CC BY
37
логии. - 2016. - № 2 (91). - С. 100-104. [Altynbekov K.S. Investigation of the efficacy and safety of neuroleptic drugs of the first and second generations in the inpatient treatment of patients with schizophrenia. // Sibirskii vestnik psikhiatrii i narkologii. - 2016; 2 (91): 100-104. (In Russ.)]
2. Максименко М.А. Физиология нервной системы // Международный журнал экспериментального образования. -2016. - № 7. - С. 179-180. [Maksimenko M.A. Physiology of the nervous system. // Mezhdunarodnyi zhurnal eksperimental 'nogo obrazovaniya. - 2016; 7: 179-180. (In Russ.)]
3. Fakra E., Azorin J. M. Clozapine for the treatment of schizophrenia. // Expert Opin. Pharmacother. - 2012; 13: 1923-1935.
4. Ikegami K., Yoshimura T. Seasonal time measurement during reproduction // J. Reprod. Dev. - 2013; 59 (4): 327-333.
5. Курбaтова А.В., Егорова А.Т. Репродуктивное здоровье девочек-подростков // Сибирское медицинское обозрение. - 2009. - Т. 50. - С. 9-13. [Kurbatova A.V., Egorova A.T. Reproductive health of adolescent girls. // Sibirskoe meditsinskoe obozrenie. - 2009; 50: 9-13. (In Russ.)]
6. Miller B.H., Takahashi J.S. Central circadian control of female reproductive function. // Front. Endocrinol. - 2014. DOI: 10.3389/fendo.2013.00195.
7. Шелехов И.Л., Берестнева О.Г. Репродуктивное здоровье женщины: психологические и социальные аспекты. - Томск: «Изд-во Томского политехн. ун-та», 2013. -367 с. [Shelehov I.L., Berestneva O.G. Reproduktivnoe zdorov'e zhenshhiny: psikhologicheskie i sotsial'nye aspekty. -Tomsk: Tomsk Polytechnic University; 2013: 367. (In Russ.)]
8. Gillian E.H., Mintzes B. Patterns of psychotropic medicine use in pregnancy in the United States from 2006 to 2011 among women with private insurance. // BMC Pregnancy and Childbirth. - 2014; 14: 242.
9. Багманова А.Р., Артамонова М.О. Действие нейролептических препаратов на организм беременной женщины и плода // Международный студенческий на-
учный вестник. - 2014. - № 4. - 77-90. [Bagmanova A.R., Artamonova M.O. Effect of neuroleptic drugs on the body of a pregnant woman and fetus. // Mezhdunarodnyi studencheskii nauchnyi vestnik. - 2014; 4: 77-90. (In Russ.)]
10. Данилов Д.С. Переносимость и безопасность терапии клозапином и уточнение показаний к его применению при лечении шизофрении (анализ данных литературы и результаты собственного исследования) // Обозрение психиатрии и медицинской психологии им. В.М.Бехтерева. -2010. - № 2. - С. 42-47. [Danilov D.S. Tolerability and safety of clozapine therapy and clarification of indications for its use in the treatment of schizophrenia (analysis of literature data and results of own research). // Obozrenie psikhiatrii i meditsinskoi psikhologii im. V.M. Bekhtereva. - 2010; 2: 42-47. (In Russ.)]
11. Карева Е.Н., Олейникова О.М., Панов В.О., Шимановский Н.Л., Скворцова В.И. Эстрогены и головной мозг // Вестник РАМН. - 2012. - № 2. - С. 48-52. [Kareva E.N., Olejnikova O.M., Panov V.O., Shimanovsky N.L., Skvortsova V.I. Estrogens and the brain. // Vestnik Rossiiskoi akademii meditsinskikh nauk. - 2012; 2: 48-52. (In Russ.)]
12. Амстиславская Т.Г., Попова Н.К. Нейроэндокрин-ные механизмы регуляции полового мотивационного поведения самцов: эффекты неблагоприятных воздействий в разные периоды онтогенеза //Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2009. - № 2. -С. 3-21. [Amstislavskaja T.G., Popova N.K. Neuroendocrine mechanisms of regulation of sexual motivational behavior of males: effects of adverse effects in different periods of ontogenesis. // Obzory po klinicheskoi farmakologii i lekarstvennoi terapii. - 2009; 2: 3-21. (In Russ.)]
13. Директива 2010/63/ EU Европейского парламента и совета Европейского союза по охране животных, используемых в научных целях. - С.-Пб., 2012. - 48 с. [Direktiva 2010/63/ EU Evropeiskogo parlamenta i soveta Evropeiskogo soyuza po okhrane zhivotnykh, ispol'zuemykh v nauchnykh tselyakh. - St.-Petersburg, 2012. - 48 p. (In Russ.)]
УДК. 616.31 DOI 10.24412/2220-7880-2022-1-67-75
ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОРЕЗОРБИРУЕМЫХ КОЛЛАГЕНОВЫХ МЕМБРАН ПРИ ЗАКРЫТИИ РАНЕВЫХ ДЕФЕКТОВ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ РТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Тарасенко С.В., Благушина Н.А.
ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет), Москва, Россия (119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2) e-mail: [email protected]
Разработка и усовершенствование методов лечения, способствующих регенерации слизистой оболочки рта в зоне раневых дефектов, является актуальной задачей хирургической стоматологии. Цель исследования: провести гистологический анализ применения новых биорезорбируемых мембран из ксеноперикар-да и коллагеновой пленки при закрытии послеоперационных дефектов слизистой оболочки рта и изучить особенности регенерации слизистой оболочки твердого неба при использовании ксеногенных мембран в рамках эксперимента на животных. Экспериментальная модель опытного исследования была создана на основании использования 36 кроликов породы шиншилла, которым были сформированы дефекты на слизистой оболочке твердого неба. Животные были разделены на 3 группы: у животных группы сравнения заживление проходило путем вторичного натяжения тканей, в 1-й группе исследования - под колла-геновой мембраной из ксеноперикарда, во 2-й группе исследования - под коллагеновой пленкой. На 3, 6 и 10-е сутки у животных, которых выводили в данный день из эксперимента, проводили забор полнослойно-го трансплантата твердого неба в области ранее сформированного дефекта и проводили гистологическое исследование биоптатов. У животных групп исследования на третьи сутки воспалительная инфильтра-
ция была снижена по сравнению с животными группы сравнения. У животных 1-й группы исследования на третьи сутки часть дефекта уже была заполнена незрелой грануляционной тканью. На шестые сутки у животных групп исследования отмечали полную эпителизацию раны, под эпителием была сформирована зрелая грануляционная ткань, переходящая в рубцовую. Воспалительная инфильтрация была менее выражена. Наибольшую активацию репарации раны отмечали при использовании перикарда. К 10-м суткам раневой дефект был эпителизирован, под эпителием была расположена фиброзно-рубцовая ткань с минимально воспалительной инфильтрацией. В группе исследования с перикардом рубцовая ткань была более зрелая, чем в группе исследования с коллагеновой пленкой. При применении коллагеновых мембран для закрытия раневых дефектов слизистой оболочки твердого неба были выявлены заметная стимуляция и сокращение сроков эпителизации и рубцевания, особенно при использовании перикарда.
Ключевые слова: свободный десневой трансплантат, коллаген, раневой дефект, твердое небо, ксеноперикард.
EXPERIMENTAL HISTOLOGICAL EVALUATION OF BIORESORBABLE COLLAGEN MEMBRANE USE IN SURGICAL ORAL MUCOSAL DEFECTS
Tarasenko S.V, Blagushina N.A.
I.M. Sechenov First Moscow State Medical University of the Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University), Moscow, Russian Federation (119991, Moscow, Trubetskaya St., 8-2), e-mail: [email protected]
Improvement of materials and treatments to facilitate wound healing and tissue regeneration is today's most urgent task for surgical dentistry. The purpose of the study: to conduct a histological analysis of the use of new bioresorbable membranes from the xenopericardium and collagen film in the closure of postoperative defects of the oral mucosa and to study the features of regeneration of the mucous membrane of the hard palate when using xenogenic membranes in an animal experiment. The experiment was carried out on 36 chinchilla rabbits, in which oral mucosa was wounded. The animals were divided into 3 groups. In the animals of the comparison group, secondary intention healing was used. The 1st study group had xenopericardium collagen membranes. In the 2nd study group a collagen film was used. On the 3rd, 6th and 10th days a biopsy was performed for histological examination. The animals of the study groups showed reduced inflammation level on the 3d day in comparison with the animals of the comparison group. In animals of the 1st study group, part of the defect area was filled with immature granulation tissue on the 3rd day. On the 6th day, the defect area presented completely filled with mature granulation tissue in the animals of the study groups. Inflammation was slight. Pericardium membranes showed the greatest activation in wound repair. By the 10th day, the wound defect had been epithelized, and fibrous-scar tissue with minimal inflammation level was seen under the epithelium. Moreover, in the study group, the scar tissue was more mature in cases with pericardium membranes than in those with a collagen film. ¿ollagen membranes used as a biological dressing in oral mucosal defects facilitated healing progress and scarring, especially when pericardium membranes were used.
Keywords: free gingival graft, collagen, wound defect, hard palate, xenopericardium.
Введение
Изучение особенностей морфологического и гистологического строения слизистой оболочки рта и ее регенерации после хирургических вмешательств является актуальной темой для отечественных и зарубежных исследователей [1—4]. Все ткани наделены способностью к самовосстановлению, однако ограничивающим данный процесс фактором может являться этиология и выраженность повреждающего фактора [5]. Заживление ран слизистой оболочки рта происходит в среде, насыщенной бактериями, раневая поверхность подвергается постоянным микротравмам и контактирует со слюной [2; 5; 6]. Понимание биологических механизмов, лежащих в основе регенеративных процессов, является основным фактором выбора возможного метода лечения, направленного на заживление ран [5-7].
