CC BY
55
Молекулярные основы дизрегуляции программированной гибели лимфоцитов при хронической вирусной инфекции
Новицкий В.В., Рязанцева Н.В., Жукова О.Б.
Molecular basis of disregulation of programmed lymphocytes' death in chronic viral infection
Novitsky V.V., Ryazantseva N. V, Zhjukova O.B.
Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск
© Новицкий В.В., Рязаниева Н.В., Жукова О.Б.
В статье анализируются данные современной литературы и результаты! собственных исследований о роли дисбаланса программированной клеточной гибели в формировании хронической вирусной инфекции. Обсуждаются молекулярные механизмы! модулирования реализации апоптоза иммунокомпетентных клеток персистирующими вирусами.
Ключевые слова: лимфоцит, апоптоз, хронические вирусные инфекции, противовирусный иммунитет.
The review analyses information from recent literature and results of the authors' own investigations concerning imbalance of programmed cell death in forming chronic viral infection. Molecular mechanisms of apoptosis modulation of immune cells by persistent viruses are discussed in the article.
Key words: lymphocyte, apoptosis, chronic viral infection, antiviral immunity
УДК 616.155.32-092.18:616.988-002.2
Традиционным направлением томской кафедральной научной школы патофизиологов является изучение фундаментальных механизмов нарушения функции клеток крови при патологии. Исследования прошлых лет, проведенные в рамках научной тематики профессора Д.И. Гольдберга, доказали, что одной из наиболее чувствительных гомеостати-ческих систем к действию различных неблагоприятных факторов является система крови. Клетки белой крови, будучи иммунокомпетентными, выполняют функцию обеспечения естественной резистентности и специфического противоин-фекционного иммунитета. Результаты современных клини-ко-экспериментальных исследований свидетельствуют о том, что течение инфекционного процесса сопровождается многоуровневой дезорганизацией кроветворной и иммунной систем (от родоначальных до зрелых клеток), патогенетической основой которой служат стимулированная возбудителем дизрегуляция процессов гемо- и иммунопоэза и структурно-функциональный дисбаланс иммунокомпетентных клеток крови. Одним из фундаментальных механизмов поддержания гомеостаза и регулирования деятельности кроветворных клеток является программированная клеточная ги-
бель (апоптоз). В любой клетке организма заложена генетически обусловленная программа, позволяющая при возникновении патологической ситуации включить самоликвидацию [96].
В последнее время стало ясно, что с позиции апоптоза можно объяснить развитие многих заболеваний человека, поскольку дисбаланс между пролиферацией клеток и программированной клеточной смертью ведет к патологическим изменениям органов и тканей [39]. Показано, что одним из патогенетических аспектов опухолевой трансформации [41], а также аутоиммунных [60, 110] и атопических заболеваний [6] является ингибирование апоптоза. Напротив, неадекватное усиление его наблюдается при нейродегенеративных, диспластических процессах и ишемических повреждениях различных органов [109].
Нарушение реализации апоптоза является также основой формирования хронических инфекционных процессов, в том числе и вирусной природы [7, 8, 54]. Однако эта проблема лишь недавно привлекла к себе должное внимание. Внедрение вируса в клетку макроорганизма — это, прежде всего, «сигнал тревоги», активизирующий врожденные меха-
низмы, натравленные на элиминацию инфектогена, среди которых клочевую роль играет гибель инфицированных клеток. Участие атоттоза в удалении вируссодержащих клеток имеет важное биологическое значение, поскольку фрагментация ДНК предупреждает перенос генетического материала в другие интактные клетки. Показано, что три вирусных инфекциях сосуществуют факторы, индуцирующие и ингиби-рующие программированную клеточную смерть [9, 19, 25, 27, 40, 49, 50, 54]. В интересах вируса — подавить апоптоз и сохранить жизнеспособность клетки. Таким образом, исход инфекционного процесса связывают с результатом противостояния антиапоптотической способности вирусов и активации физиологической гибели инфицированной клетки как части защитного механизма организма.
Понять, какую роль несет в себе индукция или угнетение программированной клеточной гибели в условиях перси-стентной вирусной инфекции, возможно, опираясь на знание молекулярных механизмов регуляции апоптоза иммуно-компетентных клеток, что и стало предметом настоящего сообщения.
