CC BY
95DOI: 10.24411/9999-008A-2019-10015 УДК 637.144.5
Асафов В.А., к.т.н.
Танькова Н.Л., , к.т.н.
Искакова Е.Л., e-mail: iskel@mail.ru, к.т.н.
Харитонов В.Д. 1 д.т.н., академик РАН
ФГАНУ «ВНИМИ», e-mail: gnu-vnimi@yandex.ru,
Курченко В.П. к.б.н.
Головач Т.Н. к.б.н
БГУ, e-mail: kurchenko@tut.by
Некоторые аспекты регулирования микробиологического состава молозива
Аннотация. Выявлены основные закономерности изменения микробиологических показателей молозива после его обезжиривания, ферментации, замораживания, сублимационной сушки и темперирования.
Abstract. The basic rules of colostrum biological index after its defatting, fermentation, freezing, freeze-drying and tempering have been revealed.
Ключевые слова: коровье молозиво, микробиологические показатели, ферментация, сублимационная сушка, темперирование, антиоксидантная активность.
Keywords: bovine colostrum, functional product, microbiological indicators, defatting, fermentation, freeze-drying, tempering, antioxidant activity.
Переработка первичного молока, или молозива, и использование его биологически активных компонентов является одним из перспективных направлений развития биотехнологии функциональных пищевых продуктов. Молозиво является природным концентратом белков, доля которых по отношению к общему содержанию сухих веществ может превышать 60 %. Для первичного молока характерен специфический аминокислотный, липидный, витаминный и минеральный состав [1, 2]. Выделяют ряд компонентов молозива, обеспечивающих нормализацию функционирования организма. Защитные свойства первичного молока обусловлены наличием в нём иммуноглобулинов, лейкоцитов, лактоферрина и лизоци-ма. Регуляторный эффект связан с присутствием в молозиве проли-на, цитокинов, интерлейкина-10, лимфокинов, антигиогенина. К функциональным компонентам молозива относят ростовые факторы (пролактин, эпителиальный, фиброластный ростовые факторы и др.), нуклеотиды, пероксидаз-ные ферменты, ингибиторы про-теаз. По мере дальнейшего изуче-
ния состава и свойств первичного молока выявляются новые данные о биологических активностях как отдельных его компонентов, так и комплексной взаимосвязанной системы [3].
В настоящее время накоплен обширный материал по изучению способов использования молозива и его фракций в виде биологически активных добавок, а также обогащающих компонентов функциональных продуктов [4]. Научные исследования в данной области проведены в основном за рубежом, так как промышленный сбор и переработка первичного молока в нашей стране практически не осуществляются.
В промышленных масштабах молозиво и его производные в капсулированной форме вырабатываются в ряде стран (США, Франция, Новая Зеландия) и являются предметом экспорта. На российском рынке продаётся сухое капсулированное молозиво, концентрат сывороточных белков с внесением молозива и его фракций, а также ТБР-молозиво, представляющее собой концентрат компонентов, выполняющих регуляторные функции и тому подобное [5].
Сбор и первичная переработка молозива осуществляется с соблюдением ряда общих приёмов. Типичным вариантом является пример США, где первичное молоко от одной коровы в количестве около 40 л собирают в течение первых 24 ч после отёла. При этом на выпойку телят расходуется около 18 л, а остальное молозиво резервируется для промышленной переработки путём замораживания при -8,3°С. Эта операция обеспечивает сохранность компонентов, отвечающих за резистентность к штаммам Escherichia coli, что подтверждено исследованиями, проведёнными в университете Теннеси [5]. Продолжительность хранения замороженного молозива составляет 7 дней, после чего оно поступает на дальнейшую переработку. Первичное молоко размораживают, определяют показатели качества и безопасности, содержание иммуноглобулинов, удаляют жир, подвергают сублимационной или низкотемпературной распылительной сушке [5]. Помимо данного способа, существует ряд других вариантов, предполагающих фракционирование и концентрирование компонентов молозива, а также
получение комбинированных продуктов, обогащенных пре- и проби-отиками, различными пищевыми волокнами [5].
