CC BY
26
© Коллектив авторов, 2020
Нестерова И.В.1' 2, Чудилова Г. А.1, Ковалева С.В.1, Русинова Т.В.1, Павленко В.Н.1, Тараканов В.А.1, Барова Н.К.1, Малиновская В.В.3
Неоднозначное влияние рекомбинантного интерферона a2b на нетрансформированный и трансформированный фенотип функционально значимых субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов в эксперименте in vitro
1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 350063, г. Краснодар, Российская Федерация
2 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский университет дружбы народов» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, Медицинский институт, 117198, г. Москва, Российская Федерация
3 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 123098, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
Введение. Современные исследования многофункциональности нейтрофильных гранулоцитов (НГ) свидетельствуют о наличии различных субпопуляций НГ, и каждая из них характеризуется своими фенотипическими и функциональными особенностями. Субпопуляции НГ обладают пластичностью и могут изменять свой фенотип в зависимости от микроокружения, оказывая позитивное, а при определенной трансформации и негативное (супрессирующее, повреждающее) воздействие на течение инфекционно-воспалительного процесса.
Целью настоящего исследования стало определение возможности экспериментального перепрограммирования трансформированного фенотипа функционально значимых субпопуляций НГ у детей с малой гнойной инфекцией (МГИ) под влиянием субстанции рекомбинантного интерферона a2b (рИФНа2Ь) в системе in vitro.
Материал и методы. Исследованы образцы периферической крови (ПК) 12 детей обоего пола в возрасте 2-4 лет с острой малой гнойной инфекцией (МГИ) (группа исследования) и 7 условно здоровых детей, сопоставимых по полу и возрасту (группа сравнения). Методом проточной цитометрии проводили оценку численности субпопуляций НГ CD64-CD16+CD32+CD11b+, CD64+CD16+CD32+CD11b+, CD62L+CD63-, CD62L+CD63+ с уточнением их фенотипа по плотности экспрессии каждой изучаемой мембранной молекулы по MFI. Исследовали фагоцитарную и микробицидную функции НГ у детей исследуемых групп. В системе in vitro ПК детей исследуемой группы и группы сравнения инкубировали в течение 1 ч при 37 °С с субстанцией рИФНа2Ь в конечной концентрации 10-6 г/л, после чего контролировали особенности трансформации фенотипа субпопуляций НГ в обеих группах детей.
Результаты. Установлены варианты негативной трансформации фенотипов функционально значимых субпопуляций НГ: увеличение количества активированных CD62LdlШCD63Шld-НГ, CD64dimCD16midCD32dimCD11ЬЬг18И-НГ на фоне снижения уровня мажорной субпопуляции ОТ64-ОТ16ш1(1ОТ32(11шОТ11ЬЬг18И-НГ и нарушения фагоцитарной и микробицидной функций НГ. Выявлена субпопуляция CD64d1mCD16m1dCD32d1m CDH^^-BP, обладающая неадекватными провоспалительными свойствами. Уточнены возможности перепрограммирования фенотипа различных субпопуляций НГ при МГИ под влиянием рИФНа2Ь, что способствовало позитивной регуляции функциональной активности клеток.
Заключение. Получены новые данные о различных субпопуляциях НГ, негативной трансформации фенотипа функционально значимых субпопуляций НГ при МГИ у детей. Установлены иммуномодулирующие эффекты рИФНа2Ь на негативно трансформированный фенотип НГ при локальном гнойном процессе, проявляющийся в переключении НГ с провоспалительного фенотипа в противовоспалительный.
Для корреспонденции
Нестерова Ирина Вадимовна -доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры аллергологии и иммунологии факультета непрерывного медицинского образования Медицинского института ФГАОУ ВО РУДН, Москва, Российская Федерация Е-шаП: inesterova1@yandex.ru http://orcid.org/0000-0002-5339-4504
Ключевые слова: нейтрофильные гранулоциты; субпопуляции; фенотип; гнойная инфекции
Статья поступила 30.01.2020. Принята в печать 17.02.2020.
Для цитирования: Нестерова И.В., Чудилова Г. А., Ковалева С.В., Русинова Т. В., Павленко В.Н., Тараканов В. А., Барова Н.К., Малиновская В.В. Неоднозначное влияние рекомбинантного интерферона a2b на нетрансфор-мированный и трансформированный фенотип функционально значимых субпопуляций нейтрофильных гранулоцитов в эксперименте in vitro. Иммунология. 2020; 41 (2): 124-134. DOI: 10.33029/0206-4952-2020-412-124-134
Финансирование. Исследование выполнено в рамках государственного задания Министерства здравоохранения Российской Федерации №АААА-А18-118122690053-0 и при частичной финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 19-415-230001р_а.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Nesterova I.V.1, 2, Chudilova G.A.1, Kovaleva S.V.1, Rusinova T.V.1, Pavlenko V.N.1, Tarakanov V.A.1, Barova N.K.1, Malinovskaya V.V.3
Contradictory effect of recombinant interferon a2b on the non-transformed and transformed phenotypes of functionally significant subpopulations of neutrophilic granulocytes in vitro
1 Kuban State Medical University of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation, 350063, Krasnodar, Russian Federation
2 Peoples' Friendship University of Russia (RUDN University), Medical Institute, 117198, Moscow, Russian Federation
3 National Research Center of Epidemiology and microbiology named after N.F. Gamaleya, Ministry of Healthcare of the Russian Federation, 123098, Moscow, Russian Federation
Abstract
Introduction. Modern studies demonstrate the multifunctionality of neutrophil granulocytes (NG) and indicate the presence of various NG subpopulations. Each of the NG subpopulations has its own phenotypic and functional features. NG subpopulations reveal plasticity and can change their phenotype under influences of the microenvironment, exerting both positive and negative (suppressing, damaging) effects on the course of the infectious and inflammatory process.
The aim of the study was to determine the possibility of experimental reprogramming of the transformed phenotype of functionally significant NG subpopulations in children with acute small purulent infection (SPI) under the influence of the substance of recombinant interferon a2b (rIFNa2b) in the in vitro system.
Material and methods. Samples of peripheral blood (PB) of 12 children of both sexes aged 2-4 years with acute small purulent infection (MGI) (the study group) and 7 conditionally healthy children, comparable in gender and age (the group of comparison), were studied. The number of NG subpopulations CD64-CD16+CD32+CD11b+, CD64+CD16+CD32+CD11b+, CD62L+CD63-, CD62L+CD63+ was determined by flow cytometry, with refinement of their phenotype by the expression density of each studied membrane molecule according to MFI. Phagocytic and microbicidal functions of NG were studied in children of the both groups. PB samples from children of the study group and the group of comparison were incubated in the in vitro system for 1 h at 37 °C with a rIFNa2b at a final concentration of 10-6 g/l, after which the features of transformation of the phenotype of NG subpopulations in both groups of children were monitored.
Results. Variants of negative transformation of phenotypes of functionally significant NG subpopulations were found: an increase in the number of activated CD62LdimCD63mid-NG, CD64dimCD16midCD32dimCD11bbright-NG against the background of a decrease in the level of the major subpopulation CD64-CD16midCD32dimCD11bbright and violations of phagocytic and microbicidal functions of NG. A subpopulation of CD64dnnCD16midCD32dimCD11bbright -NG with inadequate pro-inflammatory properties was identified. It was shown the possibility
For correspondence
Irina V. Nesterova - MD, Professor, Professor of the Department of Allergology and Immunology of Faculty of Continuing
Medical Education
of the Medical Institute, Peoples' Friendship University of Russia (RUDN University), Moscow, Russian Federation E-mail: inesterova1@yandex.ru http://orcid.org/0000-0002-5339-4504
of phenotype reprogramming of various NG subpopulations in study group with SPI under the influence of rIFNa2b, which contributed to the positive regulation of the functional cell activity.
