CC BY
35
УДК 616-006.487
З.С. ИСЛАМОВ, М.С. ГИЛЬДИЕВА, Р.Х. УСМАНОВ, Б.Ю. ЮСУПОВ, А.А. АБДУВАЛИЕВ, Ш.Н. МУСАЕВА
Республиканский онкологический научный центр Республики Узбекистан, 100174, г. Ташкент, ул. Фараби, д. 383
Мониторинг цитогенетических изменений в крови у больных с ретинобластомой до и после лечения
Исламов Зиёвуддин Садриддинович — кандидат медицинских наук, руководитель отделения онкоофтальмологии, тел. +99871 246-98-86, е-mail: dr_islamov@yahoo.com
Гильдиева Маргарита Сабировна — доктор биологических наук, заведующая лабораторией биологии опухолей, тел. +99871 246-98-74, е-mail: galice@mail.ru
Усманов Рустам Ходжиакбарович — ординатор отделения онкоофтальмологии, тел. +99871 246-98-86, е-mail: r_usmanov77@mail.ru Юсупов Бахром Юсупович — доктор медицинских наук, научный консультант отделения опухолей головы и шея, тел. +99871 246-24-15, e-mail: onkocenter@ars-inform.uz
Абдувалиев Анвар — кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории биологии опухолей, тел. +99871 246-98-74, e-mail: onkocenter@ars-inform.uz
Мусаева Шахло Нажотовна — младший научный сотрудник лаборатории биологии опухолей, тел. +99871 246-98-74, e-mail: onkocenter@ars-inform.uz
В статье приводятся результаты исследований по оценке эффективности органосохранного лечения больных РБ с использованием антиоксидантной терапии при помощи цитогенетического мониторинга. Обследованы 23 больных (25 глазных яблок) с ретинобластомой (пробанды). Анализ метафазных пластинок показал, что у всех больных до проведения терапии независимо от пола и расположения опухоли, наблюдались неспецифические структурные изменения хромосом. Рост ретинобластомы вызывает увеличение цитогенетических изменений в лимфоцитах больных в 5,9 раз по сравнению с практически здоровыми детьми. Полихимиотерапия увеличивает хромосомную нестабильность у больных ретинобластомой в 1,5 раз по сравнению с фоновыми показателями (до лечения). Органосохранная ПХТ с применением препарата «слезовит» с антиоксидантным эффектом вызвало снижение цитогенетической активности ПХТ в 2,8 раза, что свидетельствует о протекторных свойствах этого препарата.
Ключевые слова: ретинобластома, полихимиотерапия, антиоксиданты.
Z.S. ISLAMOV, M.S. GILDIEVA, R.Kh. USMANOV, B.Yu. YUSUPOV, A.A. ABDUVALIEV, Sh.N. MUSAEVA
National Cancer Research Center of the Republic of Uzbekistan, 383 Faraby Str., Tashkent, Republic of Uzbekistan, 100174
Monitoring of cytogenetic changes in the blood of patients with retinoblastoma before and after treatment
Islamov Z.S. — Cand. Med. Sc., Head of Ocular Oncology Department, tel. +99871 246-98-86, e-mail: dr_islamov@yahoo.com Gildieva M.S. — D. Biol. Sc., Head of the Laboratory of Tumor Biology, tel. +99871 246-98-74, e-mail: galice@mail.ru Usmanov R.Kh. — resident doctor of Ocular Oncology Department, tel. +99871 246-98-86, e-mail: r_usmanov77@mail.ru Yusupov B.Yu. — D. Med. Sc., scientific consultant of the Department of Head and Neck Tumors, tel. +99871 246-24-15, e-mail: onkocenter@ars-inform.uz
Abduvaliev A. — Cand. Med. Sc., Senior Researcher of the Laboratory of Tumor Biology, tel. +99871 246-98-74, e-mail: onkocenter@ars-inform.uz Musayeva Sh.N. — Junior Researcher of the Laboratory of Tumor Biology, tel. +99871 246-98-74, e-mail: onkocenter@ars-inform.uz
| ОФТАЛЬМОЛОГИЯ
'3 (104) апрель 2017 г.
ПРАКТИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА ^ 69
The article presents the results of evaluating the efficacy of treatment of patients with organsaving treatment of patients with Rb, using antioxidant therapy with cytogenetic monitoring. We have examined 23 patients (25 eyeballs) with retinoblastoma (probands). Analysis of metaphase plates showed that all patients prior to therapy, regardless of gender and location of the tumor, had nonspecific structural changes of chromosomes. The growth of retinoblastoma causes an increase of cytogenetic changes in lymphocytes of patients in the 5.9-fold compared to healthy children. Polychemotherapy increased chromosomal instability in patients with retinoblastoma by 1.5 times compared with the background values (before treatment). The organsaving chemotherapy using the drug «Slezovit» with antioxidant effect caused a decrease in the activity of cytogenetic chemotherapy 2.8 times, indicating the protective properties of the drug.
Key words: retinoblastoma, polychemotherapy, antioxidants.