Среди множества направлений хирургической стоматологии в последние годы все большее распространение приобретает хирургия пародонта и мукогингивальная хирургия [8-12]. Аугментация мягких тканей полости рта, впервые примененная более 50 лет назад, проводится как вокруг зубов, так и в области установленных дентальных имплан-татов [9, 11-13]. Показаниями к проведению му-когингивальной хирургии являются процедуры по
закрытию поверхности корня и пластике рецессий, увеличение объема кератинизированной десны и мягких тканей, коррекция слизисто-десневых деформаций [1, 4, 8, 14-17]. Данные пластические хирургические вмешательства направлены на достижение долгосрочных благоприятных результатов, которые будут отражаться в сохранении строения тканей па-родонта, поддержании функции и эстетики [4, 9, 11].
«Золотым стандартом» аугментации мягких тканей полости рта является свободный десневой трансплантат (СДТ), полученный из области твердого неба [4, 13, 17-20]. Принципы заживления тканей и факторы, влияющие на процесс регенерации при использовании данной методики, были тщательно изучены, что сделало применение СДТ достаточно предсказуемой операцией [11, 19].
Наиболее частые постоперационные осложнения получения СДТ включают в себя болевой синдром, кровотечение, некроз слизистой оболочки и обнажение костной ткани. Данные осложнения связаны в большинстве случаев с открытым ведением раны, которая подвергается механическому и термическому воздействию, бактериальной контаминации. Данные факторы замедляют процессы формирования грануляционной и эпителиальной ткани, а также могут способствовать формированию рубцовых изменений [1, 14, 18, 21].
Для снижения вероятности развития послеоперационных осложнений и интенсивности болевого синдрома, ускорения процесса заживления и эпи-телизации раны в донорской зоне после получения СДТ были предложены разнообразные методы лечения: модификация процедур забора трансплантата и ушивание раны, использование лазерного излучения, антисептические пленки и пародонтальные повязки, аллогенные и синтетические мембраны, гемостатичес-кие губки и обогащенный тромбоцитами фибрин, изготовление защитных капп и воздействие на раневую поверхность биологически активными материалами и молекулами [1, 4-6, 16-18, 20, 21]. Основной задачей использования этих методов является повышение скорости заживления раны на небе и снижение послеоперационного дискомфорта, вероятности вторичного инфицирования, формирования рубцовой ткани и развития прочих осложнений [14, 17, 18, 22]. Высокая саливация в полости рта обусловливает выбор препаратов для местного воздействия на раневую поверхность в пользу лекарственных средств с высокой адгезией для увеличения времени контакта препарата со слизистой оболочкой [2].
Для ведения открытых раневых поверхностей также применяют и препараты на основе коллагена [2, 6, 7]. В ранний послеоперационный период колла-геновые матрицы обеспечивают хороший гемостати-ческий эффект, необходимый для начала процессов заживления. Препараты на основе коллагена обладают длительным периодом резорбции (около 14 суток), что исключает необходимость его повторного нанесения на раневую поверхность. Они защищают раневую поверхность от вторичного инфицирования, снижают/устраняют механическое, химическое и термическое воздействие на рану, снижают болевые ощущения. Продукты биодеградации коллагена активируют пролиферативные процессы в окружающих тканях, а также служат пластическим материалом для регенерирующих тканей [6, 7].
В значительном количестве исследований были разносторонне изучены преимущества и недостатки разработанных методов и материалов для закрытия раневых дефектов слизистой оболочки рта. Однако такого, который удовлетворял бы всем предъявляемым требованиям, пока не удалось получить.
Цель исследования: провести гистологический анализ применения новых биорезорбируемых мембран из ксеноперикарда и коллагеновой пленки при закрытии послеоперационных дефектов слизистой оболочки рта и изучить особенности регенерации слизистой оболочки твердого неба при использовании ксеногенных мембран в рамках эксперимента на животных.
Материал и методы
На базе Центрального вивария ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет) было проведено одно-центровое проспективное нерандомизированное поперечное экспериментальное исследование. На проведение исследования было получено разрешение Локального этического Комитета (выписка из протокола заседания № 05-19 от 10.04.2019). В эксперименте были использованы 36 кроликов породы шиншилла, половозрелые самцы, массой тела около 4,0 кг, средняя масса 3,8±0,15 кг, в возрасте 6 месяцев. Исследование было проведено строго в соответствии с законодательной базой с соблюдением принципов гуманного
обращения с животными согласно «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (Страсбург, 18 марта 1986 г.), «Международными рекомендациями (этический кодекс) по проведению медико-биологических исследований с использованием животных», разработанными и опубликованными в 1985 г. Советом международных научных организаций, Приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации № 199Н «Об утверждении правил надлежащей лабораторной практики» от 01.04.2016, Межгосударственным стандартом ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами», положениями Директивы 2010/63/Еи Европейского Парламента и Совета Европейского Союза от 22 сентября 2010 года по охране животных, используемых в научных целях (статья 27).
Использованные в данном исследовании материалы являются собственной разработкой Института регенеративной медицины ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет).
