CC BY
107
© ЧХЕНКЕЛИ В.A., ЧХЕНКЕЛИ Г.Д., АГАПОВА Е.Д., МОСКВИТИНА A.A. -УДК 616-003.725
НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ВЫСШИХ ДЕРЕВОРАЗРУШАЮЩИХ БАЗИДИОМИЦЕТОВ КАК ИСТОЧНИКА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
В. А. Чхенкели, Г.Д. Чхенкели, Е.Д Агапова, A.A. Москвитина.
(Иркутский государственный медицинский университет, ректор - акад. МТА и АН ВШ A.A. Майбо-рода, Центральная научно-исследовательская лаборатория, директор - с.н.с. В.А. Чхенкели, Областная детская клиническая больница, гл. врач - В.Н. Селиверстов)
Резюме. Работа посвящена актуальной проблеме антибиотикорезистентности и созданию новых антимикробных препаратов с использованием методов биотехнологии. Изучена природа антимикробной активности дереворазрушающего гриба Сопо1иБ риЬеБсепБ, механизм действия на бактерии нового вещества - кориопубесцина, выделяемого при культивировании продуцента. Исследована его активность в отношении клинических полирезистентных штаммов микроорганизмов по сравнению с современными антимикробными препаратами, применяемыми при лечении больных детей хирургического профиля.
В последние десятилетия высшие базидиоми-цеты стали предметом пристального внимания исследователей, что объясняется значительными успехами в области изучения процессов метаболизма грибов в целом, прогрессом в техническом оснащении процессов культивирования [7,10].
Базидиальные грибы являются источником БАВ - биологически активных веществ. Проблема сама по себе не нова, но продолжает оставаться актуальной. Это связано с поиском новых химических соединений, изучением закономерностей метаболических путей БАВ и их направленной регуляции, выявлением биологической роли активных метаболитов, и наконец, широким применением их в медицине. Следует отметить, что в настоящее время эти исследования проводятся в Японии, Корее, Китае, что вероятно, связано с традиционным употреблением в пищу большого разнообразия грибов и использованием их в народной медицине [12].
В нашей стране исследования по изучению биохимии высших грибов проводятся в Институте ботаники им. В.Л. Комарова РАН (г.Санкт-Петербург). Цель настоящего исследования заключалась в изучении некоторых БАВ дереворазрушающих базидиомицетов, получаемых с использованием методов биотехнологии, изучении химического состава действующих веществ и его связи с биологической активностью, без чего невозможно как создание лекарственных препаратов со стандартным содержанием действующих веществ с предсказуемым лечебным* эффектом, так и разработка рациональной технологии производства лекарственных препаратов.
Материалы и методы
В качестве продуцента использовали штамм дереворазрушающего грЪба Coriolus pubescens (Shum.:Fr.) Quel., полученный из коллекции лаборатории биохимии грибов Института ботаники
им. В.Л. Комарова РАН. Для изучения антимикробной активности продуцента С.риЬеБсепз выращивали на сусло - агаре при температуре 26-28°С в течении 7-10 суток, затем культивировали в колбах на качалке при 220 об/мин в течении 7-10 суток при температуре 26-28°С на среде следующего состава (г/л): глюкоза - 10,0, пептон -2,5, магний сернокислый - 0,5, калий хлористый -0,5, калий фосфорнокислый однозамещенный -1,0, pH среды - 6,0. Известно, что антимикробное действие базидиомицетов рода Сопо1из обусловлено терпеновыми соединениями [9,14].
Культуральную жидкость отделяли от биомассы центрифугированием при 6000 об/мин в течение 10-15 мин. При выделении, разделении и идентификации терпеноидов руководствовались основными принципами работы с этой группой веществ [1,5].
Для выделения терпеновых соединений культуральную жидкость трижды экстрагировали хлороформом, экстракты объединяли и концентрировали в 30 раз на вакуумном ротационном испарителе ИР-12М (Россия) при 40°С. Далее экстракт хроматографировали на колонке с силикагелем марки Л 100/400 ц (С1гетаро1, Чехия). Активные вещества элюировали последовательно бензолом, смесью бензол-хлороформ (1:1), хлороформом. Качественный состав фракций контролировали методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинах БИи/о! (Чехия) в системах растворителей: хлороформ-метанол-вода (65:25:10) и бензол-эфир (2:3). В качестве реагентов - проявителей использовали 20%-ную серную кислоту с последующим нагреванием при 55-60°С в течение 10-15 мин., смесь Либермана-Бурхарда. Другие системы растворителей оказались неэффективными. Далее из каждой фракции отгоняли растворители, смеси упаривали на ротационном испарителе при 40°С. Остатки растворяли в этаноле. Спек-
трометрию веществ в УФ - области спектра проводили на спектрофотометре Specorcl UV VIS (Германия).
