CC BY
38
ПATOMOPФOЛOГIЯ
© ^pioi< о. i. 0ÄK 616. 33-002. 27 Цирюк О. I.
MOPФOЛOГIЧHИЙ TA ЛEKTИHOГICTOXIMIЧHИЙ AHAЛIЗ CЛИЗOBOÏ OБOЛOHKИ ШЛУHKA ПICЛЯ 28-ÂEHHOÏ ГIПOAЦИДHOCTI
^'¿в^кий нaцioнaльний yнiвepcитeт iмeнi Tapaca Шeвчeнкa (м. KrnB)
Poбoтa викoнaнa вiдпoвiднo дo плaнy нayкoвиx дocлiджeнь KиÏвcькoгo нaцioнaльнoгo yнiвepcитeтy iмeнi Tapaca Шeвчeнкa i e фpaгмeнтoм нayкoвиx тeм Haвчaльнo-нayкoвoгo цeнтpy (HHÖ) «lнcтитyт 6^O-гiÏ»: «Дocлiджeння мexaнiзмiв фyнкцioнyвaння opra-нiв тpaвнoгo тpaктy тa мeтoдiв Ïx кopeкцiÏ» (№ дepж. peecтpaцiÏ 0106U005755) тa "Mexaнiзми peaлiзaцiÏ aдaптaцiйнo-кoмпecaтopниx peaкцiй opгaнiзмy зa yмoв poзвиткy piзниx пaтoлoгiй" (№ дepж. peecтpaцiÏ 0111U004648).
Bcтyп. Ha cьoгoднi для вивчeння пaтoмopфo-лoгiÏ пyxлинниx пpoцeciв шиpoкoгo викopиcтaння нaбyли лeктини, тoмy щo бiльшicть acoцiйoвaниx з пyxлинaми aнтигeнiв e вyглeвoдoвмicними бioпoлi-мepaми i нaлeжaть дo глiкoпpoтeÏнiв [7,9]. Лeктини - ^ бiлки pocлиннoгo, твapиннoгo тa мiкpoбнoгo пo-xoджeння, xapa<тepнoю oзнaкoю якиx e вибipкoвe i звopoтнe зв'язyвaння з вyглeвoдaми, якe нe пpизвo-дить дo змiни xiмiчнoÏ cтpy<тypи ocтaннix. Лeктини xapaктepизyютьcя cпeцифiчнicтю зв'язyвaння як зi cтpyктypними кoмпoнeнтaми нopмaльнoÏ cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa, тaк i з глiкoкoн'югaтaми пoвepxнi плaзмaлeми тpaнcфopмoвaниx клiтин, щo дae мoж-ливють лoкaлiзyвaти тa oxapaктepизyвaти змiни, як виникaють пpи poзвиткy нeoплacтичниx змш. Maючи виcoкий cтyпiнь глiкoзилювaння, paкoвi клiтини знa-чнo пiдцaютьcя aглютинyючiй дiÏ лeктинiв [ 6, 9,14].
Пoпepeднiми нaшими дocлiджeннями бyлo пo-кaзaнo, щo 28-дeннe пpигнiчeння ceкpeцiÏ coлянoÏ киcлoти в шлунку щypiв блoкaтopoм H+-K+-ATФaзи oмeпpaзoлoм пpизвoдить дo cтpyктypнo-фyнкцio-нaльниx змiн в шлунку, яю cyпpoвoджyютьcя ди^ бaктepioзoм, пpичинoю якoгo е тpивaлe знижeння ceкpeцiÏ coлянoÏ киcлoти [12, 15]. ^py^^n змiни пoлягaли в тoмy, щo у чacтини щypiв poзвивaлиcь пepeдpaкoвi змiни, a у чacтини-poзвивaвcя paк [5,15]. В peзyльтaтi cтpy<тypниx пepeбyдoв в cлизo-вiй oбoлoнцi шлунта змiнювaлacь i ceкpeтopнa функ-^я шлyнкa [11].
З мeтoю кopeкцiÏ диcбa<тepioзy, щo poзвивaвcя в шлунку пpи знижeнiй киcлoтнocтi шлyнкoвoгo мку [12,16], ми викopиcтaли мyльтипpoбioтик <Юимб^ тep® aцидoфiльний» кoнцeнтpoвaний (Cимбiтep), який пoчинae дiяти oдpaзy пicля ввeдeння, тaк як нa вiдмiнy вщ icнyючиx лioфiлiзoвaниx пpoбioтикiв, вiн мютить живу флopy у виcoкиx кoнцeнтpaцiяx. Пpи oднoчacнoмy ввeдeннi oмeпpaзoлy тa Cимбiтepy yпpoдoвж 28-днiв cтpy<тypнo-фyнкцioнaльнi змши були виpaжeнi cлaбo [3,15 ].
Зacтocyвaння лeктинoгicтoxiмiчниx мeтoдiв дo-cлiджeнь cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa дoзвoлить пpo-лити cвiтлo нa дeякi мexaнiзми cтpy<тypниx змiн опи-зoвoÏ oбoлoнки, щo poзвивaютьcя нa тлi тpивaлoгo знижeння киcлoтнocтi шлyнкoвoгo coкy, тa лiкyвaль-нo-пpoфiлa<тичнoÏ дiÏ Cимбiтepy зa yмoв тpивaлoгo oднoчacнoгo ввeдeння oмeпpaзoлy тa Cимбiтepy.
