CC BY
181
ИНФЕКЦИОННАЯ ИММУНОЛОГИЯ
15. Wong G.W.K., Leung T.F., Mahesh P.A., HollaA.D., Ogorodova L., Fedorova O. et al. The EuroPrevall-INCO surveys on the prevalence of food allergies in children from china, India and Russia: The study methodology. Allergy. 2010; 65(3): 385-90.
16. Fedorova O.S, Ogorodova L.M., Fedotova M.M., Evdokimova T.A., Deev I.A., Deeva E.V. et al. The prevalence оf food allergies in children in world nidus of opisthorchiasis: background and study methodology of epidemiological survey EuroPrevall. vestnik Rossiiskoi Akademii Meditsinskikh Nauk. 2013; 4: 1824 (in Russian).
17. Fedorova O.S Food allergy prevalence in children of opisthorchiasis world region. Bjulleten’ sibirskoj mediciny. 2010; 5: 102-7 (in Russian).
18. Kuehn A., Hilger C., Lehners-Weber C., Codreanu-Morel F., Morisset M., Metz-Favre C. et al. Identification of enolases and aldolases as important fish allergens in cod, salmon and tuna: component resolved diagnosis using parvalbumin and the new allergens. clin. Exp. Allergy. 2013; 43(7): 811-22.
Поступила 08.07.13
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 616.832-004.2-092:612.017.1]-078.33
УШ. Фаткуллина1, Л.Ф. Зайнуллина1, К.З. Бахтиярова2, Ю.В. Вахитова1 NMDA-РЕЦЕПТОРЫ Т-ЛИМФОЦИТОВ РЕГУЛИРУЮТ СИНТЕЗ ЦИТОКИНОВ У
больных рассеянным склерозом
1ФГБУН Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН, 450054, г. Уфа, Россия; 2ГБОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет Минздрава России, 450000, г. Уфа, Россия
Рассеянный склероз (РС) - хроническое заболевание, характеризующееся активным воспалительным процессом аутоиммунной природы, следствием которого является демиелинизация нейронов. В последнее время стали появляться данные о том, что глутамат может выступать в роли иммуномодулятора, участвуя в контроле функций инфильтрованных в очаг воспаления Т-клеток. Кроме того, иммуномодуляция может осуществляться на уровне периферических Т-лимфоцитов при связывании глутамата с ионотропными рецепторами, в частности рецепторами NMDA-подтипа. В данной работе показано участие NMDA-рецепторов периферических лимфоцитов в контроле секреции про- и противовоспалительных цитокинов в культуре клеток у здоровых доноров и больных РС. Установлено, что блокада NMDA-рецепторов Т-клеток у здоровых доноров и больных РС приводит к выраженному ингибированию синтеза мРНК и секреции интерферона-Y, фактора некроза опухоли а, и интерлейкина (IL)-10, при этом секреция IL-6 подавляется в незначительной степени.
Ключевые слова: рассеянный склероз, глутамат, NMDA-рецепторы, цитокины, Т-лимфоциты U.Sh. Fatkullina1, L.F. Zainullina1, K. Z. Bakhtiyarova2, Yu.V. Vakhitova1
NMDA-RECEPTORS ARE INVOLVED IN REGULATION OF CYTOKINES PRODUCTION BY T-LYMPHOCYTES OF MULTIPLE SCLEROSIS PATIENTS
institute of Biochemistry and Genetics ufa Science centre of the Russian Academy of Sciences, 450054, ufa, Russia; 2De-partment of Neurology, Bashkir State Medical university, 450000, ufa, Russia
Multiple sclerosis is a chronic disease characterized by an active inflammatory process autoimmune nature, resulting in demyelination neurons. Recently began to appear evidence that glutamate can act as immunomodulator, participating in the control functions infiltered in inflammation of T cells. In addition, immunomodulation may take place at peripheral T-lymphocytes during the binding of glutamate ionotropic receptors, in particular NMDA-subtype. In this paper it is shown participation of NMDA receptors in peripheral lymphocytes in the control of secretion of Pro - and anti-inflammatory cytokines in the culture of cells of healthy donors and patients RS. It is established that the blockade of NMDA-receptors on T cells in healthy donors and patients RS leads to a pronounced inhibition of the synthesis of mRNA and secretion IFNy and TNF-a, IL-10, with the secretion of IL-6 is suppressed to a small extent.