Выделение терпеноидов из культурального мицелия C.pubescens проводили по модифицированному методу Куртиса. Для этого навеску мицелия обезжиривали петролейным эфиром в аппарате Сокслета в течение 10 ч. Остаток подсушивали в течение 10 ч, после чего спирт отгоняли, а полученный остаток подвергали гидролизу калийной спиртовой (этанол) щелочью в течение 4 ч на кипящей водяной бане. Охлажденный гидролизат разбавляли водой в соотношении 1:1. Из него встряхиванием с эфиром дважды удаляли нейтральные неомыляемые вещества, после чего гидролизат подкисляли соляной кислотой. Выпавший осадок отфильтровывали и переводили в эфир. Затем эфир отгоняли, а остаток в течение 3 сут. обрабатывали ледяной уксусной кислотой. Отфильтрованный осадок растворяли в этаноле, добавляли активированный уголь марки Coleman (США), смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. Из отфильтрованного раствора отгоняли спирт, сухой остаток перекристаллизо-вывали 4 раза из водного ацетона. Качественный состав контролировали методом ТСХ. Параллельно, остаток гриба после спиртовой экстракции снова экстрагировали ацетоном в течение 4 ч. Ацетон отгоняли, а остаток растворяли в метаноле, смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. Далее спирт отгоняли, а остаток гидролизовали 5%-ной (метанол) калиевой щелочью в течение 4 ч. Для очистки смесь пропускали через колонку с окисью алюминия.
Антимикробное действие полученных веществ изучали методом диффузии в агар с использованием бумажных дисков. В качестве тест-культур использовали референтные штаммы Esherichia coli АТСС 25922, Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, Staphylococcus aureus АТСС 6538-p, Bacillus cereus IP 5832. Тест-культуры выращивали на среде Мюллера-Хинтона. Посевы инкубировали при 37°С в течение 24 ч. По диаметру зон задержки роста тест-культур судили об антимикробном действии веществ [2,3,15].
Для изучения механизма действия вторичных метаболитов, синтезируемых C.pubescens, обладающих антимикробным действием, определяли интенсивность автолиза биомассы возбудителей гнойно-воспалительных инфекций при действии культуральной жидкости продуцента, а также для
сравнения определяли интенсивность автолиза растворов различной концентрации пенициллина и цефтазидима. Интенсивность автолиза определяли по изменению оптической плотности биомассы при инкубации на водяной бане в течение 1 ч при 37°С [6]. В качестве тест-организмов использовали культуры E.coli АТСС 25922, St.aureus АТСС 6538-Р, Ps.aeruginosa АТСС 27853, Вас. cereus IP 5838.
Нет необходимости говорить о том, что в арсенале практической медицины появляется всё больше высокоактивных антибиотиков широкого спектра действия. Поэтому весьма необходимо было определить чувствительность клинических полирезистентных штаммов бактерий к кориопу-бесцину, выделяемому из культуральной жидкости C.pubescens, по сравнению с современными средствами антибиотикотерапии.
Объектами исследования служили выделенные клинические штаммы бактерий, обладающие выраженной резистентностью к современным средствам антибиотикотерапии.
Изучаемые штаммы - представители микрофлоры ран, экссудатов, транссудатов, мокроты, мочи детей, поступающих в отделения Областной детской клинической больницы хирургического профиля.
Чувствительность штаммов к антибактериальным препаратам определяли методами диффузии в агар и серийных разведений с использованием отечественных дисков, среды и бульона Мюллера-Хинтона (НИЦФ, г. Санкт-Петербург), с параллельным тестированием референтных штаммов: E.coli АТСС 25922, St.aureus АТСС 25925, Ps.aeruginosa АТСС 27853 и St.aureus АТСС 2523. Оценку антибиотикорезистентности проводили в соответствии с рекомендациями Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам (NCCLS США) и Межрегиональной ассоциации по клинической микробиологии и антимикробной химиотерапии (МАКМАХ) [4,15].
Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) определяли по наименьшей концентрации антибиотика, подавляющей видимый рост микроорганизма.
Результаты и обсуждение
В результате выделения, экстрагирования и разделения из культуральной жидкости были выделены фракции 1, 2, 3, соответственно. Установлено, что только фракция 2 содержала терпеновое соединение - вещество А (табл.1).
Таблица 1
Результаты хроматографического анализа терпеновых соединений культуральной жидкости, получаемой при ферментации Сопокм риЪе5се/и (51гши.: Ег.) ()иё1.
Вещество Значение Rf в системах растворителей Окраска пятен п реагентами-пі :ри проявлении роявителями
хлороформ-метанол-вода (65:25:10) бензол-эфир (2:3) 20%-ная серная кислота сМесь Либермана -Бурхарда
Вещество А 0,4 0,4 Розово-фиолетовая Сине-зеленая
Вещество В 0,6 0,6 а
Таблица 2
Антимикробное действие терпеноидов, выделенных из мицелия и культуральной жидкости
СопоЫб риЬезсепБ (51гит.: FrJ ()иё1
Тест-культуры Диаметр зон подавления роста тест-культуры, мм
Вещество А Вещество В Фракция 1 Фракция 2 Фракция 3
1Bacillus cereus IP 5832 28,0±0,2 25,3± 1,1 - 20,2±1,2 -
Esherichia coli ATCC 25922 25,3± 1,1 23,3±0,9 10,0±0,2 0 -
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 30,0±0,2 23,3±0,2 - 0 -
Staphylococcus aureus ATCC 6538-p 0 23,3± 1,2 - 25,0± 1,1 -
Примечание: прочерк - отсутствие зон подавления роста, 0 - полное подавление роста.
После очистки получали бесцветное кристаллическое вещество (А), с tm 198-200°С, [a]D2o = +64° . Определение угла вращения вещества проводили при 20°С и длине волны спектра натрия (D = 589,3 нм). Вещество слабо растворимое в горячей воде, плохо растворимо в холодной воде, хорошо растворимо в этаноле, метаноле, пиридине. УФ-спектроскопия в этаноле показала, что имеются максимумы поглощения при 207, 260, 310 нм.
При выделении терпеноидов из мицелия С.ри-bescens получали вещество по физико-химическим свойствам идентичное веществу А, выделенному из фракции 2 культуральной жидкости.
После конечной очистки получали бесцветное кристаллическое вещество (В) с tm 285-290°С, [a]D2o =+8,19°, которое плохо растворимо в холодной воде, хорошо растворимо в этаноле, метаноле, ацетоне. УФ-спектроскопия в этаноле показала пики поглощения при 236, 243, 251 нм.
При выделении терпеноидов из мицелия
C.pubescens и культуральной жидкости при описанных выше условиях ферментации выделено два вещества: полипореновая кислота С (вещество В) и неидентифицированное вещество (А), названное кориопубесцином. Установлено, что вторичные метаболиты C.pubescens относятся к малотоксичным соединениям [11]. Об антимикробном действии веществ А и В судили по диаметру зон задержки роста тест-культур. Полученные результаты представлены в табл.2. Данные, представленные в табл.2 свидетельствуют о том, что вещества А, В и фракция 2, содержащая вещество А (не идентифицированное), обладают значительным антимикробным действием фракция 2 вызывает полное подавление роста культур Е coli, Рs.aeruginosa , St.aureus.
При определении МПК использовали метод серийных разведений. Посевы с тест-культурами термостатировали при 37 °С в течение 24 ч (табл.З).
Из таблицы 3 видно, что вещество А в концентрации 4х10~4 мг/мл и более полностью подавляет рост всех тест-культур. Минимальная подав-
ляющая концентрация вещества В несколько выше и составляет 4х10-2 мг/мл.
Таким образом, при изучении химического состава веществ, выделенных из мицелия C.pubescens и его культуральной жидкости, обладающих антимикробной активностью, было идентифицировано два соединения терпеновой природы. Вещество А выделяется как из мицелия, так и из культуральной жидкости. Его минимальная подавляющая концентрация составляет 4х 10-5 мг/мл. Вещество В (полипореновая кислота С) может быть выделена только из культурального мицелия, его минимальная подавляющая концентрация
составляет 4х10-2 мг/мл.