Meтoю дocлiджeнь бyлo дocлiдити цитoтoпo-гpaфiю лe<тинoвиx peцeптopiв у cлизoвiй oбoлoнцi шлyнкa щypiв пicля тpивaлoÏ гiпoaциднocтi, викли^-нoÏ 28 дeнним ввeдeнням oмeпpaзoлy тa зa yмoв ÏÏ кopeкцiÏ мyльтипpoбioтикoм Cимбiтepoм.
Oб'eкт тэ мeтoди дocлiджeння. Дocлiцжeння пpoвeдeнi нa 30 нeлiнiйниx щypax мacoю 150-200 г з дoтpимaнням нopмaтивiв KoнвeнцiÏ з бутики Paди Gвpoпи 1997 poкy, 6вpoпeйcькoÏ кoнвeнцiÏ пpo зa-xиcт xpeбeтниx твapин, якi викopиcтoвyютьcя для eкcпepимeнтaльниx тa iншиx нayкoвиx цiлeй, зa-гaльним eтичним пpинципaм eкcпepимeнтiв нa твa-pинax, yxвaлeниx Пepшим нaцioнaльним кoнгpecoм УкpaÏни з бioeтики (вepeceнь 2001 poкy), iншиx мж-нapoдниx yгoд тa нaцioнaльнoгo зaкoнoдaвcтвa у цм гaлyзi [10].
Ha пoчaткy eкcпepимeнтy щypiв бyлo пoдiлeнo нa 3 гpyпи. Щypи пepшoÏ фупи, яким пpoтягoм 28 днiв ввoдили 0,2 мл вoди для Ы'екцм, cлyгyвaли кoнтp-oлeм. У щypiв дpyгoÏ гpyпи мoдyлювaли тpивaлe знижeння шлyнкoвoÏ ceкpeцiÏ. Для цьoгo |'м пpoтягoм 28 днiв ввoдили блoкaтop H+-K+-ATФaзи oмeпpaзoл («Sigma», C0A) в дoзi 14 мг/кг внyтpiшньoчepeвиннo (в/o) oдин paз нa дoбy, який poзчиняли в 0,2 мл вoди для iн'eкцiй. Щypaм тpeтьoÏ фупи пpoтягoм 28 днiв oднoчacнo з ввeдeнням oмeпpaзoлy opaльнo ввoди-ли мyльтипpoбioтик Cимбiтep (TOB фipмa «О. Д. Пpo-лicoк») в дoзi 0,14 мл/кг. «Cимбiтep® aцидoфiльний» кoнцeнтpoвaний - цe бioмaca живиx клггин ^мбю-зу 14 штaмiв пpoбioтичниx бa<тepiй. В cклaд oднie,i дoзи Cимбiтepy (10 мл) вxoдить кoнцeнтpoвaнa 6ío-мaca живиx клiтин ^мбюзу мiкpoopгaнiзмiв, KУO/ см3, нe мeншe: лa<тoбaцили i лa<тoкoки - 6,0x1010, пpoпioнoвoкиcлi бa<тepiÏ - 3,0x1010, бiфiдoбa<тepiÏ -1,0x1010, oцтoвoкиcлi бaктepiÏ - 1,0x106. Чepeз дeнь пicля ocтaнньoгo ввeдeння peчoвин щypiв пiццaвaли eвтaнaзiÏ тa видaляли шлyнoк.