Коровье молоко, молозиво и ферментированные молочные продукты являются доступными источниками биологически активных пептидов, обладающих гипотензивным, генопротектор-ным, иммуномодулирующим, ан-тиоксидантным, антимикробным, опиоидным и др. эффектами [6]. Специфические пептиды образуются в результате воздействия на белки молока пищеварительных ферментов желудочно-кишечного тракта, при технологической обработке очищенными протеа-зами, а также ферментации молочнокислыми бактериями [9]. Использование различных про-теолитических ферментов и про-биотических микроорганизмов обеспечивает получение гидро-лизованных и ферментированных белков молока со специфическим белково-пептидным профилем и характерными биологически активными свойствами [7]. Антирадикальные свойства молока обусловлены наличием казеина и сывороточных белков и, в меньшей степени, присутствием вита-минно-минерального компонента [8-9]. Антиоксидантная активность (АОА) нативных белков и пептидов связана с восстанавливающими свойствами аминокислотных радикалов [9
Целью данной работы является исследование микробиологических показателей молозива при его биологической консервации (ферментации ацидофильной палочкой и закваской на кефирных грибках) и темперирования, как способов санации молозива; изучение влияния ферментации на антиоксидантные свойства первичного молока.
Объекты и методы исследования
В работе использовали 3 образца молозива в первые 12 часов после отёла.
Образцы подвергали обезжириванию с использованием центрифуги «Optima L-90K», (ГДР). Полученные и герметично упакованные образцы обезжиренного молозива замораживали с разным интервалом времени, в морозильной камере при температуре (-18) °С. Обезжиренное молозиво, полученное на осно-
ве образцов молозива № (1-3) замораживали и хранили в течение 6 месяцев. Обезжиренное молозиво, полученное на основе образца № 3, замораживали в течение 24 часов и также хранили 6 месяцев. После дефростации, обезжиренное молозиво, полученное на основе образцов молозива № (1-3), подвергали ферментации с использованием закваски на кефирных грибках. Обезжиренное молозиво, полученное на основе образца №3 подвергали ферментации с использованием закваски ацидофильной палочки (Lactobacillus acidophilus, штамм 630) и темперированию, после лиофиль-ной сушки при 60 °С, в течении 7, 14, 21 дней. Антиоксидантные свойства определяли в образце молозива №3, в образцах молозива обезжиренного и ферментированного с использованием закваски ацидофильной палочки (Lactobacillus acidophilus, штамм 630), полученных на основе образца №3.
Определяли микробиологические показатели исследуемых образцов молозива:
- количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных
Рисунок 1.
Зависимость
активной
кислотности
ферментированного
молозива
от времени
сквашивания
(представлены
средние значения
активной
кислотности, п=3)
микроорганизмов (КМАФАнМ) - по ГОСТ 32901,
- плесени и дрожжи - по ГОСТ 30706, ГОСТ 10444.12;
- бактерии группы кишечных палочек (БГКП) - по ГОСТ 31747;
- Staphylococcus aureus - по ГОСТ 30347;
- бактерии рода Salmonella - по ГОСТ 31659.
Для получения обезжиренного молозива, нативное молозиво подогревалось до 40 °С и обезжиривалось методом центрифугирования на центрифуге «Optima L-90K», (ГДР), при 3000 об\мин в течении 20 минут.
Для получения ферментированного обезжиренного молозива использовали штаммы молочнокислых бактерий из коллекции ФГАНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности»: Lactobacillus acidophilus. штамм 630; закваску на кефирных грибках. В 100 мл обезжиренного молозива вносили (5,0±0,1) % (16±2)-ч бактериальной культуры, выдерживали в термостате при оптимальной для анализируемых молочнокислых культур температуре до формирования сгустка; охлаждали до температуры (4±2) °С.
Таблица 1.
Микробиологические показатели исследуемых образцов
№ образца КМАФАнМ, КОЕ, см3 БГКП (колиформы), см3 Дрожжи, КОЕ, см3 Плесени, КОЕ, см3 S. aureus, см3
1 1 1,3*107 0,00001 60 7 Не обн
1 2 2,0*106 0,00001 60 7 Не обн
2 1 1*105 в 0,0001 отсутствует 50 4 Не обн
2 2 1*105 в 0,0001 отсутствует 50 4 Не обн
31 2,5*105 0,001 40 3 Не обн.
32 1,5*105 0, 001. 40 3 Не обн
33 (24 часа замораживания) 1,1*105 0, 001. 50 10 Не обн
33 (6 месяцев замораживания) 3,0*105 0,001. 50 7 Не обн
' Цельное. 2 Обезжиренное. 3 Обезжиренное замороженное
Активную кислотность полученных ферментированных образцов определяли по ГОСТ 32892. Массовую долю (м.д.) сухого вещества в образцах оценивали по ГОСТ 3626.