Коллагеновая мембрана, получаемая в результате стандартизованного и контролируемого процесса, изготовлена из коллагена I типа. Коллаген получают из бычьего перикарда щелочно-солевым методом. При изготовлении использовали фармацевтическую субстанцию разваренного коллагена для создания рыхлого слоя, прилипающего к ране, в который вносили левомицетин и метилурацил. Далее подвергали лиофилизации (рис. 1). Мембрана имеет пористую структуру: пористый слой обращают к раневой поверхности, плотный слой - в полость рта. Волокнистая микроструктура мембраны является гидрофильной. Мембрана сохраняет свою структурную целостность даже во влажном состоянии, легко адаптируется к раневой поверхности.
Коллагеновая пленка изготавливается из дермы крупного рогатого скота. В процессе обработки дерма проходит этапы химической и механической обработки: происходит размягчение ее структуры, дробления и разделения на волокна, после чего формируют коллагеновую массу. Из полученной массы способом экструзии и последующей сушки изготавливают саму пленку (рис. 2). Пленка представляет собой пластины светло-желтого цвета с пористой структурой и рельефной поверхностью. В состав были введены левомицетин и метилурацил для создания в ране бактерицидной среды.
Рис. 1. Внешний вид коллагеновой мембраны из ксеноперикарда
Рис. 2. Внешний вид модифицированной коллагеновой пленки
У животных, использованных для эксперимента, проводили операцию получения СДТ из области твердого неба с применением различных видов мембран для закрытия раневой поверхности. Все экспериментальные животные были разделены на три группы в зависимости от материала, который использовали для закрытия раневого дефекта слизистой оболочки на твердом небе: 12 животным, включенным в 1-ю группу, после создания раны размером 5х5 мм к краям дефекта фиксировали коллагеновую мембрану из ксеноперикарда с левомицетином и ме-тилурацилом; у 12 экспериментальных животных 2-й группы созданный раневой дефект закрывали колла-геновой пленкой с левомицетином и метилурацилом; 12 кроликов, у которых заживление раневой поверхности проходило путем вторичного натяжения, составили группу сравнения.
На 3, 6 и 10-е сутки у животных, которых выводили в данный день из эксперимента, проводили забор полнослойного трансплантата твердого неба в области ранее сформированного дефекта, частично захватывая по краям интактную слизистую оболочку. Биоптаты слизистой оболочки фиксировали в 10%-ном нейтральном растворе формалина, проводили через заливочные среды, парафиновые срезы толщиной 4-5 микрон окрашивали гематоксилином и эозином. Изучение и анализ полученных образцов осуществляли в универсальном микроскопе Leica DM4000 B LED, оснащенном видеокамерой Leica DFC7000 T. Микрофотографии препаратов были сделаны с помощью этой камеры и компьютерной программы LAS V48.
На основании полученных гистологических препаратов было проведено гистоморфометрическое исследование наличия лимфогистоцитарной (кругло-клеточной) и лейкоцитарной (нейтрофильной) инфильтрации, определение площади грануляционной ткани, соединительной ткани и некротизированных тканей. Морфометрическую оценку числа клеточных элементов и площади формирования новых тканей проводили при помощи автоматического расчета среднего значения из 10 полей зрения при увеличении в 400 раз.
Материалы исследования были подвергнуты статистической обработке с использованием методов параметрического и непараметрического ана-
лиза. Накопление, корректировка, систематизация исходной информации и визуализация полученных результатов осуществлялись в электронных таблицах Microsoft Office Excel 2019. Статистический анализ проводился с использованием программы IBM SPSS Statistics v.26 (разработчик - IBM Corporation). Статистический анализ проводился по сравнению всех трех групп для подтверждения нулевой гипотезы, где ^0 означает «нет различий между группами» и не равен гипотезе. Наличие нормального распределения проводили с помощью теста Шапиро - Уилкса. Для сравнения результатов в разных группах были использованы методы непараметрической статистики (критерий суммы рангов Краскела - Уоллиса). В том случае, если рассчитанное значение критерия Краскела - Уоллиса превышало критическое, различия показателей считались статистически значимыми. В противном случае признавалась верной нулевая гипотеза.
Результаты и их обсуждение
По результатам гистологического экспериментального исследования у животных группы сравнения на третьи сутки при микроскопической оценке определялось отсутствие эпителия на поверхности раны. В области дна раны отмечали умеренную ней-трофильную, лимфо-макрофагальную инфильтрацию, отек ткани и начинавшуюся пролиферацию фибробластов, которые сочетались с расстройством микроциркуляции (рис. 3).
Рис. 3. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа сравнения, третьи сутки после хирургического вмешательства. Ткани дна раны с отсутствием эпителия, воспалительная
инфильтрация, умеренное число фибробластов. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х200
К шестым суткам при макроскопическом изучении квадратная рана приобрела вытянутую форму, а края раны сблизились. При гистологическом изучении было отмечено значительное сужение раневого дефекта по сравнению с препаратами предыдущего срока наблюдения. По краям раны обнаруживали пролиферацию эпителия, наплывавшего на ткань вокруг дефекта. На дне раны определяли грануляционную ткань с уменьшением воспалительных изменений и преобладанием фибробластов и коллагеновых волокон (рис. 4).
