизистой оболочки и венозной системы. Необходимо отметить, что эндоскопическое исследование на данном этапе производилось в большей степени для подтверждения его выполнимости и как демонстрация возможной сферы практического применения создаваемой модели.
Рис. 3. Проведение животному фиброэзофагоскопии
Картина, обнаруженная при вскрытии нижней трети пищевода у животных, была следующая. Через слизистую оболочку розового цвета просвечивались и хорошо дифференцировались визуально 3 венозных ствола в виде сероватых тяжей различного диаметра - от 1,5 до 3 мм. Поскольку при первичной эзофагоскопии осмотр не выявлял каких-либо венозных стволов (то есть их исходный диаметр условно можно принять за 0), средний диаметр визуализируемых вен достоверно возрос (^ = 32,2, = 5,84, р<0,01). Наиболее крупные из венозных стволов выбухали в просвет пищевода на 1,5-2 мм, в их структуре начинал прослеживаться извитой характер. Признаков нарушения целостности слизистой оболочки над венозными стволами, «красных маркеров» не было. Варикозной трансформации вен кардиального отдела желудка не отмечено.
Описанная картина с точки зрения эндоскописта расценивается как изолированное варикозное расширение вен пищевода по стволовому типу. Если применить классификацию Шерцингера, констатируется I степень процесса. С учетом того факта, что упомянутая классификация все-таки рассчитана на человека, у свиньи, вероятно, степень процесса надо рассматривать как II.
Рис. 4. Внутренняя поверхность нижней трети пищевода с расширенными венозными стволами (обозначены стрелками)
Таким образом, цель, поставленная в начале исследования, была достигнута, в организме лабораторного животного удалось сформировать условия, приведшие к развитию портальной гипертензии с различными ее проявлениями. Отдельно необходимо отметить, что ни один из этапов моделирования не является технически сложным или трудновоспро-изводимым. Функциональность модели была подтверждена, в частности, проведенной серией эндо-скопий.
Выводы
1. Частичное сужение воротной вены путем наложения пластикового хомута на печеночно-двенад-цатиперстную связку может быть использовано для создания экспериментальной модели портальной гипертензии на базе организма лабораторного животного - домашней свиньи.
2. Предложенная методика отличается простотой, легкой воспроизводимостью, не требует специального оборудования или особых навыков, признаки портальной гипертензии достоверно появляются к четвертым суткам после проведения первичной операции.
3. Факт формирования у лабораторного животного портальной гипертензии подтверждается рядом визуальных признаков и развитием к четвертым суткам после первичной операции варикозного расширения вен пищевода 1-11 степени.
4. Созданная модель портальной гипертензии позволяет производить эндоскопические исследования и манипуляции на венах пищевода.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Литература/References
1. Юпатов Г.И., Прищепенко В.А. Алгоритм диагностики и дифференциальной диагностики хронических диффузных заболеваний печени (хронического гепатита и цирроза печени) в трудных клинических ситуациях, основанный на определении ферментативных
активностей сыворотки крови // Наука молодых (Eruditio Juvenium). - 2020. - Т. 8. - № 4. - С. 566-573. [Yupatov G.I., Prishepenko V.A. Algorithm for the diagnosis and differential diagnosis of chronic diffuse liver diseases (chronic hepatitis and liver cirrhosis) in difficult clinical situations, based on the determination of the enzymatic activities of blood serum. // Nauka molodykh (Eruditio Juvenium). - 2020; 8(4): 566-573 (In Russ.)]
2. Будко Е.В., Черникова Д.А., Ямпольский Л.М. Местные гемостатические средства и пути их совершенствования // Российский медико-биологический вестник им. академика И.П. Павлова. - 2019. - Т. 27. - № 2. -C. 274-285. [Budko E.V., Chernikova D.A., Jampol'skij L.M. Local hemostatic agents and ways to improve them. // Rossiiskii mediko-biologicheskii vestnik im. akademika I.P. Pavlova. -2019; 27(2): 274-285. (In Russ.)]
3. Стрижаков А.Н., Герадзe В.Н. Современное состояние проблемы цирроза печени // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2009. -Т. 1. - № 2. - С. 87-88. [Strizhakov A.N., Geradze V.N. The current state of the problem of liver cirrhosis. // Russian journal gastroenterology, gepatology, koloproktology. - 2009; 1(2): 8788 (In Russ.)]
4. Шамиров Х.Г., Курбонов Х.Х., Абдуджаббаров А. Синдром Маллори-Вейсса у больных с циррозом печени // Вестник Авиценны. - 2015. - Т. 17. - № 2. - С. 38-40.
[Shamirov H.G., Kurbonov H.H., Abdugabbarov A. Mallory-Weiss syndrome in patients with liver cirrhosis. // Vestnik Avitsenni. - 2015; 17(2): 38-40 (In Russ.)]
5. Евсеенко Д.А., Дундаров З.А., Надыров Э.А. Экспериментальная модель цирроза печени у лабораторных животных // Проблемы здоровья и экологии. - 2019. - № 1. -С. 72-77. [Evseenko D.A., Dundarov Z.A., Nadyrov Je.A. Experimental model of liver cirrhosis in laboratory animals. // Problemy zdorov'ya i ekologii. - 2019; 1: 72-77 (In Russ.)]
6. Арефьев Н.О., Гарбузенко Д.В. Выбор оптимальной методики частичного лигирования воротной вены при моделировании внепеченочной портальной гипертензии // Вестник Совета молодых ученых и специалистов Челябинской области. - 2016. - Т. 1. - № 1. -С. 14-19. [Aref'ev N.O., Garbuzenko D.V. Choosing the optimal technique for partial portal vein ligation in modeling extrahepatic portal hypertension. // Vestnik Soveta molodykh uchenykh i spetsialistov Chelyabinskoi oblasti. - 2016; 1(1): 14-19 (In Russ.)]
7. Гарбузенко Д.В. Экспериментальные методы изучения портальной гипертензии // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2010. - № 2. - С. 4-12. [Garbuzenko D.V. Experimental methods for studying portal hypertension. // Russian journal gastroenterology, gepatology, koloproktology. - 2010; 2: 4-12 (In Russ.)]