Key words: multiple sclerosis, glutamate, NMDA-receptors, cytokines, T-lymphocytes
Введение. Рассеянный склероз(РС) -аутоиммунноеде-миелинизирующее воспалительное заболевание ЦНС. Установлено, что формирование и развитие патологического процесса при РС обусловлено образованием аутоантител к антигенам компонентов миелина и аутореактивных Т-клеток, нарушением функций субпопуляций Т-хелперов (Th1, Th2, Th17, Treg, TFH, TH9) и изменением баланса содержания провоспалительных и противовоспалительных цитокинов [1]. Помимо аутоиммунных механизмов значительную роль в дегенерации нейронов, миелина и олигодендроцитов при РС отводят
Вахитова Юлия Венеровна (Vakhitova Yulia Venerovna), iuvv73@gmail.com
возбуждающему нейромедиатору ЦНС глутамату [2-4]. В ряде исследований выявлено повышение уровня нейромедиатора в плазме, спинномозговой жидкости (СМЖ) и мозге у больных РС [5, 6]. Показано также, что при нейровоспалении глутамат, в избытке продуцируемый активированными макрофагами и микроглией, посредством метаботропных (mGluR) и ионотропных (iGluR) рецепторов запускает эксайтотоксические программы, что, как полагают, вносит вклад в формирование и поддержание нейродегенарации при РС [2, 7]. Как известно, основой воспалительного аутоиммунного процесса при РС являются аутореактивные миелинспецифичные Т-клетки, циркулирующие на периферии и способные проникать через поврежденный воспалением гемато-
- 339 -
ИММУНОЛОГИЯ № 6, 2013
энцефалический барьер. Далее эти клетки реактивируются антигенпрезентирующими клетками (главным образом макрофагами и микроглией), несущими антигены миелина и продуцируют провоспалительные цитокины (IL-2, IFNy, TNFa), способствуя тем самым поддержанию и хронизации воспалительного процесса в ЦНС [8, 9]. Высказывается предположение о том, что глутамат в условиях нейровоспаления действует в качестве иммуномодулятора, регулируя функции инфильтрированных в мозг аутореактивных клеток [10, 11]. Кроме того, иммуномодулирующий эффект глутамата может быть реализован и на уровне периферических Т-клеток.
В последние несколько лет появились данные, свидетельствующие об экспрессии ионотропных и метаботропных рецепторов глутамата на Т-лимфоцитах человека [12-15]. Имеющиеся на данный момент литературные данные свидетельствуют об участии рецепторов глутамата в регуляции ключевых функций Т-лимфоцитов, в частности секреции цитокинов, поляризации субпопуляций Т-хелперов, контроле пролиферации и апоптоза, интегринопосредованной адгезии к гликопротеинам экстраклеточного матрикса, изменении мембранного потенциала клеток, модуляции активности ионных каналов, экспрессии генов [16-18].
Ионотропные рецепторы глутамата, активируемые N-метил-О-аспартатом (NMDA), привлекают повышенное внимание исследователей, поскольку хорошо известна их роль в механизмах эксайтотоксического повреждения нейронов [19]. В то же время сведения о роли данного типа рецепторов в регуляции функций Т-лимфоцитов крайне ограничены и противоречивы. Изучение функциональной значимости NMDA-рецепторов для иммунокомпетентных клеток у больных РС не проводилось. В данной работе исследовали опосредованную NMDA-рецепторами регуляцию дифференциальной экспрессии генов и белков цитокинов у здоровых доноров и у больных РС.
