CC BY
79
УДК 616.441-006.6-092
О.С. Олифирова С.В. Кналян Т.Е. Тальченкова 2, Н.Н.Трынов 1
НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ В ПРЕДОПЕРАЦИОННОЙ ДИАГНОСТИКЕ УЗЛОВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
1ГБОУ ВПО «Амурская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ
(Благовещенск)
2 ГБУЗ АО «Амурская областная клиническая больница» (Благовещенск)
Проведено исследование методом иммуноферментного анализа (ИФА) галектина-3 (human Ga-lectin-3 ELISA Bender MedSystems) в качестве онкомаркера в сыворотке крови и смывах из узловых образований щитовидной железы, при. РЩЖ (18) и. доброкачественных заболеваниях щитовидной железы. (26) в предоперационном, периоде. Галектин-3 был обнаружен у всех больных с РЩЖ. Средние уровни, содержания галектина-3 у больных с РЩЖ в сыворотке крови. (0,72 ± 0,1 нг/мл) и. смывах из узловых образований ЩЖ (2,86 ± 0,9 нг/мл) достоверно превышали аналогичные показатели, при доброкачественных заболеваниях ЩЖ (0,42 ± 0,1 и. 0,83 ± 0,2 нг/мл соответственно). Полученные данные позволяют, предположить возможность определения галектина-3 в качестве дополнительного параметра для. комплексной дифференциальной диагностики, высокодифференцированного РЩЖ методом ИФА.
Ключевые слова: рак щитовидной железы, галектин-3, иммуноферментный анализ
NEW POSSiBiLiTiES iN PREOPERATiVE DiAGNOSiS OF NODULAR THYROID DiSEASES O.S. Olifirova S.V. Knalyan T.E. Talchenkova 2, N.N. Trynov 1
1 Amur State Medical Academy, Blagoveschensk 2Amur Regional Clinical Hospital, Blagoveschensk
Galectin-3 (human Galectin-3 ELISA Bender MedSystems) was researched, by the method, of immune-enzyme analysis as an oncomarker in blood serum, and swabs of thyroid nodules of the patients with cancer (18) and. non-cancerous diseases of thyroid, gland. (26) in the preoperative period. All the patients with thyroid, cancer had. galectin-3. Average levels of galectin-3 in patients with, thyroid, cancer in blood serum. (0,72 ± 0,1 ng/ml) and. swabs from the thyroid, nodules (2,86 ± 0,9 ng/ml) were significantly higher than similar indices at non-cancerous diseases (0,42 ± 0,19 and 0,83 ± 0,2 ng/ml respectively). Obtained, results allow to suppose the possibility of determination, of galectin-3 as an additional parameter for the complex differential diagnosis of a highly differentiated, thyroid, cancer by the method, of immune-enzyme analysis.
Key words: thyroid cancer, galectin-3, immune-enzyme analysis
ВВЕДЕНИЕ
В связи со значительной распространенностью узловой патологии щитовидной железы (ЩЖ) как в мире, так и в РФ, возросло число операций на этом органе [3]. Их следствием является послеоперационный гипотиреоз, вызывающий каскад метаболических нарушений в организме. В настоящее время показания к оперативному лечению ограничены и достаточно ясно сформулированы. Однако существуют трудности в определении онкологических показаний. Основным диагностическим критерием в дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных заболеваний является тонкоигольная аспирационная пункционная биопсия (ТАПБ) с цитологическим исследованием. Как справедливо замечают А.Ф. Романчишен с соавт. [3], этот метод имеет свой предел точности и его нельзя абсолютизировать. Точность ТАПБ зависит от субъективных причин (профессионального опыта врачей, выполняющих исследование) и объективных факторов (невозможность дифференцировать фолликулярный рак и фолликулярную аденому на основании цитологических данных, многоузловой характер поражения, малые размеры узлов). Значительные трудности вызывает дифференциальная диагностика узловых образований
небольшого размера при ранних стадиях заболевания, соответствующих Т —Т2 рака ЩЖ (ШСС/ АЛСС, 6-я ред., 2002) [6]. Поэтому поиск новых методов диагностики этой патологии продолжает оставаться актуальным. Благодаря значительному прогрессу в лабораторной диагностике последних лет, появились новые возможности в комплексном выявлении злокачественных заболеваний за счет определения серологических опухолеассоциированных маркеров [2].