Conclusion. Our study demonstrated negative transformation of the phenotype of functionally significant NG subpopulations in children with SPI. The immunomodulatory effects of rIFNa2b were shown on the negatively transformed NG phenotype in study group with the local purulent process. Those effects were manifested in the switch of NG phenotype from the pro-inflammatory to the anti-inflammatory one.
Keywords: neutrophilic granulocytes; subset; phenotype; purulent infection
Received 30.01.2020. Accepted 17.02.2020.
For citation: Nesterova I.V., Chudilova G.A., Kovaleva S.V., Rusinova T.V., Pavlenko V.N., Tarakanov V.A., Baro-va N.K., Malinovskaya V.V. Contradictory effect of recombinant interferon a2b on the non-transformed and transformed phenotypes of functionally significant subpopulations of neutrophilic granulocytes in vitro. Immunologiya. 2020; 41 (2): 124-34. DOI: 10.33029/0206-4952-2020-41-2-124-134 (in Russian)
Funding. The study was carried out as part of the state assignment of the Ministry of Health of the Russian Federation No. AAAA-A18-118122690053-0 and was partially funded by RFBR according to the research project №19-415-230001p_a.
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Введение
Современные фундаментальные исследования убедительно свидетельствуют о том, что нейтрофильные гранулоциты (НГ) являются ключевыми эффектор-ными и регуляторными клетками как врожденного, так и адаптивного иммунитета, и играют решающую роль в иммунопатогенезе широкого спектра заболеваний [1-3]. Отсутствие адекватного реагирования или блокада функций НГ приводит к развитию нетипично протекающих острых, хронических и вялотекущих ин-фекционно-воспалительных заболеваний, тяжело протекающих инфекционных болезней и гнойно-воспалительных процессов, не отвечающих на традиционную терапию. В то же время гиперактивация НГ оказывает повреждающее воздействие на клетки и ткани при аутоиммунных заболеваниях, сепсисе, остром гематогенном остеомиелите, деструктивной пневмонии, хронических заболеваниях, иммунозависимых процессах [3-6]. Сегодня уже не вызывает сомнений, что НГ пластичны и способны изменять свои свойства под влиянием различных иммунотропных субстанций, трансформируясь в субпопуляции как с позитивным, так и с негативным -супрессирующим - потенциалом [7-13]. Известно, что различные фенотипические профили и уровень оснащенности поверхностными рецепторами связаны с морфологическими особенностями и определяют функциональный потенциал НГ - цитокинопродукцию, трансэндотелиальную миграцию, внутриклеточный и внеклеточный киллинг, образование NET [5, 14-19]. Продемонстрировано существование достаточно большого количества субпопуляций НГ, обладающих различными возможностями. НГ, получающие комплексные цитокиновые влияния, не только приобретают новые черты, но и проходят различные стадии активации и диф-ференцировки, экспрессируя при этом антигены MHC класса II, CD80, CD86, ICAM-1, LFA-1 [20]. В наших более ранних работах были идентифицированы следу-
ющие субпопуляции НГ: регуляторные; супрессорные; провоспалительные - инициирующие воспалительную реакцию; воспалительные с позитивным микробицид-ным потенциалом (антибактериальным, противовирусным, противогрибковым); воспалительные с негативным цитотоксическим потенциалом - «агрессивные»; противовоспалительные - регулирующие регрессию воспаления; противоопухолевые - TAN1; проопухоле-вые - TAN2, гибридные [21]. Большую диагностическую и прогностическую значимость имеют выявленные нами варианты ремоделирования фенотипа НГ, одновременно экспрессирующих CD64, CD32, CD11b и CD16 - рецепторы, функционально значимые при ин-фекционно-воспалительных заболеваниях, в том числе у новорожденных различного гестационного возраста [22-23], у пациентов с неопластическими процессами [23-24]. Активация CD64-, CD32-, CD16- и CD11b-рецепторов приводит к таким сложным процессам клеточной активации и элиминации, как фагоцитоз, экзоци-тоз внутриклеточных гранул, продуцирование активных форм кислорода (ROS), антителозависимая клеточная цитотоксичность (АЗКЦ), высвобождение внеклеточных ловушек НГ (NETs), а также дополнительным ответам, в том числе хемотаксической миграции или выделению хемокинов и цитокинов [25, 26].
Низкоаффинные CD 16(FcyRIII) и CD32(FCyRII) играют важную роль во взаимодействии НГ с иммунными комплексами [27]. FcyRIIIB осуществляют начальный контакт и связывание иммунных комплексов in vivo [28], затем происходит полная активация НГ посредством синергического лигирования как FcyRIIA, так и FcyRIIIB. Чтобы получить полное ингибирование ответов НГ необходимо удалить или заблокировать оба рецептора. Высокоаффинный рецептор CD64 (FcyRI), способен связывать IgG1, IgG3 и IgG4 человека в мономерной форме на ранних стадиях гранулопоэза, а на зрелых НГ в норме он представлен на очень низком
уровне (~1400 рецепторов на клетку). Экспрессия рецептора СБ64 на поверхности НГ индуцируется в ответ на взаимодействие с компонентами микробной стенки (ЬР8), компонентами комплемента и некоторыми цито-кинами: ИФН-у, ФНОа, ИЛ8, ИЛ 12 и т.д., повышение уровня которых сопровождает развитие бактериальных инфекций [26-28].
СБ11Ъ (рецептор комплемента 3, СЯ3) связывает большое количество физиологических лигандов и участвует в многочисленных функциях НГ. Функционально СБ11Ъ (в присутствии субъединицы СБ 18) регулирует адгезию и миграцию НГ, является рецептором для С3Ы, опосредующим поглощение и фагоцитоз и воспалительный ответ. Использование антител против СБ11Ь позволило идентифицировать СБ11Ь в качестве рецептора у-цепи фибриногена, фактора Х и 1САМ1, что доказывает участие в клеточно-опосредованной ци-тотоксичности, хемотаксисе и фагоцитозе [29].
Так как регуляция процессов адгезии, миграции и хемотаксиса играет важную роль в активации и полноценном функционировании НГ, оценка уровня экспрессии СБ62Ь и СБ63 на СБ16+-НГ позволяет получить представление о способности клетки к роллингу, миграции и готовности включения микробицидного арсенала. Рецептор адгезии СБ62Ь отвечает за миграцию НГ к очагу воспаления. При этом СБ63 играют роль белков-посредников при передаче сигналов, выполняя важную регуляторную функцию, влияя на развитие НГ, их активацию, рост и подвижность. Экспрессия СБ63 на мембране НГ - кратковременный сигнал активации, оказывающий регуляторное воздействие на адгезионную активность СБ11/СБ18. Кроме того, СБ63 является маркером азурофильных гранул, по уровню экспрессии которого можно судить об интенсивности активности миелопероксидазы (МП).
Дефекты функционирования НГ сопровождаются различными гнойно-воспалительными заболеваниями, имеющими упорно-рецидивирующее течение. Проблема нетипично протекающей малой гнойной инфекции (МГИ) мягких тканей весьма актуальна в связи с ростом гнойно-воспалительных заболеваний и послеоперационных осложнений [30-33]. Одна из основных особенностей МГИ, включая флегмоны и абсцессы, - расширение спектра возбудителей, относящихся к условно-патогенным микроорганизмам, что в первую очередь связано со снижением иммунной реактивности организма и негативными изменениями в составе симбионтной микрофлоры кожи в условиях ухудшающейся экологии и селективного воздействия антибиотиков [34]. Прогрессиро-ванию воспаления при МГИ способствует снижение общей резистентности организма и особенно функций НГ [35]. Для решения данной проблемы необходимо разработать методы контролируемой коррекции в системе НГ при инфекционно-воспалительных заболеваниях, в том числе МГИ, с помощью иммунотроп-ных препаратов различной природы, так как субпопуляции НГ демонстрируют высокую степень пластичности
и функциональную гетерогенность в зависимости от особенностей течения патологического сценария иммунного ответа.