Материалы и методы. Общая характеристика доноров. В исследовании принимали участие условно здоровые доноры-добровольцы (n = 6) и пациенты с достоверным диагнозом РС (табл. 1). Работа получила одобрение в Локальном этическом комитете при Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН. Все доноры дали информированное согласие на участие в исследованиях.
Выделение и культивирование лимфоцитов. Лимфоциты выделяли из 20 мл периферической крови условно-здоровых доноров и больных РС. Выделение фракции мононуклеаров проводили по стандартной методике градиентного центрифугирования [20]. В качестве митогена использовали моноклональные антитела (МКА) к CDS-рецептору (аСЭ3 МКА,
2,5 мкг/мл; клон OKT3, eBiosci-ence, США) и антитела к CD28 (aCD28 МКА, 1,25 мкг/мл; клон CD28.2, BD Pharmingen, США).
Общая характеристика доноров (п :
Таблица 1 = 6) и больных РС (п = 6)
Показатель Больные РС Здоровые доноры
Возраст, годы 38,5 ± 11,4 33 ± 1,2
Половой состав:
муж 2 1
жен 4 5
Длительность заболевания, год 4,4 ± 0,5
Тип течения заболевания:
ремиттирующий 4
вторично-прогрессирующий 2
EDSS (по шкале Куртцке) 3,0 ± 1,6
Для блокады NMDA-рецепторов использовали неконкурентный антагонист (+)-MK801 ((5S,10R)-(+)-5-метил-10,11-дигидро-5Н-дибензо(а^)циклогентен-5,10-имин малеат) (100 мкМ; Tocris Bioscience, США).
Уровень цитокинов измеряли с помощью коммерческих наборов для иммуноферментного анализа «ИФА-IL-6», «ИФА-Ш-10», «ИФА-TNFa», «ИФА-INFy» (“Цитокин”, Россия). В качестве проб использовали супернатант суспензии культур лимфоцитов доноров после 24 или 48 ч инкубации с комплексом антител CD3/CD28. Оптическую плотность образцов измеряли на планшетном спектрофотометре «EnSpire® Multimode Plate Readers» (Perkin Elmer, США). Концентрацию цитокинов в пробах определяли в соответствии с инструкциями производителя.
Сравнительное определение уровня мРНК генов цитокинов осуществляли методом количественной ОТ-ПЦР в режиме реального времени. Суммарную РНК выделяли с использованием «RNeasy Mini Kit» (Qiagen, США) в соответствии с протоколом фирмы-изготовителя. Примеси ДНК удаляли с помощью «RNase-Free DNase Set» (Qiagen, США). Нативность и чистоту полученных препаратов РНК контролировали на спектрофотометре «NanoDrop 1000» (Thermo Scientific, США) по соотношению длин волн 260/280
Таблица 2
Цитокиновый профиль в культуре Т-лимфоцитов у здоровых доноров и больных РС при блокаде NMDA-рецептора
Цитокин, пг/мл Контроль aCD3/aCD28 aCD3/aCD28 + MK-801 MK-801
Здоровые доноры (n = 6)
IL-10 126,86 ± 4,22 1318,28 ± 252,06** 768,87 ± 93,99## 208,39 ± 12,54**
IL-6 2787,69 ± 70,87 5208,76 ± 469,94** 4161,47 ± 176,75## 3993,79 ± 311,57*
IFNy 3874,37 ± 55,65 12597,04 ± 1251,08** 5089,25 ± 283,29## 3580,29 ± 53,26**
TNFa 705,92 ± 57,47 2618,27 ± 238,02** 1324,15 ± 37,14## 699,28 ± 54,29
Больные РС
IL-10 202,82 ± 23,81 448,35 ± 72,65* 270,85 ± 39,10## 171,43 ± 22,28*
IL-6 158,61 ± 1,45 301,71 ± 5,89** 306,06 ± 1,44 137,30 ± 1,75**
IFNy 339,91 ± 3,77 1169,50 ± 276,23* 797,16 ± 187,85## 322,15 ± 3,57**
TNFa 60,36 ± 6,89 206,45 ± 36,79** 129,03 ± 17,70## 58,82 ± 4,76*
Примечание. Здесь и в табл. 3: * - р < 0,05 и ** - р < 0,01 относительно показателей в контроле; # -р < 0,05 и ## -р < 0,01 относительно показателей в группе aCD3/aCD28.