Обнаружение патологии в хромосомах и установления связи с презиготной хромосомной мутацией, то есть — делецией хромосомы 13, привлекло внимание исследователей к РБ. В дальнейшем был выявлен тип мутации и «критический» хромосомный сегмент (13q-14), который выявлялся у большинства больных с ретинобластомой. Развитие методов анализа хромосом позволило значительно увеличить частоту выявления цитогенетических форм РБ. Однако офтальмологическое обследование новорожденных и медико-генетическое консультирование их, часто не проводится. В результате опухоль, возникшая еще внутриутробно, прогрессирует и больные с далеко зашедшими стадиями бывают ограничены в возможности выбора метода лечения [1-5]. Исследование кинетических параметров не позволяет объяснить патогенез роста опухоли без учета состояния антипероксидной и антирадикальной систем защиты [1, 6]. На основании полученных результатов Maziere С. и соавторы [9] дают заключение о роли окислительного стресса в накоплении гипофосфорилированной формы ингибитора РБ, что является фактором ее роста. Согласно их результатам можно предположить о возможной роли окислительного стресса в возникновении РБ, что свидетельствует о необходимости назначения антиоксидантной терапии больным детям.
Целью нашего исследования явилась оценка эффективности органосохранного лечения больных РБ с использованием антиоксидантной терапии («слезовит») при помощи цитогенетического мониторинга.
Материал и методы
Нами были обследованы 23 больных (25 глазных яблок) с ретинобластомой. Им всем проводилась ор-ганосохранная химиотерапия по схеме в/в Этопозид 100 мг/м2 + Карбоплатин 150 мг/м2 1-3 дни, в сочетании с антиоксидантом Слезавит по 1 таб. 1 раз в день. У всех пробандов взята кровь из локтевой вены объемом 2,0-5,0 мл для культивирования и цитогенетического анализа лимфоцитов до и после ор-ганосохранной химиотерапии в сочетании с антиок-сидантами. Культивирование и хромосомный анализ проводили общепринятыми методами по Агакак D.T., Sparkes ^ (1963) и Н.П. Бочкова (1987).
Полученные препараты хромосом анализировали под микроскопом N 800М, окуляр 10х, объектив 100х. Отбор, анализ и регистрацию аберраций хромосом проводили согласно методическим рекомендациям Н.П. Бочкова (1987).
Для анализа отбирали метафазные пластинки. В каждой метафазной пластинке регистрировалось нарушение числа и структуры хромосом. Для этого подсчитывали число хромосом, пробелов, делеций и фрагментов.
Митотический (пролиферация) и апоптотический (гибель) индексы определяли по морфологическим особенностям клеток, находящихся в митозе и апоптозе, производят подсчет и рассчитывали по
формулам: МИ% а. . 100%; АИ% __б_100%
1000 1000,
где а — количество митотически делящихся клеток, б — количечство апоптозных клеток.
Цитогенетический анализ был проведен для мониторинга изменений генома в лимфоцитах периферической крови больных до и после 4 курсов органосохранного лечения в сочетании с антиоксидантной терапией («слезовит»).
Статистическая обработка материала
Данные статистической обработки представлены в виде М±т (где М — среднеарифметическое; т — среднеквадратичное отклонение). Статистический анализ данных проводилось при помощи пакета программ Statistica 5,0. Использовали критерий Mamus — Уитни (Т-критерий) для сравнения независимых выборок, критерий ^Фишера для сравнения относительных показателей. Различия в полученных показателях считались достоверными при р<0,05.
Результаты и их обсуждение
Анализ метафазных пластинок показал, что у всех больных до проведения терапии не зависимо от пола и расположения опухоли, наблюдались неспецифические структурные изменения хромосом (см. табл.) в виде делеций различных хромосом — 8,2% (70/850), 16,5% (140/850) крупных и мелких фрагментов, анеуплоидия и полиплоидия 34,1% (290/850). У здоровых детей уровень аберраций хромосом составил 1,4%. Сравнительный анализ показал, что после 4 курсов ПХТ по стандартной схеме лечения у 12 больных при мониторинге в лимфоцитах наблюдались изменения в кариотипе. Уровень структурных и количественных изменений хромосом у данной группы больных в 1,5 раза превышал фоновый (до 12,2% после ПХТ, по сравнению с 8,6% до лечения).
Анализ кинетических изменений при культивировании лимфоцитов больных после ПХТ показал, что у 50% из них (6 человек) ФГА-стимуляция была низкой (МИ — 0,1%о). Следовательно, у этих больных ингибировалась пролиферация Т-лимфоцитов, у остальных пролиферация была средней (Ми — 0,5%о-1,0%о, в норме до 10,0%о). Индукция апоп-тоза в лимфоцитах периферической крови больных после стандартной ПХТ увеличилась (АИ — 8,010,0%, в норме до 3,0-5,0%), что согласуется с низкой ФГА-стимуляцией.
У больных, получивших антиоксидантную терапию (11 человек), также был проведен мониторинг цитогенетических изменений, который показал
Таблица.