Цель исследования - выявить возможности экспериментального перепрограммирования трансформированного фенотипа функционально значимых субпопуляций НГ у детей с МГИ под влиянием субстанции рекомбинантного интерферона a2b (рИФНа2Ь) в системе in vitro.
Материал и методы
Для изучения возможности модулирования трансформированного фенотипа НГ исследованы образцы периферической крови (ПК) детей 2-4 лет (n = 12) с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями (абсцессы, флегмоны - МГИ) до хирургического вмешательства (группа исследования) и 7 условно здоровых детей, сопоставимых по полу и возрасту (группа сравнения).
Методом проточной цитометрии (FC500, Beckman Coulter, США) с МкАт (Beckman Coulter International S.A., Франция) тестировали одномоментное несение функционально значимых мембранных рецепторов CD16, CD64, CD32, CD11b и CD62L, CD63. При этом проводили количественную оценку субпопуляций НГ CD64-CD16+CD32+CD11b+, CD64+CD16+CD32+CD11b+, CD62L+CD63-, CD62L+CD63+ с уточнением плотности экспрессии каждой изучаемой мембранной молекулы на поверхности НГ по MFI. Такой подход позволил выявлять особенности фенотипа изучаемых функционально значимых субпопопуляций НГ и контролировать изменения динамики экспрессии каждой мембранной молекулы.
Кроме того, у исследуемых групп тестировали фагоцитарную и микробицидную функции НГ. Оценивали содержание активно фагоцитирующих НГ -(%ФАН), объем захваченного бактериального материала - фагоцитарное число (ФЧ), фагоцитарный индекс (ФИ); активность переваривания - по проценту и индексу переваривания (%П; ИП). Активность МАОРН-оксидазы определялась в нагрузочных тестах в системе in vitro с St.aureus (NBT-тест). В зависимости от уровня спонтанной и стимулированной активности определяли средний цитохимический индекс -СЦИ, рассчитывали коэффициент мобилизации (КМ) -СЦИст/СЦИсп для МАБРН-оксидаз [22].
С целью уточнения возможности перепрограммирования фенотипа функционально значимых субпопуляций НГ и коррекции их фагоцитарной и микробицидной функции ПК детей исследуемой группы (дети с МГИ) и группы сравнения инкубировали в течение 1 ч при 37 °С с рИФНо2Ь в конечной концентрации 10-6 г/л, которая была любезно предоставлена ФГУП «Гос .НИИ ОЧБ» ФМБА России. После инкубации контролировали особенности трансформации фенотипа исследуемых субпопуляций НГ.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью компьютерных программ
Microsoft Excel 2016, StatPlus 2009 с применением непараметрических тестов Вилкоксона и Манна-Уитни. Результаты представляли в виде медианы (верхний и нижний квартиль) - Me (Qp Q3). Различия определяли значимыми приp < 0,05.
Результаты
Анализ полученных результатов позволил выявить неадекватное реагирование НГ ПК на локальный гнойный инфекционный процесс у детей с МГИ. Так, в группе исследования относительное количество НГ в остром периоде МГИ достоверно не отличалось от такового в группе сравнения 39,5 (27,55; 47,5)% против 41,0 (37,0; 47,0)% (р > 0,05). На этом фоне уровень лейкоцитов повысился незначительно и составил лишь 8,75 (8,11; 9,23) х 109/л против 7,25 (6,67; 8,25) х 109/л (р > 0,05) в группе сравнения (рис. 1).
При проведении тестирования поверхностных мембранных рецепторов НГ CD62L и CD63 было показано, что у условно здоровых детей 2-4 лет 89,45 (81,48; 96,8)% НГ представлены субпопуляцией с фенотипом CD62LmidCD63- с плотностью экспрессии рецепторов по MFI: CD62L - 7,08 (5,44; 11,3) и отсутствием молекул CD63 на поверхностной мембране НГ. Другая субпопуляция НГ обнаруживалась у 7,55 (0,31; 8,65)% условно здоровых детей и характеризовалась другим фенотипом -CD62LdimCD63mid, имеющим более низкую плотность рецепторов CD62L - 4,55(3,54; 8,85), и наличием молекулы CD63 средней плотности экспрессии по MFI - 2,19 (1,68; 3,20) (табл. 1).
Культивирование НГ условно здоровых детей с рИФНа2Ь, связывающимся с рецептором IFNo/pR на поверхностной мембране НГ, позволило выявить особенности его влияния на трансформацию фенотипа субпопуляций CD62LшidCD63--НГ и CD62LdiШCD63Шid-НГ. Значительно изменилась субпопуляция CD62LШidCD63--НГ, которая трансформировалась в CD62Lbri8htCD63--НГ. Количество НГ этой субпопуляции, несущей только молекулу CD62L, уменьшилось с 89,45 (81,48; 96,8) до 65,95 (39,93; 80,8) (р < 0,05), но при этом увеличилась плотность экспрессии (см. табл. 1). Увеличение уровня экспрессии молекул CD62L на мембране НГ необходимо
Л %НГ НГабс
■ Группа сравнения (2-4 года)
■ МГИ (2-4 года)
Рис. 1. Содержание общего числа лейкоцитов (Л) и количества НГ периферической крови у детей 2-4 лет с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей
для усиления процессов миграции, в том числе к очагу воспаления.
В системе in vitro рИФНа2Ь способствовал значительной трансформации фенотипа субпопуляции CD62LdiшCD63шid-НГ, которая у условно здоровых детей встречалась в 7,55 (0,31; 8,65)% случаев. Под влиянием рИФНа2Ь отмечено увеличение до 32,96 (11,59; 51,7)% (р < 0,05) количества НГ с фенотипом CD62Lbri8htCD63diШ-НГ, с высоким (в 2,2 раза) MFI CD62L-рецептора. В тоже время выявлена тенденция к умеренному снижению уровня мембранной экспрессии молекулы CD63, что, вероятно, позволяет предохранить НГ от усиления преждевременной спонтанной дегрануляции (см. табл. 1).
Сравнительный анализ субпопуляций CD62Lmid CD63--BP и CD62LdiшCD63шid-НГ у условно здоровых детей и у детей с МГИ выявил значительное (в 3,1 раза) уменьшение количества НГ субпопуляции CD62LimdCD63-с 89,45 (81,48; 96,8)% в группе сравнения до 28,8 (2,2; 57,8)% у детей с МГИ. В тоже время при МГИ в 8,5 раза увеличилось количество НГ субпопуляции CD62Ld™CD63inid по сравнению с таковым в группе условно здоровых детей, соответственно с 7,55 (0,31; 8,65) до 63,95 (17,25; 74,1) (р < 0,05) (табл. 2).
При этом проявилась пластичность НГ, о чем свидетельствует факт самостоятельного перепрограммирования под влиянием бактериальных АГ у пациентов с МГИ 35,5% НГ субпопуляции CD62LlmdCD63- в субпопуляцию с фенотипом CD62LdiinCD63inid, то есть в ПК пациентов с МГИ появилось большое количество НГ субпопуляции CD62LdiinCD63inid, где достаточно высока экспрессия рецепторов CD63, активирующих процессы дегрануляции НГ, что имеет существенное значение для реализации процессов завершенности фагоцитоза при МГИ. При этом уровень экспрессии поверхностных рецепторов CD62L и CD63, определяемый в субпопуляциях CD62LшidCD63--НГ и CD62LdiШCD63Шid-НГ, у пациентов с МГИ статистически значимо не отличался от показателей группы сравнения (см. табл. 2).
