CC BY
36
НЕРВНАЯ СИСТЕМА ASPIDOGASTER CONCHICOLA K.BAER,1827 (TREMATODA: ASPIDOGASTREA, POSHE, 1907): -СЕРОТОНИНЕРГИЧЕСКИЕ И ПЕПТИДЕРГИЧЕСКИЕ ЭЛЕМЕНТЫ.
Теренина Н.Б. *, Толстенное О.О. *,
Крещенко Н.Д. **, Густафссон М.***
* Центр паразитологии Института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН **Институт биофизики клетки РАН ***Отдел биологии АБО Академии Университета, Финляндия
Введение. Трематода Aspidogaster conchicola является широко распространённым представителем своеобразной группы паразитических плоских червей подкласса Aspidogastrea (Faust et Tang, 1936). Трематоды, принадлежащие к данному подклассу, имеют ряд морфологических и биологических особенностей, которые делают эту группу крайне интересной с точки зрения филогении и положения в системе плоских червей. (Тимофеева, 1971; Rhode, 1972) Органы прикрепления этих паразитов представлены продольным рядом присосок (или присасывательных ямок) на брюшной стороне или особым прикрепительным диском (диском Бэра), занимающим всю брюшную поверхность тела. Типичная ротовая присоска отсутствует. Ротовое отверстие субтерминальное или терминальное, окружено радиальной мускулатурой. Развитие данных трематод прямое, без метаморфоза. Вышедшая из яйца личинка, именуемая ларвотремой, похожа на взрослую форму. Паразиты пресноводных и морских рыб и черепах, а также моллюсков (Шульц, Гвоздев, 1970) Подкласс состоит из одного отряда Aspidogastrida Skrjabin et Gushanskaja, 1962, куда входит семейство Aspidogastridae Poshe, 1907. Трематоды, принадлежащие к данному семейству паразитируют в почках, перикардии и мантийной полости моллюсков, кишечнике рыб и черепах. Представитель рода Aspidogaster - Aspidogaster conchicola локализуется в перикардиальной полости двустворчатых моллюсков рода Anadonta. Прикрепительный орган этого паразита имеет вид крупного овального выпуклого диска с четырьмя продольными рядами присасывательных ямок.
Как указывает Rhode (1972) аспидогастриды имеют ряд архаичных характеристик предполагающих, что это древняя группа, которая по-видимому, связывает паразитические и свободноживущие организмы, от которых эволюционировали трематоды, имеющие сложный жизненный цикл и разнообразных хозяев.
Несмотря на значительный интерес к этой относительно небольшой группе паразитических червей, многие морфофункциональные аспекты их жизнедеятельности, в частности нейромедиаторы и их функциональное значение, остаются недостаточно изученными. Нервная система Aspidogastrea в целом представлена хорошо дифференцированным ортогоном, присущим
386
большинству плоских червей, и состоит из трёх пар продольных нервных стволов, связанных между собой кольцевыми комиссурами. Мозг представлен двумя дорзо-латеральными образованиями, связанными вентральной комиссурой. В работе Тимофеевой (1971) на основании определения локализации фермента холинэстеразы, топографически связанного с нервной системой, даётся подробное описание строения нервной системы Aspidogaster conchicola. Имеются сведения о наличии в нервной системе A. conchicola помимо холинергических, катехоламинергических элементов. Указывается также на присутствие и серотонинергических нервных клеток (Шишов, 1991).
В настоящей работе с целью дальнейшего изучения нейрональных сигнальных веществ у представителей класса Aspidogastrea с помощью иммуноцитохимического метода и конфокальной сканирующей лазерной микроскопии проведено исследование локализации нейромедиаторов — серотонина и нейропептида FMRFамида - в нервной системе Aspidogaster conchicola.
Материалы и методы. В работе использовали трематод Aspidogaster conchicola, извлечённых их перикардия моллюсков Anodonta anatina (Тверская обл). Материал фиксировали в 4% параформальдегиде в 0,1 М фосфатном буферном растворе (рН 7,4) при 4 0С и затем сохраняли в 10% сахарозе, приготовленной на 0,1 М фосфатном буфере.
Локализацию серотонинергических и пептидергических (FMRFамидергических) нервных структур определяли иммуноцитохимически в соответствии с методом Coons et al., (1955). Образцы инкубировали в первичной антисыворотке (Incstar, USA, в разведении 1:500), затем во вторичной антисыворотке (FITC, DAKO, в разведении 1:50) при температуре +4°C.
Для исследования взаимоотношения выявляемых нейромедиаторов с мышечными элементами паразита одновременно проводили также окраску мышечных волокон, используя связанный с флуорофором фаллоидин. Для окраски мускулатуры использовали TRITC (тетраметилродамин изотиоцианат) меченый фаллоидин (в разведении 1:200), во влажной камере в течение одного часа в темноте при температуре +4°C в соответствии с методом, описанным Wahlberg (1998).
Препараты исследовались с помощью Leica TCS 4D конфокального сканирующего лазерного микроскопа, соединенного с Leitz Aristoplan флуоресцентным микроскопом.
