CC BY
15
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ»
Санкт-Петербург 23-24 июня 2016 г.
тах количество безъядерных клеток варьировало от 22 до 29 %. Доля оксифильных нормобластов (стадия созревания, предшествующая ретикуло-цитам) в варианте без подложки составила 56 %, в суспензионной и адгезивной культурах — 72 и 68 %, соответственно. Несмотря на то, что дифференцировка CD34+ клеток в условиях бес-стромального культивирования прошла за тот же период более полно, кратность увеличения клеточной массы в этом случае была в среднем в 5,3 раза ниже в сравнении с вариантами дополнительного сокультивирования с МСК. В результате кратность увеличения общего количества ретикулоцитов в двух последних вариантах культивирования была выше более чем в 3 раза. О накоплении клетками гемоглобина свидетель-
ствовал осадок красного цвета, полученный при седиментации клеток. Содержание гемоглобина в среднем составляло 20 пг/клетку (по литературным данным зрелый эритроцит содержит 27-30 пг/клетку).
Выводы. Разработан метод трёхстадийной эритроидной дифференцировки стволовых клеток пуповинной крови in vitro до стадии окси-фильного нормобласта/эритроцита с кратностью прироста— 19 070 ± 3 740 раз. Проведение этапа сокультивирования эритроидных предшественников с МСК КМ на 7-17 сутки эритродиф-ференцировки приводит к дополнительному увеличению прироста предшественников эритроид-ного ряда.
Костяев А. А., Утемов С. В.
ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров
НОВЫЙ СПОСОБ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Трансплантации криоконсервированных ге-мопоэтических стволовых клеток (ТГСК) остаются в 2016 году одним из эффективных методов коррекции костномозговой недостаточности различной этиологии. Между тем, накопленный за более чем 30-летний опыт многочисленных ТКГСК выявил круг проблем, решение которых требует углублённой научной разработки. Распространённая в настоящее время технология азотного консервирования ГСК несовершенна. Она отличается дороговизной, сложностью подготовительных этапов, требует использования дефицитного жидкого азота, токсичного этилового спирта, содержит элементы опасности инфицирования и повреждения консервированных клеток, несет риск посттрансфузионных осложнений. Поэтому поиск новых медицинских технологий, сочетающих в себе высокую эффективность с наименьшими затратами, является важнейшей проблемой современного здравоохранения в условиях ограниченности экономических ресурсов.
Альтернативой консервации биообъектов в жидком азоте или его парах при температуре -150°^-196°С с постоянной скоростью охлаждения являются методы быстрого двухступенчатого замораживания. Важно, что новые технологии безопасны, эффективны, менее затратны, просты
в осуществлении, надёжны и доступнее жидко-азотных. Для их воспроизведения могут быть использованы сравнительно простые, дешёвые и надёжные криостаты и нетоксичные, стерильные хладагенты.
Цель. Разработать новый высокотехнологичный, нетоксичный, эффективный и доступный для практической медицины способ криоконсер-вирования ГСК.
Материалы и методы. В основу работы положены исследования свойств нового теплоносителя — сухих обеззараженных термогранул Lab Armor (взамен этилового спирта) в качестве хладагента консервируемых ядросодержащих клеток донорской крови (ЯКДК). Первоначально концентраты ЯКДК с ГСК получали методом сепарации на аппарате Amicus в объеме от 38,0 до 81,0 (56,3 ± 7,3) мл, закрытым способом переводили в стандартную эластичную полимерную упаковку и смешивали с 10 % раствором крио-консерванта диметилсульфоксида (ДМСО) при +4 ± 1оС. Далее производили сборку устройства для холодовой адаптации полученной клеточной взвеси. При этом «Термоконтейнер ТМ-20» для временного хранения и транспортирования термонеустойчивых медицинских и других препаратов выкладывали изнутри в виде прямоугольной ячейки хладоэлементами МХД-2 с раствором
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XII, № 2, 2016
антифриза, которые охлаждали до +4 ± 1оС или -28 ± 2оС. В образовавшуюся ячейку насыпали указанные термогранулы, которыми покрывали упаковку с биообъектом слоем толщиной от 3 до 5 см. Замораживание взвеси ядросодержащих клеток с ГСК производили в режиме быстрой двухступенчатой программы. На первом этапе клеточную взвесь в пакете погружали в слой теплоносителя с заданной температурой - 28 ± 2оС и выдерживали при ней в течение 25 мин. На втором этапе биообъект быстро переносили в хранилище с температурой консервации - 80^ - 196 оС и перед использованием отогревали при +38-42 оС до температуры 2-4 оС.