Таблица 3
Антимикробная активность полипореновой кислоты С и не идентифицированного терпенового вещества , выделенных из мицелия и культуральной жидкости Coriolus pubescens (Shum.: Fr.) Quél
Вещество Концен- трация, мг/мл Т ест-культуры
Bacillus cereus IP 5832 Esherichia coli ATCC 25922 Staphylococcus aureus ATCC 6538-p, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Полипореновая кислота С 4x10“5 ± + ± +
4x10'4 - - - -
4х10~3 - - - -
4x10"2 - - - -
4x10"' - - - -
4 - - - -
Не идентифицированное терпеновое вещество 4х1(Г5 + + + +
4х10“4 + + + +
4х1СГ3 ± ± ± +
4х10~2 - - - -
4x10'' - - - -
4 - - - -
Примечание: (±) - слабый рост; (-) - полное подавление роста; (+) - нормальный рост.
Влияние антимикробных препаратов на интенсивность автолиза клеток бактерий
Пре- парат Концен- трация, % Тест-культуры
Staphylococcus aureus АТСС 6538-р Esherichia coli АТСС 25922 Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 Bacillus cereus IP 5832
Пени- цил- лин к 7,2±0,1 9,0±0,2 7,2±0,1 7,0±0,1
0,001 7,6±0,1 10,4±0,2 8,0+0,2 8,0±0,2
0,01 10,0+0,2 17,3±0,3 10,3±0,3 10,5±0,3
0,1 14,0±0,3 18,6±0,2 8,3±0,1 8,3±0.1
1,0 16,5±0,2 20,3±0,4 6,1 ±0,2 9,2±0,2
Цеф- тази- дим к 6,5±0,1 8,6±0,1 7,0±0,2 7,2±0,2
0,002 6,6±0,1 8,9+0,2 8,1+0,2 8,Г±0,2
0,02 12,Г±0,2 ІЇ,3+0,2 8,4+ОД 10,3±0,2
0,2 12,1 ±0,1 15,3±0,2 11,3±0,3 12,0±0,2
2,0 12,2±0,2 16,3±0,1 13,5±0,1 16,07±0,2
Культу- раль- ная жид- кость к 7,7±0,1 9,2±0,1 7,0±0,1 6,2±0,3
0,001 9,5±0,3 16,2±0,2 3,7±0,1 8,0±0,3
0,01 10,3±0,2 19,0±0,2 12,5±0,2 4,42±0,3
0,1 14,2±0,3 20,5±0,2 12,9±0,1 3,6±0,2
1,0 20,8±0,4 26,6±0,3 16,3±0,2 3,4±0,3
Примечание: К - контроль.
Известно, что антибиотики можно подразделить на несколько групп по механизму их действия. Для изучения механизма действия вторичных метаболитов, синтезируемых С.риЬезсеги, обладающих антимикробным действием, определяли интенсивность автолиза биомассы возбудителей гнойно-воспалительных инфекций при действии культуральной жидкости продуцента, а также для сравнения определяли интенсивность автолиза растворов различной концентрации пенициллина и цефтазидима.
Бактерицидное действие ряда антибиотиков связано с нарушением синтеза клеточной стенки . Под действием антимикробных веществ, ингибирующих синтез клеточной стенки, происходит изменение фиксации витальными красителями. При внесении культуральной жидкости С.риЬе5сеги (в
концентрациях от 10" ‘ до 10 ‘" объемн.%) в суспензии тест-организмов установлено, что в концентрации Ю'10 объемн. % наблюдается окрашивание гранул 1%-ным водным раствором нейтрального красного. У E.coli и B.cereus происходит окрашивание гранул при внесении культуральной жидкости в суспензию тест-организма в концентрации 10‘10 объемн. %. У St.aureus окрашивание гранул происходит при концентрации культуральной жидкости 10'6 объемн %.
Нами проводилось сравнительное исследование действия пенициллина, цефтазидима и культуральной жидкости C.pubescens на интенсивность автолиза тест-организмов. С этой целью определяли интенсивность автолиза тест-культур при различных концентрациях антимикробных веществ (табл.4).