- 340 -
ИНФЕКЦИОННАЯ ИММУНОЛОГИЯ
Т аблица 3
Экспрессия генов цитокинов в Т-клетках у здоровых доноров и больных PC при блокаде NMDA-рецептора
IL-10
IL-6
Рис. 1. Влияние блокады NMDA-рецепторов на содержание цитокинов в супернатанте культуры Т-лимфоцитов здоровых доноров и больных РС.
Уровень мРНК Контроль aCD3/aCD28 aCD3/aCD28 + MK-801 MK-801
Здоровые доноры (n = 6)
CSIF 1,32 ± 0,18 7,43 ± 2,16* 6,41 ± 2,15# 2,92 ± 0,63
IFNB2 1,09 ± 0,11 1,99 ± 0,13* 1,47 ± 0,21# 1,35 ± 0,13
IFNy 1,11 ± 0,11 32,07 ± 14,78* 18,94 ± 9,99# 1,37 ± 0,16
TNFa 1,12 ± 0,10 4,72 ± 1,78* 1,89 ± 0,26# 1,08 ± 0,28
Больные РС
CSIF 1,13 ± 0,09 1,70 ± 0,20* 1,15 ± 0,06# 1,58 ± 0,34
IFNB2 1,04 ± 0,08 1,35 ± 0,13* 1,04 ± 0,07# 1,32 ± 0,20
IFNy 1,05 ± 0,010 54,62 ± 22,11* 39,56 ± 16,87 1,06 ± 0,13
TNFa 1,06 ± 0,04 1,93 ± 0,29* 1,73 ± 0,22 1,32 ± 0,19
и 260/230. кДНК получали из 3-5 мкг суммарной РНК реакцией обратной транскрипции с использованием 0,5 мкг праймера oligo (dT)12-18 («ДНК-синтез», Россия) и набора «RevertAid ™ Reverse Transcriptase» (Fermentas, США) в соответствии с протоколом фирмы-изготовителя. Количественную ОТ-ПЦР в реальном времени проводили в приборе «iQ™5 Multicolor RealTime PCR Detection System» (BioRad, США), используя набор «iQ™ SYBR® Green Supermix» (BioRad, США), 100-500 нМ прямого и обратного праймеров,
2 мкл кДНК и деионизованную воду. Последовательности праймеров могут быть предоставлены по запросу. Относительный уровень мРНК исследуемых генов определяли с помощью модификации С(^-метода в программе REST Tool V2.0.7 (Corbertt Research, США).
статистическая обработка. Обработку результатов проводили в программе StatSoft (Statistica v6.1). При сравнении показателей цитокинового статуса использовали методы непараметрической статистики в связи с малым объемом выборки и отсутствием нормального распределения значений в вариационных рядах. Числовые данные в таблице приведены в виде медианы (Ме) и интерквартильного размаха (5- и 95-го про-центилей). Для сравнения двух независимых выборок применяли критерий Манна-Уитни, а для сравнения двух зависимых выборочных совокупностей - критерий Вилкоксона.
Результаты и обсуждение. В данном исследовании провели сравнительную оценку влияния неконкурентного антагониста NMDA-рецепторов на уровень мРНК генов и белков цитокинов IL-10, IL-6, TNFa и IFNy в лимфоцитах у здоровых доноров и больных РС.
