CC BY
10УДК 577.112.4; 661.124
E.S. Zaitseva1, I.N. Polyakova2, A.I. Ginak3 Е.С. Зайцева1, И.Н. Полякова2, А.И. Гинак3
NANOCONSTRUCTIONS BASED ON INFLUENZA ANTIGENS TO CREATE NEW INFLUENZA VACCINES
FSUE St Petersburg scientific research institute of vaccines and serums and the enterprise for the production of bacterial preparations, ul. Svobody 52, g. Krasnoe Selo, St. Petersburg, 198320, Russia
St. Petersburg State Institute of Technology (Technical University), 26, Moskovsky Pr., St Petersburg, 190013, Russia e-mail: e.s.zaytseva@spbniivs
Followed by chemical modification of surface antigens (AG) of influenza virus strain В/Florida 04/2006 et A/California H1N1/07/2009 was realised by conjugation with partially oxidized dextran (D). Elaboration of complex was proved practice technique of chromatography and imaging of samples in polyacrylamide gel (PAAG). The immunogenicity properties of the РА complex were examined for outbred white mice. Specific antibodies were determine by inhibition- reaction hemagglutination in blood serum modified-antigen. The research work results show that synthesis new nanoconstruc-tions of surfaces antigens of influenza virus and dextran. The immunised synthesized РА complex improvement specific postvaccination were in blood serum modified-antigen.
Keywords: surfaces antigens; influenza virus; dextran; postvaccination titer, oxidation dextran, chemical modification, nanoconstructions.
Введение
В настоящее время прививка против гриппа остается наиболее эффективным методом защиты от гриппозной вирусной инфекции и от возникновения потенциально серьезных осложнений в результате заболевания гриппом [1].
Известно, что субъединичные вакцины против гриппа обладают наименьшей реактогенностью по сравнению с живыми и сплит вакцинами [2, 3]. Однако субъединичные вакцины обладают низкой иммуногенностью [4]. Одним из стандартных способов повышения антигенной активности вакцин является применение фосфатов и гидроокиси алюминия. В качестве адъювантов могут так же использоваться высокомолекулярные соединения природного происхождения как бактериальные, так и растительные полисахариды, бактериальные гликопептиды, нуклеиновые кислоты; синтетические по-
НАНОКОНСТРУКЦИИ НА ОСНОВЕ АНТИГЕНОВ ВИРУСА ГРИППА ДЛЯ СОЗДАНИЯ НОВЫХ ПРОТИВОГРИППОЗНЫХ ВАКЦИН
ФГУП Санкт-Петербургский научно - исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов ул. Свободы, д. 52 Санкт-Петербург, г. Красное Село, 198320, Россия Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет), Московский пр., 26, Санкт-Петербург, 190013, Россия e-mail: e.s.zaytseva@spbniivs
Проведена химическая модификация субъединиц вируса гриппа В/Florida/04/2006 и A/California H1N1/07/2009 путем конъюгации с частично окисленным декстраном. Образование антиген-полисахаридного комплекса подтверждено хрома-тографическим методом и визуализацией образцов в поли-акриламидном геле (ПААГ). Иммуногенные свойства полученных антиген-полисахаридных комплексов проверяли при иммунизации модифицированными антигенами вируса гриппа белых беспородных мышей. Титр специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). В результате проведенной научно-исследовательской работы были синтезированы новые наноконструкции, состоящие из поверхностных антигенов вируса гриппа и декстрана. Синтезированные антиген-полисахаридные комплексы показали нарастание титров специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных.
Ключевые слова: поверхностные антигены, вирус гриппа, титр специфических антител, окисленный декстран, химическая модификация, наноконструкции.
линуклеотиды, полипептиды, гликопептиды - аналоги природных полимерных соединений; синтетические полимерные соединения, не имеющие природных аналогов [5].