Таблица 5
Чувствительность /устойчивость выделенных клинических штаммов рода Pseudomonas к
антимикробным препаратам
Микро- организмы Число штаммов ПРЕПАРАТЫ
Имипенем Амикацин Цефтази- дим Ципроф- локсацин Г ентами-цин Цефтри- аксон Кориопу- бесцин
Pseudomonas aeruginosa Общее R,% I,% S,% 15 0 20±0,1 80±0,3 15 0 0 100±0,1 15 50±0,1 20±0,2 30±0,1 15 0 0 100±0,2 15 80±0,3 20±0,1 0 15 84±0,1 26±0,2 0 15 0 0 100±0,1
Pseudomonas spp. Общее R,% I,% S,% 10 0 20±0,2 80±0,1 10 0 10±0,1 90±0,2 10 0 20±0,2 80±0,1 10 0 0 100±0,2 10 100±0,3 0 0 v 10 70±0,1 30±0,2 0 10 0 0 100±0,3
Примечание: R - резистентные штаммы; Г - умеренно-резистентные; S - чувствительные
Чувствительность /устойчивость выделенных клинических штаммов к Klebsiella spp. антимикробным препаратам
Число ПРЕПАРАТЫ
штаммов Имипенем Амикацин Цефтазидим Ципрофлоксацин Цефтриаксон Кориопубсцин
Общее 11 11 11 11 11 11
R,% 0 0 10+0,1 0 60+0,1 0
1,% 20±0,1 0 10+0,2 0 20+0,2 0
S,% 80+0,3 100+0,2 80+0,2 100+0,1 20+0,3 100+0,3
Примечание: R - резистентные штаммы; I - умеренно-резистентные; S - чувствительные
Полученные данные свидетельствуют о том, что пенициллин в концентрациях 0,01-1,0% и цефтазидим в концентрациях 0,02-2,0% повышают интенсивность автолиза биомассы тест-культур в 1,1-2,3 раза, а культуральная жидкость С.ри-ЬеБсепБ в более низких концентрациях (0,0016-1,0 объемн. %) увеличивает интенсивность автолиза более значительно - в 1,2-2,9 раза.
Следовательно, экспериментальные данные свидетельствуют о том, что под действием вторичных метаболитов, синтезируемых С.риЬезсепБ и выделяемых в культуральную жидкость, происходит нарушение нормального синтеза клеточных стенок бактерий.
Под действием автолизинов, образование и проявление которых не ингибируется, происходит активный лизис клеток бактерий. Это подтверждается микроскопией при окрашивании объектов исследования витальным красителем. На основании чего можно считать, что действие антимикробных веществ, выделяемых С.рыЬезсепз, является бактерицидным. Тем не менее, штаммы патогенных микроорганизмов становятся всё более устойчивыми к антибиотикам, что обусловлено рядом изученных на сегодняшний день и ещё изучаемых факторов [8]. Устойчивость нефермети-рующих микроорганизмов связана с продукцией
плазмидных и хромосомных /?-лактамаз, снижением проницаемости внешних структур микробной клетки или активным выведением из неё антибиотиков.
Результаты оценки чувствительности неферментирующих микроорганизмов к антимикробным препаратам представлены в таблице 5.
Установлено, что штаммы Рs.aeruginosa наиболее чувствительны к амикацину, имипенему, ципрофлоксацину, кориопубесцину, а штаммы Ps.spp. - к амикацину, цефтазидиму, имипенему, ципрофлоксацину и кориопубесцину. Следует отметить, что во всех случаях было установлено бактерицидное действие кориопубесцина. Минимальная подавляющая концентрация (МПК) составила 1,5-2,0 мкг/мл.
Данные антибиотикорезистентности 11 клинических штаммов Klebsiella spp. представлены в таблице 6.
Показано, что штаммы Klebsiella spp чувствительны к цефтазидиму, имипенему, ципрофлоксацину, кориопубесцину МПК для кориопубесцина составила 6,0-7,2 мкг/мл. Уровень природной устойчивости Klebsiella spp определяется наличием у подавляющего большинства штаммов этих микроорганизмов /?-лактамаз класса А.