К сожалению, для дифференциальной диагностики высокодифференцированного рака ЩЖ (РЩЖ) пока не предложены высокоспецифичные серологические онкомаркеры, а применяемые (ти-реоглобулин, раковый эмбриональный антиген) не нашли широкого применения из-за недостаточной чувствительности и специфичности. Тиреогло-булин — гликопротеин и основной компонент коллоида фолликулов ЩЖ. Он используется для мониторинга адекватности оперативного лечения РЩЖ в послеоперационном периоде [14], хотя некоторые авторы указывают на возможность повышения его содержания при злокачественных опухолях ЩЖ [5, 8].
Наше внимание привлек галектин-3 как возможный маркер РЩЖ, на основании ряда наблю-
дений разных исследователей [4, 7, 10, 12, 13]. Га-лектин-3 — это р-галактозид-связывающий белок с молекулярной массой 26 кДа, принадлежащий к семейству галектинов. Экспрессия галектина-3 изменяется при неопластической трансформации: повышение наблюдается при РЩЖ, но может снижаться при других типах злокачественных новообразований [4, 7]. Установлено, что галектин-3 действует как внеклеточно, так и внутриклеточно [11, 13]. Большинство публикаций посвящено имму-ноцитохимическому и иммуногистохимическому исследованию галектина-3 при заболеваниях ЩЖ [4, 9, 11]. Несмотря на некоторые противоречия в оценке, отмечена эффективность определения экспрессии галлектина-3 при карциномах ЩЖ [4, 7, 11, 13]. Вместе с тем авторы указывают, что галектин-3 не является единственным высокоспецифичным маркером при иммуноцитохимическом и иммуногистохимическом исследованиях, но может использоваться как дополнительное средство в комплексной диагностике РЩЖ или в сочетании с другими онкомаркерами [4, 7].
Перспективным направлением явилось совместное исследование экспрессии галектина-3 методом проточной флуороцитометрии и мутации гена методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в пунктате из узла ЩЖ, полученном при ТАПБ [1]. Авторами отмечена высокая специфичность и точность предложенного метода в дооперационной диагностике высокодифференцированного РЩЖ [1]. Однако более широкое внедрение вышеуказанных методов пока ограничено их стоимостью и сложностью выполнения. Благодаря совершенствованию современных методов проведения иммуноферментного анализа и созданию новых наборов реагентов для определения молекулярных маркеров, появилась возможность развивать дифференциальную диагностику злокачественных новообразований в этом направлении, тем более, что серологические исследования, касающиеся га-лектина-3, немногочисленны [2]. В связи с этим научно-практический интерес представляет изучение диагностической значимости определения серологического маркера галектина-3 при онкопатологии ЩЖ методом ИФА как более простого и менее дорогостоящего метода, а также возможность сравнения полученных результатов с другим маркером тиреоидной патологии — тиреоглобулином.
Целью исследования явилось оценить возможность определения галектина-3 методом ИФА для дифференциальной диагностики доброкачественных узловых заболеваний ЩЖ и высокодифференцированного РЩЖ.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Проведен анализ результатов обследования 44 больных с заболеваниями ЩЖ, получавших лечение в хирургическом отделении Амурской областной клинической больницы — клинической базе Амурской государственной медицинской академии
— в 2010 — 2011 гг. Из них 43 (97,7 %) женщины и 1 (2,3 %) мужчина. Средний возраст — 51,5 ± 2,1 лет.
В комплекс диагностических методов входили исследование гормонов ЩЖ, тиреоглобулина, УЗИ ЩЖ, цветное допплеровское картирование (ЦДК) ЩЖ, ТАПБ под контролем УЗИ, сканирование ЩЖ при тиреотоксикозе, послеоперационное гистологическое исследование ЩЖ. В предоперационном периоде проведено исследование галектина-3 в сыворотке периферической крови и смыве аспирата из пункционной иглы (21G), полученного при ТАПБ узловых образований ЩЖ. Аналогичным образом определяли содержание тиреоглобулина. После выполнения ТАПБ аспират наносили на предметное стекло и направляли для цитологического исследования. Пункционную иглу промывали двукратно 1 мл изотонического раствора натрия хлорида. Полученный смыв аспирата использовали для исследования онкомакеров методом иммуноферментного анализа с использованием автоматизированного анализатора «Multicon EX» (Финляндия). Галек-тин-3 исследовали с помощью иммуноферментного набора для количественного определения человеческого галектина-3 (human Galectin-3 ELISA) фирмы Bender MedSystems (Австрия), предназначенного для исследовательских целей. Уровни галектина-3 в сыворотке крови, установленные фирмой-произ-водителем, составляли 0,62 — 6,25 нг/мл, со средним уровнем 2,33 нг/мл.