Цитокиновая панель включала как про- (IL-6, TNFa, IFNy), так и противовоспалительные цитокины (IL-10). Как следует из полученных данных (табл. 2, 3; рис. 1, 2, 5), стимуляция Т-клеточного рецептора лимфоцитов у здоровых доноров сопровождается возрастанием уровня мРНК генов и белков всех исследованных цитокинов, причем наиболее выраженные изменения отмечены для противо-
I Здоровые
I Больные РС
Т-лимфоциты (1 • 106/мл) стимулировали комплексом антител am'nCD3/ aCD28 (2,5/1,25 мкг/мл). Одновременно в среду вносили неконкурентный антагонист NMDA-рецепторов (+)МК801 (100 мкМ). Уровень цитокинов измеряли через 24 ч (IL-10, IL-6, TNFa) и 48 ч (INFy). Данные представлены в виде % к контролю, n = 6. Для группы aCD3/aCD28+MK-801 контролем являлась группа aCD3/aCD28. Здесь и на рис. 2: статистическую обработку проводили с помощью U-критерия Манна-Уитни.* -р < 0,05, ** -р < 0,01 относительно показателей в контроле.
Рис. 2. Эффект блокады NMDA-рецепторов на экспрессию генов цитокинов в Т-лимфоцитах у здоровых доноров и больных РС.
Для определения относительного уровня мРНК Т-лимфоциты инкубировали в течение 8 ч (CSIF, IFNB2, TNFA) и 24 ч (INFG) в присутствии комплекса антител aCD3/aCD28 (2,5/1,25 мкг/мл) и (+)Mk801 (100 мкM). Данные представлены в виде % к контролю, n = 6. Группу aCD3/aCD28+MK-801 оценивали относительно группы aCD3/aCD28.
- 341 -
ИММУНОЛОГИЯ № 6, 2013
воспалительного Th2 - цитокина IL-10, провоспалительных Th1 - цитокина IFNy и Th1/Th17 - цитокина TNFa. При инкубации митогениндуцированных Т-лимфоцитов с антагонистом NMDA-рецепторов наблюдали статистически достоверное снижение уровня мРНК и содержания белков соответствующих цитокинов. Так, в митогенакти-вированных культурах лимфоцитов синтез IL-6 угнетался в среднем на 18%, IL-10 - на 53%, TNFa - на 50%, IFNy - на 57%. Отметим, что (+)-MK801 в используемой нами концентрации (100 мкМ) оказывал незначительное влияние на исследуемые параметры. Таким образом, эффект блокады NMDA-рецепторов лимфоцитов у здоровых доноров наиболее выраженно проявлялся в супрессии продукции провоспалительных цитокинов IFNy и TNFa, и противовоспалительного цитокина IL-10, тогда как синтез плейотропного цитокина IL-6 подавлялся в меньшей степени.
Схожие закономерности выявили и при анализе ци-токинового профиля у больных РС (см. табл. 2, 3; рис. 4, 5). Так же, как и у здоровых доноров, на фоне TCR-опосредованной стимуляции лимфоцитов происходит повышение уровня мРНК и содержания IL-10, IL-6, TNFa, IFNy. Действие (+)-MK801 сопровождается ингибированием синтеза мРНК генов и белков исследованных цитокинов, за исключением IL-6. В частности, синтез IL-10 был снижен на 35%, TNFa - на 35%, а IFNy - на 27%.
Обращает внимание более низкий уровень цитокинов в культуре лимфоцитов, полученных от больных РС по сравнению с таковым у здоровых доноров. В целом отметим, что кратность стимуляции синтеза некоторых цитокинов отличалась у больных РС и здоровых доноров. Так, на фоне Т-клеточной активации уровень продукции IL-10 у здоровых доноров превышал таковой у больных РС почти в 5 раз, а синтез TNFa - в 1,6 раза (см. рис. 4). Для IFNy и IL-6 подобных различий не обнаружили. При сравнении эффективности синтеза цитокинов в условиях блокады NMDA-рецепторов лимфоцитов у здоровых доноров и больных РС выявили некоторые особенности. В частности, ингибирование продукции TNFa у здоровых доноров составило 50%, а у больных РС - 35%. Схожий характер влияния антагониста показан и для IL-10 (53% ингибирования синтеза у здоровых доноров и 35% ингибирования у больных РС). Уровень синтеза IFNy на фоне действия (+)-MK801 у здоровых доноров (56%) и больных (27%) различался в 2 раза. Как уже отмечалось выше, блокада NMDA-рецепторов лимфоцитов у больных РС не сопровождалась изменениями содержания IL-6, а у здоровых доноров эффект антагониста составил всего 18%. Интересно, что действие антагониста NMDA-рецепторов схожим образом проявляется и на уровне мРНК генов соответствующих цитокинов (см. рис. 2).