Для вiзyaлiзaцiÏ фyнкцioнaльнoÏ peopгaнiзaцiÏ м^ кpocкoпiчниx ypaжeнь cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa (CO0) гicтoлoгiчний мaтepiaл шлyнкa фiкcyвaли у 10 % нeйтpaльнoмy фopмaлiнi i зaливaли у пapaфiн зa зaгaльнoпpийнятoю мeтoдикoю з фapбyвaнням
nAT0M0Pô0Ë0rm
гeмaтoкcилiнoм тa eoзинoм [В]. Oцiнювaння вyглe-вoдниx кoмпoнeнтiв глiкoпpoтeÏнoвиx peцeптopiв cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa пpoвoдили зa aнaлiзoм xiмiчнoгo cклaдy гicтoxiмiчнoÏ peaкцiÏ зa нaявнicтю чopнoгo (кopичнeвoгo) ocaдy y мicцяx зв'язyвaння лeктинy нaпiвкiлькicним мeтoдoм з викopиcтaнням лeктинiв piзнoÏ вyглeвoднoÏ cпeцифiчнocтi мiчeниx пepoкcидaзoю [9]. Ï^ip пaнeлi лeктинiв 6ув здм-cнeнний з ypaxyвaнням Ïxнix вiдмiннocтeй y вyглe-вoднiй cпeцифiчнocтi з мeтoю бiльш тoчнoÏ тa пoвнoÏ iдeнтифiкaцiÏ вyглeвoдниx кoмпoнeнтiв глiкoпpo-тeÏнoвиx peцeптopiв CO0: лeктин зapoдкiв nrne-ницi (WGA), cпeцифiчнoгo дo NAcDGlc^NAcNeu; лeктин нaciння apaxicy (PNA), cпeцифiчнoгo дo ßDGal-H^3DGalNAcDGal; лeктин кopи бузини чop-нoÏ (SNA), cпeцифiчнoгo дo Neu5Ac/2^6Gal; лeк-тин винoгpaднoгo cлимaкa ( HPA), cпeцифiчнoгo дo aNAcaDGal, лeктин нaciння pицини звичaйнoÏ (RCA), cпeцифiчнoгo дo ßDGal, лeктин нaciння coÏ (SBA), cпeцифiчний дo aNAcDGal, лeктин «зoлoтoгo дoщy звичaйнoгo» (LABA), cпeцифiчний дo aLFuc (НДЛ „Лeктинoтecт", м. Львiв) [1,2]. Пepeгляд пpeпаpатiв тa фoтoгpaфyвaння здiйcнювaли зa дoпoмoгoю м^ кpocкoпy Carl Zeiss. Iнтeнcивнicть лeктин-peцeптop-нoÏ peaкцiÏ oцiнювaли нaпiвкiлькicним мeтoдoм („-" - cлaбкa peaкцiя, „+"- пoмipнa peaкцiя, „++"- cильнa peaкцiя, „+++" -дyжe cильнa peaкцiя, „+-" гeтepo-гeннicть зв'язyвaння) зa зaбapвлeнням пpeпapaтiв. Aктивнicть пepoкcидaзи i, вiдпoвiднo, лoкaлiзaцiю зв'язyвaння лeктинy з глiкoкoн'югaтaми визнaчaли зa кopичнeвим пpoдyктoм oкиcлювaльнoÏ пoлiмepи-зaцiÏ 3,3' диaмiнoбeнзидинy.
Peзyльтaти дocлiджeнь тa ïx oбгoвopeння. Aнaлiз гicтoлoгiчнoÏ кapтини cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa пoкaзaв, щo y щypiв кoнтpoльнoÏ гpyпи, яким пpoтягoм 28 дiб ввoдили вoдy для Ы'екцм, cлизo-вa oбoлoнкa мaлa нopмaльнy гicтoлoгiчнy бyдoвy (pиc. 1a).
Пюля 2В дeннoгo ввeдeння oмeпpaзoлy y ^и-зoвiй oбoлoнцi шлyнкa cпocтepiгaлacя дecквaмa-цiя eпiтeлiю cлизoвoÏ oбoлoнки, y oкpeмиx зaлoзax глaндyлoцити пiдцaвaлиcь дecтpyктивним змiнaм. У пiдcлизoвiй ocнoвi i влacнiй плacтинцi cлизoвoÏ o6o-лoнки вeликa кiлькicть кJliтин з нaявнicтю oкcифiлiй y цитoплaзмi. Cпocтepiгaлacь вoгнищeвa виpaжeнa лiмфoÏднoкJliтиннa iнфiльтpaцiя cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa iз зaмiщeнням зaлoз, iнфiльтpaцiя влacнoÏ плacтинки i пiдcлизoвoÏ ocнoви лeйкoцитaми. 3a-знaвaв змЫ внyтpiшнiй map м'язoвoÏ oбoлoнки-мic-цями poзшapyвaння (pиc. 1б).
У Tpym щypiв, яким пpoтягoм 2В дыв paзoм з oмeпpaзoлoм ввoдили Cимбiтep y cлизoвiй oбoлoн-цi шлунга зникaли явищa дecтpyктивнoгo xapaicre-py. Cyдини cлизoвoÏ oбoлoнки були poзшиpeнi, зa-пoвнeнi фopмeними eлeмeнтaми кpoвi (pиc. 1в). У пiдcлизoвiй ocнoвi змeншyвaлacь кiлькicть кJliтин з oкcифiльним кoмпoнeнтoм y цитoплaзмi. Cтpyктypa м'язoвoÏ oбoлoнки бyлa oднopiднa, бeз пaтoлoгiчниx змiн.
В пiдтвepджeння oтpимaниx peзyльтaтiв мop-фoлoгiчниx дocлiджeнь бyлo пpoвeдeнo лeктинoвe гicтoxiмiчнe дocлiджeння cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa щypiв, якe пoкaзaлo нacтyпнi ocoбливocтi цитото-пoгpaфiÏ peцeптopiв викopиcтaниx лeктинiв (тaбл.). Taк y твapин кoнтpoльнoÏ гpyпи y cтpyктypниx гам-пoнeнтax cлизoвoÏ oбoлoнки бiльшicть викopиc-тaниx нaми лeктинiв тaкиx як HPA, WGA, SNA, RCA зв'язyвaлиcя з кëiтинaми eпiтeлiaльнoÏ плacтинки ocoбливo ÏÏ aпiкaльнoÏ пoвepxнi, щo вгазуе нa пpи-cyтнicть вyглeвoдниx дeтepмiнaнт y виглядi NAcDGal, NAcDGle, Neu5Ac/2^ 6 Gal, ßDGal>ßDGalNAc, щo вxoдять дo cкJlaдy cлизoвo-бiкapбoнaтнoгo бap'epy тa зaбeзпeчyють пpoцecи йoгo в'язкicтi i пpoник-нocтi, a тaкoж пpoцecи мiжкJliтиннoÏ взaeмoдiÏ. Cлiд звepнyти yвaгy, щo кoмпoнeнти cлизoвo-бiкapбo-нaтнoгo бap'epy cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa твapин
Pиc. 1a. Кoнтpoльнa гpyпa. Cлизoвa oбoлoнкa фyндaльнoгo вiддiлy шлyнкa нopмaльнoï Ncto-лoгiчнoï бyдoви. Зaбapвлeння гeмaтoкcилiнoм-eoзинoм. Зб.120.