Белковый состав образцов обезжиренного, ферментированного, темперированного молозива выявляли с применением ГОСТ 23327, ГОСТ Р 55246 и ВЭЖХ (в работе использована ВЭЖХ-система Bio-Rad с рефрактометрическим и спектрофотометрическим детекторами, соединенными последовательно и системой компьютерной регистрации. Колонка: Bio-Rad 30XL (7,5*300мм) для гель-проникаюзщей хроматографии).
Соотношение между мезофиль-ными гомо- и гетероферментатив-ными лактококками устанавливали в результате микроскопирова-нии препаратов ферментированного первичного молока.
Антиоксидантную активность образцов цельного, обезжиренного и ферментированного молозива оценивали с применением модифицированной методики, описанной в статье Hernandez-Ledesma et al. (2007) [10]. При измерении ABTS-ради кал-
восстанавливающей активности использовали предварительно полученный катион-радикал на основе диаммониевой соли 2,2'-азино-бис [3-этилбензтиазолин-6-сульфоновой кислоты] (ABTS^). Для оценки уровня АОА применяли TEAC (Trolox equivalent antioxidant сарасИ:у)-метод [11].
В качестве стандарта при определении антиоксидантного потенциала изучаемых образцов использовали тролокс (6-гидрокс и-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-кар боновой кислоты), который представляет собой водорастворимый аналог витамина Е. Определена величина IC50, или концентрация тролокса, при которой скорость восстановления катион-радикала ABTS^+ снижается в 2 раза, что составляет 16,2 мкмоль. Величину IC50 стандарта использовали для расчета Trolox Equivalent Antioxidant Capacity (TEAC, показатель антиоксидантной активности, выраженный в мкмоль тролокса/ мг белка).
Результаты независимых экспериментов представлены как среднее арифметическое значение ± доверительный интервал. Достоверность различий между
выборками данных определяли методом доверительных интервалов.
Результаты и их обсуждение
Изучены микробиологические показатели цельного коровьего молозива: образцы № (1-3), обезжиренного нативного и замороженного молозива, полученных на основе образцов № (1-3). В соответствии с данными табл. 1 необходимо снижение микробиологической обсеменённости всех исследуемых образцов.
Нами исследованы два способа стандартизации молозива по микробиологическим показателям.
Первый способ базируется на антагонистических свойствах уникальной микробной системы кефирных грибков и ацидофильной палочки к патогенной микрофлоре.
Второй способ заключатся в лиофилизации нативного обезжиренного молозива с последующим темперированием препаратов при 60 С, в течении 7, 14, 21 дней.
Эффективность методов оценивалась по микробиологическим показателям и биологически активным белкам до и после обработки молозива.
Так как в процессе переработки молозива необходим режим ре-
Fluxx клапаны выравнивания давления в канистре и бочке европейского производства. Sabeu, Германия.
Удобный дозирующий пластиковый кран-крышка Р1ихх для канистр производства немецкой компании ЭаЬеи
Применяется в пищевой промышленности, а также химической и агрохимической промышленности, для дезинфицирующих,
чистящих и косметических средств, в автомобильной и нефтехимической индустрии.
>вторизованный дистрибьютор ООО "ВЕТРАКО", Санкт-Петербург, тел. +7 812 401 6717, e-mail: spb@wetraco.ru
зервирования, то биологической консервации и темперированию подвергали образцы обезжиренного замороженного молозива (6 месяцев).
Результаты микробиологических исследований ферментированного молозива консорциумом культур закваски на кефирных грибках образцов № (1-3) представлены в табл. 2, а кинетика ферментации отражена на рисунке 1.
При микроскопировании препаратов ферментированного молозива соотношение между мезофиль-ными гомо- и гетероферментатив-ными лактококками было аналогичным закваске на кефирных грибках. В частности, гомоферментативные преобладали над гетерофермен-тативными лактококками; кроме этого в ферментированном молозиве были выявлены мезофильные молочнокислые палочки и уксуснокислые бактерии. Количество молочнокислых микроорганизмов в ферментированном продукте в 1 -е сутки составило 1,0х107 КОЕ/см3, дрожжевых клеток - 1-2 в поле зрения. Отмечено, что при внесении 5-7 % закваски кефирных грибков адаптация культур в среде происходила быстрее; время ферментации молозива составило 28 ч.