В немногочисленных на данный момент работах показано, что глутамат посредством метаботропных и ионотропных рецепторов, экспрессированных в Т-клетках, оказывает влияние на направленность линейной дифференцировки Т-хелперов и, соответственно, регулирует баланс провоспалительных и противовоспалительных цитокинов [21-24]. Таким образом, результаты проведенных нами исследований позволили установить участие NMDA-рецепторов Т-лимфоцитов в регуляции синтеза как про-, так и противовоспалитель-
ных цитокинов, реализуемое на уровне мРНК генов соответствующих белков. Функциональные последствия регуляторного действия NMDA-рецепторов на продукцию цитокинов Т-лимфоцитами у больных РС и здоровых доноров трудно однозначно оценить ввиду плейо-тропной активности этих белков. Как известно, IFNy и TNFa имеют ключевое значение в запуске и поддержании иммунопатологического процесса в ЦНС при РС, а IL-10 опосредует адаптационный механизм стабильности течения РС, кроме того, IL-10 играет роль в регуляции проницаемости ГЭБ при РС [25]. В настоящее время IL-6 рассматривается в качестве провоспалительного агента при многих хронических воспалительных заболеваниях [26]. В связи с этим незначительное ингибирование продукции провоспалительных цитокинов антагонистом NMDA-рецепторов Т-лимфоцитов может быть рассмотрено в контексте протективного механизма, препятствующего или ограничивающего развитие воспаления при РС, однако данное предположение требует дальнейшей экспериментальной проверки.
Полученные нами данные свидетельствуют о том, что Т-лимфоциты у больных РС характеризуются более высокой резистентностью к блокаде NMDA-рецепторов. Результаты наших экспериментов согласуются с данными исследования G. Lombardi и соавт. [27], в котором продемонстрировано уменьшение ингибирования пролиферации ФГА-стимулированных лимфоцитов у больных РС в присутствии высокой концентрации глутамата (1 мМ), что, по мнению авторов, свидетельствует о сниженной чувствительности Т-клеток у больных РС к глутамату. Можно предположить, что NMDA-рецепторы Т-лимфоцитов у больных РС могут быть десенситизи-рованы к глутамату или находиться в состоянии down-регуляции, что отражается в снижении чувствительности рецепторов к лиганду и селективному антагонисту.
Не так давно в литературе появились сведения об эффективности блокаторов NMDA-рецепторов мемантина и (+)-MK801 при экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите животных. По данным ряда авторов, эти антагонисты снижали выраженность неврологических нарушений у животных с ЭАЭ, не препятствуя при этом развитию демиелинизации, однако уменьшали воспаление в ЦНС вследствие ограничения проницаемости ГЭБ для цитокинов и Т-лимфоцитов [28, 29]. Отметим, что антагонисты АМРА-рецепторов более эффективно, чем антагонисты NMDA-рецепторов, устраняют неврологический дефицит, но не оказывают влияния на развитие воспаления в ЦНС [30]. Вполне вероятно, что протективное действие антагонистов NMDA-рецепторов может быть сопряжено с регуляцией баланса про- и противовоспалительных цитокинов, продуцируемых периферическими и/или проникшими в мозг аутореактивными Т-лимфоцитами.
Выводы. 1. Блокада NMDA-рецепторов, стимулированных митогенами Т-лимфоцитов, у здоровых доноров и больных РС приводит к ингибированию продукции провоспалительных (IL-6, TNFa, IFNy) и противовоспалительных (IL-10) цитокинов, что свидетельствует об иммуномодулирующей роли данного типа рецепторов глутамата.