Pиc. 1б. Cлизoвa oбoлoнкa фyндaль-нoгo вiддiлy шлyнкa пюля 28-дeннoгo ввeдeння oмeпpaзoлa. (1-дecквaмaцiя eпiтeлiю, 2-дecтpyктивнi змiни г^н-дyлoцитiв, 3- poзшapyвaння м'язeвoï oбoлoнки). Зaбapвлeння гeмaтoкcилiн-eoзинoм. Зб. 120.
Pиc. 1в. Cлизoвa oбoлoнкa фун-дaльнoгo вiддiлy шлyнкa щypiв пicля 28-дeннoгo ввeдeння oмe-пpaзoлa з Cимбiтepoм О^удини зaпoвнeнi фopмeними eлeмeнтaми кpoвi). Зaбapвлeння гeмaтoкcилiн-eoзинoм.Зб.120.
ПATOMOPФOЛOГIЯ
кoнтpoль (PNA)
oмeпpaзoл (PNA)
oмeпpaзoл+Cимбiтep (PNA)
m
-Ж m™
« ■ :
■ il ш
- á's дач
' II f..
и
. ! í Ш/»
• ' ^ Щ
ш %
1ИИЗУ
кoнтpoль (WGA)
oмeпpaзoл (WGA)
oмeпpaзoл+Cимбiтep (WGA)
Pиc. 2. Miкpoфoтoгpaфiïcлизoвoï oбoлoнки шлункэ ùypiâ пpи зaбapвлeннi: PNA - лeктинaми нaciння apaxicy PNA, (cпeцифiчнoгo дo ЯDGaI-H>3DGaINAcDGaI), WGA - лвктинвми зapoдкy пшeницi WGA (cпeцифiчнoгo дo NAcDGIe)
кoнтpoльнoÏ гpyпи були пoзбaвлeнi aLFuc i ßDGal. У зaлoзax шлyнкa бiльшicть лeктинiв пpoявляли ^o-piднeнicть дo пapieтaльниx клiтин у зaлeжнocтi вiд Ïx лoкaлiзaцiÏ. Taк y дiлянцi днa зaлoз y пapieтaльниx клiтинax вiдмiчeнa eкcпpeciя peцeптopiв лe<тинiв ви-нoгpaднoгo cлимaкa (HPA) тa лe<тин зapoдкiв пию-ниц (WGA) (pиc. 2), y пpoцeci фopмyвaння ceкpeтy дeщo змiнюeтьcя Ïx вyглeвoдний пpoфiль.
Пpи ввeдeннi oмeпpaзoлy yпpoдoвж 28 днiв (тэ6л.) ми кoнcтaтyвaли y cклaдi cлизoвo-бiкapбo-нaтнoгo бap'epy пoявy ßDGal лe<тинy apaxicy (PNA) (тэ6л.), щo cвiдчить пpo нeзнaчнi мapкyвaння cia-лoглiкaнiв тa пopyшeння пpoцeciв кiнцeвoгo гл^л^ зyвaння вyглeвoдoвмiщyючиx бioпoлiмepiв, a caмe вдоутнють мapкyвaння NAcDGal ciaлoвoю киcлo-тою [9]. Haтoмicть гoлoвнi клiтини зaлoз змiнювa-ли cвiй вyглeвoдний пpoфiль, якщo y кoнтpoлi цi кгмтини були apea<тивнi дo лeктинiв aбo пpoявляли гoмoгeннe зв'язyвaння, тo пpи ввeдeннi oмeпpaзo-лу ми кoнcтaтyвaли eкcпpeciю peцeптopiв лeктинiв HPA,SBA,WGA нa пoвepxнi мeмбpaн тa у внyтpiш-ньoклiтинниx кoмпapтмeнтax циx клiтин, щo вкaзye нa змiнy xiмiчнoгo ^гаду ceкpeтy, тa пpoцecи йoгo фopмyвaння. Xapa<тepнo, щo у ядpax як гoлoвниx, тaк i пapieтaльниx кттин з'являютьcя peцeптopи ßDGal-cпeцифiчнoгo лe<тинy PNA ^и^ 2). Myкoци-ти лoкaлiзoвaнi ближчe дo днa шлyнкoвиx ямoк пpo-являли aфiннicть дo NAcDGle cпeцифiчнoгo лeктинy зapoдкy пшeницi (WGA). Oтжe, ввeдeння oмeпpaзo-лу пpизвoдить дo мoжливoгo "пepeпpoгpaмyвaння"
cинтeзy вyглeвoдниx кoмпoнeнтiв пoвepxнi клiтин тa внyтpiшньoклiтинниx кoмпapтмeнтiв, дo змiни xa-pauepy ceкpeтy циx клiтин, кoнcиcтeнцiÏ cлизoвo-бiкapбoнaтнoгo бap'epy тa aдгeзивниx мiжклiтинниx взaeмoзв'язкiв.