Результаты. Иммунореактивные к серотонину нервные клетки и волокна выявлены в области расположения церебральных ганглиев, комиссуры, связывающей их, в волокнах, идущих от церебральных ганглиев к переднему концу тела, а также в терминальном нервном кольце. От терминального нервного кольца к краю ротовой присоски идут иммунореактивные к серотонину волокна. К заднему отделу тела от церебральных ганглиев отходят три пары нервных стволов: наиболее толстые - вентральные, более тонкие - дорзальные и латеральные, идущие по бокам
387
тела паразита. Видны нервные комиссуры, соединяющие продольные нервные стволы. В области церебрального ганглия, а также терминальной комиссуры видны несколько серотонинергических клеток. Серотонин-иммунореактивная клетка, а также нервные волокна имеются также вблизи полового отверстия. По ходу вентрального нервного ствола также выявляются несколько клеток, иммунореактивных к серотонину.
Внутри прикрепительного овального диска, разделённого тремя продольными и большим числом поперечных мышечных перегородок на отдельные присасывательные ячейки, наблюдается тонкая сеть из нервных волокон, имеющих положительную реакцию на серотонин.
На поверхности терминального отдела матки обнаруживаются многочисленные мелкие серотонинергические нервные клетки и волокна. Такие же клетки, но в гораздо меньшем количестве выявляются и в конечных отделах мужской половой системы трематоды..
Положительное окрашивание на нейропептид - БМКРамид выявлено в головных ганглиях, в волокнах, идущих к ротовому отверстию, в продольных нервных стволах, идущих к заднему отделу тела и комиссурах, связывающих их, а также в области экскреторного отверстия. Сеть нервных волокон и нервная клетка, иммунореактивные к FMRFамиду наблюдались в области полового отверстия.
Заключение. Результаты проведённого исследования свидетельствуют о том, что в нервной системе Aspidogaster conchicola присутствуют серотонинергические и пептидергические компоненты. Обнаружена иннервация прикрепительного диска, конечных отделов репродуктивной системы, ротового отверстия, что свидетельствует в пользу того, что регуляция мышечной активности данных органов осуществляется с помощью серотонинергических и пептидергических отделов нервной системы
Работа поддержана грантом РФФИ № 08-04-00271-а
Литература: 1.Тимофеева Т.А. //Паразитология, 1971, V, 6, 517-523. 2.Coons A.H., Leduc E.H., Connolly J.M. // J. Exper. Med. - 1955. - V. 102. - Р. 4960. 3. Rhode K. //Advances in Parasitology, 10, 77-151. 4. Shishov B.A. |// Studies in Neurosciences 1991, 13:113-152; 4.Wahlberg M.H. // Cell and Tissue Research. -1998. -V. 291. - Р. 561-570.
Nervous system of Aspidogaster conchicola K.Baer,1827 (Trematoda: Aspidogastrea, Poshe, 1907): - serotoninergic and peptidergic components
Terenina N.B., Tolstenkov O.O., Kreshchenko N.D., Gustafsson M. Centre of Parasitology of A.N.Severtsov Institute of Ecology and Evolution of Russian Academy of Sciences, Moscow. Institute of Cell Biophysics, Russian Academy of Sciences. Department of Biology, Abo Academi University, Abo, Finland,
Summary. Serotoninergic and neuropeptidergic components of the nervous system were examined in Aspidogaster conchicola using immunocytochemical
388
method and confocal scanning laser microscopy. TRITC-conjugated phalloidin was used to stain the musculature. The presence of serotonin- and neuropeptide (FMRFamid)-ergic components were revealed in central and peripheral nerve system of trematode.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ АБИВЕРТИНА ПРИ НЕМАТОДОЗАХ ОВЕЦ В АЛТАЙСКОМ КРАЕ
Тихая Н.В., Понамарев Н.М.
Алтайский государственный аграрный университет
В состав абивертина входит абамектин (эдектин ВМ), препарат представляет собой 1%-ный инъекционный раствор, обладающий широким спектром противопаразитарного действия.
Для проведения опыта подобрали 62 овцы, спонтанно зараженных гельминтами. Животных разделили по принципу аналогов на 2 группы: опытную - 37 голов и контрольную - 25 голов. Содержались животные в одинаковых условиях.
Абивертин с лечебной целью вводили мелкому рогатому скоту при диктиокаулезе, протостронгилезе, мюллериозе, нематодирозе и стронгилятозах желудочно-кишечного тракта внутримышечно в область предплечья в дозе 1 мл на 50 кг массы животного (0,2 мг/кг по ДВ).
Животным контрольной группы препарат не вводили. После введение абивертина учитывали общее состояние овец и возможное проявление местной реакции.
Эффективность препарата учитывали по результатам количественных копроовоскопических исследований методом флотации с использованием счетной камеры ВИГИС для подсчета количества яиц нематод в г фекалий и гельминтолярвоскопических исследований по методу Бермана-Орлова. Кроме того, проводили убой овец (по 4 головы из группы) с последующим гельминтологическим вскрытием легких и желудочно-кишечного тракта.
Расчет эффективности абивертина проводили по типу «контрольный
тест».
Полученные результаты представлены в таблице.
До начала опыта в г фекалий овец яиц нематодир было 39,9±5,7; желудочно-кишечных стронгилят - 78,4±12,7 экз.; личинок диктиокаул 22,7±0,3 экз.; протостонгил и мюллерий 17,6±8,2.экз. Через 20 дней после дегельминтизации произошло снижение яиц нематодир на 96,4 %; желудочнокишечных стронгилят на 97,3%; личинок диктиокаул на 98,3%; протостронгил и мюллерий на 100%.
389