Для определения тиреоглобулина применяли набор реагентов ТироидИФА-ТТГ-1 «Алкор Био» (Санкт-Петербург, Россия) с рекомендуемым нормальным уровнем тиреоглобулина до 55 нг/мл.
Всем больным были выполнены операции по поводу заболеваний ЩЖ. Показаниями к операции явились РЩЖ (9), фолликулярная опухоль (17), компрессия органов шеи (13), неэффективность консервативной терапии тиреотоксикоза (5). Соотношение дооперационного цитологического и послеоперационного гистологического диагнозов указано в таблице 1.
Из общего числа больных у 18 (40,9 %) был морфологически верифицирован РЩЖ, коллоидный зоб — у 14 (31,8 %), фолликулярные аденомы — у
11 (25 %), аутоиммунный тиреоидит (АИТ) — у 1 больного (2,3 %).
Согласно классификации pTNM (UICC/AJCC, 6-я ред., 2002) [6], больные РЩЖ (18) распределились следующим образом: T1N0M0 — 12 (66,6 %), T2N0M0 - 3 (16,7 %), T3N0M0 - 3 (16,7 %). Наибольший диаметр опухолей ЩЖ составлял от 0,5 см до 10 см, а в среднем — 2,7 ± 0,7 см.
Для анализа полученных результатов были выделены две клинические группы больных. В 1-ю группу вошли 18 больных с РЩЖ, во 2-ю группу — 26 больных с доброкачественными заболеваниями щитовидной железы (ДЗЩЖ). Такое разделение обусловлено тем, что в хирургической практике принципиальным является выявление РЩЖ как абсолютного показания к операции, в то время как при ДЗЩЖ оперативное лечение выполняется по ограниченным показаниям. Характеристика больных по полу, возрасту, функции и объему ЩЖ представлена в таблице 2.
Таблица 1
Результаты до и послеоперационной морфологической диагностики
Предоперационное цитологическое заключение Кол-во Послеоперационное гистологическое заключение Кол-во
РЩЖ 9 РЩЖ 8
Фолликулярная аденома ЩЖ 1
Фолликулярная опухоль ЩЖ 17 Папиллярный РЩЖ 6
Фолликулярный РЩЖ 2
Фолликулярная аденома 8
Коллоидный зоб 1
Коллоидный зоб 18 РЩЖ 2
Фолликулярная аденома 2
Коллоидный зоб 13
Аутоиммунный тиреоидит 1
Всего 44 Всего:
РЩЖ 18
Аденома ЩЖ 11
Коллоидный зоб 14
Аутоиммунный тиреоидит 1
Таблица 2
Характеристика больных в клинических группах
Примечание: ДЗЩЖ - доброкачественные заболевания щитовидной железы; РЩЖ - рак щитовидной железы; ЩЖ - щитовидная железа.
Больные обеих групп сопоставимы по полу, возрасту, функции щитовидной железы. В среднем объем ЩЖ у больных 1-й группы составил
31,1 ± 6,9 см3, а у 2-й группы — 55,1 ± 14,3 см3 (р > 0,5).
