Новая синегнойная вакцина: иммунологическая оценка эффективности в эксперименте Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Медицинская Иммунология 2003, Т. 5, № 1-2, стр 125-127 © 2003, СПб РО РААКИ

Краткие сообщения

НОВАЯ СИНЕГНОЙНАЯ ВАКЦИНА: ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

Нуридцинова Н.Р., Гариб Ф.Ю.

Ташкентский НИИ вакцин и сывороток ГАК “Узфармпром"

Резюме. Разработана новая синегнойная вакцина, предназначенная для иммунотерапии больных с синегнойной инфекцией. Вакцина вызывает индукцию антисинегнойных антител в высоких титрах, активирует фагоцитоз, вызывает развитие гиперчувствительности замедленного типа и не влияет на количество антителообразующих клеток к эритроцитам барана.

Ключевые слова: вакцина синегнойная, антитела, эффективность, показатели иммунологические.

Nuriddinova N.R., Garib F. Yu

NEW PSEUDOMONAS AERUGINOSA VACCINE: IMMUNOLOGICAL

ESTIMATION OF THE EFFICACY IN EXPERIMENT

Abstract. We have elaborated a new Pseudomonas aeruginosa vaccine for immunotherapy of patients infected with Pseudomonas aeruginosa. The vaccine causes the induction of high antipseudomonas aeruginosa antibodies titer, activates phagocytosis, stimulates the development of delayed type hypersensitivity. It doesn’t influence the count of antibody-forming cells against sheep erythrocytes. (Med.Immunol., 2003, vol.5, N1-2, pp 125-127)

В последние годы в инфекционной патологии Материалы и методы

человека значительно возросла роль Pseudomonas g приготовлении СВ использован штамм №263

aeruginosa как возбудителя внутригоспитальных P.aeruginosa коллекции ТашНИИВС [5]. Протек-

инфекций [3]. тивный антиген выделен из внеклеточной слизи

Инфекции, вызванные P.aeruginosa, трудно под- биомассы штамма P.aeruginosa, накопленной на

даются лечению из-за высокой антибиотикоустой- питательной среде К-4 [4]. Питательная среда К-4

чивости возбудителя [7]. В связи с этим разработка приготовлена нами на основе пептидов гидроли-

иммунных препаратов для лечения больных синег- зата казеина. В работе использован эритроцитар-

нойной инфекцией является актуальной задачей ныд дцагностикум синегнойный производства

практической медицины [8]. ТашНИИВС

В ТашНИИВС разработана технология произ- Опыты выполнены на белых мышах массой 14-

водства новой синегнойной вакцины (СВ), предназ- jgr и Кр0ЛИКах породы шиншилла массой 2,5-3,Окг,

наченной для иммунотерапии больных с синегной- полученных из питомника ТашНИИВС.

ной инфекцией. Кроликов иммунизировали СВ подкожно в дозе

Целью настоящего исследования явилось изу- 50 мкг/мл трехкратно с интервалом 7 дней. Через

чение некоторых аспектов иммунологической без- 7^ 14, 21,28 и 40 дней после иммунизации определя-

вредности и эффективности СВ. ли в СЫВоротке животных уровень антисинегнойных

___________________________________________ антител в реакции пассивной гемагглютинации

(РПГА) с помощью эритроцитарного диагностику-ма (ЭД).

Развитие гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) при введении СВ оценивали в плантар-

и сывороток. 700084, ¿.Ташкент, ил. Мавлянова, ном тесте [1]. ^

л 57 т иытл Иммуномодулирующее действие СВ оценивали

Адрес для переписки:

Нуриддинова Нозима Рамизовна - км.н., с.н.с., заведующая лабораторией бактериальных препаратов Ташкентского НИИ вакцин

д. 37, ТашНИИ вакцин и сывороток.

по отношению к эритроцитам барана (ЭБ). Мышей

Тел./факс: (10998712) 34-77-22. , .

„ .. ' . иммунизировали однократно 1,0 мл смеси, содержа-

E-mail: nnvs@ uzsci.net

Нуриддинова Н.Р., Гариб Ф.Ю.

Медицинская Иммунология

щей равные объемы СВ в дозах 50 и 100 мкг, а также 2% взвеси ЭБ. Через 4 дня после иммунизации в селезенке каждой мыши методом Ierne и Nordin [6] определяли число антителообразующих клеток (АОК).

Для оценки фагоцитарной и ферментативной активности макрофагов использовали клетки перитонеального экссудата мышей [6]. Животных опытной группы иммунизировали СВ в дозах 50 и 100 мкг/мл подкожно. Через 7 дней после иммунизации определяли фагоцитарный показатель -процент фагоцитирующих макрофагов из числа сосчитанных, фагоцитарное число - среднее количество поглощенных клеток стафилококка на 1 фагоцитирующую клетку [6] и интенсивность внутриклеточного переваривания в тесте с нитросиним тетразолием - НСТ тесте [2]. Объектом фагоцитоза служила суточная культура Staphylococcus aureus, штамм №209 в конечной концентрации 250 млн. клеток на 1 мл.

Статистическую обработку проводили методом вариационной статистики с использованием критерия Стъюдента.