Установлено отсутствие влияния рИФНа2Ь в системе in vitro на трансформированный фенотип субпопуляций CD62LшidCD63--НГ и CD62LdiШCD63Шid-НГ у пациентов с МГИ в отличие от позитивных эффектов рИФНа2Ь, выявленных у условно здоровых детей (рис. 2).
Анализ данных, полученных при изучении НГ, экс-прессирующих рецепторы CD64, CD16, CD32, CD11b, продемонстрировал, что у условно здоровых детей НГ ПК представлены двумя субпопуляциями: мажорной - CD64-CD16bri8htCD32diinCD11bbli8;ht и минорной -CD64imdCD16imdCD32dnnCD11bimd. Мажорная субпопуляция CD64-CD16bri8htCD32d™CD11bbright присутствует в 97,98 (96,88; 98,74)% случаев, в то время как минорная выявляется лишь у 1,30 (0,18; 0,35)% условно здоровых детей. Мажорная субпопуляция характеризуется различным уровнем плотности экспрессии каждого из оцениваемых рецепторов: CD64 - нет экспрессии, MFI CD 16 - 129,50 (115,75; 131,75), MFI CD 11b - 19,40
Таблица 1. Влияние рИФНа2Ь на фенотип субпопуляций CD62LmidCD63"HT и CD62LdimCD63midHT условно здоровых детей, Me (Qp Q3)
НГ группы сравнения
CD62LmidCD63-НГ,% MFI CD62L CD62LdimCD63mid НГ,% MFI CD62L MF I CD63
89,45 (81,48; 96,8) 7,08 (5,44; 11,3) 7,55 (0,31; 8,65) 4,55 (3,54; 8,85) 2,19 (1,68; 3,20)
НГ гр уппы сравнения + рИФНa2b
CD62LbrightCD63-НГ,% MFI CD62L CD62LbrightCD63dim НГ,% MFI CD62L MFI CD63
65,95* (39,93; 80,8) 10,99 (5,49; 15,5) 32,96* (11,59; 51,7) 9,85 (4,93; 14,3) 1,85 (1,64; 1,96)
Примечание. Здесь и в табл. 2-4: * - различия показателей по сравнению с фоновыми значениями условно здоровых детей р < 0,05; А - различия показателей между исследуемыми группами с нагрузками.
(16,66; 20,93) и MFI CD32 - 5,73 (4,76; 6,11). Минорная субпопуляция CD64midCD16midCD32dimCD11bmid, в отличие от мажорной, характеризуется появлением активационного маркера CD64, с MFI 7,92 (5,25; 12,20). При этом отмечаются более низкие значения MFI CD16 -79,43 (65,13; 79,62) (в 1,8 раза меньше) (р < 0,05) и CD11b - 15,39 (4,87; 25,90) (р > 0,05), а MFI CD32 составил 5,50 (5,2; 6,31) и практически не отличался от экспрессии в мажорной субпопуляции (р > 0,05) (табл. 3).
При изучении влияния рИФНа2Ь на фенотип мажорной субпопуляции CD64-CD16brightCD32dimCD11bblight-HT условно здоровых детей (группа сравнения) в эксперименте in vitro установлено, что на фоне сохраняющегося ее количественного состава происходит значительная трансформация фенотипа CD64-CD16brightCD32dimCD11bbright. Наблюдается тенденция к увеличению плотности экспрессии CD16 (р > 0,05), происходит статистически значимое увеличение MFI CD32 (р < 0,05) и снижение MFI CD11b (р > 0,05). Эти изменения свидетельствуют о трансформации мажорной субпопуляции в сторону фенотипа CD64-CD16brightCD32midCD11bmid (см. табл. 3).
Под влиянием рИФНо2Ь не менялось количество НГ минорной субпопуляции CD64midCD16midCD32dim CD11bmid-Hr (р > 0,05). При этом выявлено значимое усиление экспрессии молекул CD64 (р < 0,05) и CD11b (р < 0,05), наблюдалась тенденция к умеренному уве-
личению МИ СБ32 (р > 0,05) и значительное снижение (в 9,15 раз) плотности экспрессируемых молекул СБ 16 (р < 0,05). Эти изменения свидетельствовали о перестройки под влиянием рИФНа2Ь фенотипа покоящейся минорной субпопуляции СБ64Ш1<1СВ16Ш1<1СВ32<&П СВ11ЪШ1(1-НГ в сторону активного воспалительного фенотипа СВ64Ьп^СВ16ашСВ32ашСВ11ЪЬг«м-НГ с выраженными протективными свойствами, но с минимизацией цитотоксических свойств, о чем свидетельствует значительное снижение экспрессии молекул СБ 16 на поверхностной мембране НГ (см. табл. 3).
У пациентов с МГИ отмечались снижение количества НГ субпопуляции СВ64-СВ16+СВ32+СБ11Ъ+ до 86,45 (80,49; 96,08)% против 97,98 (96,88; 98,74)% НГ в группе сравнения (р < 0,05). При этом отмечалась и трансформация фенотипа СБ64-СБ16Ьг«иСВ32^СВ11ЬЬп^-НГ, выявляемого у условно здоровых детей, в фенотип СБ64-СБ16Ш1с1СВ32с&пСВ11ЪЫ8И, характерный для НГ при МГИ. Отмечалось значимое снижение плотности экспрессии СБ16 в 1,58 раз до 81,5 (64,90; 97,3) против 129,50 (115,75; 131,75) в группе сравнения (р < 0,05), выявлена тенденция к повышению МИ СБ11Ь (р > 0,05), при уровне экспрессии СБ32, не отличающемся от группы сравнения (р > 0,05).
Отмечено, что у детей группы исследования с МГИ на фоне появления субпопуляции СВ64-СБ16Ш1<1СВ32'11ШСВ11ЬЬг18и-НГ с трансформирован-
Таблица 2. Влияние рИФНа2Ь на трансформацию фенотипа субпопуляций CD62LmidCD63--Hr и CD62LdimCD63mid-HT детей с МГИ в эксперименте in vitro, Me (Q1; Q3)
Группа сравнения (условно здоровые дети)
CD62LmidCD63--E!r, % MFI CD62L CD62LdimCD63mid-НГ, % MFI CD62L MFI CD63
89,45 7,08 7,55 4,55 2,19
(81,48; 96,8) (5,44; 11,3) (0,31; 8,65) (3,54; 8,85) (1,68; 3,20)
Группа исследования: НГ детей с МГИ
CD62LmidCD63--E!r, % MFI CD62L CD62LdimCD63mid-НГ, % MFI CD62L MFI CD63
28,8* 5,72 63,95* 5,64 2,22
(6,63; 62,75) (4,92; 8,77) (17,25; 74,1) (4,38; 6,77) (1,83; 2,63)
МГИ +рИФШ2Ь
CD62LmidCD63--НГ, % MFI CD62L CD62LdimCD63mid-НГ, % MFI CD62L MFI CD63
25,45* 5,8 69,0* 6,59 2,08
(2,20; 57,8) (5,04; 9,3) (36,99; 79,1) (4,92; 8,83) (1,75; 3,54)
МГИ
28,8%
МГИ+ рИФНа2Ь
25,45%
63,95%
■ %CD62LmidCD63--Hr □ %CD62LdimCD63mid-Hr
69%
■ %CD62LmidCD63--Hr □ %CD62LdimCD63mid-Hr
Рис. 2. Влияние рИФНа2Ь на фенотип субпопуляций CD62LШidCD63--НГ и CD62LdiШCD63Шid-НГ у детей с МГИ
ным фенотипом наблюдается значительное увеличение %НГ субпопуляции СВ64+СВ16+СВ32+СБ11Ъ- - в 11,1 раза до 14,45 (5,58; 15,71)% против 1,30 (0,18; 0,35)% по сравнению с показателями группы условно здоровых детей. Также при МГИ установлена трансформация фенотипа этой субпопуляции в СБ64<11тСВ16Ш1<1СВ32<11Ш СБ11ЬЫ8И-НГ в отличие от фенотипа СБ64Ш1<1СВ16Ш1<1 СБ32с11шСВ11Ьш1(1-НГ в группе сравнения. Субпопуляция с фенотипом СБ64<11ШСВ16Ш1'1СВ32'11ШСВ11ЬЬг18и-НГ у пациентов с МГИ имела одинаковую экспрессию рецепторов СБ16, СБ32, СБ11Ъ по сравнению с мажорной субпопуляцией СВ64-СБ16Ш1<1СВ32'11ШСВ11ЬЬг18мНГ при МГИ (табл. 4).