2. Т-лимфоциты у больных РС характеризуются меньшей чувствительностью к действию антагонистов NMDA-рецепторов.
- 342 -
ИНФЕКЦИОННАЯ ИММУНОЛОГИЯ
Данная работа проводилась при финансовой поддержке гранта РФФИ - Поволжье (№ 11-04-97093)
и гранта ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры
инновационной России» (соглашение № 8046).
ЛИТЕРАТУРА
8. Гусев Е.И., Завалишин, И.А., Бойко А.Н., ред. Рассеянный склероз. Клиническое руководство. М.: Реал Тайм; 2011.
18. Болдырев А.А., Брюшкова Е.А., Владыченская Е.А. NMDA-рецепторы в клетках иммунной системы. Биохимия. 2012; 77 (2): 160-8.
29. Абдурасулова И.Н., Житнухин Ю.Л., Тарасова Е.А., Клименко В.М. Вовлечение NMDA рецепторов глутамата в патогенез экспериментального аллергического энцефаломиелита (ЭАЭ). Клиническая патофизиология. 2004; 1: 29-32.
REFERENCES
1. Kuchroo V.K., Ohashi P.S., SartorR.B., Vinuesa C.G. Dysregulation of immune homeostasis in autoimmune diseases. Nature Med. 2012; 18 (1): 42-7.
2. PittD., WernerP., Raine C.S. Glutamate excitotoxicity in a model of multiple sclerosis. Nature Med. 2000; 6 (1): 67-70.
3. Werner P., Pitt D., Raine C.S. Multiple sclerosis: altered glutamate homeostasis in lesions correlates with oligodendrocyte and axonal damage. Ann. Neurol. 2001; 50 (2): 169-80.
4. Matute C. Interaction between glutamate signalling and immune attack in damaging oligodendrocytes. Neuron Glia Biol. 2007; 3 (4): 281-5.
5. Stover J.F., Pleines U.E., Morganti-KossmannM.C., Kossmann T., Low-itzsch K., Kempski O.S. Neurotransmitters in cerebrospinal fluid reflect pathological activity. Eur. J. Clin Invest. 1997; 27 (12): 1038-43.
6. SrinivasanR., SailasutaN., HurdR., NelsonS., PelletierD. Evidence of elevated glutamate in multiple sclerosis using magnetic resonance spectroscopy at 3 T. Brain. 2005; 128 (5): 1016-25.
7. CentonzeD., MuzioL., RossiS., FurlanR., Bernard G., Martino G. The link between inflammation, synaptic transmission and neurodegeneration in multiple sclerosis. Cell Death Differ. 2010; 17 (7): 1083-91.
8. GusevE.I., ZavalishinI.A., BoykoA.N., eds. Multiple sclerosis. Clinical guidance. Moscow: Real-Time Publ.; 2011 (in Russian).
9. Goverman J. Autoimmune T cell responses in the central nervous system. Nature Rev. Immunol. 2009; 9 (6): 393-407.
10. Schwartz M., Shaked I., Fisher J., Mizrahi T., Schori H. Protective autoimmunity against the enemy within: fighting glutamate toxicity. Trends Neurosci. 2003; 26 (6): 297-302.
11. Volpi C., Fazio F., Fallarino F. Targeting metabotropic glutamate receptors in neuroimmune communication. Neuropharmacology. 2012; 63 (4): 501-6.
12. Kostanyan I.A., Merkulova M.I., Navolotskaya E.V., Nurieva R.I. Study of interaction between L-glutamate and human blood lymphocytes. Immunol. Lett. 1997; 58 (3): 177-80.
13. Lombardi G., Dianzani C., Miglio G., Canonico P.L., Fantozzi R. Characterization of ionotropic glutamate receptors in human lymphocytes. Br. J. Pharmacol. 2001; 133 (6): 936-44.