Таблица 7
Чувствительность /устойчивость выделенных клинических штаммов рода Staphylococcus к
антимикробным препаратам
Микро- организ- мы Число штаммов ПРЕПАРАТЫ
Ко-амок- сиклаву Цефазо- ЛИН Ванко- мицин Оксацил- лин Линко- мицин Эритро- мицин Олеан- домицин Корио- пубесцин
Staphylo- coccus aureus Общее R,% I,% S,% 20 20±0,10 0 80±0,3 20 20±0,1 0 80±0,3 20 0 0 100±0,1 20 40±0,1 20±0,24 40±0,3 20 60±0,2 10±0,2 30±0,3 20 20±0,2 0 80±0,1 20 0 0 100±0,3
Staphylococcus epide г midis Общее R,% I,% S,% 13 20±0,1 0 80±0,2 13 40±0,3 0 60±0,2 13 0 0 100±0,2 13 30±0,1 20±0,3 50±0,1 13 70±0,2 10±0,1 20±0,1 13 40±0,1 0 60±0,3 13 0 90±0,2 10±0,1 13 0 0 100±0,3
Staphylo- coccus haemolyti- cus Общее R,% I,% S,% 19 40±0,2 0 60±0,3 19 0 0 100±0,1 19 40±0,1 0 60±0,3 19 r 40±0,2 10±0,1 50±0,2 19 80±0,1 io±o;2 10±0,1 19 0 90±0,2 10±0,3 19 0 0 100±0,2
Примечание: R - резистентные штаммы; I - умеренно-резистентные; S - чувствительные
Таблица 8
Чувствительность /устойчивость выделенных клинических штаммов ЕтегоЬасгег Брр.
к антимикробным препаратам
Число
штаммов
ПРЕПАРАТЫ
Имипенем Амикацин Цефтазидим Ципрофлоксацин Цефтриаксон Кориопубсцин
Общее
R,%
1%
S,%
10
о
о
100±0,1
10
о
о
100±0,1
10
10±0,1
10±0,2
80±0,3
10
о
20±0,2
80±0,3
10
60±0,2
0
40±0,2
10
0
0
100±0,1
Примечание: R - резистентные штаммы; I - умеренно-резистентные; S - чувствительные
Данные по чувствительности / устойчивости штаммов рода Staphylococcus к антибиотикам представлены в таблице 7. Отмечено, что штаммы St. aureus наиболее чувствительны к олеандомицину, ко-амоксиклаву, ванкомицину и кориопубесцину, а штаммы St.epidermiclis St.haemolyticus - к цефазоли-ну, ко-амоксиклаву, и кориопубесцину. МПК ко-риопубесцина составила 0,4-0,8 мкг/мл. В исследованиях выявлены оксацилинрезистентные стафил-лококи. Среди изученных микроорганизмов устойчивости к ванкомицину не выявлено.
Данные по определению чувствительности / устойчивости 10 клинических штаммов Enterobacter spp. представлены в таблице 8.
Обнаружено, что клинические штаммы Enterobacter spp. чувствительны к цефтазидиму, ципроф-локсацину, имипенему, амикацину, кориопубесци-
ну, МПК для кориопубесцина составила 5,2 мкг/мл. У Enterobacter возможна достаточно быстрая селекция устойчивости. Характерной особенностью этих микроорганизмов является наличие индуцибельных хромосомных /?-лактамаз.
Данные по определению антибиотикорезистент-ности 9 клинических штаммов E.coli представлены в таблице 9.
Установлено, что выделенные штаммы E.coli наиболее чувствительны к цефтазидиму, цефтатри-аксону, имипенему, амикацину, кориопубесцину. МПК для корипубесцина составляет 0,8 мкг/мл. Штаммы E.coli имеют высокую природную чувствительность к подавляющему большинству /?-лак-тамных антибиотиков. Наиболее частым механизмом устойчивости у E.coli является продукция плазмидных /?-лактамаз широкого спектра.
Таблица 9
Чувствительность /устойчивость выделенных клинических штаммов Е.соИ к
антимикробным препаратам
Число ПРЕПАРАТЫ
штаммов Имипенем Амикацин Цефтазидим Ципрофлоксацин Цефтриаксон Кориопубсцин
Общее 9 9 9 9 9 9
R,% 0 0 0 10±0.1 0 0
I,% 0 0 0 0 0 0
S,% 100±0,3 100±0,2 100±0,2 90±0,1 100±0,3 100±0,1
Примечание: R - резистентные штаммы; I - умеренно-резистентные; S - чувствительные
Таким образом, кориопубесцин является активным антимикробным препаратом в отношении клинически значимых штаммов микроорганизмов. Его
минимальная ингибирующая концентрация для изученных штаммов составляет 0,4 мкг/мл.