Следует отметить, что несмотря на значительное увеличение в 11,1 раза количества НГ субпопуляции СБ64аШСВ16Ш1<1СВ32'11ШСВ11ЬЬг18м-НГ у детей с МГИ, уровни экспрессии изучаемых рецепторов отличались от значений, регистрируемых в группе условно здоровых детей. Так, показана более низкая, в 2,3 раза меньше, плотность экспрессии молекул СБ64 - 3,36 (2,19; 4,72) против 7,92 (5,25; 12,20) в группе сравнения (р < 0,05), в то время как МП СБ11Ъ была в 1,6 раза выше - 24,6 (17,68; 37,12) против 15,39 (14,87; 15,90) в группе сравнения (р < 0,05), при этом уровни МИ
мембранных молекул CD32 и CD 16 статистически значимо не отличались от таковых в группе сравнения p > 0,05; p2 > 0,05) (см. табл. 4).
Значимое увеличение субпопуляции CD64d™CD16inid CD32d™CD11ЬЫ;И-НГ при МГИ, с одной стороны, свидетельствует о появлении большего количества НГ, несущих активационную молекулу CD64, являющуюся маркером бактериальной инфекции. С другой стороны, эта субпопуляция характеризуется повышенной экспрессией молекул адгезии CD11b, влияющей на запуск процессов фагоцитоза, но при неменяющемся уровне экспрессии CD32 и CD16. Полагаем, что субпопуляция СD64dпnCD16ШidCD32diШCD11bbri8ht-НГ является воспалительной субпопуляций (НГ1), обладающей провоспали-тельными свойствами и участвующей в инициировании процесса гнойного воспаления. Ее увеличение на фоне манифестирования МГИ у детей может свидетельствовать о неполноценности эффекторных функций НГ, не предотвративших возникновение гнойного процесса, и может расцениваться как прогностически неблагоприятный признак.
Культивирование НГ ПК детей с МГИ в системе in vitro с рИФНа2Ь позволило выявить модулирующие эффекты рИФНа2Ь, проявляющиеся в снижении в 4,7 раз количества НГ минорной субпопуляции СD64+CD16+CD32+CD11b+-НГ на фоне увеличения субпопуляции СD64-CD16+CD32+CD11b+-НГ (см. табл. 4). При этом следует отметить, что рИФНа2Ь приводит к незначительному повышению уровня экспрессии CD16 (p > 0,05) и статистически значимому снижению MFI CD11b (р < 0,05) мажорной субпопуляции СD64-CD16bli8htCD32diinCD11ЬЫ8И-НГ. В минорной субпопуляции под влиянием рИФНа2Ь происходит изменение фенотипа с СD64diШCD16ШidCD32dmlCD11bbnght-НГ на СD64Шid CD16d™CD32diinCD11ЬшМ-НГ и выявляется умеренная тенденция повышения уровня экспрессии CD64
Таблица 3. Влияние рИФНа2Ь в эксперименте in vitro на фенотип субпопуляций СD64"CD16bri8htCD32diШCD11bbri8ht-НГ и СD64ШidCD16ШidCD32diШCD11bШid-НГ условно здоровых детей, Me (Q1; Q3)
%CD64-CD16+CD32+CD11b+
НГ, % CD64-CD16brightCD32dimCD11bbright
MFI CD16 MFI CD32 MFI CD11b
Группа срав- 97,98 129,50 5,73 19,40
нения (96,88; 98,74) (115,7; 131,75) (4,76; 6,11) (16,66; 20,93)
Группа 98,28 CD64-CD16brightCD32midCD11bmid
сравнения (97,49; 98,63) 138,50 10,55* 16,33
+рИФНа2Ь (107,8; 144,75) (8,51; 11,63) (9,58; 25,20)
%CD64+CD16+CD32+CD11b+
НГ, % CD64midCD16midCD32dimCD11bmid
MFI CD64 MFI CD16 MFICD32 MFI CD11b
Группа срав- 1,30 7,92 79,43 5,50 15,39
нения (0,18; 0,35) (5,25; 11,20) (65,13; 79,62) (5,2; 6,31) (14,87; 15,90)
Группа 0,15 CD64brightCD16dimCD32dimCD11bbright
сравнения (0,10; 0,41) 12,10* 8,68* 6,97 22,75*
+рИФНа2Ь (12,0; 12,58) (6,13; 10,50) (6,2; 7,56) (18,65;24,25)
Таблица 4. Влияние рИФНа2Ь в эксперименте in vitro на фенотип субпопуляций CD64"CD16bri8htCD32dimCD11bbri8ht-Hr и CD64midCD16midCD32dimCD11bmid-Hr детей с МГИ, Me (Q1; Q3)
CD64-CD16+CD32+CD11b+
НГ, % CD64-CD16brightCD32dimCD11bbright
MFI CD16 MFI CD32 MFI CD11b
Группа сравнения 97,98 (96,88; 98,74) 129,50 (115,7; 131,75) 5,73 (4,76; 6,11) 19,40 (16,66; 20,93)
МГИ 86,45* CD64-CD16midCD32dimCD11bbright
(80,49; 96,38) 81,5 5,31 16,40
(64,90; 97,3)* (3,95; 5,95) (12,88; 28,9)
CD64-CD16midCD32dimCD11bdim
МГИ+ рИФНа2Ь 95,48 87,7 4,18 9,51*
(85,82; 96,06) (72,15; 95,55) (3,93; 4,66) (9,17; 15,00)
CD64+CD16+CD32+CD11b+
НГ, % CD64brightCD16midCD32dim CD11bmid
MFI CD64 MFI CD16 MFI CD32 MFI CD11b
Группа сравнения 1,30 (0,38; 1,35) 7,92 (5,25; 12,20) 79,43 (65,13; 79,62) 5,50 (5,2; 6,31) 15,39 (14,87; 15,90)
CD64dimCD16midCD32dimCD11bbright
МГИ 14,45* 3,36* 71,2 6,06 24,6*
(5,58; 15,71) (2,19; 4,72) (60,20; 98,18) (5,02; 7,56) (17,68; 37,12)
CD64midCD16dimCD32dimCD11bmid
МГИ+ рИФНа2Ь 3,80*л 5,32 52,1* 5,43 13,6
(3,63; 5,45) (2,78; 16,65) (41,55; 64,00) (4,84; 6,71) (12,28; 18,75)
на фоне достоверного снижения плотности экспрессии молекулы CD16 (p < 0,05) и MFI CD11b (р > 0,05) (см. табл. 4).
Исследование влияния рИФНа2Ь на фагоцитарную и микробицидную NADPH- зависимую функцию позволило выявить эффекты, связанные с модулированием рецепторного аппарата.