Математическую обработку результатов выполняли с помощью пакета прикладных программ Statistica 6.0. Степень отличий считали значимой при р < 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Галектин-3 был обнаружен в сыворотке крови и смывах из узловых образований у всех больных1-й группы, которым был верифицирован РЩЖ. Во 2-й группе больных с ДЗЩЖ содержание галекти-на-3 также было установлено, но в меньшем числе наблюдений (в сыворотке — 69,2 %, в смывах — 76,9 %). У 7 (26,9 %) больных 2-й группы с ДЗЩЖ
не обнаружено галектина-3 в сыворотке крови и смывах из узловых образований. Значения галек-тина-3 сыворотки крови находились в диапазоне 0,1 — 0,9 нг/мл в 100 % наблюдений в 1-й группе и в
69,2 % случаев — во 2-й группе. В среднем уровень галектина-3 сыворотки крови был значимо выше у больных с РЩЖ (0,72 ± 0,1 нг/мл), чем у больных с ДЗЩЖ (0,42 ± 0,1 нг/мл), хотя и не превышал установленных фирмой-производителем нормальных показателей. Уровни галектина-3 в клинических группах указаны в таблице 3.
Средний уровень галектина-3 в смывах из узловых образований при РЩЖ (1-я группа) был значимо выше и составил 2,86 ± 0,9 нг/мл по сравнению со 2-й группой (0,83 ± 0,2 нг/мл). Значения галек-тина-3 у больных с РЩЖ находились в диапазоне 0,8—13,9 нг/мл. Из них в диапазоне 0,1 — 1 нг/мл
— 33,3 % (6) наблюдений; 1,1—2 нг/мл — 38,9 % (7); свыше 2 нг/мл — 27,8 % (5). Уровни галектина-3 в смывах при ДЗЩЖ были в диапазоне 0 — 4,4 нг/мл:
0,1 — 1 нг/мл — 50 % (13) наблюдений; 1,1—2 нг/мл
— 19,2 % (5); свыше 2 нг/мл — 3,8 % (1).
Анализ полученных результатов показал, что содержание галектина-3 у больных обеих групп оказалось выше в смывах, полученных при пункции узловых образований, чем в сыворотке крови. Установлено, что уровень галектина-3 был значимо большим в смывах из злокачественных опухолей (2,86 ± 0,9 нг/мл), чем в смывах из доброкачественных узловых образований ЩЖ (0,83 ± 0,2 нг/мл). Очевидно, это обусловлено локализацией галекти-нов в цитоплазме, ядре, поверхности тиреоидных клеток, межклеточном матриксе [11, 13]. Полученные данные согласуются с информацией, что продукция галектина-3 возрастает при неоплатических процессах в ЩЖ [7, 13].
Показатели Группа 1 (РЩЖ) (п = 18) СМ —ч " 1^3 — Р
Количество мужчин 1 0 > 0,5
Количество женщин 17 26 > 0,5
Средний возраст (годы) 49,8 ± 2,7 52,7 ± 2,9 > 0,5
Эутиреоз (кол-во) 16 20 > 0,5
Тиреотоксикоз (кол-во) 1 4 > 0,5
Гипотиреоз (кол-во) 1 2 > 0,5
Объем ЩЖ (см3) 31,1 ± 6,9 55,1 ± 14,3 > 0,5
Таблица 3
Уровни галектина-3 в клинических группах
Группа Число больных Уровень галектина-3, нг/мл
Диапазон Средний, М ± т Р
1-я группа (РЩЖ) 18 Сыворотка 0,7-0,8 0,72 ± 0,1 Р1 < 0,05 р2 < 0,05 р3 < 0,001 р4 < 0,05
Смыв 0,8-13,9 2,86 ± 0,9
2-я группа (ДЗЩЖ) 26 Сыворотка 0-0,8 0,42 ± 0,1
Смыв 0-4,4 0,83 ± 0,2
Примечание: р1 - значимость различий между средним уровнем галектина-3 в сыворотке и смыве в 1-й группе; р2 - значимость различий между средним уровнем галектина-3 в сыворотке и смыве во 2-й группе; р3 - значимость различий между средним уровнем галектина-3 в сыворотке в 1-й и 2-й группах; р4 - значимость различий между средним уровнем галектина-3 в смыве в 1-й и 2-й группах; ДЗЩЖ - доброкачественные заболевания щитовидной железы; РЩЖ - рак щитовидной железы.