Уменьшение количества бактерий группы кишечной палочки показано для всех образцов ферментированного молозива (табл. 2), что может быть обусловлено бактерицидными свойствами микроорганизмов в составе закваски на кефирных грибках, в том числе, подавляющим действием уксуснокислых бактерий в отношении Escherichia coli.
Кинетика ферментации молозива была типичной для всех исследованных образцов и принципиально не отличалась от динамики сквашивания молока. Согласно графику, представленному на рис. 1, рост активной кислотности фермети-рованных образцов установлен в течение первых 6 ч после внесения закваски; далее показано незначительное изменение величины рН.
Изучен белковый состав обезжиренного и ферментированного молозива (на основе образца №3), с применением закваски на кефирных грибках. Согласно данным табл. 3 установлено снижение количества общего белка наряду с увеличением доли небелкового азота, что обусловлено уменьшением содержания белков казеино-
Таблица 2.
Микробиологические показатели ферментированного молозива
№ образца Молочнокислые микроорганизмы, КОЕ, см3 БГКП (коли-формы), см3 Дрожжи-(микроско-пирование) S. aureus, см3 Патогенная микрофлора, в т.ч. сальмонеллы, 25см3
1 10х107 0,001 1-2 в поле зрения Не обн. Не обн.
2 10х107 0,01 1-2 в поле зрения Не обн. Не обн.
3 10х107 0,01 1-2 в поле зрения Не обн. Не обн.
Таблица 3.
Белковый состав ферментированного обезжиренного молозива, полученного с применением закваски на кефирных грибках
Наименование показателя Фактические значения (молозиво обезжиренное) Фактические значения(молозиво обезжиренное сквашенное)
Массовая доля белка, % 14,96 14,04
Содержание общего азота, % 2,35 2,20
Содержание небелкового азота, % 0,045 0,097
Содержание «истинного белка», % 14,71 13,42
Содержание казеиновых белков, % 1,20 0,70
Содержание сывороточных белков, % 13,49 12,64
в том числе:
Содержание а- лактоальбумина, % 6,28 6,09
Содержание в - лактоглобулина, % 4,06 3,55
Содержание лактоферрина, % 6,30 2,08
Содержание аминокислот, мг/100г
Аспарагиновая 914,0 933,0
Глутаминовая 2613,0 2802,0
Треонин 694,0 699,0
Валин 886,0 857,0
Метионин 337,0 319,5
Лейцин 1175,0 1190,0
Изолейцин 704,0 712,0
Фенилаланин 782,0 770,0
Лизин 1263,0 12,95
Гистидин 375,0 339,0
Тирозин 830,0 860,0
Триптофан 266,0 270,0
Общобщеее количество незаменимых аминокислот, мг/100 г 6107,0 6112,5
Таблица 4.
Микробиологические показатели образцов жидкого, лиофильно высушенного, ферментированного молозива
Наименование образца КМАФАнМ, КОЕ, см3 БГКП (колиформы), см3 Дрожжи/ плесени, КОЕ, см3 S. aureus, см3 Патогенная микрофлора, в т.ч. сальмонеллы, 25см3
Нативное молозиво 2,5*105 0,001 40/3 Не обн. Не обн.
Обезжиренное молозиво 1,5*105 0, 001. 40/3 Не обн. Не обн.
Молозиво сухое нативное 3х104 0,01 30/30 Не обн. Не обн.
Молозиво сухое обезжиренное 4х104 0,01 30/40 Не обн. Не обн.
Молозиво сухое обезжиренное, сквашенное ацидофильной палочкой * 0,1 30/40 Не обн. Не обн.
* - в результате микроскопирования обнаружена ацидофильная палочка (Lactobacillus acidophilus, штамм 630) -1x10s
Таблица 5.
Микробиологические показатели сухого молозива, подвергнутого темперированию при 60 °С
Наименование образца, продолжительность темперирования КМАФАнМ, КОЕ, см3 БГКП (колиформы), см3 Дрожжи/ плесени, КОЕ, см3 S. aureus, см3 Патогенная микрофлора, в т.ч. сальмонеллы, 25см3
Исходный 4х104 0,01 30/40 Не обн. Не обн.
