CC BY
27
Морфологические изменения слизистой оболочки ободочной кишки и состав просветной микрофлоры у орхиэктомированных половозрелых самцов крыс Вистар
Е.В. Андреева1, Т.И. Хомякова1, О.В. Макарова1, 2
ФГБНУ«Научно-исследовательский институт морфологии человека»; Россия, 117418, Москва, ул. Цюрупы, 3; 2ФГБОУВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова»; Россия, 119991, Москва, Ленинские горы, 1
Контакты: Елена Владимировна Андреева [email protected]
Гипоандрогенемия имеет место как при возрастных изменениях в организме мужчин, так и при ряде патологических состояний и может проявляться как совокупность симптомов, характерных для заболеваний желудочно-кишечного тракта. Общеизвестна роль микробиома в поддержании состояния организма в целом, однако роль микрофлоры и структурных компонентов толстой кишки в развитии синдромов, связанных со снижением уровня андрогенов в организме, не изучена. Целью настоящего исследования было изучение влияния экспериментальной гипоандрогенемии на структуру слизистой оболочки ободочной кишки, а также на некоторые компоненты микрофлоры толстой кишки.
Ключевые слова: крысы Вистар, гипоандрогенемия, микробиом, энтерохромаффинные клетки, серотонин
DOI: 10.17650/2070-9781-2015-16-4-35-39
Morphological changes of a colon mucus and the composition of luminal microbial population at orchiectomy of mature males Wistar rats
E. V. Andreeva1, T.I. Khomyakova1, O. V. Makarova1,2
1Research Institute of Human Morphology; 3 Tsyurupy St., Moscow, 117418, Russia; 2M.V. Lomonosov Moscow State University; 1 Leninskie Gory, Moscow, 119991, Russia
Hypoandrogenaemia can take place in men body at aging and different pathologies. It can appear as the complex of gastrointestinal diseases symptoms. Its common knowledge that the intestinal structure and function as well as microbiome changes are extremely important for body homeostasis, but their role in the development of hypoandrogenaemia is not described. A argentaffin cells produced serotonin acts to the structure andfunction of the colon and its microbiome and its production acts to the blood serum androgen level. The aim of the study was the investigation of the influence of the experimentally induced hypoandrogenaemia to the colon mucus structure and some components of its luminal population.
Key words: Wistar rats, hypoandrogenaemia, microbiome, argentaffin cells, serotonin
Введение
В возрасте 30—40 лет у мужчин отмечается прогрессирующее снижение уровня тестостерона в сыворотке крови на 1—2 % в год. По данным клинических исследований, в 80-летнем возрасте содержание тестостерона снижается на 20—40 %. Это состояние получило название «возрастной дефицит андрогенов» [1]. Недостаточность секреции тестостерона в возрасте 40—50 лет отмечается у 7 % мужчин, после 60 лет — у 20 %, после 70 лет — у 30 %, после 80 лет — у 50 % [2]. В возрасте 50—60 лет дефицит свободного тестостерона выявляется у 15,9 %, а дефицит общего тестостерона — у 22,1 % мужчин [3]. Для описания синдрома возрастного дефицита андрогенов в 1994 г. Австрийским
обществом урологов был предложен термин «частичный андрогенодефицит пожилых мужчин», или «синдром PADAM» (partial androgen deficiency in aging male) [4]. При PADAM наблюдается нарушение механизмов регуляции в системе гонады—гипофиз—гипоталамус [1], а также увеличивается содержание 5а-дигидро-тестостерона и 17р-эстрадиола [5, 6]. Клиническая картина гипогонадизма крайне вариабельна. Организм реагирует на андрогенный дефицит снижением либидо, эректильной дисфункцией, уменьшением полового оволосения, массы яичек и мышечной массы, увеличением количества жировой ткани, остеопорозом, снижением эластичности и толщины кожи. Со стороны нервно-психической сферы отмечаются повышенная
Е га Е
Е га Е
раздражительность, снижение способности к концентрации внимания, ослабление памяти и когнитивных функций, депрессия, бессонница. С дефицитом тестостерона может быть связан патогенез ряда соматических, онкологических и метаболических заболеваний. При андрогенной недостаточности увеличивается частота развития таких заболеваний желудочно-кишечного тракта, как гастрит, рак поджелудочной железы и толстой кишки [7]. Колоректальный рак является распространенным онкологическим заболеванием. В течение последнего 10-летия в России по статистическим данным отмечается неуклонный рост числа новых случаев заболевания. В структуре онкологических заболеваний колоректальный рак занимает у мужчин 3-е место после рака легкого и предстательной железы. Чаще (в 65—70 % наблюдений) он развивается у мужчин старше 60 лет. В динамике показателей заболеваемости колоректальным раком у мужчин в 2001—2011 гг. преобладает локализация опухолевого процесса в ободочной кишке [8]. Установлено, что развитие рака толстой кишки связано с уровнем половых гормонов: так, низкий уровень тестостерона обнаруживается при раке ободочной кишки в 100 % наблюдений в опухолевой ткани и в 50 % — в неповрежденной ткани независимо от возраста и пола пациентов [9]. Данные о влиянии андрогенов на гистофизиоло-гическое состояние органов нерепродуктивной системы, в частности желудочно-кишечного тракта, в литературе отсутствуют.