Рис. 4. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа сравнения, шестые
сутки после хирургического вмешательства. Пролиферация эпителия в ткани. В раневых тканях остается лимфо-макрофагальная инфильтрация.
Формирование незрелой грануляционной ткани. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х200
Через 10 суток после забора СДТ дефект был эпителизирован и заполнен фиброзирующейся грануляционной тканью. В грануляционно-фиброзной ткани была повышена васкуляризация, часть сосудов имела расширенный просвет. В этой ткани оставалось много пролиферирующих фибробластов, снижалось количество макрофагов и лимфоцитов (рис. 5).
Рис. 5. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа сравнения, 10-е сутки после хирургического вмешательства.
Пролиферация фибробластов, сниженная лимфо-макрофагальная инфильтрация. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х400
К третьим суткам при закрытии донорской зоны на твердом небе при помощи коллагеновой мембраны из ксеноперикарда с левомицетином и метилура-цилом определялось значительное сужение раневого дефекта по сравнению с дефектами в группе сравнения. Дефект был заполнен фибринозно-лейкоци-тарной пробкой с преобладанием нейтрофилов, в том числе разрушенных. Следует отметить, что по краям дефекта были видны пласты регенерирующего эпителия (рис. 6). Вокруг дефекта располагалась
грануляционная ткань, между очагами которой визуализировали жировую ткань (рис. 7). В грануляционной ткани на фазовом контрасте были видны тонкие коллагеновые волокна.
Рис. 6. Гистологический препарат слизистой
оболочки твердого неба, группа 1, третьи сутки после хирургического вмешательства. Лейкоцитарно-фибриновая пробка, заполняющая дефект. Рост эпителиального пласта с обеих сторон. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х50.
Рис. 7. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа 1, третьи сутки после хирургического вмешательства. Жировая и грануляционная ткань на дне раны. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х100
К шестым суткам отмечали полную эпителиза-цию дефекта с резко выраженной гипертрофией эпителия. На месте дефекта обнаруживалась рубцовая ткань, состоявшая из коллагеновых волокон, плотно прилежащих друг к другу и ориентированных беспорядочно (рис. 8). В рубцовой ткани несколько увеличено, по сравнению с нормальной тканью твердого неба, количество сосудов. Кроме фибробластов в ткани определяли сравнительно немногочисленные макрофаги и лимфоциты.
К 10-м суткам после оперативного вмешательства область бывшего дефекта была покрыта гипертрофированным эпителием, под которым располагалась фиброзная ткань (рис. 9).
Рис. 8. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа 1, шестые сутки после хирургического вмешательства Переход грануляционной ткани в фиброзно-грануляционную ткань. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х200
Рис. 10. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа 2, третьи сутки после хирургического вмешательства. Лимфо-макрофагальная и слабая нейтрофильная инфильтрация раневых тканей. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х200
Рис. 9. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа 1, 10-е сутки после хирургического вмешательства. Плотная фиброзная ткань с умеренной лимфо-макрофагальной инфильтрацией. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х200
На третьи сутки после фиксации к области созданного дефекта на слизистой оболочке твердого неба коллагеновой пленки с левомицетином и метилураци-лом поверхность раневого дефекта выглядела относительно чистой, местами на ней оставались небольшие остатки фибрина и фокусы кровоизлияния. Эпителий по обеим сторонам дефекта был гипертрофирован. В ткани неба отмечали умеренно выраженный отек и слабую лимфо-макрофагальную инфильтрацию с примесью нейтрофилов и эозинофилов (рис. 10).
На шестые сутки дефект был полностью закрыт гипертрофированным эпителием с выраженным акантозом. Под эпителием обнаруживали грануляционную ткань, переходившую в фиброзную (рис. 11).
Через 10 суток после закрытия раневого дефекта коллагеновой пленкой под гипертрофированным эпителием была видна фиброзно-рубцовая ткань, состоявшая из фибробластов, уменьшенного количества лимфоцитов и макрофагов и параллельно расположенных коллагеновых волокон (рис. 12). При фазо-во-контрастной микроскопии определяли развитую сеть коллагеновых волокон (рис. 13).
Рис. 11. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа 2, шестые сутки после хирургического вмешательства. Пролиферация фибробластов в грануляционной ткани. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х400
Рис. 12. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа 2, 10-е сутки после хирургического вмешательства. Под гипертрофированным эпителием расположена грануляционная ткань, переходящая в фиброзно-рубцовую ткань. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение х100
Рис. 13. Гистологический препарат слизистой оболочки твердого неба, группа 2, 10-е сутки после хирургического вмешательства. Тот же микропрепарат, что и на рисунке 12. Видны параллельные пучки фибробластов и коллагена. Фазово-контрастная микроскопия, увеличение х200
При изучении гистологических препаратов, полученных на 3, 6 и 10-е сутки после оперативного вмешательства на слизистой оболочке твердого неба, также был проведен сравнительный анализ динамики регенеративного процесса в донорской зоне в зависимости от использованного для ее закрытия коллагенсодержащего препарата на основании мор-фометрического метода исследования (табл. 1).
