CC BY
6
УДК 636.2.053:615.272.6:612.017.1
НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ НАТРИЯ НУКЛЕИНАТА ГЛУБОКОСТЕЛЬНЫМ КОРОВАМ
Горина А.В. - аспирант, Великанов В.И. - д.б.н., профессор, Кляпнев А.В. - к.б.н., доцент, Трунова Е.А. - аспирант, Слетов А.О. - аспирант, Дунаевская А.А. - аспирант
ФГБОУ ВО «Государственная сельскохозяйственная академия»
Ключевые слова: новорожденные телята, неспецифическая резистентность, Натрия нуклеинат
Keywords: newborn calves, nonspecific resistance, Sodium nucleinate
Для устойчивого развития интенсивного скотоводства важным условием является организация
выращивания здорового молодняка. Пристального внимания к себе требуют новорожденные телята. Сразу после рождения их организм начинает адаптироваться к условиям внешней среды. По сравнению со взрослыми животными их защитно-приспособительные функции реализованы недостаточно.
Неспецифическая резистентность
новорожденных телят находится на низком уровне. Иммуноглобулины в сыворотке крови присутствуют в крайне малых количествах, так как во внутриутробном периоде развития они не поступают плоду через плаценту из материнского организма. Главным источником иммуноглобулинов для новорожденных телят является молозиво. Оно также содержит защитные и регуляторные факторы, такие как лейкоциты, лизоцим, лактоферрин, цитокины.
Гугушвили Н.Н. (2003) установлено, что у коров черно-пестрой породы уровень фагоцитарной активности нейтрофилов, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови увеличивались к девятому месяцу стельности и понижались сразу после отела. Уровень общего белка понижался с увеличением срока беременности. На ранних сроках стельности выявлена тенденция понижения содержания гамма-глобулинов и резкое снижение их перед отелом, а также в течение нескольких суток после него. Количество иммуноглобулинов классов А,
М, G, которые составляют значительную часть этой фракции белка с седьмого по девятый месяц понижалось [8].
Установлено, что количество иммуноглобулинов в крови активно снижается за несколько суток до отела и в день отела их содержание минимально. Этот процесс объясняется переходом защитных белков в молозиво [4, 7]. В первые минуты после отела уровень иммуноглобулинов в сыворотке молозива максимальный [7].
У коров за 3-9 суток перед отелом бактерицидная и лизоцимная активности сыворотки крови, фагоцитарная активность нейтрофилов могут быть понижены [5].
Качество молозива в некоторых случаях может быть низким, например, вследствие неполноценного кормления коров, уменьшения длительности сухостойного периода, преждевременного доения до родов или потери молозива перед ними. Возраст также влияет на уровень антител - чем более зрелая корова, тем выше уровень антител в молозиве. Низкое качество молозива является причиной иммунодефицита у новорожденных телят, что приводит к возникновению массовых болезней желудочно-кишечного тракта. Повысить уровень иммуноглобулинов в молозиве и степень их усвоения в организме новорожденных телят можно путем введения биологически активных веществ коровам за несколько дней до родов.
Натрия нуклеинат (НН) усиливает неспецифическую устойчивость,
лейкопоэз, миграцию и кооперацию Т- и
В-лимфоцитов, фагоцитарную активность макрофагов и нейтрофилов, ускоряет процессы регенерации, повышает содержание лизоцима, пропердина, уровень антител, индуцирует синтез интерферона. НН имеет антитоксическое действие [1, 2, 3].
Целью исследования стало изучение влияния НН на физиологическое состояние и становление неспецифической резистентности новорожденных телят после его парентерального введения глубокостельным коровам.