Biдoмo, щo глiкoпoлiмepи ßDGal у нopмaльниx i зpiлиx клiтинax вiдcyтнi aбo Ïx вмicт нeзнaчний. Глiкo-пoлiмepи, щo зв'язують лe<тин apaxicy (PNA) бiльш виявляютьcя y eмбpioнaльниx aбo злoякicнoтpaнc-фopмoвaниx клiтинax здaтниx дo мeтacтaзyвaння [9]. Пoявa peцeптopiв лe<тинy PNA y cклaдi eпiтe-лiaльнo-cлизoвoгo бap'epy тa ядpax глaндyлoцитiв вкaзye нa знижeння piвня Ïx дифepeнцiaцiÏ [9], тoбтo нaшi дaнi cвiдчaть, щo 28 дeннe пpигнiчeння ceкpeцiÏ coлянoÏ киcлoти oмeпpaзoлoм пpизвoдилo дo зни-жeння piвня дифepeнцiaцiÏ гoлoвниx тa пapieтaльниx кттин.
Oдepжaнi дaнi лe<тинoгicтoxiмiчниx дocлiджeнь дoпoвнюють тa пiдтвepджyють peзyльтaти пoпepe-днix нaшиx дocлiджeнь, дe бyлo пoкaзaнo зpocтaння piвня кoмпoнeнтiв шлyнкoвoгo ^изу, внacлiдoк дe-зopгaнiзaцiÏ cпoлyчнoткaнинниx ^py^ryp cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa, oбyмoвлeнy тpивaлим ввeдeн-ням oмeпpaзoлy [13]. Пpoтe, oднoчacнe ввeдeння з oмeпpaзoлoм мyльтипpoбioтикa Cимбiтepy пpo-тягoм 28 дiб зaпoбiгaлo пiдвищeнoмy кaтaбoлiзмy кoлaгeнoвиx тa нeкoлaгeнoвиx бiлкiв cпoлyчнoÏ ткaнини cлизoвoÏ oбoлoнки шлyнкa тa пoвepнeння пoкaзникiв вiльнoгo oкcипpoлiнy, фyкoзи тa ге^у-poнoвиx киcлoт дo нopми [4].
nATOMOPôOËOrm
Taблиця
Цитoтoпoгpaфiя peцeптopiв лeктинiв y cтpyктypниx кoмпoнeнтax шлyнкa щypiв
Eкcпepимeнтaльнi гpyпи ^py^prn кoмпoнeнти CO0 Лeктини та Ïx вyглeвoднa cпeцифiчнicтьГ~■^^ EП Koнтpoль 3aлoзи EП Oмeпpaзoл 3aлoзи Oivie EП пpaзoл+Cимбiтep 3aлoзи
гк пк м e гк пк м e гк пк м e
HPA-лeктин винoгpaднoгo олимака, (NAcaDGal) ++ + ++ ++ ++ +- +++ +++ +++ ++
PNA-лeктин нaоiння apaxicy (ЯDGaI) ГЗ +++ + + + ++
LABA-лeктин «зoлoтoгo дoщy звичaйнoгo»,(aLFuc) ГЗ ГЗ ++ ++
WGA-лeктин заpoдкiв пшeницi, (NAcDGIe, NeuNAe) + ++ +++ +++ ++ +++ +++ ++ +++ +
SNA-лeктин кopи бузини чopнoÏ, (Neu5Ac/2^ 6 Gal) ++ ++ + +++ + +++ +
SBA-лeктин нaоiння coÏ, (NAcDGal) ГЗ + +++ + ГЗ
RCA-лeктин нaоiння pицини звичайн^, опeцифiчний дo (ßDGaI>ßDGaINAc) ++ ++ ++ +-++ + + ++ ++ ++ ++
Пpимiткa: en- eпiтeлiaльнa плacтинкa, гк- голсвы клiтини, пк-пapieтaльнi клiтини, e-eндoкpинoцити, м- мукс>цити, Г3-гoмoгeннe зв'язyвaння, CO0- cлизoвa сбслснкa шлyнкa, (+++ iнтeнcивнe зв'язyвaння (eкcnpeciя), ++ nсмipнe зв'язyвaння, + ^aöi<e зв'язyвaння, -вiдcyтнicть зв'язyвaння,+- гeтepсгeннicть зв'язyвaння.