Известно, что развитие воспалительных заболеваний кишечника связано с нарушениями микробиома желудочно-кишечного тракта [10, 11], метаболическим синдромом [12], остеопорозом [13], нарушением функционирования иммунной системы [14]. Однако связь морфологических изменений толстой кишки и нарушений состава ее микрофлоры при развитии андро-генного дефицита не изучена.
Ранее нами было показано, что при гиперандроге-немии изменяются процессы дифференцировки эпителиальных клеток тонкой кишки с увеличением среди них доли клеток ЕС1-1, продуцирующих серотонин [15], играющий важную роль в регуляции секреторной активности и моторики толстой кишки. Известно, что 90 % эндогенного серотонина производят ЕС1-клетки, составляющие наибольшую популяцию среди эндо-криноцитов желудочно-кишечного тракта. Важная роль в обмене серотонина отводится также бактериям-симбионтам толстой кишки (например, Escherichia coli), которые способны декарбоксилировать триптофан с образованием серотонина [16].
В связи с этим целью настоящего исследования было изучение влияния гипоандрогенемии на структуру слизистой оболочки ободочной кишки и состав прос-ветной микрофлоры толстой кишки у орхиэктомиро-ванных самцов крыс Вистар.
Материалы и методы
В эксперименте использовали 20 половозрелых самцов крыс Вистар (по 10 животных в опытной и контрольной группах) массой тела 220—240 г. При работе с экспериментальными животными руководствовались приказом Минздрава СССР № 775 от 12.08.1977. Андрогенную недостаточность моделировали путем проведения орхиэктомии. Операцию выполняли под эфирным наркозом. Животных выводили из эксперимента на 14-е и 21-е сутки после кастрации. Для определения уровня нейромедиаторов, общего тестостерона и эндотоксина получали кровь из шейных вен наркотизированных золетилом животных. Содержание общего тестостерона измеряли в сыворотке крови методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью тест-систем фирмы Adaltis. Анализ содержания серотонина и его основного метаболита — 5-оксииндолуксусной кислоты (5-ОИУК) в плазме крови проводили с помощью хрома-тографической системы с насосом PM-80 (BAS, США) с электрохимическим детектором LC-4B (BAS, США).
Для изучения просветной микрофлоры выделенное стерильно содержимое прямой кишки разводили физиологическим раствором в соотношении 1:9 (по массе), гомогенизировали, 40 мин инкубировали при комнатной температуре с 3-кратным перемешиванием через каждые 10 мин. После осаждения в течение последних 10 мин надсадочную жидкость использовали для посева на селективные среды (HiMedia, Индия) методом серийных разведений. Оценивали содержание лактозоферментирующих и лактозонеферменти-рующих энтеробактерий (посев на агар Эндо), лакто-бактерий (лактобак-агар) и энтерококков (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) (посев на энтерококк-агар) в пересчете на 1 г содержимого просвета прямой кишки. Косвенным методом оценки состояния микро-биома и его взаимоотношения с организмом хозяина является уровень эндотоксина, который определяли в сыворотке крови при помощи хромогенного LAL-теста (Hycult Biotech, HIT302, Нидерланды).
Объектом морфологического исследования служила ободочная кишка. Материал фиксировали в жидкости Буэна, заливали в парафиновые блоки. Получали гистологические срезы толщиной 10 мкм, окрашивали их гематоксилином и эозином. Для выявления ЕС1-клеток в качестве первичных антител применяли коммерческие моноклональные антитела к серотонину (5НТ-Н209, Abcam, ab16007). Подсчет клеток осуществляли на участке слизистой оболочки длиной 3,5 мм на продольно ориентированных срезах под световым микроскопом Leica DM 2500 с программным обеспечением ImageScope Color.