Материал и методы исследований. Исследования выполнены в осенне-зимний период 2021 года на базе молочно-товарной фермы СПК «Нижегородец»
Нижегородской области. Объектами исследования выступили 10
глубокостельных коров черно-пестрой породы. Подбор животных проводили по принципу парных аналогов. Были составлены 2 группы - контрольная и опытная по 5 животных в каждой. От коров контрольной и опытной групп было получено кратное количество
новорожденных телят, которых
распределили в группы, соответствующие их матерям. Коровам опытной группы за 39 суток перед отёлом инъецировали НН в дозе 5 мл внутримышечно, однократно. Коровам контрольной группы - 0,9% раствор хлорида натрия.
Теленку выпаивали материнское молозиво после появления рефлекса сосания. В первые сутки жизни телята содержались в клетках в родильном отделении, затем их переводили в пластмассовые боксы-домики, т.е. на ферме используется «холодный метод выращивания».
Проводилось клиническое
наблюдение за подопытными животными. Массу новорожденных телят определяли в день рождения, в конце первого, второго, третьего и четвертого месяцев жизни. У новорожденных телят производили отбор проб крови из яремной вены через сутки после рождения и на 10-е сутки жизни для изучения биохимических и
иммунологических показателей.
Для проведения исследований
использовали клинические методы, включающие определение температуры тела, частоты пульса и дыхательных движений; осмотра волосяного покрова, слизистых оболочек глаз, рта и носа; изучение активности, темперамента, конституции.
С помощью биохимических методов изучали уровень общего белка сыворотки крови (ОБС) на анализаторе ICUBIO iMagic-V7 (Китай). Принцип работы анализатора основан на методе спектрофотометрии. При этом
автоматически определяется зависимость интенсивности поглощения падающего света от длины волны.
Определение альбуминов, альфа-, бета-, гамма-глобулинов проводили на приборе Minicap, Sebia (Франция). Принцип работы аппарата основан на методе капиллярного электрофореза, при этом в тонком капилляре анализатора происходит разделение молекул исследуемого раствора по заряду и величине.
В работе использовались иммунологические методы. Изучали бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК) телят в модификации О.В. Смирновой и Г.А. Кузьминой. Она базируется на том, что сыворотка крови воздействует бактерицидно и
бактериостатически на микроорганизмы. Для проведения анализа использовали тест-культуру Escherichia coli штамм О111. Учитывался характер изменения оптической плотности среды с микроорганизмами при добавлении к ней исследуемой сыворотки крови.
Определение лизоцимной
активности сыворотки крови (ЛАСК) проводили нефелометрическим методом, учитывая изменение оптической плотности суспензии M. Lysodeikticus после добавления в нее изучаемой сыворотки крови.
Определение уровня фагоцитоза осуществляли путем изучения активности нейтрофилов периферической крови подопытного животного поглощать микробные клетки. Реакция ставится in vitro с использованием Staphylococcus
albus. При этом рассчитывали фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) и фагоцитарный индекс (ФИ).
Изучение иммуноглобулинов
(классов A, M, G) осуществляли по методу радиальной иммунодиффузии в геле из агара (В.В. Меньшиков, 1987)
Цифровые данные, полученные в ходе эксперимента, обрабатывались статистическим методом
(Н.А. Плохинский, 1967) на персональном компьютере с установленным пакетом программ Microsoft Excel 2007. Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента. Результаты рассматривались как достоверные, начиная со значения P<0,05.
Анализы выполнялись на кафедре «Анатомия, хирургия и внутренние незаразные болезни» ФГБОУ ВО
Нижегородская ГСХА, лаборатории «Гемохелп» г. Нижнего Новгорода. Получено решение о выдаче патента РФ на изобретение от 26.11.2021 г. по заявке № 2021109976.
Результат исследований.
Биохимические показатели крови телят контрольной и опытной групп представлены в таблице 1. На вторые сутки жиз ни у новорожденных телят усваивается основная часть веществ, полученных с материнским молозивом. В этот период нами отмечено увеличение в крови опытных телят уровня общего белка на 18 % в основном за счет альбуминов и у-глобулинов, уровень которых был выше соответственно на 16,5 % и 53,5 %. Известно, что у новорожденного альбумины и глобулины молозива могут проникать неизмененными через стенку кишечника в кровь.