Taкoж лeктинoгicтoxiмiчнi дocлiджeння в гpyпi щypiв, яким пpoтягoм 2В днiв ввoдили oмeпpa-зoл з Cимбiтepoм пpoдeмoнcтpyвaли ocoбливicть eкcпpeciÏ peцeптopiв лeктинiв y твapин ^eÏ гpyпи (тaбл., pиc. 2). Ta! виявлeнa бiльш iнтeнcивнa e^-пpeciя NAcaDGal cпeцифiчнoгo лeктинy винoгpaднo-ra cлимaкa HPA тa NAcDGIe - cпeцифiчнoгo лeктинy зapoдкiв пшeницi (WGA) нa aпiкaльнiй пoвepxнi i ци-тoплaзмi eпiтeлioцитiв cлизoвoÏ oбoлoнки тa y erao-кpинoцитax зaлoз. Знижyвaлacь aфiннicть лeктинy нaciння apaxicy (PNA) дo eпiтeлioцитiв cлизoвoÏ o6o-лoнки гoлoвниx i пapieтaльниx глaндyлoцитiв, тобто пaтepн з'язyвaння цьoгo лeктинy був нaближeний дo кoнтpoльнoÏ гpyпи. Ha пoвepxнi eпiтeлioцитiв али-зoвoÏ oбoлoнки i y ядpax гoлoвниx eкзoкpинoцитiв з'являютьcя peцeптopи aLFuc- cпeцифiчнoгo лeк-тину «зoлoтoгo дoщy звичайнoгo» (LABA). Вщбува-eтьcя iнтeнcивнa ciaлiзaцiя пoвepxнi eпiтeлioцитiв i пapieтaльниx eкзoкpинoцитiв i чacткoвo гoлoвниx eкзoкpинoцитiв з лoкaлiзaцieю y дiлянцi дна зaлoз. Peцeптopи лeктинy нaciння pицини звичaйнoÏ (RCA) зaдoкyмeнтoвaнi нами на aпiкaльнiй мeмбpaнi пo-вepxнi eпiтeлioцитiв, тoбтo y cu^i eпiтeлiaльнo-cлизoвoгo бap'epy y цитoплaзмi гoлoвниx eкзoкpи-нoцитiв дна зaлoз, y пapieтaльниx кJliтинax вивiдниx пpoтoк зaлoз та y cu^i шийкoвиx мyкoцитiв oкpe-миx пoлiв зaлoз.
Ha фoнi дecтpyктивниx змш зaлoз, ми ган-cтaтyвaли цитoтoпoгpaфiю peцeптopiв лeктинiв
y cтpyктypниx кoмпoнeнтax нaближeнy дo твapин кoнтpoльнoÏ фупи. Ùo мoжe зaбecпeчyвaти нop-мaлiзaцiю xiмiчнoгo cклaдy cлизoвo-бiкapбoнaтнoгo бap'epy з пoявoю y йoгo cкJlaдi aLFuc лeктинy <^o-лoтoгo дoщy звичайнoгo». Пpи бaгaтьox зaxвopю-вaнняx cпocтepiгaeтьcя збiльшeння фyкoзилювaння фiзioлoгiчнo вaжливиx глiкoпoлiмepiв. Taк вiдмiчeнa виcoкocтaтиcтичнa дocтoвipнa кopeляцiя мiж c^e-нeм фyкoзилювaння a-aнтитpипcинy та тpaнcфepи-ну пpи гeпaтoцeлюляpнiй кapцинoмi [2].
Bиcнoвки.
1. 28-дeннe пpигнiчeння ceкpeцiÏ coлянoÏ rnc-лoти oмeпpaзoлoм пpизвoдилo дo мopфoлoгiчниx змш в cлизoвiй oбoлoнцi шлунка: знижeння piвня дифepeнцiaцiÏ гoлoвниx та пapieтaльниx клiтин, внacлiдoк чoгo змiнювaвcя xiмiчний cклaд ceкpeтy гoлoвниx кJliтин.
2. Myльтипpoбioтик «Cимбiтep® aцидoфiльний» кoнцeнтpoвaний зaпoбiгaв cтpyктypнo-фyнкцioнaль-ним змiнaм в cлизoвiй oбoлoнцi шлунка в yмoвax тpивaлoÏ гiпoaциднocтi шлyнкoвoгo coкy та зaбeз-пeчyвaв нopмaлiзaцiю йoгo xiмiчнoгo вкладу.
Пepcпeктиви пoдaльшиx дocлiджeнь. ^p-cпeктивними е кJliнiчнi дocлiджeння eфeктивнocтi зacтocyвaння мyльтипpoбioтикa «Cимбiтepy® аци-дoфiльнoгo» кoнцeнтpoвaнoгo y пpoфiлaктицi crpy^ тypнo-фyнкцioнaльниx змш в cлизoвiй oбoлoнцi шлунка, викликaниx тpивaлoю гiпoaциднicтю.
Лiтepaтypa
1. Aнтoнюк В. A. Koнъюгиpoвaниe лeктинoв c пepoкcидaзoй xpeнa: ycoвepшeнcтвoвaниe мeтoдики / В. A. Aнтoнюк, A. M. Ящeнкo // Kлиничecкaя лaбopaтopнaя диaгнocтикa. - 1996. - № 4. - C. 102-106.