Статистическую обработку данных проводили в программе Statistica 7.0. Достоверность различий между показателями определяли с использованием параметрического t-критерия Стьюдента и непараметрического U-критерия Манна—Уитни. Для значений измеряемых
4
показателей вычисляли медиану и интерквартильныи размах (Ме; 25—75 %) или среднее арифметическое и стандартную ошибку среднего (М ± т). Различия считали статистически значимыми приp < 0,05.
Результаты
На 14-е сутки после орхиэктомии по сравнению с контрольной группой уровень тестостерона в сыворотке крови снизился в 200 раз, в плазме крови уровень 5-ОИУК уменьшился в 4 раза, уровень серотони-на снизился незначительно (табл. 1). Глубина крипт ободочной кишки по сравнению с контрольной группой увеличилась с 0,15 до 0,17 мм. В эпителиальной выстилке достоверно уменьшилась объемная доля бокаловидных клеток (в 1,6 раза), увеличилось количество митозов (в 2 раза) и серотониноцитов (в 1,5 раза). В составе клеток собственной пластинки слизистой оболочки повысился показатель относительного содержания сегментоядерных лейкоцитов (табл. 2).
На 21-е сутки уровень тестостерона сохранялся стабильно низким, а значения метаболита серотонина 5-ОИУК были сопоставимы с показателями контрольной группы. Уровень серотонина статистически зна-
Таблица 1. Содержание общего тестостерона, серотонина и 5-ОИУК в крови крыс контрольной группы и в разные сроки после орхиэктомии (M ± m)
Группа Тестостерон, нг/мл 5-ОИУК, нг/мл Серотонин, нг/мл
Контрольная 2,01 ± 0,55 14,25 ± 1,62 315,82 ± 40,42
Орхиэктомия, 14-е сутки 0,0095 ± 0,0095* 3,52 ± 0,62* 194,05 ± 28,36
Орхиэктомия, 21-е сутки 0,011 ± 0,01* 39,58 ± 13,72 234,00 ± 127,67
Примечание. Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой: *р < 0,025.
чимо не изменился (см. табл. 1) по сравнению с группой контроля. После орхиэктомии глубина крипт увеличилась с 0,15 до 0,18 мм. В эпителиальной выстилке отмечено уменьшение объемной доли бокаловидных клеток, увеличение числа митозов, увеличение количества межэпителиальных лимфоцитов (в 2 раза). В составе клеток собственной пластинки слизистой оболочки отмечено повышение содержания сегменто-ядерных гранулоцитов (см. табл. 2).
На 14-е сутки после орхиэктомии у крыс Вистар по данным бактериологического исследования количество энтерококков E. faecalis увеличилось в 10, а E. faecium — в 60 раз. Возросло количество колиформ-ных лактозонегативных (Lac) энтеробактерий и энтерококков, а количество лактозопозитивных (Lac+) энтеробактерий и лактобактерий было сопоставимо с показателями животных контрольной группы. В целом в составе микрофлоры толстой кишки у крыс Ви-стар на 14-е сутки после орхиэктомии обнаруживалось значительное повышение уровня бактерий, обладающих патогенным потенциалом.
На 21-е сутки было отмечено статистически значимое снижение всех определяемых показателей про-светной микрофлоры. Количество Lac- энтеробактерий уменьшилось в 30, энтерококков E. faecalis — в 450, E. faecium - в 60 раз. Показатель количества лактобак-терий снизился в опытной группе в 15 раз по сравнению с контрольной.
По данным литературы, энтерококки обладают высокой патогенностью при их транслокации из кишки [17]. Количественное увеличение патогенной флоры на 14-е сутки эксперимента может приводить к активации иммунной системы толстой кишки и, соответственно, к подавлению роста энтерококков, а также других представителей микрофлоры кишки. На 21-е сутки после орхиэктомии значительно уменьшилось количество лактобактерий. Отмечено также уменьшение уровня Lac+, но увеличение количества колиформных
Таблица 2. Морфометрическая характеристика слизистой оболочки ободочной кишки у самцов крыс Вистар после орхиэктомии (М ± т)
Морфометрические параметры Состав клеточных элементов в собственной пластинке, %
Группа объемная доля, % абсолютное количество на площади эпителия 0,03 мм2
бокаловидные клетки колоно-циты инфильтрат строма митозы межэпителиальные лимфоциты серотони-ноциты лимфоциты сегменто-ядерные другие клетки
Контрольная 23,9 ± 2,5 40,9 ± 2,4 10,5 ± 0,4 24,7 ± 2,7 2,0 ± 0,6 9,0 ± 1,0 4,3 ± 0,3 3,6 ± 0,5 7,0 ± 0,8 89,4 ± 0,5
Орхиэктомия, 14-е сутки 15,9 ± 1,5* 50,4 ± 5,4* 10,9 ± 1,7 22,8 ± 4,5 4,6 ± 0,7* 12,7 ± 2,9 6,6 ± 0,3* 3,9 ± 0,8 9,9 ± 1,0* 86,1 ± 1,5*
Орхиэктомия, 21-е сутки 15,1 ± 1,7* 52,5 ± 3,4* 7,5 ± 0,9* 24,8 ± 3,5 2,6 ± 0,3 18 ± 3,6* 5,7 ± 0,7 5,1 ± 0,9 10,7 ± 1,3* 84,2 ± 1,5*
Е га Е
Примечание. Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой: * р < 0,05.
