CC BY
29
ПРЕПАРАТЫ
К ВОПРОСУ ТЕСТИРОВАНИЯ АНТАГОНИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЛИКОМПОНЕНТНЫХ ПРОБИОТИКОВ
Несчисляев В.А., Белова И.В., Арчакова Е.Г., Мужикова А.В., Валеева Е.М.
Филиал ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед», г. Пермь, Пермская государственная медицинская академия им. Вагнера Е.А., г. Пермь Казанский государственный медицинский университет, г. Казань, Россия
Дисбиотические состояния, связанные с негативными изменениями состава микрофлоры различных биотопов макроорганизма, играют существенную роль в патогенезе многих заболеваний человека. Из препаратов для коррекции микробиоценозов в настоящее время предпочтение отдается поликомпонентным пробиоти-кам (симбиотикам), содержащим бактериальные композиции из штаммов различной таксономической принадлежности. Их ингибирующее действие в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры является важной характеристикой качества данных лекарственных средств. Однако, с помощью общепринятых культуральных методов, основанных на применении питательных сред - субстрата для взаимодействия клеток, адекватно оценить антагонистическую активность поликомпонентного препарата, в отличие от монопро-биотика, достаточно сложно. В этом случае необходимы другие подходы выявления сочетанного метаболит-ного воздействия всех штаммов на тест-объекты. Особую актуальность данная проблема приобретает при разработке новых вариантов симбиотиков, качественные характеристики которых следует сопоставлять с известными параметрами выпускаемых аналогов.
При исследовании антагонистической активности ли-некса и бифиформа, доминирующих на отечественном фармрынке пробиотиков, был апробирован тест ингиби-рования биолюминесценции контрольного штамма. Данный тест отличается экспрессностью, учитывает влияние концентрации клеток в препарате и исключает питательные субстраты. С помощью люминометра фиксируется снижение интенсивности свечения тест-штамма при совместной экспозиции с испытуемым препаратом. При этом определяется активность пробиотика в конкретном состоянии, а не потенциал производственной культуры в ходе или после выращивания.
Полученные результаты свидетельствуют об относительно близких параметрах антагонистической активности обоих препаратов при некотором превосходстве бифиформа. Следует отметить, что отечественные мо-нопробиотики (лактобактерин и ацилакт) более активно подавляют свечение контрольного штамма по сравнению с исследуемыми зарубежными препаратами.
Таким образом, тест ингибирования биолюминесценции может быть использован для получения адекватной сравнительной оценки антагонистических свойств поликомпонентных пробиотиков.
НОВЫЙ ПЦР МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИФИДО-И ЛАКТОБАКТЕРИЙ В КОМПЛЕКСНЫХ ПРОБИОТИКАХ
Бродский И.Б., Щит И.Ю., Мацулевич Т.В.
ЗАО «Партнер» г. Москва, Россия
Бифидо- и лактобактерии являются наиболее часто определяемыми представителями нормальной микрофлоры человека, что обуславливает их широкое применение, в качестве основных компонентов пробиотических лекарственных препаратов. Пробиотические бактерии имеют большое количество функций, направленных на поддержание здоровья человека. Интерес к пробиотикам постоянно растет, что свидетельствует об эффективности данных препаратов в лечении ряда заболеваний, в том числе и инфекционных в качестве альтернативы антибиотикам.
Нарушения нормальной микрофлоры и связанные с этим заболевания достаточно распространены в сове
ременном обществе. В связи с этим, постоянно растет выпуск различных отечественных лекарственных препаратов, содержащих в своем составе живые бифидо-и лактобактерии, как в нашей стране, а также увеличивается импорт зарубежных пробиотиков, в том числе содержащих не только пробиотические бактерии, но и условно-патогенные микроорганизмы. До сих пор для контроля качества пробиотических препаратов в нашей стране широко используется бактериологический метод и бактериоскопический анализ. Эти процедуры довольно трудоемки и субъективны. Кроме того, особую сложность представляет количественное определение пробиотических бактерий в препаратах, где присут-
2010 г.
ствует несколько видов бифидо- и лактобактерий, что затрудняет выход таких препаратов на рынок. В настоящее время во всем мире все большую популярность приобретают методы молекулярной биологии - например, метод полимеразно цепной реакции (ПЦР).
С использованием метода ПЦР нами была разработана методика качественного и количественного анализа поливидовой смеси, содержащей три вида бифидобактерий (B. bifidum, B. longum и B. adolescentis) и два вида лактобактерий (L. plantarum, L. acidophilus). Для решения данной задачи нами были разработаны оригинальные специфические прай-
меры, направляющие синтез определенного фрагмента ДНК для каждого вида бактерии, входящей в состав смеси. Данная методика разработана с целью контроля параметров качества, а именно определения качественного и количественного состава живых пробиотических бактерий в новых целевых сорбированных пробиотиках.
Для количественного определения живых пробиоти-ческих бактерий нами разработан метод с использованием стандартного десятикратного разведения анализируемого образца с последующим высевом на плотную питательную среду. Видовая принадлежность выросших колоний определялась ПЦР идентификацией.
БАКТЕРИОЦИНЫ - АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ПРОБИОТИЧЕСКИХ И КЛИНИЧЕСКИХ ШТАММОВ
Блинкова Л.П.
НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, Москва
Бактериоцины, своеобразная группа антибактериальных биологически активных веществ микробного происхождения, являются в настоящее время объектом детального изучения во многих странах. Исследования сосредоточены на свойствах новых бактериоцинов, выделенных у микроорганизмов разных таксономических групп (физико-химическая характеристика, спектр антибактериального действия, механизмы взаимодействия с микробной клеткой и макроорганизмом, возможности практического применения и т. д.). Как правило, изучение сопровождается определением мо-лекулярно-генетических особенностей штаммов-продуцентов. На основании полученных результатов проводится классификация вещества. Отметим, что система международной классификации бактериоци-нов несовершенна, ее продолжают уточнять и дополнять, так же, как и основные критерии принадлежности бактериальной субстанции к группе бактериоцинов. Особый интерес вызывают пептидсодержащие бактериоцины, как правило, имеющие широкий спектр действия и обладающие регуляторным влиянием на макроорганизм. Установлено, что как пробиотические штаммы, так и многие из изученных клинических культур обладают бактериоцинпродуцирующей актив-
ностью. На скрининг новых штаммов - продуцентов бактериоцинов и выявление их прикладного потенциала (пробиотики, анибактериальные средства консерванты биопрепаратов, пищевых продуктов и др.) ассоциированным коллективам ученых из стран Евросоюза оказывается мощная финансовая поддержка.
В 80-х гг. прошлого века сотрудниками НИИВС им. И.И. Мечникова на основе бактериоцина создан первый отечественный коммерческий препарат «томицид» [Блинкова Л.П. и др., 1985]. В настоящее время проведен анализ выделенных клинических штаммов, а также культур из окружающей среды на способность продуцировать бактериоцинподобные субстанции. Показано, что частота встречаемости признака варьирует от 52 до > 60%. Некоторые из родов синтезировали вещество не менее чем в 90% случаев [Блинкова Л.П., Гор-батко Е.С. и др., 2008]. Обнаружены бактериоциноген-ные штаммы, которые предполагается тестировать на возможность использования в качестве пробиотиков или консервантов. Следует заключить, что скрининг новых безопасных штаммов-продуцентов и получение соответствующих бактериоцинов является весьма актуальным и перспективным.
Н)