Таблица 1 - Биохимические показатели крови новорожденных телят (M±m, n=5)
Показатель 2 сутки 10 сутки
контроль опыт контроль опыт
Общий белок, г/л 62,36±0,58 73,6±2,58* 60,82±0,96 67,6±1,67*
Альбумины, г/л 21,38±0,42 24,92±1,07* 22,62±0,50 23,78±0,71
а-глобулины, г/л 18,78±0,93 17,4±1,02 17,24±1,31 15,14±0,60
Р-глобулины, г/л 5,8±0,37 6,1±0,49 7,6±0,86 9,34±0,60
у-глобулины, г/л 16,4±0,97 25,18±2,43* 13,36±0,57 19,34±1,53*
Примечание: здесь и далее в таблицах * - Р<0,05 по парному критерию при сравнении с контролем
Уровень а-глобулинов оказался ниже на 7,3 %, а Р-глобулинов выше на 5,2 % у животных опытной группы по сравнению с контролем ^>0,05).
На 10-е сутки жизни уровень общего белка у телят подопытных групп снизился за счет фракций а- и у-глобулинов, при этом уровень общего белка был достоверно выше у телят опытной группы на 11,1 %. Содержание альбуминов и у-глобулинов в опытной группе оставалось выше на 5,13 % и 44,7 % по сравнению с контролем.
В крови подопытных животных а-глобулиновая фракция белка снижалась к 10 суткам и у опытных животных была на 12,2 % меньше в сравнении с контрольными животными. Уровень Р-глобулинов у животных исследуемых групп увеличился и у опытных телят
оказался на 22,9 % выше, чем в контроле.
Увеличение количества
у-глобулинов в сыворотке крови телят опытной группы связано с большим поступлением иммуноглобулинов с молозивом. Содержание
иммуноглобулинов молозива 1 -го удоя коров опытной группы было достоверно выше на 19 %, что говорит о повышении образования этих белков в организме, вследствие усиления иммунореактивности коров под действием Натрия нуклеината. Применение стельным коровам Натрия нуклеината способствовало повышению уровня колострального иммунитета у полученных от них телят.
Иммуноглобулин А представляет собой димер, составляет около 5 % колостральных ^ и защищает поверхность
слизистых оболочек, включая слизистую кишечника, от проникновения патогенных микроорганизмов и их колонизации на поверхности эпителия. Содержание этого иммуноглобулина у опытных телят было выше на 2-е и 10-е сутки соответственно на 64,4 и 61,7 %.
Иммуноглобулин М является пентамером, составляет около 7 % колостральных иммуноглобулинов,
обладает защитными свойствами и служит первичным защитным механизмом против септицемии, способен фиксировать комплемент. Содержание этого
иммуноглобулина у опытных телят было выше на 2-е и 10-е сутки соответственно на 75,3 и 47,6 %.
У новорожденных контрольной и
опытной групп на 2-е и 10-е сутки жизни уровень иммуноглобулин G в крови составил 18,84±1,32 и 16,17±1,13 г/л, что на 46,6 и 43,6 % достоверно выше, по сравнению с животными контрольной группы.
Отмечено увеличение БАСК у животных исследуемых групп, при этом она была выше у телят опытной группы на 16,4 и 15,2 % на 2-е и 10-е сутки жизни соответственно, по сравнению с контрольной группой. С возрастом БАСК животных подопытных групп увеличивался на 12,6 и 11,4 % соответственно. Данный показатель отражает совместное действие клеточного и гуморального факторов защиты.