В течение последних 20 лет широко применяются и исследуются синтетические полимерные соединения полиионной природы, такие как полиакриловая кислота, поливинилпиридин, полиоксидоний и природные соединения, такие как хитозан, хитин, декстран [68]. Декстран выпускается промышленностью РФ в виде 6 % раствора для инфузий и является полифункциональным плазмозамещающим раствором. Он хорошо переносится пациентами. Декстраны хорошо растворимы в воде и без затруднений подвергаются всевозможным превращениям с образованием химически активных форм. Активированные декстраны способны в мягких условиях связываться с молекулами биологически актив-
1 Зайцева Елена Сергеевна, науч. сотр. ФГУП СПбНИИВС ФМБА, e-mail: e.s.zaytseva@spbniivs
Elena S. Zaytseva, research scientist, FSUE St Petersburg scientific research institute of vaccines and serums and the enterprise for the production of bacterial preparations
2 Полякова Ирина Николаевна, канд. хим. наук, уполномоченное лицо, ФГУП СПбНИИВС ФМБА, e-mail: i.n.polakova@spbniivs
Irina N. Polakova, Ph.D (Chem.), Qualified Person, FSUE St Petersburg scientific research institute of vaccines and serums and the enterprise for the production of bacterial preparations
3 Гинак Анатолий Иосифович, д-р хим. наук, профессор каф. молекулярной биотехнологии, СПбГТИ(ТУ), e-mail: mbt@lti-gti.ru Anatoly I. Ginak, Dr Sci. (Chem.), Professor, Department of Molecular Biotechnology
Дата поступления - 13 октября 2017 года
ных веществ (БАВ) с образованием ковалентной связи [9-11]. Кроме того, декстраны способны улучшать реологические свойства крови и микроциркуляцию, по мнению ряда авторов, декстраны активируют систему иммунного ответа [12].
В литературе описаны различные способы химической модификации БАВ при помощи декстранов [13, 14]. Цель проведенного исследования заключалась в разработке новой молекулярной наноконструкции на основе антигенов вируса гриппа, модифицированных декстраном, и исследовании иммуногенных свойств синтезированных антиген-полисахаридных конъюгатов.
Экспериментальная часть
В России накоплен богатый опыт по химической модификации белков с ферментативной активностью при помощи частично окисленного декстрана [11, 13, 14]. Основываясь на результатах работ российских исследователей, для химической модификации антигенов вируса гриппа был использован декстран в форме 6 % раствора полиглюкина для инфузий, окисленный периодатом натрия до степени окисления y = 20 ± 4 % [15, 16]. Для исследования были выбраны образцы концентратов субъединиц (КСЕ) вируса гриппа B/Florida/04/2006 и A/California H1N1/07/2009. Химическая модификация антигенов вируса гриппа проводилась в различных молярных соотношениях основных реагентов (AG-Д) в реакционном растворе, которые составили 1 : 5; 1 : 10; 1 : 20; 1: 40; 1 : 100. Соотношение основных реагентов варьировалось при помощи изменения количества декстрана, взятого в реакцию модификации антигенов.
Оценку образцов проводили хроматографиче-ским методом при помощи установки Acta Prime plus на колонке, заполненной сорбентом Sephacryl S300 объемом 54 мл, элюировали 50 мМ Tris-НС! буферным раствором рН=7,2±0,2, детектирование вели при 280 нм.
Визуализация образцов проводилась электрофорезом в полиакриламидном геле (ПААГ) с использованием 12 % ПААГ и с окраской Кумасси.
Иммуногенность модифицированных антигенов вируса гриппа определялась путем иммунизации беспородных белых мышей массой 10-12 г и выражалась в единицах среднего титра специфических антител в сыворотке крови животных. Животных иммунизировали двукратно с интервалом в 7 дней. Группы животных состояли из 15 особей. Для образцов на основе КСЕ вируса гриппа B/Florida/04/2006 иммунизирующая доза составляла 17 мкг гемагглютинина, для образцов на основе КСЕ вируса гриппа A/California H1N1/07/2009 иммунизирующая доза составляла 3,5 мкг гемагглютинина. Титр специфических антител в сыворотке крови экспериментальных животных определялся в реакции торможения гемагглю-тинации (РТГА) на 21 сутки.
Обсуждение результатов
На примере модификации антигена вируса гриппа В/Florida/04/2006 было показано изменение соотношения основных компонентов синтезированной молекулярной структуры в зависимости от начального соотношения реагентов реакционной смеси [17, 18]. В результате такой модификации получены новые молекулярные конструкции с содержанием от 16 до 30 молекул декстрана на 1 глобулу антигена [19], которые схематически могут быть представлены следующим образом (рисунок 1).
Вероятнее всего, образуются новые высокомолекулярные наноконструкции антигенов вируса гриппа, связанные с декстраном посредством образования точечных ковалентных связей между аминогруппами антигена и карбонильными группами окисленного декстрана. Образование высокомолекулярных наноструктур подтверждено методом гелевой хроматографии образцов. Хроматографические профили исследованных образцов представлены на рисунках 2 и 3.