Так, под воздействием рИФНа2Ь на НГ группы сравнения при неменяющемся количестве активно фагоцитирующих НГ происходит усиление процессов захвата бактериального антигена (ФЧ и ФИ) и его переваривания (ИП). Также выявлено усиление микробицидной активности с сохранением потенциала ответа на дополнительную антигенную нагрузку в системе in vitro (рис. 3).
При исследовании фагоцитарной функции НГ у детей с МГИ отмечался количественный дефицит активно фагоцитирующих НГ [%ФАГ 49,00 (39,26; 53,00) против 55,25 (54,0; 57,0) в группе сравнения,р < 0,05]. При этом были увеличены показатели поглотительной способности НГ: ФЧ - 5,17 (3,92; 5,57) против 4,1 (3,72; 5,7) в группе сравнения (р > 0,05) и ФИ 2,69 (1,8; 3,55) против 2,46 (1,77; 3,25) в группе сравнения (р > 0,05). Также выявлено снижение процессов переваривания: % П - 53,13 (42,5; 57,72) против 61,62 (57,9; 62,92)% в группе сравнения, ИП - 1,27 (0,65; 1,35) против 1,57 (1,37; 1,88) в группе сравнения (p < 0,05, p2 < 0,05). В то же время в группе с МГИ отмечалось значительное увеличение спонтанной и индуцированной активности NADPH-оксидаз (р < 0,05) без сохранения резервного микробицидного потенциала, о чем свидетельствует низкий КМ (р < 0,05) (рис. 4).
Эффекты рИФНа2Ь, направленные на восстановление %ФАГ, функций переваривания и поддержания напряженности NADPH-оксидаз, необходимых для реализации ответа на инфекционный процесс, различались по интенсивности воздействий (см. рис. 4). Так, под влиянием рИФНа2Ь фагоцитарная активность НГ имела тенденцию к восстановлению, но показатели всех исследуемых параметров оставались ниже соответствующих значений в группе сравнения: %ФАН (р < 0,05), ФЧ (р < 0,05), ФИ (р < 0,05), ИП (р < 0,05). При этом резервная NADPH-оксидазная активность повысилась в 2 раза по КМ по сравнению с исходными данными, что было выше соответствующих значений в группе сравнения (р1 < 0,05 и р2 < 0,05, соответственно) (рис. 4).
Обсуждение
Таким образом, в результате исследования установлены варианты негативной трансформации фенотипов функционально-значимых субпопуляций НГ: увеличение количества активированных CD62LdiшCD63шid-НГ и CD64diinCD16inidCD32diinCD11ЬЫ8И-НГ на фоне снижения уровня мажорной субпопуляции CD64-CD16mid CD32dnnCD11bbn8ht, не позволяющие НГ эффективно осуществлять фагоцитарную и микробицидную функции. Выявлена субпопуляция CD64diinCD16imdCD32dnn CD11bbгi8ht-НГ, обладающая неадекватными провоспа-лительными свойствами, повышение численности которой может расцениваться как прогностически неблагоприятный признак течения МГИ.
При экспериментальном исследовании в системе in vitro установлены иммуномодулирующие эффекты
СЦИст
%ФПКст
СЦИ сп
%ФАН
%ФАН
ФИ
%П
%ФПК сп
■ Группа сравнения
Группа сравнения+рИФНа2Ь
Рис. 3. Эффекты рИФНа2Ь на фагоцитарную и микробицид-ную КАБРИ-зависимую функцию нейтрофильных грануло-цитов группа! условно здоровых детей
КМ
СЦИст
%ФПКст
ФИ
%П
СЦИ сп
%ФПК сп
Группа сравнения МГИ
МГИ+рИФНа2Ь
Рис. 4. Эффекты рИФНа2Ь на фагоцитарную и микробицид-ную NADPH-зависимую функцию нейтрофильных грануло-цитов группа! детей с МГИ
рИФНа2Ь на негативно трансформированный фенотип НГ при локальном гнойном процессе проявляющийся в переориентации НГ с провоспалительного фенотипа в противовоспалительный. Так, установлено, что под влиянием рИФНа2Ь происходит снижение количества НГ субпопуляции СБ64+СБ32+СБ16+СБ11Ь+-НГ с параллельным увеличением количества НГ субпопуляции СБ64-СБ32+СБ16+СБ11Ь+-НГ Иными словами, рИФНа2Ь способствует перепрограммированию негативно трансформированного при гнойно-воспалительном процессе фенотипа минорной субпопуляции в фенотип мажорной субпопуляции, что обеспечивает перестройку НГ с воспалительного фенотипа на противовоспалительный. При этом параллельно происходит усиление функциональной активности НГ и развивается адекватный ответ этих клеток на инфекционно-воспалительный процесс.
Таким образом, получены абсолютно новые данные о различных субпопуляциях НГ и негативной трансформации фенотипа функционально значимых субпопуляций НГ при МГИ у детей. Уточнены возможности перепрограммирования фенотипа различных субпопуляций НГ с помощью рИФНа2Ь, которое способствует позитивной регуляции функциональной активности клеток. Новые знания об особенностях неадекватного реагирования субпопуляций НГ при МГИ у детей, а также полученные данные о возможности коррекции негативно трансформированных функций НГ, являются, с нашей точки зрения, многообещающими и могут использоваться, с одной стороны, для иммунодиагностики дефектов функционирования НГ при иммунозависимых инфекционно-воспалительных заболеваниях, а с другой стороны - способствовать разработке новых иммуноте-рапевтических подходов, улучшающих эффективность проводимого комплексного лечения.
■ Литература
1. Cortjens B., Ingelse S.A., Calis J.C., Vlaar A.P., Koenderman L., Bem R.A. et al. Neutrophil subset responses in infants with severe viral respiratory infection. Clinical immunology. 2017; 176: 100-6. DOI: 10.1016/j.clim.2016.12.012.
2. Балмасова И.П., Сепиашвили Р.И., Малова Е.С., Ефрато-ва Е.П., Ющук Н.Д. Коинфекция вирусами иммунодефицита человека и гепатита С как модель иммунного ответа на патогены иммунотропного действия. Аллергология и иммунология. 2019; 20 (1): 5-9.
3. Нестерова И.В., Ковалева С.В., Чудилова Г.А., Ломтатид-зе Л.В., Евглевский А. А. Двойственная роль нейтрофильных гра-нулоцитов в реализации противоопухолевой защиты. Иммунология. 2012; 33 (5): 281-8.
4. Hong C.W. Current Understanding in Neutrophil Differentiation and Heterogeneity. Immune Netw. 2017;17 (5): 298-306. URL: https:// doi.org/10.4110/in.2017.17.5.298. (дата обращения: 22.09.2017)
5. Долгушин И.И., Мезенцева Е.А., Савочкина А.Ю., Кузнецова Е.К. Нейтрофил как «многонациональное» устройство иммунной системы. Инфекции и иммунитет. 2019; 9 (1): 9-38.
6. Долгушин И.И. Нейтрофильные гранулоциты: новые лица старых знакомых. Бюллетень сибирской медицины. 2019; 18 (1): 30-7.
7. Beyrau M., Bodkin J.V., Nourshargh S. Neutrophil heterogeneity in health and disease: a revitalized avenue in inflammation and immunity. Open Biol. 2012; 2: 120-34. DOI: 10.1098/rsob.120134.
8. Carmona-Rivera C., Kaplan M.J. Low-density granulocytes: a distinct class of neutrophils in systemic autoimmunity. Semin. Immunopathol. 2013; 35: 455-63. DOI: 10.1007/s00281-013-0375-7.
9. Scapini P., Cassatella M.A. Social networking of human neutrophils within the immune system. Blood. 2014; 124: 710-9. DOI: 10.1182/blood-2014-03-453217.