Таблица 2 - Иммунологические показатели крови новорожденных телят (М±т, п=5)
Показатель 2 сутки 10 сутки
контроль опыт контроль опыт
Иг А, г/л 1,29±0,13 2,16±0,2* 0,68±0,06 1,10±0,11*
Иг М, г/л 1,7±0,13 2,98±0,3* 1,07±0,04 1,58±0,12*
Иг G, г/л 12,85±0,71 18,84±1,32* 11,26±0,4 16,17±1,13*
БАСК, % 29,6±0,8 34,48±0,84* 33,32±1,08 38,4±1,01*
ЛАСК, % 15,2±0,59 18,22±0,31* 15,8±0,68 18,56±0,50*
ФАН, % 32,4±0,91 37,5±0,36* 37,4±1,06 42,44±0,93*
ФИ, % 1,36±0,09 1,85±0,04* 1,62±0,07 1,9±0,04*
Одним из важных показателей неспецифической резистентности является активность фермента лизоцима, способного лизировать живые и мёртвые клетки. Отмечается выраженное нарастание ЛАСК у телят опытной группы на 2-е и 10-е сутки жизни на 19,8 % и 17,4% по сравнению с контролем. Возможно, это связано с активацией макрофагов, поскольку данный фермент секретируется этими клетками, а также выделяется при дегрануляции полиморфноядерными нейтрофилами. В динамике ЛАСК телят, участвующих в эксперименте, значимых изменений не прослеживается.
ФАН на 2-е и 10-е сутки жизни была выше у телят опытной группы соответственно на 15,7 и 13,4% по сравнению с контрольной группой. Повышение этого показателя у телят опытной группы связано с активацией внутриклеточных систем фагоцитов и
повышением опсонических способностей иммуноглобулинов. Со временем происходит увеличение ФАН на 15,4 и 13,2% в контрольной и опытной группе соответственно. Наблюдалось также увеличение фагоцитарного индекса у телят опытной группы на 2-е и 10-е сутки жизни на 36 и 17,2 % соответственно, по сравнению с контролем. С возрастом происходит увеличение фагоцитарного индекса у животных исследуемых групп.
Начиная с рождения и в конце каждого месяца, проводилось взвешивание телят 4 месяца подряд. Масса тела телят контрольной и опытной групп сразу после рождения не имела существенной разницы и в среднем составила 31,8±0,37 и 32,2± 0,48 кг соответственно (Р>0,05). Среднесуточный прирост массы тела за 4 месяца выращивания был выше в опытной группе на 11,6-23 %. В конце 4 месяца жизни масса тела телят контрольной
группы составила 97,8±1,75 кг, а телят опытной группы 105,4±1,88 кг, что больше на 7,7 % (Р<0,05).
Заключение. Парентеральное однократное введение 0,2% водного раствора Натрия нуклеината коровам в предродовой период способствовало получению иммунологически
качественного молозива. Установлено повышение иммуноглобулинов молозива первого удоя на 19%. У телят на вторые сутки жизни повысился уровень общего белка крови за счет альбуминовой и у-глобулиновой фракций. Происходила стимуляция колострального иммунитета. Содержание иммуноглобулинов А, М, G крови повысилось соответственно на 64,4;
75.3 и 46,6 %, что может быть связано как с большим содержанием в молозиве, так и усвоением их в кишечнике. Иммуноглобулины могут выполнять функцию опсонизации, поэтому, видимо, их более высокое содержание обусловило повышение ФАН и ФИ соответственно на
15.4 и 36 %. Уровни БАСК и ЛАСК также были выше у опытных телят. На 10-е сутки жизни телят положительный эффект сохранился.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Барсуков, А. А. Повышение неспецифической резистентности макроорганизма к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам нуклеинатом натрия / А. А. Барсуков, В. М. Земсков, В. Г. Соболев // Антибиотики. - 1978. - № 6. - С. 520-526.
2. Воронин, С. Натрия нуклеинат -
эффективный иммуномодулятор
/ С. Воронин, А. Гуменюк, А. Ханис, Ю. Фёдоров // Животноводство России. -
2015. - № 7. - С. 21.