7 дней 3,0х104 0,1 Не обн. Не обн. Не обн.
14 дней 3,0х104 0,1 Не обн. Не обн. Не обн.
21 день 8,0х103 0,1 Не обн. Не обн. Не обн.
вой и сывороточной фракции в результате расщепления бактериальными протеолитическими ферментами.
На следующем этапе исследований изучены микробиологические показатели обезжиренного молозива на основе образца №3 после дефрастации и ферментации с использованиием закваски ацидофильной палочки (Lactobacillus acidophilus штамм 630).
Температура ферментации -(40±2) °С, время ферментации -11 час., рН сгустка - 4,23. Орга-нолептические показатели сквашенного молозива, на конец ферментации, соответствуют ор-ганолептическим показателям ацидофильного продукта. При микроскопировании препарата ферментированного молозива отмечена положительная динамика накопления ацидофильной палочки (Lactobacillus acidophilus,
штамм 630 - 1х108). Титр кишечной палочки на конец ферментации снижается.
Результаты микробиологических показателей экспериментальных исследований отражены в табл. 4.
В табл. 5 приведены результаты исследования микробиологических показателей сухого обезжиренного молозива после темперирования при 60 °С в течение 7, 14 и 21 дня. Установлено снижение уровня обсемененности образцов с увеличением продолжительности темперирования.
В таблице № 6 представлен белковый состав сухого обезжиренного молозива ( на основе образца № 3) после темперирования при 60 °С в течение 7, 14 и 21 дня.
В соответствии с полученными данными, продолжительность темперирования отрицательно воздействует на белки молозива.
В табл. 7 представлены показатели TEAC, рассчитанные для образцов молозива. Снижение антирадикальной активности обезжиренного молозива, очевидно,связано с удалением липидного компонента, содержащего жирорастворимые витамины А, Е и К и гидрофобный низкомолекулярный белковый компонент с антиоксидантным потенциалом. Установлено достоверное увеличение АОА ферментированного молозива 1,5-1,6 раза по сравнению с нативным и обезжиренным молозивом.
Согласно данным Sah et al. (2014) изучены антиоксидантные и антимутагенные свойства пептидных фракций из образцов йогурта, полученных путем ферментации молока комбинациями пробиотических молочнокислых бактерий Lb. acidophilus (ATCC® 4356™), Lb. casei (ATCC® 393™) и Lb. paracasei ssp. paracasei (ATCC® BAA52™). При определении АОА оценивали восстановление катион-радикала ABTS~+. В эксперименте для изученных пептидных фракций со степенью гидролиза 5,38-11,91 % значения IC50 достигали 2,431,63 мг/мл соответственно. Увеличение степени расщепления белков молока коррелировало с возрастанием их антирадикальных свойств.
Таким образом, увеличение анти-оксидантных свойств ферментированного обезжиренного молозива связано с действием ферментных систем молочнокислых бактерий, в частности, с расщеплением белкового компонента протеолитической системой ацидофильной палочки.
Заключение
Показана практическая возможность корректировки коровьего молозива по микробиологическим показателям методами биологической консервации (ферментации ацидофильной палочкой (Lactobacillus acidophilus, штамм 630) и закваской на кефирных грибках) и темперирования. Ферментированное молозиво может быть использовано в качестве альтернативного или дополнительного средства бактериотерапии.
Получены экспериментальные данные об антирадикальной активности образцов молозива. Установлено возрастание антиоксидантных свойств ферментированного образца в 1,5-1,6 раза по сравнению с цельным и обезжиренным молозивом.
Таблица 6.
Физико-химические показатели сухого молозива, подвергнутого темперированию при 60 °С.