1
Морфометрическая характеристика раневой поверхности на слизистой оболочке твердого неба
у экспериментальных животных
3 сутки 6 сутки 10 сутки
Группа 1
Количество нейтрофилов (%) 13,25±0,99* 0 0
Площадь грануляционной ткани (%) 13,75±1,44* 47,5±2,89* 22,5±1,67*
Площадь соединительной ткани (%) 0 31±2,31* 57,5±2,89*
Группа 2
Количество нейтрофилов (%) 16,5±0,75* 0 0
Площадь грануляционной ткани (%) 0 35±2,36* 25±2,36*
Площадь соединительной ткани (%) 0 22,5±1,67* 42,5±2,89*
Группа сравнения
Количество нейтрофилов (%) 31,5±0,75* 12,5±0,75* 0
Площадь грануляционной ткани (%) 0 21,25±2,76* 17,5±1,67*
Площадь соединительной ткани (%) 0 16,25±2,76* 26,25±1,44*
Примечание: * различия статистически значимы при р<0,05.
При сравнении средних показателей между тремя исследуемыми группами достаточно наглядным являлось наличие выраженной и длительно сохраняющейся воспалительной инфильтрации тканей донорской зоны при заживлении вторичным натяжением. При закрытии раневой поверхности коллагенсодержащими препаратами на третьи сутки степень выраженности воспалительного процесса была значительно ниже, а содержание нейтрофилов в исследованных образцах было ниже в 2 раза, чем в образцах из группы сравнения. В исследуемых группах на 6 и 10-е сутки не определяли нейтрофильную инфильтрацию. В гистологических препаратах группы сравнения количество нейтрофилов в тканях снижалось к шестым суткам наблюдения, а исчезала только к 10-м суткам (рис. 14). Полученные данные являются статистически достоверными с высокой степенью безошибочного прогноза (р<0,01).
Заживление раневой поверхности и формирование грануляционной ткани были наиболее интенсивными при использовании коллагеновой мембраны из ксеноперикарда по данным морфометрического метода исследования: первые признаки формирования незрелой грануляционной ткани по краям дефекта определяются на третьи сутки после создания раневой поверхности. В этот же период наблюдения при закрытии дефекта коллагеновой пленкой и при заживлении вторичным натяжением грануляционная ткань во всех препаратах отсутствовала. К шестым суткам во всех группах определяли прогрессирова-ние роста грануляционной ткани. Постепенное сни-
жение интенсивности роста грануляций отметили на 10-е сутки наблюдения, что связано с замещением данной ткани на соединительную (рис. 15). Статистический анализ полученных показателей роста грануляционной ткани показал достоверность различий (в период наблюдения третьих и шестых суток р<0,01; на 10-е сутки наблюдения р<0,05).
35
—•—Группа 1 • Группа 2 —о—Группа сравнения
—^ 0 10 сутки
Рис. 14. Динамика развития воспалительной инфильтрации слизистой оболочки твердого неба у экспериментальных животных после проведения оперативного вмешательства
Сниженная регенерация тканей донорской зоны при заживлении вторичным натяжением также прослеживалась и при оценке площади формировавшейся соединительной ткани. По сравнению с образцами из группы 1 на шестые сутки послеоперационного
периода площадь соединительной ткани была в три раза меньше и в 1,5 раза меньше, чем в образцах из группы 2. К 10-м суткам данная тенденция сохранилась во всех группах. При использовании коллаге-новой мембраны из ксеноперикарда соединительная ткань более зрелая (рис. 16). Полученные средние значения площади соединительной ткани являются статистически достоверными во все периоды наблюдения (на шестые сутки р<0,05; на 10-е сутки р<0,01).
Рис. 15. Динамика формирования грануляционной ткани на твердом небе у экспериментальных животных после проведения оперативного вмешательства
Рис. 16. Динамика формирования соединительной ткани на твердом небе у экспериментальных животных после проведения оперативного вмешательства
Заключение
Таким образом, по данным проведенного гистологического и гистоморфометрического исследования при закрытии раневой поверхности на слизистой оболочке твердого неба коллагеновой мембраной из ксеноперикарда и коллагеновой пленкой обнаруживаются заметная стимуляция и ускорение раневого процесса, в том числе эпителизации и рубцевания. Было отмечено определенное преимущество коллагеновой мембраны из ксеноперикарда. Использование препаратов на основе коллагена положительно влияет на процессы регенерации, снижает интенсивность послеоперационных воспалительных явлений. Кол-лагеновая мембрана из ксеноперикарда с левомице-тином и метилурацилом при ее экспериментальном использовании продемонстрировала наиболее благоприятное течение раневого процесса, что в клиническом использовании будет значительно сокращать сроки реабилитации пациентов после процедур по забору СДТ для мягкотканной аугментации.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Литература/References
1. Дурново Е.А., Рябова Д.А., Орлинская Н.Ю., Хо-мутинникова Н.Е. Экспериментально-клиническая оценка эффективности использования полимерной мембраны при оперативных вмешательствах на слизистой оболочке полости рта // Стоматология. - 2018. - № 97 (5). -С. 48-53. [Dumovo E.A., Ryabova D.A., Orlinskaya N.Yu., Khomutinnikova N.E. Experimental and clinical study of the effectiveness of polymeric membrane in surgical interventions on the oral mucosa. // Stomatologiia. - 2018; 97 (5): 48-53. (In Russ.)]