Рисунок 1. Схема строения модифицированных антигенов вируса гриппа Д - декстран; AG - антиген вируса гриппа
30,00
25,00
20,00
£ 15,00
Ё
о 10,00
5,00
1 1
J
0,00
0,D0 20,00 40,00 60,00 80,0
Объем элюата, мл
Рисунок 2. Хроматографический профиль КСЕ вируса гриппа А/Сalifornia H1N1/07/2009
Рисунок 3. Хроматографический профиль КСЕ вируса гриппа А/Сalifornia H1N1/07/2009, модифицировнного окисленным декстраном в соотношении 1:5
Из хроматографического профиля, представленного на рисунке 2, можно наблюдать, что в КСЕ вируса гриппа без модификации декстраном содержатся как высокомолекулярные фракции белков, элюирующиеся при 18 мл, так и фракции белков с низкими молекулярными массами, элюирующиеся при 25-30 мл. Из хроматографического профиля, представленного на рисунке 3, отчетливо видно, что в образцах КСЕ, модифицированных окисленным декстраном, содержатся только высокомолекулярные фракции белков, следовательно, в результате химической модификации белковые глобулы антигенов вируса гриппа объединены в единую высокомолекулярную структуру.
Предположение об образовании высокомолекулярных наноструктур было подтверждено визуализацией образцов в ПААГ (рисунок 4).
Mw, кДа 1 2 3 4 Mw, кДа
57
27__
+-'25
_—15
Рисунок 4. Визуализация антигенов вируса гриппа А в ПААГ дорожка 1 - КСЕ вируса гриппа А/Сalifornia/07/2009; дорожка 2 - КСЕ вируса гриппа А/Сalifornia/07/2009lконъюгированный
с декстраном в соотношении 1:5; дорожка 3 - КСЕ вируса гриппа А/Сalifornia/07/2009l конъюгированный с декстраном в соотношении1:10;
дорожка 4 - Белковый маркер молекулярного веса
В образце субъединиц вируса гриппа наблюдается распределение белковых глобул по высокомолекулярным (> 250 кДа) и низкомолекулярным (57-86 кДа) фракциям. В образцах субъединиц вируса гриппа после химической модификации наблюдается распределение только по высокомолекулярным фракциям (рисунок 4 дорожки 2 и 3). Следует отметить, что при визуализации образцов в ПААГ в образце, соответствующем КСЕ вируса гриппа без модификации, отчетливо видны полосы на уровне белков вируса, соответствующих молекулярным массам гемагглютинина (около 80 кДа) и ней-раминидазы (63-75 кДа). В образцах субъединиц вируса гриппа, модифицированных декстраном, указанные полосы видны слабо, однако в области белков с молекулярной массой выше 250 кДа можно наблюдать четко выраженные интенсивные полосы. Такие результаты доказывают, что при проведении химической модификации антигенов вируса гриппа, белки с молекулярными массами от 57 до 86 кДа образуют прочно связанную конструкцию с молекулярной массой более 250 кДа.
Все образцы субъединиц вируса гриппа, модифицированные декстраном, показали нарастание титров специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных [20, 21]. Высокие титры отмечены в группах животных, иммунизированных субъединицами вируса гриппа B/Florida/04/2006, модифицированных декстраном в соотношении 1 : 10 и 1 : 20. Величина титра специфических антител в сыворотке крови мышей, иммунизированных субъединицами, модифицированными декстраном в соотношении 1 : 40, соответствовал уровню антител в группе животных, иммунизированных субъединицами без модификации. Величина титра антител в сыворотке крови мышей, иммунизированных субъединицами, модифицированными декстраном в соотношении 1 : 100 оказались ниже, чем в группе животных, иммунизированных субъединицами без модификации.
Указанная зависимость была подтверждена в опытах с образцами субъединиц вируса гриппа А/ Сalifornia ИШ1/07/2009. При иммунизации мышей образцами, модифицированными декстраном в соотношении 1 : 5 и 1 : 10, получены титры антител, превышающие значения титров антител в сыворотке крови животных, иммунизированных субъединицами без модификации [22], рисунок 5.