Результаты и обсуждение

Определение уровня специфического иммунного ответа при введении СВ выявило высокий титр антител в сроках наблюдения - через 7, 14, 21, 28 дней после иммунизации. Обратные значения титра антител в РПГА через 7 дней после иммунизации СВ составляли 4505,6± 1,4, через 14 дней 18022,4±1,2. Через 21 и 28 дней после иммунизации высокий уровень титра антител сохранился (26214,4 + 1,4 и 29491,2± 1,4 соответственно). Только на 40 день после иммунизации наблюдали снижение титра антител до 358,4± 1,1.

Полученные данные показали, что СВ, изготовленная на основе антигена, выделенного из внеклеточной слизи биомассы штамма 263, накопленной на среде К-4, обладает выраженными иммуногенными

свойствами, в частности способна индуцировать синтез антисинегнойных антител.

Для оценки эффективности СВ представляло несомненный интерес также изучение ее воздействия на показатели иммунной системы.

Изучено влияние СВ на клеточное звено иммунитета по индукции ГЗТ.

Как показали результаты исследования, представленные в таблице, высокий уровень ГЗТ, тестируемый по индексу реакции, был выявлен при введении СВ в дозе 100 мкг/мл (Р<0,05). СВ в дозе 50 мкг/мл вызывала ГЗТ меньшей степени при статистически достоверной разнице с контрольной группой (Р<0,05).

При изучении иммуномодулирующего действия СВ по отношению ЭБ, она в испытанных дозах 50 и 100 мкг/мл не оказывала действия на содержание АОК (таблица).

Как видно из таблицы, СВ вызывает в фагоцитарной системе иммунитета количественные и качественные изменения.

Количественно СВ вызывает увеличение числа фагоцитирующих клеток, качественно вызывает повышение способности фагоцитов захватывать и внутри-клеточно переваривать микроорганизмы с усилением реакции восстановления нитросинего тетразолия.

Полученные результаты свидетельствуют, что разработанная СВ иммуногенна, вызывала выраженную стимуляцию фагоцитарной активности макрофагов с усилением ферментативных процессов в них. Она также стимулировала ГЗТ и не обладала иммуномодулирующим действием в иммунизирующих дозах, рекомендованных для человека, эквивалентным 50-100 мкг/мл.

Таким образом, изучение иммунологических свойств СВ с установлением ее влияния на неспецифические факторы резистентности и клеточный иммунитет, а также оценка развития специфического иммунного ответа способствует разработке высокоэффективного препарата для лечения синегнойной инфекции.

Таблица. ВЛИЯНИЕ СИНЕГНОЙНОЙ ВАКЦИНЫ НА ПОКАЗАТЕЛИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ

Доза иммунизации (мкг) Фагоцитарная активность НСТ-тест Развитие ГЗТ Иммуномодулирующее действие

Препарат Фагоцитарный показатель, % 30 8 + 1 4* Фагоцитарное число Количество деформазан-позитивных клеток, % Индекс реакции,% Абсолютное количество АОК на селезенку с доверительным интервалом

Синегнойная вакцина 50 100 38,6 ±2,1* °1 4 + 07 1,8+ 0,2* 2,4 ±0,17* 8,4 ±0,6* 10,8 ±0,9* 24,5 ± 1,8* 30,4 ± 2,5* 23821 (20940+26702) 24589 (20882-5-28295)

Контроль - 1,29 ±0,06 4,8 ±0,8 15,6 ± 1,8 26518 (18739+34797)

2003, T.5, № 1-2

Новая синегнойная вакцина...

Список литературы

1. Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения. - РД 42-28-8-89. -М., 1989,-ЗІс.

2. Маянский А.Н., Виксман М.Е., Котельникова П.К., Молчанова И.В. Характеристика функциональной активности нейтрофилов крови человека с помощью реакции восстановления нитросинего тетра-золия // Журн.микробиол., эпид. и иммунобиол. -1977. -№ 6. —С.108-110.

3. Медицинская микробиология /Под ред. Покровского В.И., Поздеева O.K. -М. : Медицина, 1999.

- 428с.

4. Нуриддинова Н.Р., Синяшин И.И., Иванова Л.Е. Биопрепараты на основе антигенов синегнойной палочки, выделенные из биомассы, накопленной в условиях интенсивного массообмена // Роль им-

мунобиологических препаратов в современной медицине. Материалы международного симпозиума. -Уфа, 1995. - С.138-141.

5. Нуриддинова Н.Р. Отбор и иммунобиологические свойства штаммов синегнойной палочки, кандидатов в штаммы-продуценты //Журн.инфекция, иммунитет и фармакология.-2000.-№ 1. - С.69-72.

6. Порядок и методы контроля иммунологической безопасности вакцин. Общие методические принципы. - РД 42-28-10-90. - М., 1989. - 49с.

7. Сидоренко С.В., Гельфанд Е.Б., Мамонтова O.A. Госпитальные инфекции, вызванные синегнойной палочкой. Значение для интенсивной терапии. // Журн.анестезиология и реаниматология. - 1999.

- № 3. - С. 46- 54.

8. Stanislavsky E.S., Lam J.S. Pseudomonas aeruginosa antigens as potential vaccines. // FEMS Microbiol. Rev. - 1997. - Vol. 21. - P.243-277.

поступила в редакцию 07.10.2002 принята к печати 30.12.2002