2. Днтонюк В. O. Лeктини та îxrn джepeлa / В. O. Днтонюк. - Л.: Kвapц, 2005. - 565 c.
3. Берегова Т. В. Мультипробютик «Симбтер» як 3aci6 профтактиктики структурно-морфолопчних 3MiH в шлунку, що виникають на фонi зниженоУ киcлотноcтi шлункового соку / Т. В. Берегова, О. I. Цирюк // Збiрник праць Сaтелiтного cимпозiуму «Сучacнi аспекти застосування пробютиюв в педiaтрii» - 2008. - С. 52-57.
4. Берегова Т. В. Зaкономiрноcтi функцюнування слизового бар'еру проксимального вiддiлу травного тракту в умовах тривало'|' ппоацидност та ii корекцiя / Т. В. Берегова, К. С. Непорада, О. I. Цирюк, А. М. Манько, Д. С. Янковський // Доповщ НАУ. -2010. - №8. - С. 163-166.
5. Гурленко Т. М., Змiни функцiонувaння транспортно' системи епiтелiю та морфологiчних показниюв слизово' обо-лонки ободово' кишки щурiв з гiпергacтринемieю рiзноi тривалост / О. К. Воронiнa, В. М. Грищук, Г. М. Толстанова, М. Е. Дзержинський, Т. В. Берегова // Фiзiологiчний журнал. - 2007. - Т. 53, № 3. - С. 23-30.
6. Золотаревский В. Б. Лектиногистохимическая характеристика эпителия при кишечной метаплазии, полипах и раке желудка / А. Г. Уфимцева // Арх. Пат. - 1991. - Т. 53, № 10. - C. 39-44.
7. Игнатов В. В. Углеводузнающие белки - лектины / В. В. Игнатов // Соросовский образовательный журнал. - 1997. -№ 2. - С. 14-20.
8. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лилли. - К.: Мир, 1969. - 648 с.
9. Луцик А. Д. Лектины в гистохимии / Луцик А. Д., Детюк Е. С., Луцик М. Д. ; Под ред. Панасюка Е. Н. - Львов: Выща шк. Изд-во при Львов. ун-те., 1989. - 144 с.
10. Мальцев В. И. Этическая оценка методик проведения исследований / В. И. Мальцев, Д. Ю. Белоусов // Еженед. Аптека. - 2001. - № 34. - С. 35.
11. Цирюк О. I. Вплив омепразол-викликано' ппергастринемп на базальну шлункову секрецш у щурiв / О. I. Цирюк, Т. В. Берегова // Вюник проблем бюлогп i медицини. - 2007. - Вип. 3. - С. 38-43.
12. Цирюк О. I. Вплив мультипробютика «Симбтер ацидофильний» концентрований на стан мiкроекологii шлунка у щурiв / О. I. Цирюк, Т. В. Берегова // Проблеми еколопчно[ та медично( генетики i кшшчно! iмунологii. - 2007. - B. 3-4, № 7879. - С. 62-70.
13. Цирюк О. I. Змши глкопротещних та протеоглканних компонента шлункового слизу у щурiв за умов тривало( ппоацидност / О. I. Цирюк, В. М. Кухарський, К. С. Непорада // Вюник Кшвського нацюнального ушверситету iменi Тараса Шевченка - 2010 - №13- С. 23-25.
14. Ященко А. М. Селективнють зв'язування фукозоcпецифiчних лектишв iз структурними компонентами деяких оргашв / А. М. Ященко, В. В. Дудок, О. В. Смолькова // Експериментальна та кшшчна фiзiологiя та бiохiмiя. - 2003. - №2. -С. 37-40.
15. ТБугуик О. Effect of multiprobiotic "Symbiter® acidophilic"concentrated on morphofunctional changes in stomach evoked by 28-days introduction of omeprazole/ O. Тsyryuk, T. Beregova // Journal of Pre-Clinical and Clinical Research. - 2010. -Vol. 4, № 1. - P. 52-56.
16. Wilder-Smith C. H Bactericidal factors in gastric juice / G. Spiring, T. Krech, H. S. Merki // Eur. J. of Gastroenterology and Hepatology. - 1992. Vol. 4. - P. 885-891.
УДК 616. 33-002. 27
М0РФ0Л0Г1ЧНИЙ ТА ЛЕКТИН0Г1СТ0Х1М1ЧНИЙ АНАЛ13 СЛИЗОВОТ ОБОЛОНКИ ШЛУНКА П1СЛЯ 28-ДЕННОТ Г1П0АЦИДН0СТ1
Цирюк О. I.
Резюме. В робот проведено морфолопчний та лектиногicтохiмiчний aнaлiз слизово! оболонки шлунка пюля 28-денного пригычення секреци соляно1 кислоти в шлунку щурiв блокатором Н+-К+-АТФази омепразо-лом. Показано, що 28-денне пригычення cекрецiI соляно1 кислоти омепразолом призводило до зниження рiвня диференцiaцiI головних та пaрieтaльних клiтин, внacлiдок чого змшювався хiмiчний склад секрету го-ловних кJliтин. Використання мультипробiотикa «Симбггер® aцидофiльний» зaпобiгaло деструктивним змiнaм в слизовм оболонцi шлунка та порушенню процеciв глiколiзувaння до яких призводить тривале пригычення шлунково1 cекрецiI омепразолом.