10. Sagiv J.Y., Michaeli J., Assi S., Mishalian I., Kisos H., Levy L. et al. Phenotypic diversity and plasticity in circulating neutrophil subpopulations in cancer. Cell Rep. 2015; 10 (4): 562-73. DOI: 10.1016/j.celrep.2014.12.039.
11. Silvestre-Roig C., Hidalgo A., Soehnlein O. Neutrophil heterogeneity: implications for homeostasis and pathogenesis. Blood. 2016; 127: 2173-81. DOI: 10.1182/blood-2016-01-68888.
12. Scapini P., Marini O., Tecchio C. Cassatella M.A. Human neutrophils in the saga of cellular heterogeneity: insights and open questions. Immunological reviews. 2016; 273: 48-60. URL: https:// doi.org/10.1111/imr.12448.
13. Zhong M., Yang H., Xu Y., Mao S. Examining the utility of the CD64 index compared with other conventional indices for early diagnosis of neonatal infection. Sci. Rep. 2018; 3, 8 (1): 9994. URL: https:// doi.org/10.1038/s41598-018-28352-7. (дата обращения: 20.06.2018)
14. Moses K., Brandau S. Human neutrophils: Their role in cancer and relation to myeloid-derived suppressor cells. Semin. Immunol. 2016; 28 (2): 187-96. DOI: 10.1016/j.smim.2016.03.018
15. Tamassia N., Cassatella M.A., Bazzoni F. Fast and accurate quantitative analysis of cytokine gene expression in human neutrophils. Methods Mol. Biol. 2014; 1124: 451-67. DOI: 10.1007/978-1-62703845-4-279
16. Tamassia N., Bianchetto-Aguilera F., Arruda-Silva F., Gardi-man E., Gasperini S., Calzetti F. et al. Cytokine production by human neutrophils: «Revisiting the dark side of the moon». European journal of clinical investigation. 2018; 48: e12952. URL: https:// doi.org/10.1111/eci.12952. (дата обращения: 17.05.2018)
17. Зурочка А.В., Зурочка В. А., Добрынина М.А., Фомина Л.О., Файзуллина А.И., Гриценко В.А. Нейтрофилы как цитокинопро-дуцирующие клетки. Российский иммунологический журнал. 2019; 22 (4): 1469-71.
18. Papayannopoulos V. Neutrophil extracellular traps in immunity and disease. Nature reviews. Immunology. 2018; 18 (2): 13447. D0I:10.1038/nri.2017.105.
19. Симбирцев А.С. Цитокины в патогенезе и лечении заболеваний человека. Санкт-Петербург: Фолиант, 2018: 512 с.
20. Lin A., Lore K. Granulocytes: new members of the antigen-presenting cell family. Frontiers in Immunology. 2017; 11. URL: https://doi.org/10.3389/fimmu.2017.01781. (дата обращения: 28.10.2017)
21. Mishalian I., Granot Z., Fridlender Z.G. The diversity of circulating neutrophils in cancer. Immunobiology. 2017; 222: 82-8. URL: https://doi.org/10.1016/j.imbio.2016.02.001. (дата обращения 01.02.2016)
22. Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А., Ломта-тидзе Л.В., Ковалева С.В., Евглевский А.А., Нгуен Т.З.Л. Новый взгляд на нейтрофильные гранулоциты: переосмысление старых догм (Часть 1). Инфекция и иммунитет. 2017; 7 (3): 219-30. DOI: 10.15789/2220-7619-2017-3-219-230.
23. Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А., Лом-татидзе Л.В., Ковалева С.В., Евглевский А.А., Нгуен Т.З.Л. Новый взгляд на нейтрофильные гранулоциты: переосмысление
старых догм (Часть 2). Инфекция и иммунитет. 2018; 8 (1): 7-18. DOI: 10.15789/2220-7619-2018-1-7-18.
24. Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Чудилова Г.А., Ломта-тидзе Л.В., Ковалева С.В., Евглевский А.А. Нейтрофильные гранулоциты: новый взгляд на «старых игроков» на иммунологическом поле. Иммунология. 2015; 36 (4): 257-65.
25. Pincetic A., Bournazos S., DiLillo D.J., Maamary J., Wang T.T., Dahan R. et. al. Type I and type II Fc receptors regulate innate and adaptive immunity. Nature immunology. 2014; 15: 707-16. DOI: 10.1038/ni.2939.
26. Bournazos S., Wang T.T., Ravetch J.V. The role and function of Fcy receptors on myeloid cells. Microbiology spectrum. 2016; 4 (6): 10. DOI: 10.1128/microbiolspec.
27. Jakus Z., Nemeth T., Verbeek J.S., Mocsai A. Critical but overlapping role of FcyRIII and FcyRIV in activation of murine neutrophils by immobilized immune complexes. J Immunol. 2008; 180: 618-29. URL: https://doi.org/10.4049/jimmunol.180.1.618. (дата обращения 22.09.2007).
28. Coxon A., Cullere X., Knight S., Sethi S., Wakelin M.W., Stavrakis G. FcyRIII mediates neutrophil recruitment to immune complexes. A mechanism for neutrophil accumulation in immune-mediated inflammation. Immunity. 2001; 14: 693-704. URL: https://doi. org/10.1016/S1074-7613(01)00150-9. (дата обращения 22.06.2001)
29. Bournazos S., Wang T.T., Ravetch J.V. The Role and Function of Fcy Receptors on Myeloid Cells. Microbiology spectrum. 2016; 4 (6). URL: https://doi.org/10.1128/9781555819194.ch22.
30. Bartlett J.G. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections. Topics in HIV medicine: a publication of the International AIDS Society, USA. 2008; 16 (5): 151-5.
31. Fournier B., Philpott D.J. Recognition of Staphylococcus aureus by the innate immune system. Clinical microbiology reviews. 2005; 18: 521-40. doi: 10.1128/CMR.18.3.521-540.2005.
32. Owens C.D., Stoessel K. Surgical site infections: epidemiology, microbiology and prevention. The Journal of hospital infection. 2008; 70 (2): 3-10. URL: https://doi.org/10.1016/S0195-6701(08)60017-1. (дата обращения: 18.10.2008)
33. Whitman T.J. Community-associated methicillinresistant Staphylococcus aureus skin and soft tissue infections. Disease-a-month: DM. 2008; 54 (12): 780-6.
34. Шмагель К.В., Зубарева Н.А., Ренжин А.В. Местный иммунитет гнойных ран. Медицинская иммунология. 2010; 12 (4-5): 393-8.
35. Потапнев М.П., Гущина Л.М., Мороз Л.А. Фенотипиче-ская и функциональная гетерогенность субпопуляций нейтрофи-лов в норме и при патологии. Иммунология. 2019; 40 (5): 84-96.
■ References
1. Cortjens B., Ingelse S.A., Calis J.C., Vlaar A.P., Koenderman L., Bem R.A., et al. Neutrophil subset responses in infants with severe viral respiratory infection. Clinical immunology. 2017; 176: 100-6. DOI: 10.1016/j.clim.2016.12.012.
2. Balmasova I.P., Sepiashvili R.I., Malova E.S., Efratova E.P., Yushchuk N.D. Co-infection with human immunodeficiency viruses and hepatitis C as a model of the immune response to immunogenic pathogens. Allergologiya i immunologiya. 2019; 20 (1): 5-9. (in Russian)
3. Nesterova I.V., Kovaleva S.V., Chudilova G.A., Lomtatidze L.V., Evglevskiy A.A. The dual role of neutrophilic granulocytes in the implementation of antitumor protection. Immunologiya. 2012; 33 (5): 281-8. (in Russian)
4. Hong C.W. Current Understanding in Neutrophil Differentiation and Heterogeneity. Immune Netw. 2017; 17 (5): 298-306. URL: https://doi.org/10.4110/in.2017.17.5.298.