4
Lac- энтеробактерий. Вероятно, Lac+ энтеробактерии были вытеснены Lac-. На 21-е сутки после орхиэкто-мии уменьшение количества просветной микрофлоры сопровождалось снижением уровня эндотоксина в сыворотке крови в 4 раза (табл. 3).
Обсуждение
В норме у самцов крыс Вистар бокаловидные клетки составляют 22-26 % от общего объема клеточных элементов эпителия и стромы. Секретируемый бокаловидными клетками муцин является одним из структурных компонентов кишечного барьера. На 14-е сутки после орхиэктомии увеличились митотическая активность эпителия, глубина крипт и, соответственно, площадь эпителиального пласта. На 14-е и 21-е сутки объемная доля колоноцитов возросла, а бокаловидных клеток - сократилась. В то же время достоверно увеличилось количество ЕС1-клеток, что указывает на изменение направления дифференцировки камбиальных клеток в сторону секреторных эндокринных ЕС1-клеток и уменьшения экзокринных бокаловидных клеток [18].
По данным литературы, пролиферация и дифферен-цировка экзокринных секреторных и эндокринных клеток в андроген-зависимых органах - предстательной и бульбоуретральных железах — регулируются стероидными половыми гормонами, которые взаимодействуют с андроген-реактивными клетками-мишенями. Показано, что введение андрогенов способствует гиперплазии бульбоуретральных желез и их эпителия и уменьшению объема соединительной ткани в строме [19]. Увеличение хромогранин-позитивных клеток (ЕС1) в бульбоурет-ральных железах у мужчин пожилого и старческого возраста может быть следствием снижения уровня циркулирующих андрогенов и увеличения эстрадиола [20, 21].
По результатам бактериологического исследования, на 14-е сутки после орхиэктомии у крыс Вистар количество энтерококков и лактобактерий в составе микрофлоры толстой кишки повышается; видимо, они
вытесняют другие виды микроорганизмов, обитающих в дистальном отделе толстой кишки. Популяция энте-робактерий в просвете кишечника увеличивается в целом за счет повышения Lac-. На 21-е сутки отмечается значительное уменьшение определяемых показателей микрофлоры, исключая Lac-, которые, вероятно, вытесняются энтеробактериями Lac+. При этом уровень эндотоксина в крови снижается. Таким образом, на 14-е и 21-е сутки у орхиэктомированных крыс Вистар нарушается состав микрофлоры толстого кишечника, что отражает развитие дисбиотического состояния.
Выводы
По сравнению с контрольной группой у самцов крыс Вистар на 14-е сутки после орхиэктомии численность популяции эндокринных ЕС1-клеток в эпителиальной выстилке толстой кишки увеличивается. Уровень серотонина во все сроки эксперимента статистически достоверно не изменяется. Показатель содержания метаболита серотонина 5-ОИУК снижается в 4 раза на 14-е сутки, а на 21-е сутки он нормализуется, что отражает компенсаторный характер изменений метаболизма серотонина.
В эпителиальной выстилке проксимального отдела ободочной кишки у крыс Вистар по сравнению с группой контроля на 21-е сутки после кастрации уменьшается объемная доля бокаловидных клеток, увеличивается число межэпителиальных лимфоцитов. На 14-е сутки возрастает число митозов, а на 21-е оно снижается до показателей контрольной группы. В собственной пластинке слизистой оболочки увеличивается количество сегментоядерных гранулоцитов.
После орхиэктомии отмечено снижение количества определяемых показателей просветной микрофлоры толстого кишечника, нарушение ее состава, что отражает развитие дисбиотического состояния. На 21-е сутки после орхиэктомии уровень эндотоксина в сыворотке крови снижается.