SOME ASPECTES OF MEDICAL AND BIOLOGICAL INVESTIGATIONS OF HIGHER WOOD-DECOMPOSING BASIDIOMYCETES AS THE SAURCE OF BIOLOGICALL
ACTIVE SUBSTANCES
V.A. Chkhenkeli, G.D. Chkheli, E.D. Agapova,
A.A. Moscvitina
(Irkutsk State Medical University)
This work is devoted to burning problem of creation of new antimicrobial medicines using biotechnology methods. The nature of antimicrobial activity of basidiomycete Coriolus pubescens (Shum.:Fr) Quel., mechanism of biological activity of new substance namea coriopubescen were investigated. The antimicrobial activity of coriopu-bescen was investigated in comparison with moder antibiotics.
Литература
1. Выделение и анализ биологически активных веществ / Под ред. Е.Е. Сироткиной. - Томск, Изд-во ТГУ, 1987.- 184с.
2. Красильников А.П., Адарченко A.A. Клиническое значение и методические вопросы определения чувствительности / устойчивости бактерий к антисептикам // Антибиотики и химиотер. - 1992. -Т.37. - №9. - С.39-74.
3. Скала Л.З., Сидоренко С.В., Нехорошева А.Г. и др. Практические аспекты современной клинической микробиологии: - М., 1997. - 70с.
4. Стецюк О.У., Решедько Г.К., Рябкова Ё.Л. Ци-профлоксацин и норфлоксацин определение чувствительности диско-диффузионным методом: Методические рекомендации // Клин, микробиол. и антимикробная химиотерапия. - 1999. - Т1. - №1. -С.92-100.
5. Сур С.В. Методы выделения, идентификации и определения терпеновых соединений // Химикофармацевтический журнал. - 1990. - Т.24. - №5. -С.42-47.
6. Сухаревич В.И., Тутурина-Чхенкели В.А., Лисиц-кая Т.Б. и др. Влияние синтетических углеводов на биосинтез лизина // Биотехнология. - 1992. - №2. -С.30-32.
7. Феофилова Е.П. Современные направления в изучении биологически активных веществ базидиаль-ных грибов: (обзор) // Прикл. биохим. и микробиол. - 1998. - Т.34. - №6. - С.597-608.
8. Чхенкели В.А., Агапова Е.Д., Чхенкели Г.Д. и др. Сравнительная оценка антимикробных средств в
отношении полирезистентных штаммов - возбудителей инфекционно воспалительных заболеваний дыхательных путей // Тез.докл. Зап.-Сиб. терапевт, форума. - Тюмень. - 2000. - С. 134-135.
9. Чхенкели В.А., Никифорова Т.И., Скворцова Р.Г. Антимикробное действие дереворазрушающего гриба Coriolus pubescens (Shum., Fr.) Quel..// Микол. и фитопатол. - 1998. - Т.32. - Вып.1. - С.69-72.
10. Чхенкели В.А. К вопросу о биологически активных веществах дереворазрушающих грибов // Мат. междунар. совещ., “Физиолого-биохимические аспекты изучения лекарственных растений”. - Новосибирск. - 1998. - С.70-71.
11. Чхенкели В.А. Токсикологическая оценка продуктов химической биотехнологии // Тез. докл. 1-го съезда токсикологов России. - М. - 1998. -С. 128.
12. Hobbs Ch. Medicinal Mushrooms. - 2-nd ed. - Santa Crus, CA: Botanica Press, 1995. - P.35.
13. Takashi S., Iinuma H., Takata T. et al. The structure of coriolin, a new sesquiterpene antibiotic // Tetrahedron Lett. - 1969. - №53. - 1995. - P.4663-4666.
14. Takashi S., Iinuma H., Takata T. et al. The structure of coriolin, В and С // Tetrahedron Lett. - 1970. -№19.-P.16373-1639.
15. Woods G.L., Washington J.A. Antibacterial Susceti-bility Tests: Dilution and Disk Methods // Mannual of Clinical Macrobiology. - 6th ed. / Ed. P. Murray. -P.1327-1341.