Заключение
В результате проведенной работы были синтезированы новые наноконструкции, образованные посредством ковалентной «сшивки» поверхностных антигенов вируса гриппа и высокомолекулярного полисахарида микробного происхождения - декстрана. Показано, что величина титра специфических антител в сыворотке крови животных, иммунизированных субъединицами вируса гриппа, модифицированными декстраном, зависит от доли полисахаридной составляющей в синтезированных антиген-полисахаридных структурах. Образцы препаратов на основе антигенов вируса гриппа B/Florida/04/2006 и декстрана, синтезированные в соотношении 1 : 10 и 1 : 20, а также образцы препаратов на основе антигенов вируса гриппа А/Сalifornia H1N1/07/2009 и декстрана, синтезированные в соотношении 1 : 5 и 1 : 10, показали нарастание титров специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных, превышающие значения титров специфических антител в сыворотке крови животных, иммунизированных образцами препаратов на основе антигенов вируса гриппа без модификации декстраном. Наноконструкции на основе антигенов вируса гриппа В/ Florida/04/2006 и декстрана, синтезированные в соотношении 1 : 10 и 1 : 20, и наноконструкции на основе антигенов вируса гриппа А/Сalifornia H1N1/07/2009 и декстрана, синтезированные в соотношении 1 : 5 и 1 : 10, могут быть рекомендованы для разработки интерназальной формы гриппозной полимер-субъединичной вакцины.
Литература.
1. Никоноров И.Ю. Актуальные аспекты лечения и профилактики гриппа // Российский медицинский журнал. 2015. Т. 23. № 2. С. 66-69.
2. Петров Р.В., Хаитов Р.М. Иммуногены и вакцины нового поколения. М.: ГЭОТАР. Медиа. 2011. С. 176179.
3. Гендон Ю.З. Высокая эффективность и безопасность вирусных вакцин и бездоказательная критика // Вопросы вирусологии. 2013. Т. 58. N 6. С. 5-13.
4. Ерофеева М.К., Никоноров И.Ю. Современные проблемы гриппа и его специфической профилактики // Terra Medica Nova. 2009. № 2. С. 3-9.
5. Машковский Д.М. Лекарственные средства. М: ООО Новая волна, 2002. 540 с.
6. Пенегин Б.В. Некрасов А.В. Хаитов Р.М. Им-муномодулятор полиоксидоний: механизмы действия и аспекты клинического применения // Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3. № 3. С. 41-47.
7. Kamel S. [et al.]. Parmaceutical significance of cellulose: A review // Express polymer letters. 2008. Vol. 2. N 11. P. 758-778.
8. Jeong Y., Kim D.G. KangD.H. Synthesis of Dextran / Methoxy Poly(ethylene glycol) Block Copolymer // Journal of Chemistry. 2013. URL: http://dx.doi.org/10.1155/2013/414185 (дата обращения 18.07.2015).
9. Балабушевич Н.Г. Включение белков в полиэлектролитные микрокапсулы из декстрана сульфата, про-тамин и меламина формальдегида // Вестник Московского ун-та. 2002. Т. 43. № 6. С. 374-377.
10. Антонов Ю.А. Журавлева И.Л. Структурное исследование взаимодействия лизоцима с декстран сульфатом // Тр. Междунар. научно-практ. конф. «Биотехнология и качество жизни» Москва, 18-20 марта 2014 г. М.: ЗАО «Экс-по-биохим-технологии» РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2014. С. 14-16.
11. Полякова И.Н., Москвичев Б.В., Гинак А.И. Изучение химической модификации ремантадина с помощью полисахаридов // Известия СПбГТИ(ТУ). 2009. № 6(32). С. 57-59.
12. Шкурупий В.А. Туберкулезный гранулематоз. Цитофизиология и адресная терапия. М., РАМН 2007. С. 109-150.
13. Нынь И.В., Москвичев Б.В., Иванова Г.П., Та-ратина Т.М. Нанобиотехнология в действии. Нанотехно-логичная форма лечебного протеоллитического фермента террилитина - терридеказа® // Поликлинника. 2011. № 1-2. С. 93-95. URL: http://poliklin.ru/article201102L0_93-95.php (Дата обращения 15.04.2017).
14. Taratina T.M., Moskvichev B.V. Specific activity of streptokinase modified by linear hydrophilic copolymer // Pharmaceutical chemistry journal. 1985. Vol. 19. N 1. P. 20-24.
15. И.В. Нынь, Я.Б. Москвичева, Г.П. Иванова, Т.М. Таратина. Терридеказа - усовершенствованная лекарственная форма протеолитического фермента, продуцируемого Aspergillus terricola // Поликлиника. 2007. № 6. С. 8789.