Наименование Фактические значения 7 дней обработки Фактические значения 14 дней обработки Фактические значения 21 день обработки показателя
Массовая доля белка, % 68,0 68,54 63,93
Содержание общего азота, % 10,65 10,74 10,02
Содержание небелкового азота, % 2,50 2,60 2,14
Содержание «истинного белка», % 51,99 51,93 50,27
Содержание казеиновых белков, % 18,10 20,37 21,95
Содержание сывороточных белков, % 33,75 31,18 28,15
в том числе:
Содержание а- лактоальбумина, % Менее 0,40 Менее 0,40 Менее 0,40
Содержание в - лактоглобулина, % Менее 0,40 Менее 0,40 Менее 0,40
Содержание лактоферрина, % Менее 0,50 Менее 0,50 Менее 0,50
Содержание аминокислот, мг/100г
Аспарагиновая 3985,9 3990,0 3854,0
Глутаминовая 7763,8 7804,5 7507,0
Треонин 3195,7 3199,0 3090,0
Валин 4003,2 4024,4 3870,8
Метионин 1116,0 1167,0 1079,1
Лейцин 4471,1 4502,0 4323,2
Изолейцин 3005,0 3009,0 2905,6
Фенилаланин 2467,8 2435,0 2386,1
Лизин 5043,0 5051,0 4876,2
Гистидин 1663,7 1690,0 1608,6
Тирозин 2045,0 1998,8 1977,3
Триптофан 1091,8 1112,0 1055,7
Общобщеее количество незаменимых аминокислот, мг/100 г 24393,6 24507,4 23586,7
Литература
Таблица 7.
Характеристика антиоксидантных свойств образцов молозива
Наименование образца TEAC, мкмоль тролокса/ мг сухого вещества
Молозиво цельное 0,171±0,001
Молозиво обезжиренное 0,156±0,003
Молозиво обезжиренное ферментированное 0,252±0,024
1. Biological components in a standardized derivative of bovine colostrum / P. Sacerdote [et al.] // Journal of Dairy Science. - 2013. - Vol. 96, № 3. - P. 1745-1754. https://doi.org/10.3168/jds.2012-5928.
2. Bovine colostrum: an emerging nutraceutical / S. Bagwe [et al.] // Journal of Complementary and Integrative Medicine. - 2015. - Vol. 12, № 3. - P. 175-185. https://doi.org/10.1515/jcim-2014-0039.
3. Composition and properties of bovine colostrum: a review / B.A. Mcgrath [et al.] // Dairy Science & Technology. - 2015. - Vol. 96, № 2. - P. 133-158. https://doi.org/10.1007/s13594-015-0258-x.
4. Properties of bovine colostrum and the possibilities of use / S. Dzik [et al.] // Polish Annals of Medicine. - 2017. - Vol. 24, № 2. - P. 295-299. https://doi.org/10.1016/j.poamed.2017.03.004.
5. Нативное и ферментированное коровье молозиво как компонент продуктов функционального назначения / Т.Н. Головач [и др.] // Труды БГУ. - 2014. - Т. 9, ч. 2. - С. 224-235. Halavach Т.М, Kozich O.G., Asafov V.A., Tankova N.L., Iskakova E.L., Myalenko D.M., Kharitonov D.V., and Kurchenko V.P. Nativnoye i fermentirovannoye korov'ye molozivo kak komponent produktov funktsional'nogo naznacheniya [Native and fermented cow colostrum as a component of functional products]. Trudy BGU [Proceedings of BSU], 2014, vol. 9, no. 2, pp. 224-235.
6. Invited review: Physiological properties of bioactive peptides obtained from whey proteins / A.R. Madureira [et al.] // Journal of Dairy Science. - 2010. - Vol. 93, № 2. - P. 437-455. https://doi. org/10.3168/jds.2009-2566.
7. Bioactive peptides: A review / A. Sánchez, A. Vázquez / Food Quality and Safety. - 2017. - Vol. 1, № 1. - P. 29-46. https://doi.org/10.1093/fqs/fyx006.
8. Antioxidant capacity of cow milk, whey and deproteinized milk / A. Zulueta [et al.] // International Dairy Journal. - 2009. - Vol. 19, № 6-7. - P. 380-385. https://doi.org/10.1016Zj.idairyj.2009.02.003.
9. Natural antioxidants in milk and dairy products / C. Grazyna [et al.] // International Journal of Dairy Technology. - 2017. - Vol. 70, № 2. - P. 165-178. https://doi.org/10.1111/1471-0307.12359.
10. Identification of bioactive peptides after digestion of human milk and infant formula with pepsin and pancreatin / B. Hernández-Ledesma [et al.] // International Dairy Journal. - 2007. - Vol. 17, № 1 - P. 42-49. https://doi.org/10.1016/jjdairyj.2005.12.012.
11. ORAC and TEAC assays comparison to measure the antioxidant capacity of food products / A. Zulueta [et al.] // Food Chemistry - 2009. - Vol. 114, № 5. - P. 310-316. https://doi.org/10.1016/j. foodchem.2008.09.033.