Аготоз в системе противовирусного иммунитета
Интерес к состоянию иммунокомпетентных клеток при вирусной инфекции обусловлен не только тем, что они принимают непосредственное участие в реализации инфекционного процесса, но и тем обстоятельством, что эти клетки сами являются мишенью для действия терсистирующих вирусов. Убедительные данные, подтвердившие факты изменения субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови, нарушения их структурно-функционального и ци-тогенетического статусов при хронических инфекционных процессах, вызванных вирусами простого герпеса, клещевого энцефалита, гепатитов В и С, были ранее получены в лаборатории молекулярной медицины Сибирского государственного медицинского университета [9, 18—22, 24—29].
Известно, что апоптотическая гибель клеток является фундаментальным процессом регулирования иммунных реакций. Селекция в ходе развития иммунокомпетентных клеток, иммунологическая толерантность и собственно иммунный ответ — процессы, неотъемлемой частью которых является программированная клеточная гибель [3, 39]. цистеиновых остатков и два потенциальных N-связанных гликозилирующих участка. С-конец состоит из 145 аминокислот и, возможно, является внутриклеточным доменом белка [3, 80]. Ген, кодирующий Fas, локализован в длинном плече хромосомы 10 и содержит 9 экзонов [43].
Вирусная интервенция индуцирует активацию элиминирующих защитных реакций организма, биологическим смыслом которых является удаление вируса и зараженных им клеток как генетически чужеродного объекта. Иммунный ответ против внутриклеточных вирусов связан с активацией цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8 > CD4), распознающих инфицированные клетки по представленным вирусным пептидам и убивающих их, индуцируя цитолиз или апоптоз [12, 15, 34]. Цитокины, секретированные Т-лимфоцитами (ин-терлейкин-2, -4, -5), подключают к этой реакции и другие клетки-эффекторы (макрофаги, естественные киллеры), которые усиливают антивирусную активность цитотоксических Т-лимфоцитов [34].
Реализация цитотоксичности С08+-лимфоцитов связана с индукцией рецептор-опосредованного апоптоза клетки-мишени. Среди огромного множества клеточных рецепторов в особую группу выделяют так называемые рецепторы смерти (death receptors). Они представляют собой трансмембранные гликопротеиды, которые, взаимодействуя со специфическими лигандами, передают апоптотический сигнал в клетку и вызывают активацию каспаз. Большинство смертельных рецепторов относятся к надсемейству рецепторов фактора некроза опухолей (TNFR) и характеризуются сходными эктрацеллюлярными доменами, богатыми цистеином [97]. Рецепторы смерти также имеют в своей структуре гомологичные цитоплазменные участки, называемые death domain, которые принимают непосредственное участие в запуске апоптоза [105].
Наиболее изученными из смертельных рецепторов являются Fas (C095, или Apo1) и TNFR1 (CD120a, или p55) [3, 75]. Человеческий Fas-рецептор состоит из 335 аминокислотных остатков с сигнальной последовательностью на N-конце и трансмембранным участком в середине молекулы, что позволяет отнести его к мембранным белкам I типа [58]. Молекулярная масса Fas-рецептора составляет 48 кДа. Первые 16 аминокислотных остатков образуют гидрофобную последовательность. Второй гидрофобный участок молекулы нахрдится в позиции 172—190 и с обеих сторон окружен положительно заряженными аминокислотными остатками, что характерно для трансмембранного участка. N-конец, состоящий из 155 аминокислот, содержит 18
Fas способен запускать в клетке апоптоз при взаимодействии с Fas-лигандом (FasL) [3]. FasL впервые был выделен из мембранной фракции клеток цитотоксической Т-кле-точной гибридомы, способной вызывать гибель Fas-экспрес-сирующих клеток [99]. Показано, что FasL имеет молекуляр-
ную массу около 40 кДа и гредставпяет собой трансмембранный белок II типа. Его N-концевая последовательность находится в цитоплазме, а С-конец экспонирован в экстраклеточное пространство [1, 3]. По аминокислотной последовательности FasL гомологичен TNF-цитокину, давшему название семейству подобных белков. Как и другие члены семейства TNF, FasL проявляет свою активность в форме го-мотримера.
Представляя собой трансмембранный белок, FasL может существовать и в растворимой форме (sFasL), отщепляющейся от мембранного Fas (mFasL) с помощью металло-протеиназы [103]. Поскольку есть данные о том, что TNF и растворимый лиганд CD40 отщепляются от мембраносвя-занного предшественника, а также о наличии специфического ингибитора процессинга этих растворимых форм, имеется предположение, что все члены семейства TNF могут существовать в растворимой форме. Растворимый FasL является более слабым индуктором апоптоза, чем его мембранная форма. Кое того, он способен ингибировать действие мембранного FasL [102].