16. Москвичев Б.В. Многоцелевая модификация гидрофильными полимерами биологически активных веществ как средство создания новых препаратов и технологических процессов в медицинской промышленности: дис. ... д-ра хим. наук, Л., 1986. С. 143-156, 166-169.
17. Zaytseva E.S. Molecular structures suitable for the development of antiviral new generation vaccines // Applied and Fundamental Studies Proceedings of the 6th International Academic Conference. 30-31 august, 2014. St. Louis, Missouri, USA, 2014. P. 162-165.
18. Зайцева Е.С., Тапапаева О.Ю., Москвичева Я.Б., Нынь И.В., Гинак А.И. Иммуногенность химически модифицированных полисахаридами антигенов вируса гриппа // Известия СПбГТИ(ТУ). 2012. №15(41). С. 75-78.
19. Зайцева Е.С., Титова Т.Г., Петровский С.В., Москвичев Б.В. Полимерные наноконструкции антигенов вируса гриппа // VII Московский междунар. конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития» Сб. тр.. Москва, 19-22 марта 2013. М.: ЗАО «Экспо-биохим-техно-логии» РХТУ им. Д.И. Менделеева, 2013. С. 128-129.
20. Титова Т.Г., Зайцева Е.С., Трухин В.П. Модификация антигенов вируса гриппа биоразлагаемым полимерным носителем // II Всерос. научно-практ. конф. с междунар. участием «Инновации в здоровье нации», 17 ноября 2017. Сб. матер. СПб: СПХФА, 2014. С.605-608.
21. Зайцева Е.С., Трухин В.П., Титова Т.Г., Ани-сенкова О.А. Изучение структуры антигенов вируса гриппа методом химической модификации // VIII междунар. науч-но-практ. конф. «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» Проблемы развития высоких технологий. Санкт-Петербург, 20-22 мая 2015 г. Сб. матер. Т.1 СПб: СПбГПУ,, 2015. С. 40-44.
22. Е.С. Зайцева Повышение иммуногенности субъединичной гриппозной вакцины с помощью конъюги-рования поверхностных антигенов вируса гриппа с окисленным декстраном. // Научно-практ. конф.-биеннале «Грипп: вирусология, эпидемиология, профилактика и ле-
чение». 27-28 октября 2016 г. Санкт-Петербург. Сб. статей. СПб., 2016. С. 40-43. URL: http://www.influenza.spb.ru/files/ publications/conf-2016-sbornik-materialov.pdf (Дата обращения 20.04.2017)
References
1. Nikonorov I.Ju. Aktual'nye aspekty lechenija i profilaktiki grippa // Rossijskij medicinskij zhurnal. 2015. T. 23. № 2. S. 66-69.
2. Petrov R.V., Haitov R.M. Immunogeny i vakciny novogo pokolenija. M.: GJeOTAR. Media. 2011. S. 176-179.
3. Gendon Ju.Z. Vysokaja jeffektivnost' i bezopasnost' virusnyh vakcin i bezdokazatel'naja kritika // Voprosy virusologii. 2013. T. 58. N 6. S. 5-13.
4. Erofeeva M.K., Nikonorov I.Ju. Sovremennye problemy grippa i ego specificheskoj profilaktiki // Terra Medica Nova. 2009. № 2. S. 3-9.
5. Mashkovskij D.M. Lekarstvennye sredstva. M: OOO Novaja volna, 2002. 540 s.
6. Penegin B.V. Nekrasov A.V. Haitov R.M. Immunomoduljator polioksidonij: mehanizmy dejstvija i aspekty klinicheskogo primenenija // Citokiny i vospalenie. 2004. T. 3. № 3. S. 41-47.
7. Kamel S. [et al.]. Parmaceutical significance of cellulose: A review // Express polymer letters. 2008. Vol. 2. N 11. P. 758-778.
8. Jeong Y., Kim D.G. Kang D.H. Synthesis of Dextran / Methoxy Polyethylene glycol) Block Copolymer // Journal of Chemistry. 2013. URL: http://dx.doi.org/10.1155/2013/414185 (data obrashhenija 18.07.2015).
9. Balabushevich N.G. Vkljuchenie belkov v polijelektrolitnye mikrokapsuly iz dekstrana sul'fata, protamin i melamina formal'degida // Vestnik Moskovskogo un-ta. 2002. T. 43. № 6. S. 374-377.