2. Тирская О.И., Казанкова Е.М., Большедворская НЕ., Бывальцева С.Ю., Федотова М.В. Применение гелеобразно-го покрытия на основе повиаргола в лечении травматических повреждений слизистой оболочки полости рта // Пародонто-логия. - 2018. - Т. 23. - № 3 (88). - С. 35-38. [Tirskaya O.I., Kazankova E.M., Bolshedvorskaya N.E., Byvaltseva S.Yu., Fedotova M.V. The gel-like coating application based on poviargol in treatment of traumatic lesions of the oral mucosa. // РагоёоМо^а. - 2018; 23 (3-88): 35-38. (In Russ.)]
3. Tancharoen S., Gando S., Binita S., Nagasato T., Kikuchi K., Nawa Y., Dararat P., Yamamoto M., Narkpinit S., Maruyama I. HMGB1 Promotes Intraoral Palatal Wound Healing through RAGE-Dependent Mechanisms. // Int. J. Mol. Sci. - 2016; 17 (11): 1961.
4. Yaghobee S., Rouzmeh N., Aslroosta H., Mahmoodi S., Khorsand A., Kharrazifard M.J. Effect of Topical Erythropoietin (EPO) on palatal wound healing subsequent to Free Gingival Grafting (FGG). // Braz Oral Res. - 2018; 32: e55.
5. Lee K., Amara H.B., Lee S.C., Leesungbok R., Chung M.A., Koo K.-T., Lee S.W. Chemical Regeneration of Wound Defects: Relevance to the Canine Palatal Mucosa and Cell Cycle Up-Regulation in Human Gingival Fibroblasts. // Tissue Eng. Regen. Med. - 2019; 16 (6): 675-684.
6. Зорина О.А., Молчанов А.М., Балыкин Р.А. Показания к применению коллагенового раневого покрытия в мукогингивальной хирургии и методика его использования // Стоматология. - 2014. - № 93 (4). - С. 48-51. [Zorina O.A., Molchanov A.M., Balykin R.A. Indication and technique of human fibrinogen/thrombin-coated collagen patch use in mucogingival surgery. // Stomatologiia. - 2014; 93 (4): 48-51. (In Russ.)]
7. Морозов А.М., Сергеев А.Н., Сергеев Н.А., Дуба-толов Г.А., Рыжова Т.С., Пахомов М.А., Пельтихина О.В. Современные методы стимуляции процесса регенерации послеоперационных ран // Сибирское медицинское обозрение. - 2020. - № 3 (123). - С. 7. [Morozov A.M., Sergeev A.N., Sergeev N.A., Dubatolov G.A., Ryzhova T.S., Pakhomov M.A., Peltikhina O.V. Modern methods of stimulating the regeneration process of postoperative wounds. // Sibirskoe medicinskoe obozrenie. - 2020; 3(123): 7. (In Russ.)]
8. Грудянов А.И., Николаев А.В. Сравнительный анализ отдаленных результатов использования различных ауто- и аллотрансплантатов для создания зоны кера-тинизированной десны при вестибулопластике на нижней челюсти // Стоматология. - 2016. - Т. 95. - № 1. - С. 40-43. [Grudyanov A.I., Nikolaev A.V. Comparative study of long term result of auto- and allografts for keratinized gingiva restoration in vestibuloplasty area on the lower jaw. // Stomatologiia. -2016; 95 (1): 40-43. (In Russ.)]
9. Thoma D.S., Naenni N., Figuero E., Hammerle C.H.F., Schwarz F., Jung R.E., Sanz-Sanchez I. Effects of soft tissue
augmentation procedures on peri-implant health or disease: A systematic review and meta-analysis. // Clin. Oral Implants Res. - 2018; 29 (Suppl 15): 32-49.
10. Barootchi S., Tavelli L., Zucchelli G., Giannobile W. V., Wang H.L. Gingival phenotype modification therapies on natural teeth: A network meta-analysis. // J. Periodontol. -2020; 91 (11): 1386-1399.
11. Zucchelli G., Tavelli L., McGuire M.K., Rasperini G., Feinberg S.E., Wang H.L., Giannobile W.V. Autogenous soft tissue grafting for periodontal and peri-implant plastic surgical reconstruction. // J. Periodontol. - 2020; 91 (1): 9-16.
12. Tavelli L., Barootchi S., Avila-Ortiz G., Urban I.A., Giannobile W. V., Wang H.L. Peri-implant soft tissue phenotype modification and its impact on peri-implant health: A systematic review and network meta-analysis. // J. Periodontal. - 2021; 92 (1): 21-44.