Исследование тиреоглобулина в сыворотке крови этих же больных показало, что уровень его содержания находился в диапазоне 2,1 —407 нг/мл у больных 1-й группы и 3,7 — 397,5 нг/мл — у больных 2-й группы. Средний уровень тиреоглобулина превышал установленную норму (до 55 нг/мл) у больных обеих групп. Значимых различий в средних значениях тиреоглобулина в сыворотке крови у больных с РЩЖ (116,3 ± 36,0 нг/мл) и больных с ДЗЩЖ (181 ± 26,4 нг/мл) не установлено. Тем не менее, уровень тиреоглобулина в смывах из злокачественных новообразований (351,8 ± 17,8 нг/мл) был значительно выше (р < 0,01), чем из доброкачественных узлов ЩЖ (169 ± 26,9 нг/мл). Причем содержание тиреоглобулина у больных с РЩЖ в смывах было достоверно больше, чем в сыворотке крови больных этой же группы. Этот факт объясняется тем, что тиреоглобулин является основным компонентом коллоида фолликулов ЩЖ, а также подтверждает информацию об усиленной секреции тиреоглобулина клетками неопластической ткани при дифференцированном РЩЖ [8].
Корреляционной зависимости между уровнем содержания галектина-3 и тиреоглобулина в сыворотке и смывах из узловых образований не обнаружено.
Целенаправленно проведено изучение результатов у больных с предоперационным заключением «фолликулярная опухоль». Понятие «фолликулярная опухоль» ЩЖ относится к категории неопределенных цитологических диагнозов, когда на основании цитологических данных невозможна дифференциальная диагностика РЩЖ и фолликулярной аденомы ЩЖ. Хирургический аспект проблемы состоит в том, что из-за неопределенности доброкачественного или злокачественного характера «фолликулярной опухоли» возникают трудности в выборе адекватного объема оперативного вмешательства. Проведен анализ результатов исследования галектина-3 и тиреоглобулина у больных (17), оперированных по поводу «фолликулярной опухоли» ЩЖ. После операции у 7 из них был верифицирован РЩЖ, а у 10 — ДЗЩЖ (табл. 1). Оказалось, что содержание галектина-3 у больных РЩЖ в сыворотке крови (0,78 ± 0,03 нг/мл) и смывах из узловых образований (4,6 ± 2,1 нг/мл) пре-
вышало аналогичные показатели больных ДЗЩЖ (0,31 ± 0,1 и 0,65 ± 0,1 нг/мл соответственно). Причем средний уровень галектина-3 в смывах из злокачественных узловых образований был выше, чем в сыворотке крови этих же больных. Полученные результаты исследования позволяют предполагать возможность использования метода ИФА с определением галектина-3 в качестве дополнительного параметра для комплексной дифференциальной диагностики у больных с неопределенным цитологическим диагнозом «фолликулярная опухоль» ЩЖ.
Обращает внимание, что средний уровень тиреоглобулина в смывах из злокачественных узловых образований составлял 366 ± 32,9 нг/мл, тогда как при ДЗЩЖ он был значительно меньше (268 ± 38,3 нг/мл). Эти данные представляют интерес, но пока недостаточны для разработки клинико-диагностической концепции определения уровня содержания тиреоглобулина из узловых образований ЩЖ в качестве онкомаркера.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Проведенные исследования выявили различия в количественном содержании галектина-3 у больных с РЩЖ и ДЗЩЖ. Галектин-3 был обнаружен в сыворотке крови и смывах из узловых образований ЩЖ во всех случаях РЩЖ, тогда как при ДЗЩЖ — в 69,2 % и 76,9 % соответственно. Установлено, что средние значения галектина-3 в сыворотке крови и смывах из узловых образований ЩЖ у больных с РЩЖ были достоверно выше, чем у больных с ДЗЩЖ. Причем уровень галектина-3 в смывах из злокачественных опухолей ЩЖ превышал его содержание в сыворотке крови этих же больных.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о перспективности дальнейшего исследования методом ИФА галектина-3 в качестве онкомаркера для уточняющей диагностики и мониторинга на этапах лечения РЩЖ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Комбинированный анализ выявления мутации гена ВгаГ и экспрессии галектина-3 в доопера-ционной диагностике рака щитовидной железы / Д.Ю. Семенов, М.И. Зарайский, Л.Е. Колоскова [и
др.] // Клиническая и экспериментальная тиреои-дология. — 2011. — № 2. — С. 49 — 56.
2. Молекулярные маркеры опухолей / Н.Е. Кушлинский, Е.С. Герштейн, Л.К. Овчинникова, М.А. Дигаева // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 2009. - Т. 148, № 8. - С. 199-208.