14. Ganor Y., Besser M., Ben-Zakay N., Unger T., Levite M. Human T
cells express a functional ionotropic glutamate receptor GluR3, and glutamate by itself triggers integrin-mediated adhesion to laminin and fibronectin and chemotactic migration. J. Immunol. 2003; 170 (8): 4362-72.
15. Chiocchetti A., Miglio G., Mesturini R., Varsaldi F., Mocellin M., Orilieri E. et al. Group I mGlu receptor stimulation inhibits activation-induced cell death of human T lymphocytes. Br. J. Pharmacol. 2006; 148 (6): 760-8.
16. Pacheco R., Gallart T., Lluis C., Franco R. Role of glutamate on T-cell mediated immunity. J. Neuroimmunol. 2007; 185 (1-2): 9-19.
17. Levite M. Neurotransmitters activate T-cells and elicit crucial functions via neurotransmitter receptors. Curr. Opin. Pharmacol. 2008; 8 (4): 460-71.
18. Boldyrev A.A., BryushkovaE.A, VladychenskayaE.A. NMDA-recep-tors in cells of the immune system. Biokhimiya. 2012; 77 (2): 160-8 (in Russian).
19. Hardingham G.E., BadingH. Synaptic versus extrasynaptic NMDA receptor signalling: implications for neurodegenerative disorders. Nature Rev. Neurosci. 2010; 11 (10): 682-96.
20. Boyum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood. Scand. J. Lab. Clin. Invest. 1968; 21: 77-89.
21. Pacheco R., Oliva H., Martinez-Nawo J.M., Climent N., Ciruela F., GatellJ.M. et al. Glutamate released by dendritic cells as a novel modulator of T cell activation. J. Immunol. 2006; 177 (10): 6695-704.
22. Mashkina A.P., Tyulina O.V, Solovyova T.I., Kovalenko E.I., Kanevs-ki L.M., Johnson P. et al. The excitotoxic effect of NMDA on human lymphocyte immune function. Neurochem. Int. 2007; 51 (6-7): 356-60.
23. Kvaratskhelia E., Maisuradze E., Dabrundashvili N.G., Natsvlish-vili N., Zhuravliova E., Mikeladze D.G. N-methyl-D-aspartate and sigma-ligands change the production of interleukins 8 and 10 in lymphocytes through modulation of the NMDA glutamate receptor. Neuroimmunomodulation. 2009; 16 (3): 201-7.
24. Fallarino F, Volpi C., Fazio F, Notartomaso S., Vacca C., Busceti C. et al. Metabotropic glutamate receptor-4 modulates adaptive immunity and restrains neuroinflammation. Nature Med. 2010; 16 (8): 897-902.
25. Katsavos S., AnagnostouliM. Biomarkers in multiple sclerosis. Multiple Scleros. Int. 2013; 2013: 340508.
26. Rincon M. Interleukin-6: from an inflammatory marker to a target for inflammatory diseases. Trends Immunol. 2012; 33 (11): 571-7.
27. Lombardi G., Miglio G., Canonico P.L., Naldi P., Comi C., Monaco F. Abnormal response to glutamate of T lymphocytes from multiple sclerosispatients. Neurosci. Lett. 2003; 340 (1): 5-8.
28. Paul C., Bolton C. Modulation of blood-brain barrier dysfunction and neurological deficits during acute experimental allergic encephalomyelitis by the N-methyl-D-aspartate receptor antagonist memantine. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2002; 302 (1): 50-7.
29. Abdurasulova I.N., Zhitnukhin Yu.L., Tarasova E.A., Klimenko V.M. Involvement of NMDA glutamate receptors in the pathogenesis of experimental allergic encephalomyelitis (EAE). Klinicheskaya patofiziologiya. 2004; 1: 29-32 (in Russian).
30. Smith T., Groom A., Zhu B., Turski L. Autoimmune encephalomyelitis ameliorated by AMPA antagonists. Nature Med. 2000; 6 (1): 62-6.
Поступила 14.03.13
- 343 -