13. Долгалев А.А., Цогоев В.К., Брусницын Д.А., Аветисян З.А., Чагаров А.А. Метод направленной тканевой регенерации для увеличения площади прикрепленной слизистой полости рта // Пародонтология. - 2017. -Т. 22. - № 4 (85). - С. 73-76. [Dolgalev A.A., Cogoev V.K., Brusnitsyn D.A., Avetisyan Z.A., Chagarov A.A. The method of increasing the volume of the attached oral mucosa in the area of implants. // Рarodontologija. - 2017; 22; 4 (85): 73-76. (In Russ.)]
14. Семенцов И.В., Пешко А.П., Гоман М.Ю. Закрытие донорского участка небного аутотрансплантата фи-бриновой мембраной // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2020. - № 2. - С. 92-93. [Sementsov I.V., Peshko A.P., Goman M.Yu. Closing a donor site of a palate autograft with a fibrin membrane. // Pacific Medical Journal. - 2020; 2: 92-93. (In Russ.)]
15. Ксембаев С.С., Бушеев Д.О., Валиева И.И., Ха-лиуллина А.А., Хафизова Л.Н. Мукогингивальные аномалии как этиопатологенетический фактор развития рецессии десны // Проблемы стоматологии. - 2021. - Т. 17. - № 2. -С. 14-18. [Ksembaev S.S., Busheev D.O., Valieva I.I.,
Khaliullina A.A., Khafizova L.N. Mucosal abnormalities as an etiopathogenetic factor in the development of gingival recession. // Problemy stomatologii. - 2021; 17; 2: 14-18. (In Russ.)]
16. Amaliya A., Muhaimina R.K., Susanto A., Sutjiatmo A.B. Histological Assessment of Palatal Donor Site Wound Healing after Application of Moringa oleifera Lamarck Leaf Extract in Rats. // Eur. J. Dent. - 2019; 13 (2): 248-254.
17. Kadkhoda Z., Tavakoli A., Chokami Rafiei S., Zolfaghari F., Akbari S. Effect of Amniotic Membrane Dressing on Pain and Healing of Palatal Donor Site: A Randomized Controlled Trial. // Int J. Org. Transplant Med. - 2020; 11 (2): 55-62.
18. Sezgin Y., Qetin M.B., Bulut S., Alptekin N.Ö., Börjek P. Evaluating the Effects of a Topical Preparation with Dexapanthenol, Silbiol, Undecylenic Acid, and Lidocaine on Palatal Mucosa Wound Healing in a Rat Model. // Balkan Med. J. - 2019; 36 (2): 88-95.
19. Едранов С.С., Керзиков Р.А. Морфогенез свободного десневого трансплантата // Российский стоматологический журнал. - 2017. - Т. 21. - № 2. -С. 111-116. [Edranov S.S., Kerzikov R.A. Free gingival graft morphogenesis. //Rossiiskii stomatologicheskii zhurnal. -2017; 21; 2: 111-116. (In Russ.)]
20. Chiu T.S., Chou H.C., Kuo P. J., Liang J.Y., Chiu H.C. A novel design of palatal stent to reduce donor site morbidity in periodontal plastic surgery. // J. Dent. Sci. - 2020; 15 (2): 136-140.
21. Keskiner I., Lutfioglu M., Aydogdu A., Saygun N.I., Serdar M.A. Effect of Photobiomodulation on Transforming Growth Factor-beta1, Platelet-Derived Growth Factor-BB, and Interleukin-8 Release in Palatal Wounds After Free Gingival Graft Harvesting: A Randomized Clinical Study. // Photomed Laser Surg. - 2016; 34 (6): 263-271.
22. Zhu T., Park H.C., Son K.M., Yang H.-C. Effects of dimethyloxalylglycine on wound healing of palatal mucosa in a rat model. // BMC Oral Health. - 2015; 15: 60.
УДК 616.366-003.7-089 DOI 10.24412/2220-7880-2022-1-75-79
НОВЫЙ СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПОРТАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ НА ЖИВОТНЫХ
Федосеев А.В., Бударев В.Н.
ФГБОУ ВО «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Минздрава России, Рязань, Россия (390026, г. Рязань, ул. Высоковольтная, 9), e-mail: [email protected]
Цель: разработать способ создания полноценной, доступной, легко воспроизводимой экспериментальной модели портальной гипертензии на базе организма лабораторного животного - домашней свиньи. После анализа используемых в настоящее время способов формирования портальной гипертензии у лабораторных животных был разработан пригодный для работы на домашних свиньях метод. В условиях операционной вивария Рязанского государственного медицинского университета был проведен эксперимент на шести животных. Портальная гипертензия формировалась за счет контролируемого частичного сдавления элементов печеночно-двенадцатиперстной связки пластиковым хомутом с многопозиционной защелкой. Результатом проведенных действий было формирование у животных портальной гипертензии, что подтверждалось выявлением у них варикозного расширения вен пищевода. Созданная модель была признана доступной и достаточно функциональной, подтверждена возможность проведения на ней эндоскопических исследований и манипуляций.
Ключевые слова: портальная гипертензия, экспериментальная модель, домашняя свинья.