10. Antonov Ju.A. Zhuravleva I.L. Strukturnoe issledovanie vzaimodejstvija lizocima s dekstran sul'fatom // Tr. Mezhdunar. nauchno-prakt. konf. «Biotehnologija i kachestvo zhizni» Moskva, 18-20 marta 2014 g. M.: ZAO «Jekspo-biohim-tehnologii» RHTU im. D.I. Mendeleeva, 2014. S. 14-16.
11. Poljakova I.N., Moskvichev B.V., Ginak A.I. Izuchenie himicheskoj modifikacii remantadina s pomoshh'ju polisaharidov // Izvestija SPbGTI(TU). 2009. № 6(32). S. 57-59.
12. Shkurupij V.A. Tuberkuleznyj granulematoz. Citofiziologija i adresnaja terapija. M., RAMN 2007. S. 109150.
13. Nyn'I.V., MoskvichevB.V., Ivanova G.P., Taratina T.M. Nanobiotehnologija v dejstvii. Nanotehnologichnaja forma lechebnogo proteolliticheskogo fermenta terrilitina -terridekaza® // Poliklinnika. 2011. № 1-2. S. 93-95. URL: http:// poliklin.ru/article201102L0_93-95.php (Data obrashhenija 15.04.2017).
14. Taratina T.M., Moskvichev B.V. Specific activity of streptokinase modified by linear hydrophilic copolymer // Pharmaceutical chemistry journal. 1985. Vol. 19. N 1. P. 20-24.
15. Moskvichev B.V., Taratina T.M., Ivanova G.P. [i dr.]. Sposob poluchenija immobilizovannoj streptokinazy: a. s. 1371004 SSSR. reg № ; zajavl. opubl. Bjul. № kol-vo str.
16. Moskvichev B.V. Mnogocelevaja modifikacija gidrofil'nymi polimerami biologicheski aktivnyh veshhestv kak sredstvo sozdanija novyh preparatov i tehnologicheskih processov v medicinskoj promyshlennosti: dis. ... d-ra him. nauk, L., 1986. S. 143-156, 166-169.
17. Zaytseva E.S. Molecular structures suitable for the development of antiviral new generation vaccines // Applied and Fundamental Studies Proceedings of the 6th International Academic Conference. 30-31 august, 2014. St. Louis, Missouri, USA, 2014. P. 162-165.
18. Zajceva E.S., Talalaeva O.Ju., Moskvicheva Ja.B., Nyn' I.V., Ginak A.I. Immunogennost' himicheski modificirovannyh polisaharidami antigenov virusa grippa // Izvestija SPbGTI(TU). 2012. №15(41). S. 75-78.
19. Zajceva E.S., Titova T.G., Petrovskij S.V., Moskvichev B.V. Polimernye nanokonstrukcii antigenov virusa grippa // VII Moskovskij mezhdunar. kongress «Biotehnologija: sostojanie i perspektivy razvitija» Sb. tr.. Moskva, 19-22 marta 2013. M.: ZAO «Jekspo-biohim-tehnologii» RHTU im. D.I. Mendeleeva, 2013. S. 128-129.
20. Titova T.G., Zajceva E.S., Truhin V.P. Modifikacija antigenov virusa grippa biorazlagaemym polimernym nositelem // II Vseros. nauchno-prakt. konf. s mezhdunar. uchastiem «Innovacii v zdorov'e nacii», 17 nojabrja 2017. Sb. mater. SPb: SPHFA, 2014. S.605-608.
21. Zajceva E.S., Truhin V.P., Titova T.G., Anisenkova O.A. Izuchenie struktury antigenov virusa grippa metodom
himicheskoj modifikacii // VIII mezhdunar. nauchno-prakt. konf. «Vysokie tehnologii, fundamental'nye i prikladnye issledovanija v fiziologii i medicine» Problemy razvitija vysokih tehnologij. Sankt-Peterburg, 20-22 maja 2015 g. Sb. mater. T.1 SPb: SPbGPU,, 2015. S. 40-44.
22. E.S. Zajceva Povyshenie immunogennosti sub#edinichnoj grippoznoj vakciny s pomoshh'ju kon#jugirovanija poverhnostnyh antigenov virusa grippa s okislennym dekstranom. // Nauchno-prakt. konf.-biennale «Gripp: virusologija, jepidemiologija, profilaktika i lechenie». 2728 oktjabrja 2016 g. Sankt-Peterburg. Sb. statej. SPb., 2016. S. 40-43. URL: http://www.influenza.spb.ru/files/publications/conf-2016-sbornik-materialov.pdf (Data obrashhenija 20.04.2017)