5. Dolgushin I.I., Mezentseva E. A., Savochkina A.Yu., Kuznetso-va E. K. Neutrophil as a «multinational» device of the immune system. Infektsii i immunitet. 2019; 9 (1): 9-38. (in Russian)
6. Dolgushin I.I. Neutrophilic granulocytes: new faces of old acquaintances. Byulleten' sibirskoy meditsiny. 2019; 18 (1): 30-7. (in Russian)
7. Beyrau M., Bodkin J.V., Nourshargh S. Neutrophil heterogeneity in health and disease: a revitalized avenue in inflammation and immunity. Open Biol. 2012; 2: 120-34. DOI: 10.1098/rsob.120134.
8. Carmona-Rivera C., Kaplan M.J. Low-density granulocytes: a distinct class of neutrophils in systemic autoimmunity. Semin. Immu-nopathol. 2013; 35: 455-63. DOI: 10.1007/s00281-013-0375-7.
9. Scapini P., Cassatella M.A. Social networking of human neutrophils within the immune system. Blood. 2014; 124: 710-9. DOI: 10.1182/blood-2014-03-453217.
10. Sagiv J.Y., Michaeli J., Assi S., Mishalian I., Kisos H., Levy L., et al. Phenotypic diversity and plasticity in circulating neutrophil subpopulations in cancer. Cell Rep. 2015; 10 (4): 562-73. DOI:10.1016/j.celrep.2014.12.039.
11. Silvestre-Roig C., Hidalgo A., Soehnlein O. Neutrophil heterogeneity: implications for homeostasis and pathogenesis. Blood. 2016; 127: 2173-81. DOI:10.1182/blood-2016-01-68888.
12. Scapini P., Marini O., Tecchio C. Cassatella M.A. Human neutrophils in the saga of cellular heterogeneity: insights and open questions. Immunological reviews. 2016; 273: 48-60. URL: https:// doi.org/10.1111/imr.12448.
13. Zhong M., Yang H., Xu Y., Mao S. Examining the utility of the CD64 index compared with other conventional indices for early diagnosis of neonatal infection. Sci. Rep. 2018; 3, 8 (1): 9994. URL: https://doi.org/10.1038/s41598-018-28352-7.
14. Moses K., Brandau S. Human neutrophils: Their role in cancer and relation to myeloid-derived suppressor cells. Semin. Immunol. 2016; 28 (2): 187-96. DOI: 10.1016/j.smim.2016.03.018.
15. Tamassia N., Cassatella M.A., Bazzoni F. Fast and accurate quantitative analysis of cytokine gene expression in human neutro-phils. Methods Mol. Biol. 2014; 1124: 451-67. DOI: 10.1007/978-162703-845-4-279.
16. Tamassia N., Bianchetto-Aguilera F., Arruda-Silva F., Gardi-man E., Gasperini S., Calzetti F., et al. Cytokine production by human neutrophils: Revisiting the «dark side of the moon». European
journal of clinical investigation. 2018; 48: e12952. URL: https:// doi.org/10.1111/eci.12952.
17. Zurochka A.V., Zurochka V.A., Dobrynina M.A., Fomina L.O., Fayzullina A.I., Gritsenko V.A. Neutrophils as cytokine-producing cells. Rossiyskiy immunologicheskiy zhurnal. 2019; 22 (4): 1469-71. (in Russian)
18. Papayannopoulos V. Neutrophil extracellular traps in immunity and disease. Nature reviews. Immunology. 2018; 18 (2): 134-47. D01:10.1038/nri.2017.105.
19. Simbirtsev A.S. Cytokines in the pathogenesis and treatment of human diseases. St. Petersburg: Foliant, 2018: 512 p.
20. Lin A., Lore K. Granulocytes: new members of the antigen-presenting cell family. Frontiers in Immunology. 2017; 11. URL: https://doi.org/10.3389/fimmu.2017.01781.
21. Mishalian I., Granot Z., Fridlender Z.G. The diversity of circulating neutrophils in cancer. Immunobiology. 2017; 222: 82-8. URL: https://doi.org/10.1016/j.imbio.2016.02.001.
22. Nesterova I.V., Kolesnikova N.V., Chudilova G.A., Lomta-tidze L.V., Kovaleva S.V., Evglevskiy A.A., et. al. The new look at neutrophilic granulocytes: rethinking old dogmas. Part 1. Infektsiya i immunitet. 2017; 7 (3): 219-30. DOI: 10.15789/2220-7619-2017-3219-230 12. (in Russian)
23. Nesterova I.V., Kolesnikova N.V., Chudilova G.A., Lomta-tidze L.V., Kovaleva S.V., Evglevskiy A.A., et. al. The new look at neutrophilic granulocytes: rethinking old dogmas. Part 2. Infektsiya i immunitet. 2018; 8 (1): 7-18. DOI: 10.15789/2220-7619-2018-1-7-18 12. (in Russian)
24. Nesterova I.V., Kolesnikova N.V., Chudilova G.A., Lomta-tidze L.V., Kovaleva S.V., Evglevskiy A.A. Neutrophilic granulocytes: a new look at the «old players» in the immunological field. Immu-nologiya. 2015; 36 (4): 257-65. (in Russian)
25. Pincetic A., Bournazos S., DiLillo D.J., Maamary J., Wang T.T., Dahan R., et. al. Type I and type II Fc receptors regulate innate and adaptive immunity. Nature immunology. 2014; 15: 707-16. DOI: 10.1038/ ni.2939.
26. Bournazos S., Wang T.T., Ravetch J.V. The role and function of Fcy receptors on myeloid cells. Microbiology spectrum. 2016; 4 (6): 10. DOI: 10.1128/microbiolspec.
27. Jakus Z., Nemeth T., Verbeek J.S., Mocsai A. Critical but overlapping role of FcyRIII and FcyRIV in activation of murine neutrophils by immobilized immune complexes. J Immunol. 2008; 180: 618-29. URL: https://doi.org/10.4049/jimmunol.180.1. 618.
28. Coxon A., Cullere X., Knight S., Sethi S., Wakelin M.W., Stavrakis G. FcyRIII mediates neutrophil recruitment to immune complexes. A mechanism for neutrophil accumulation in immunemediated inflammation. Immunity. 2001; 14: 693-704. URL: https:// doi.org/10.1016/S1074-7613(01)00150-9.
29. Bournazos S., Wang T.T., Ravetch J.V. The Role and Function of Fcy Receptors on Myeloid Cells. Microbiology spectrum. 2016; 4 (6). URL: https://doi.org/10.1128/9781555819194.ch22.
30. Bartlett J.G. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections. Topics in HIV medicine: a publication of the International AIDS Society, USA. 2008; 16 (5): 151-5.
31. Fournier B., Philpott D.J. Recognition of Staphylococcus aureus by the innate immune system. Clinical microbiology reviews. 2005; 18: 521-540. DOI: 10.1128/CMR.18.3.521-540.2005.
32. Owens C.D., Stoessel K. Surgical site infections: epidemiology, microbiology and prevention. The Journal of hospital infection. 2008; 70 (2): 3-10. URL: https://doi.org/10.1016/S0195-6701(08)60017-1.
33. Whitman T.J. Community-associated methicillinresistant Staphylococcus aureus skin and soft tissue infections. Disease-a-month: DM. 2008; 54 (12): 780-6.
34. Shmagel' K.V., Zubareva N.A., Renzhin A.V. Local immunity of purulent wounds. Meditsinskaya immunologiya. 2010; 12 (4-5): 393-8. (in Russian)
35. Potapnev M.P., Hushchyna L.M., Moroz L.A. Human neutro-phils subpopulations and functions heterogeneity in norm and pathology. Immunologiya. 2019; 40 (5): 84-96.