Таблица 3. Уровень содержания эндотоксина в сыворотке крови и показатели состава просветной микрофлоры у самцов крыс Вистар после орхиэктомии (Me (25 %; 75 %))
га Е Группа Энтеробактерии, КОЕ/г, х 104 Энтерококки, КОЕ/г, х 104 Лактобакте-рии, КОЕ/г, х 104 Эндоток-
и 09 2 Л Lac+ Lac- Lac+/Lac- E. faecalis E. faecium E faecalis/ E. faecium син, eU/мл
Контрольная 31,0 (1,0; 58,0) 1,6 (1,0; 58,0) 1,0 (1,0; 1,0) 1100,0 (83,0; 2700,0) 10,0 (8,0; 100,0) 25,29 (10,38; 27,00) 3800,0 (2200,0; 6600,0) 0,17 (0,12; 0,23)
ч га Орхиэктомии, 14-е сутки 36,0 (8,3; 625,0) 12000,0 (4100,0; 30000,0) 0,02 (0,01; 1,0) 13000,0 (5000,0; 17000,0)* 5000,0 (1400,0; 5300,0)** 3,40 (1,88; 10,90) 6250,0 (5000,0; 8700,0) 0,15 (0,1; 0,22)
Орхиэктомия, 21-е сутки 1,0 (1,0; 1,0) 37,0 (31,0; 100,0) 0,03 (0,01; 0,03) 1,0 (1,0; 2,0)* 1,0 (1,0; 1,0)** 1,0 (1,0; 2,0) 260,0 (170,0; 380,0)* 0,04 (0,04; 0,06)*
s Примечание. Статистически значимые различия по сравнению с контрольной группой: * p < 0,1; ** p < 0,02.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Vermeulen A., Kaufman J.M. Androgens and cardiovascular disease in men and women. Aging Male 1998;1:35-50.
2. Harman S.M., Metter E.J., Tobin J.D. et al. Longitudinal effects of aging on serum total and free testosterone levels in healthy men. J Clin Endocrinol Metab 2001;86(2):724-31.
3. Chueh K.S., Huang S.P., Lee Y.C. et al. The comparison of the aging male symptoms (AMS) scale and androgen deficiency
in the aging male (ADAM) questionnaire to detect androgen deficiency in middle-aged men. J Androl 2012;33(5):817-23.
4. Morales A., Lunenfeld B. Investigation, treatment and monitoring of late-onset hypogonadism in males. Official recommendations of ISSAM. International Society for the Study of the Aging Male. Aging Male 2002;5(2):74-86.
5. Семиглазов В.Ф., Мазуров В.И., Кар-пищенко А.И. и др. Влияние уровня тестостерона на образование 5а-дигидро-тестостерона и 17р-эстрадиола
в тестостерон-чувствительной клеточной линии фибробластов крайней плоти человека. Цитология 2005;47(2):172-4. [Semiglazov V.F., Mazurov V.I., Kapishchenko A.I. et al. Influence of the testosterone level on the formation of 5a-dihydrotestosterone and 17p-estradiol in the testosterone-sensitive cell line of fibroblasts of the human foreskin. Tsitologiya = Cytology 2005;47(2):172-4. (In Russ.)].
6. Печерский А.В., Семиглазов В.Ф., Лоран О.Б. и др. Влияние уровня тестостерона на развитие рака предстательной железы. Онкоурология 2005;(3):31-8. [Pecherskiy A.V., Semiglazov V.F.,
Loran О.В. et al. Influence of the testosterone level of the prostate cancer development. Onkourologiya = Cancer Urology 2005;(3):31-8. (In Russ.)]
7. Тюзиков И.А., Калинченко С.Ю. Андрогенный дефицит в общей врачебной практике: эндокринология, рациональная диагностика и клинические «маски». Медицинский алфавит 2012;3(15):59-68. [Tyuzikov I.A., Kalinchenko S.Yu. Androgenic deficiency in the common medical practice: endocrinology, rational diagnostics and clinical "masks". Meditsinskiy alfavit = Меdical Alphabet 2012;3(15):59-68. (In Russ.)].
8. Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообра-
зования в России в 2011 году (заболеваемость и смертность). М., 2013. 289 с. [Chissov V.I., Starinskiy V.V., Petrova G.V. Malignant tumors in Russia in 2011 (morbidity and fatality). Moscow, 2013. 289 p. (In Russ.)].