Ключов1 слова: слизово1 оболонки шлунка, лектинова гicтохiмiя, омепразол, мультипробiотик «Симбтер® aцидофiльний».
УДК 616. 33-002. 27
Морфологический и лектиногистохимический анализ слизистой оболочки желудка после 28-дневной гипоацидности
Цирюк Е. И.
Резюме. В работе проведен морфологический и лектиногистохимичних анализ слизистой оболочки желудка после 28 дней угнетения секреции соляной кислоты в желудке крыс блокатором Н+-К+-АТФази омепразолом. Показано, что 28-дневное угнетение секреции соляной кислоты омепразолом приводило к снижению уровня дифференциации главных и париетальных клеток, в результате чего менялся химический состав секрета главных клеток. Использование мультипробиотика «Симбитер ® ацидофильный» предотвращало деструктивные изменения в слизистой оболочке желудка и нарушение процессов гликолизирова-ния к которым приводит длительное угнетение желудочной секреции омепразолом.
Ключевые слова: слизистая оболочка желудка, лектиновая гистохимия, омепразол, мультипробиотик «Симбитер® ацидофильный».
В1сник проблем бюлош i медицини -2014 - Вип. 2, Том 3 (109)
299
UDC 616. 33-002. 27
Morphological and Histochemical Lectin Analysis of Gastric Mucosa after 28-days of Hypoacidity
Tsyryuk O. I
Abstract. In our days lectins are widely used for pathologic study of tumors, because most tumor-associated antigens are carbohydrate containing biopolymers and belong to the glycoprotein. Lectins are characterized by specificity of binding to the structural components of normal gastric mucosa and the surface of transformed cells. Previously our studies have shown that 28-day inhibition of gastric acid secretion in the stomach of rats by H+-K+-ATPase inhibitor omeprazole leads to structural and functional changes in the stomach, accompanied by dysbiosis, caused by prolonged decrease of the hydrochloric acid secretion. Hydrochloric acid plays also important role in the prevention of stomach bacterial colonization. It protects organism from microorganisms that enter into stomach with food. Bacterial overgrowth in proximal part of digestive tract is also additional risk of malignization in stomach. The elimination of disbyosis using probiotics are an actual way of prevention of pathological changes in the stomach.
In this connection, our aim was to study effect of multiprobiotic "Symbiter® acidophilic" on morphological and histochemical lectin changes in stomach under the conditions of long-term inhibition of gastric acid secretion by omeprazole.
The rats were divided into 3 groups. The animals of the first (control) group were injected with 0. 2 ml of water (intraperitoneally (i. p.)) during 28 days once a day. The rats of the next two groups were injected with omeprazole («Sigma», USA) (14 mg/kg, i. p., once a day) during 28 days. Omeprazole was solved in 0. 2 of ml water for injections. In addition the animals of the third group were treated with multiprobiotic "Symbiter® acidophilic concentrated" simultaneously with omeprazole (OD Prolisok Ltd) in dose 0. 14 ml/kg which was solved in 0. 2 ml of water for injections. "Symbiter® acidophilic" is concentrated fluid biomass consisted of 14 symbiotic bacteria strains. 1 ml of "Symbiter® acidophilic" contains no less than 6. 0x1010 CFU of Lactobacillus and Lactococcus, 3. 0x1010 CFU of Propionic bacterium, 1. 0x1010 CFU of Bifidobacterium, 1. 0x106 CFU of Acetic bacterium.
One day after the last injection the rats were sacrificed and their gastric mucosa was removed. It was performed morphological and histochemical lectin analysis of gastric mucosa.
Analysis of the histology of the gastric mucosa of the control group of rats, injected with water for 28 days, showed that the mucous structure was normal. However, after 28 days of omeprazole administration it was observed desquamation of the epithelium in gastric mucosa and destructive changes of cells of some glands. In the gastric mucosa in the group of rats that were administered within 28 days of omeprazole together with "Symbiter® acidophilic" phenomenon of destruction disappeared. The structure of the muscle layer was common, without pathological changes.
Lectin histochemical study of gastric mucosa showed disruption of terminal glycosylation of carbohydrate containing biopolymers and change of the carbohydrate profile of main gland cells in rats after 28 days of administration of omeprazole.
After simultaneous administration of omeprazole with "Symbiter® acidophilic" we have got cytotopography of lectin receptors close to the animals in the control group.
So, it was concluded that multiprobiotic "Symbiter® acidophilic" concentrated prevented destructive changes in the gastric mucosa and interrupt of glycosylation processes which were caused by prolonged inhibition of gastric secretion by inhibitor of H +-K +-ATPase omeprazole.
Key words: gastric mucosa, lectin histochemistry, omeprazole, multiprobiotic "Symbiter® acidophilic".
Рецензент - проф. Старченко 1.1.
Стаття надшшла 25. 03. 2014 p.
300
BicHMK проблем бюлош i медицини - 2014 - Вип. 2, Том 3 (109)