3. Новые возможности пункционной биопсии в диагностике рака щитовидной железы и гипер-паратиреоза / А.Ф. Романчишен, А.В. Гостимский, И.В. Зайцева, Е.В. Липская // Современные аспекты хирургической эндокринологии: Матер. XIX Рос. симп. - Челябинск, 2010. - С. 306-308.
4. Определение экспрессии галектина-3 в ткани фолликулярных опухолей щитовидной железы / Е.А. Коган, Н.А. Петунина, Т.В. Чернышова, Д.В. Лукьянченко // Клиническая и экспериментальная тиреоидология. - 2011. - Т. 7, № 1. - С. 45-49.
5. Пинский С.Б., Калинин А.П., Белобородов В.А. Диагностика заболеваний щитовидной железы. - М.: Медицина, 2005. - 192 с.
6. Рак щитовидной железы: Современные подходы к лечению / П.О. Румянцев, А.А. Ильин, У.В. Румянцева, В.А. Саенко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 448 с.
7. Роль молекулярных маркеров в дифференциальной диагностике фолликулярных опухолей щитовидной железы / Е.А. Трошина, Н.В. Мазурина, И.А. Абесадзе, П.В. Юшков [и др.] // Клиническая и экспериментальная тиреоидология. -2006. - Т. 2, № 2. - С. 22-26.
Сведения об авторах
8. Скударнова Н.М., Соболева Н.В., Мычка Н.В. Гормоны щитовидной железы. — Кольцово: ЗАО «Вектор-Бест», 2006. — 32 с.
9. Beesley M.F., McLaren K.M. Cytokeratin 19 and galectin-3 Immunohistochemistry in the differential diagnosis of solitary thyroid nodules // Histopathol. - 2002. - Vol. 41, N 3. - P. 236-243.
10. Belfiore A. The use of fine needle aspiration biopsy (FNAB) in thyroid disease // Thyroid International. - 2002. - N 2. - Р. 4-15.
11. Characterization of thyroid «follicular neo-plasms» in fine-needle aspiration cytological specimens using a panel of immunohistochemical markers: a proposal for clinical application / E. Saggiorato, R. De Pompa, M. Volante, S. Cappia [et al.] // Endocr. Relat. Cancer. - 2005. - Vol. 12 (2). - P. 305-317.
12. Galectin-3 and CD44v6 isoforms in the preoperative evaluation of thyroid nodules / A. Gasbarri, M.P. Martegani [et al.] // J. Clin. Oncol. - 1999. -Vol. 17, N 11. - P. 3494-3502.
13. Galectin-3-expression analysis in the surgical selection of follicular thyroid nodules with indeterminate fine-needle aspiration cytology: a prospective multicentre study / A. Bartolazzi, F. Orlandi, E. Sag-giorato, M. Volante [et al.] // Lancet Oncol. - 2008. -Vol. 9. N 6. - P. 508-510.
14. Spencer A.C. Современные принципы оценки уровня тиреоглобулина при наблюдении пациентов с высокодифференцированным раком щитовидной железы // Thyroid International (на русском языке). - 2003. - N 4. - Р. 1-15.
Олифирова Ольга Степановна - доктор медицинских наук, доцент, заведующая кафедрой хирургических болезней факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов ГБОУ ВПО «Амурская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ (675000, г Благовещенск, ул. Горького, 74: тел.: 8 (4162) 42-97-43; е-таИ: оИ1ос@таН.ш)
Кналян Софья Владимировна - аспирант кафедры хирургических болезней факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов ГБОУ ВПо «Амурская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ (675000, г Благовещенск, ул. Горького, 74: тел.: 8 (4162) 42-97-43)
Тальченкова Татьяна Евгеньевна - заведующая лабораторией «Центра планирования семьи» ГБУЗ АО «Амурская областная клиническая больница» (675000, г Благовещенск, ул. Воронкова, 26; тел.: 8 (4162) 42-96-13)
Трынов Николай Николаевич - аспирант кафедры хирургических болезней факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов ГБОУ ВПО «Амурская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития РФ (675000, г. Благовещенск, ул. Горького, 74: тел.: 8 (4162) 42-97-43)