9. Козлова М.Б., Франциянц Е.М., Геворкян Ю.А. Содержание половых гормонов в опухоли и в неповрежденной ткани у больных раком прямой и ободочной кишки. Сибирское медицинское обозрение 2010;62(2):48-51.
[Kozlova М.В., Frantsiyants Е.М., Gevorkyan Yu.A. intent of sex hormones in the tumor and undamaged tissue at patients with colorectal cancer. Sibirskoe meditsinskoe obozrenie = Siberian Medical Review 2010;62(2):48-51. (In Russ.)].
10. Packey Ch.D., Sartor R.B. Commensal bacteria, traditional and opportunistic pathogens, dysbiosis and bacterial killing in inflammatory bowel diseases. Curr Opin Infect Dis 2009;22(3):292-301.
11. Fava F., Danese S. Intestinal microbiota in inflammatory bowel disease: Friend of foe? World J Gastroenterol 2011;17(5):557-66.
12. Harris K., Kassis A., Major G.,
Chou C.J. Is the gut microbiota a new factor contributing to obesity and its metabolic disorders? J Obes 2012;2012:879151.
13. Sjögren K., Engdahl C., Henning P. et al. The gut microbiota regulates bone mass
in mice. J Bone Miner Res 2012;27(6): 1357-67.
14. Fujimura K.E., Slusher N.A., Cabana M.D., Lynch S.V. Role of the gut microbiota in defining human health. Expert Rev Anti Infect Ther 2010;8(4):435-54.
15. Андреева Е.В., Макарова О.В. Изменение уровня серотонина, 5-ОИУК
в плазме крови и численности популяции серотонинсекретирующих клеток тонкой и толстой кишки у самцов крыс Вистар при гипоандрогенемии и гиперандроге-немии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2012;154(11): 637-41. [Andreeva E.V., Маkarova O.V. Change of serotonin level, 5-oxyanthracene acid in the blood plasma, as well as of the number of population of serotonin secreting cells of the small and large intestine at Wistar rats males at hypoandrogenemia and hypoandrogenemia. Byulleten eksperimental noy biologii i meditsiny = Bulletin of the Experimental Biology and Medicine 2012;154(11):637-41. (In Russ.)].
16. Ардатская М.Д. Микробиоценоз кишечника и его роль в развитии и поддержании заболеваний желудочно-кишечного тракта. Новости медицины и фармации 2010;(313). [Ardatskaya M.D. Intestine microbiocenosis and its role
in the development and maintenance of the gastro-intestinal tract diseases. Novosti meditsiny i farmatsii = News of Medicine and Pharmacy 2010;(313). (In Russ.)].
17. Бондаренко В.М., Суворов А.Н. Симбиотические энтерококки и проблема энтерококковой оппортунистической инфекции. М., 2007. 30 с. [Bondarenko V.M., Suvorov A.N. Symbiotic enterococcus and problem of the entero-coccus opportunistic infection. Moscow, 2007. 30 p. (In Russ.)].
18. Костюкевич С.В. Дифференцировка эндокринных клеток эпителия слизистой оболочки толстой кишки у человека
и некоторых представителей позвоночных. Цитология 2004;46(6):506-13. [Kostyukevich S.V. Differentiation of endocrinal cells of the epithelium of the human large intestine mucous membrane, as well as at some vertebrata. Tsitologiya = Cytology 2004;46(6):506-13. (In Russ.)].
19. Левкович Л.Г., Салмина А.Б., Зыкова Л.Д. Нейрогуморальная регуляция функциональной активности предстательной железы. Сибирское медицинское обозрение 2009;60(6):7—12. [Levkovich L.G., Salmina A.B.,
Zykova L.D. Neurohumoral regulation of the prostate functional activity. Sibirskoe meditsinskoe obozrenie = Siberian Medical Review 2009;60(6):7-12. (In Russ.)].
20. Теппермен Дж., Теппермен Х. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. М., 1989. ^ppermen G., Теppermen Kh. Physiology of the metabolism and of the endocrinal system. Moscow, 1989. (In Russ.)].
21. Боронихина Т.В. Возрастная динамика количества эндокринных клеток
в бульбоуретральных железах человека. Вестник новых медицинских технологий 2005;12(3—4):75—6. [Bоronikhina T.V. Age dynamics of the number of endocrinal cells in human bulbouretral glands. Vestnik novykh meditsinskikh tekhnologiy = Herald of New Medical Technologies 2005;12(3-4):75-6. (In Russ.)].
E
W
E