Частота аберраций хромосом в лимфоцитах периферической крови у больных РБ
Группы Количество Тип аберраций, % от всех аберраций (n)
Исследованных метафаз Аберрантных метафаз, % (n) Аберраций, % (n) Делеции Анеуп-лоидия Фраг-менты МДХ
1. Больные РБ n=23 до лечения 850 8,6±0,26 (73)* 8,8±0,30 (75)* 8,0±0,93* (6/75) 33,3± 1,26* (25/75) 18,7±1,98 (14/75) 5,3±0,90 (4/75)
2. Больные после ПХТ n=12 300 12,2±0,27 (36)* 12,6±0,28 (38)* 7,9±1,91* (3/38) 13,2±2,70 (5/38) 42,1±3,25* (16/38) 0
3. Больные с ПХТ + «Слезовит» n = 11 250 4,4±0,17 (11) 4,4±0,17 (11) 0 9,1±1,43 (1/11) 18,2±2,02 (2/11) 0
Примечание: * — p<0,05 (по сравнению с группой 3)
снижение частоты аберраций хромосом до 4,4% по сравнению с фоновым уровнем (8,6%) и в 2,8 раза по сравнению с больными получавшими только ПХТ (12,2%). Кроме того изменился состав аберраций, если до лечения и после ПХТ частота деле-ций хромосом и хроматид составляла 8,0% и 7,9% соответственно, то после лечения антиоксидантом («слезовит») делеции отсутствовали. Количество анеуплоидных клеток снизило до 9,1% по сравнению с 33,3% до лечения и до 18,2% снизилась частота фрагментов хромосом по сравнению с 42,1% после ПХТ (см. табл.).
После антиоксидантной терапии у всех пациентов ФГА-стимуляция в лимфоцитах увеличилась ( МИ — до 5,0%о), а уровень апоптоза снизился или остался на том же уровне, что и до лечения ( в среднем АИ — от 3,0 до 6,0%).
При ретинобластоме опухолевые клетки, характеризуются высокой пролиферативной активностью [7]. Синтез ДНК и деление клеток зависит от концентрации свободных радикалов.
Большинство авторов отмечают увеличение концентрации свободных радикалов в начальной и латентной стадии развития опухоли. Отмеченные данные противоречат принципам лечения злокачественных новообразований, в которых при воздействии рентгеновского облучения и введением хими-опрепаратов усиливается образование свободных радикалов и таким путем блокируется синтез ДНК, и соответственно тормозится деление опухолевых клеток [6, 8].
Наши исследования показали высокую эффективность использования антиоксидантной терапии. Применение препарата «Слезовит» с антиоксидант-ным эффектом вызвало снижение цитогенетиче-ской активности ПХТ, что свидетельствует о протекторных свойствах этого препарата.
Выводы
1. Рост ретинобластомы вызывает увеличение цитогенетических изменений в лимфоцитах больных в 5,9 раз по сравнению с практически здоровыми детьми.
2. Полихимиотерапия увеличивает хромосомную нестабильность у больных ретинобластомой в 1,5 раз по сравнению с фоновыми показателями (до лечения).
3. Применение препарата «Слезовит» с антиок-сидантным эффектом вызвало снижение цитогене-тической активности ПХТ в 2,8 раза, что свидетельствует о протекторных свойствах этого препарата.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бурлакова Е.Б. Биоантиоксиданты. Наномир слабых воздействий — «карликов», его законы, общность и различия с миром «гигантов» // Сб. тез, докл. VIII Международной конференции «Биоантиоксидант», 4-6 окт. 2010 г., Москва. — С. 69-71.
2. Наследственные болезни. Национальное руководство. Главные редакторы Н.П. Бочков, Е.К. Гинтер, В.П. Пузырев. — Москва, 2012. — 935 с.
3. Ньюссбаум Р.Л., Мак-Иннес Р.Р., Виллард Х.Ф. Медицинская генетика. Перевод с англ. А.Ш. Латыпова / Под ред. Н.П. Бочкова. — М., 2010. — 620 с.
4. Саакян С.В. Ретинобластома — 2005. — М.: Медицина, 2005. — 199 с.
5. Саакян С.В. Современные подходы к лечению ретинобластомы // Российский офтальмологический журнал. — 2008. — №1. — С. 33-38.
6. Смирнова Л.П. Активность антиоксидантных ферментов в клетках асцитной и солидной форм карциномы // Экспериментальная онкология. — 2003. — Т. 25, №1. — С. 113; 128.
7. Kase S.C., et al. Phosphorylation of p27 (KIP1) in the developing retina and retinoblastoma // Int. J. Mol. Med. — 2005 Aug. — 16 (2). — P. 257-62.
8. Kim H., Lee J.W. et al. Clinical Results of Chemotherapy based Treatment in Retinoblastoma Patients // A Single Center Experience Cancer Res Treat. — 2008 December. — 40 (4). — P. 164-171.
9. Maziere C. et al. Oxidized low density lipoprotein induces the cyclin-dependent kinase inhibitor p21 (waf1) and the tumor suppressor Rb // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 2002 May 24. — 293 (5). — P. 1327-32.
| ОФТАЛЬМОЛОГИЯ