Результаты. Проведенные исследования показали, что после отогревания клеточной взвеси все пробы консервированных ядросодержащих клеток были стерильны, количество морфологически сохранных составляло 87,3 ± 11,2 %, из которых устойчивостью к витальному красителю обладали 83,1 ± 10,3 % клеток. Использованные при этом технические средства обеспечивают более высокий уровень криоконсервации ГСК и гарантированно высокую сохранность криоконсервирован-ных ядросодержащих клеток донорской крови.
Выводы. Термогранулы Lab Armor могут с успехом использоваться в качестве хладагента-гипотерма ГСК.
Криницына Е. Е., Игнатьев С. В., Ермачкова М. Ю., Попцов А. Л., Минаева Н. В.
ФГБУН «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», г. Киров
ХАРАКТЕРИСТИКА ВИДОВОГО СОСТАВА МИКРОФЛОРЫ У ПАЦИЕНТОВ ГЕМАТОЛОГИЧЕСКОЙ КЛИНИКИ
Важное значение в развитии инфекции имеет видовой состав микрофлоры. В каждом стационаре в зависимости от спектра применяемых антибиотиков, проведения противоэпидемических мероприятий, особенностей микрофлоры данной местности и других факторов формируется свой видовой состав микроорганизмов. В течение времени он может меняться, появляются новые патогенные штаммы, снижается их чувствительность к антимикробным препаратам. Поэтому так необходим периодически проводимый, тщательный анализ структуры микробиологического профиля в каждом отдельно взятом лечебно-профилактическом учреждении, что важно для разработки более рациональных подходов к антимикробной терапии и профилактике инфекционных осложнений.
Цель исследования — оценить спектр микроорганизмов, вызывающих инфекционные осложнения у пациентов, наблюдавшихся в клинике ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России. Для микробиологического подтверждения инфекции применяли бактериологический анализ материалов, полученных из крови, мокроты, мочи, кала, зева, носа и с поверхности кожи. Взятие материала со слизистых зева, носа, влагалища осуществляли стерильными ватными тампонами. Посевы проводили на агар, содержащий 5 % кровь барана, среду Эндо, маннитоловый агар и среду Сабуро. В исследование был включен
4931 пациент за 2014 и 2015 г. При микробиологически доказанной инфекции преобладала грамположительная микрофлора в 69,7 % эпизодах, грамотрицательная микрофлора обнаружена в 16,9 %, грибы — 13,4 %. Анализ видового состава грамположительных и грамотрицатель-ных микроорганизмов показал, что наибольший удельный вес среди выделенных изоля-тов имеет Staphylococcus epidermidis — 28,5 %, реже высевались: Streptococcus viridans — 14,3 %, Escherichia coli — 6 %, Pseudomonas aeroginosa — 4,8 %, Staphylococcus aureus — 4,6 %, Enterococcus faecalis — 2,3 %; в 26,2 % случаев были обнаружены другие возбудители, из них Proteus rettgeri (0,13 %), Staphylococcus bovis (0,08 %) ранее не встречались. Считаем необходимым отметить рост частоты встречаемости и значимость Pseudomo^s aeroginosa, в развитии серьёзных инфекционных осложнений, в плоть до летальных исходов. Развитие полирезистентности ко всему спектру антибактериальных средств, применяемых в клинике, штаммов этого микроорганизма мы наблюдали в 24,4 % случаев. Грибковые микроорганизмы были представлены Candida albicans, kefyr — 13,4 %.
Выводы. В структуре возбудителей инфекционных осложнений в гематологической клинике преобладает грамположительная флора, при этом частота выявления золотистого стафилококка, занимающего лидирующие позиции