3. Инструкция по ветеринарному применению Натрия нуклеината от 12.03.2018 г. Номер регистрационного удостоверения 44-3-2.18-4045 № ПВР-3-4.6/01777.
4. Карпуть, И. М. Иммунология и иммунопатология болезней молодняка / И. М. Карпуть, Минск : Ураджай, 1993. -288 с.
5. Терентьев, С. С. Изучение влияния азоксивета в сочетании с синэстролом 2 % на показатели морфологического состава крови у коров / С. С. Терентьев, В. И. Великанов, А. В. Кляпнев, А. В. Горина, А. О. Слетов // Морфология. - 2020. - Т. 157. - № 2-3. - С. 209-210.
6. Орёл, А. А. Обзор российского рынка иммуномодуляторов / А. А. Орёл // Смоленский медицинский альманах. -
2016. - № 1. - С. 174-177.
7. Шульга, Н. Н. Законы формирования иммуноглобулиновой составляющей молозива / Н. Н. Шульга, И. С. Шульга, Л. П. Плавшак, С. С. Дикунина // Национальная Ассоциация Ученых. - 2016. - № 3-2 (19). -С. 59-62.
8. Gugushvili, N. N. Dependence of the nonspecific resistance in cows from their physiological and clinical state / N. N. Gugushvili // Bull. Exp. Biol. Med. -2003. - Vol. 136(6). - P. 548-550.
НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ ПОСЛЕ
ПРИМЕНЕНИЯ НАТРИЯ НУКЛЕИНАТА ГЛУБОКОСТЕЛЬНЫМ КОРОВАМ
Горина А.В., Великанов В.И., Кляпнев А.В., Трунова Е.А., Слетов А.О., Дунаевская А.А.
Резюме
Целью исследования стало изучение применения иммуномодулятора Натрия нуклеината на развитие естественной резистентности новорожденных телят после его инъецирования коровам-матерям в предродовой период. Работа проведена на базе СПК «Нижегородец» Нижегородской области. В ходе опыта проводили оценку показателей неспецифической резистентности крови новорожденных телят на 2-е и 10-е сутки после рождения. На 2-е сутки жизни у телят установлено повышение у-глобулиновой фракции белка на 53,5 %, что может быть обусловлено, как более высоким содержанием иммуноглобулинов в молозиве, так и повышением усвоения их в кишечнике новорожденных. Иммуноглобулины могут выполнять функцию опсонизации, поэтому, видимо, их более высокое содержание обусловило повышение ФАН и ФИ соответственно на 15,4 и 36 %. Уровень БАСК и ЛАСК также были выше у опытных телят. На 10-е сутки положительный эффект сохранился.
NONSPECIFIC RESISTANCE OF NEWBORN CALVES AFTER APPLICATION OF SODIUM
NUCLEINATE TO DОWN-CALVING COWS
Gorina A.V., Velikanov V.I., Klyapnev A.V., Trunova E.A., Sletov A.O., Dunaevskaya A.A.
Summary
The aim of the study was to study the use of the immunomodulator Sodium nucleinate for the development of nonspecific resistance in newborn calves. The work was carried out on the basis of the APC «Nizhegorodets» of the Nizhny Novgorod region. In the course of the experiment, a biochemical and immunological analysis of the blood of newborn calves was carried out on the second and tenth days after birth. As a result, there was an increase in gamma globulins by 53,5%. This effect may be due to both a higher content of immunoglobulins in colostrum and an increase in their assimilation in the intestines of newborns. Immunoglobulins can perform the function of opsonization, therefore, apparently, their higher content caused an increase in the phagocytic activity of neutrophils and the phagocytic index, respectively, by 15.4 and 36 %. The level of bactericidal activity and lysozyme activity of blood serum were also higher in the experimental calves. On the 10th day, the positive effect persisted.