Передача сигнала с рецептора в клетку опосредована адаптерными протеинами, специфическими для каждого типа рецептора. Адаптерные протеины имеют в своей структуре домены DED (death effector domain), способные соединяться с аналогичными участками в структуре прока-спазы 8 [47]. Специфическим адаптерным белком для Fas-рецептора является FADD (Fas-associated death domain), необходимость которого для Fas-опосредованного запуска программированной клеточной гибели доказана при оценке апоптоза в Т-лимфоцитах трансгенных мышей, экспрессиру-ющих мутантную форму FADD [78, 122], а также мышей с генетическим нокаутом гена FADD [117, 119].
Существует группа цитоплазматических белков, функционально сходных с FADD и имеющих в своей структуре DED [75]. Один из этих белков — Daxx (death-associated proteine 6) — способен узнаваться доменом смерти Fas-рецепто-ра и активировать FADD-независимый путь запуска апоптоза [57, 95, 108].
Независимо друг от друга двумя исследовательскими группами был обнаружен фактор TRAIL (или Apo2L), сходный с FasL [70, 88, 114]. В отличие от FasL, экспрессированного, главным образом, на активированных Т- и NK-клетках и клетках иммунопривилегированных зон [75], Apo2L был обнаружен во многих тканях организма [114]. Однако, как и в случае с FasL, экспрессия Apo2L повышается в Т-лимфоци-тах в ответ на антигенную стимуляцию [59, 72, 92, 93]. Зрелые Т-лимфоциты приобретают чувствительность к Apo2L-
индуцированному апоптозу после воздействия интерлейки-на-2, что говорит о возможной роли Apo2L в контроле иммунных реакций [72]. Кроме того, показано возрастание чувствительности клеток к Apo2L у пациентов c HIV-инфекцией, что позволяет думать о роли Apo2-зависимоro апоптоза в уничтожении HIV-инфицированных клеток [59].
Основными рецепторами, связывающимися с Apo2L, являются DR4 (death rreceptor-4) и DR5, также обнаруженные во многих тканях организма. Дискуссионным остается вопрос о наличии специфического адаптерного протеина для этих рецепторов. Известно, что с DR4 и DR5 способны связываться многие адаптерные белки, в частности, FADD, TRADD (TNFR-associated death domain), TRAF2 (TNFR-associ-ated factor-2) и RIP (rreceptor-interacting protein) [56, 91, 113]. Интересен тот факт, что клетки, не синтезирующие FADD либо синтезирующие его мутантную форму, и поэтому устойчивые к FasL-индуцированному апоптозу, являются чувствительными к Apo2L-опосредованному апоптозу, что говорит о FADD-независимой передаче сигнала в клетку [71]. Вместе с тем получены данные о необходимости активации каспаз для реализации Apo2L-зависимоro апоптоза [71, 72].
В отношении защиты клеток от Apo2/Apo2L-апоптоза существует уникальный механизм, опосредованный особыми рецепторами-ловушками DcR1 (decow rreceptor-1) и DcR2. DcR1 — гликозилфосфатидилинозитол-связанн^1й поверхностный клеточный протеин, гомологичный DR4 и DR5, но не имеющий внутриклеточного домена [73, 74, 85, 91, 94]. DcR2 в отличие от DcR1 имеет функционально неполноценный внутриклеточный домен, в котором отсутствуют четыре из шести ключевые аминокислотные позиции, необходимые для запуска апоптоза и активации NF-kB (nucleus factor-kappa B) в клетке [105]. Рецепторы--ловушки конкурируют с DR4 и DR5 за связывание с Apo2L и тем самым снижают эффект лиганда [74, 85, 94]. Гены рецепторов DR4 и DR5, как и гены рецепторов-ловушек DcR1 и DcR2, картированы в одном локусе 8p21 -22, что позволяет предположить их эволюционное родство [71].
Наряду с экспрессией FasL-протеина, цитотоксические Т-лимфоциты и естественные киллеры при взаимодействии с вирусным антигеном выделяют гранимы и перфорин. Гран-зим В является сериновой протеазой, которая проникает в клетки-мишени через трансмембранные каналы, образуемые в плазматической мембране перфоринами лимфоцитов, и активирует каспазу-8 с последующим включением апоптотического протеолитического каскада [31].
Апоптотическая гибель может быть реализована также в результате экзогенных воздействий через неспецифические для апоптоза рецепторы [37, 42], активация которых может способствовать индукции клеточной гибели. К их числу относятся, в частности, рецепторы для цитоки-нов [23].
Цитокины считаются наиболее многочисленной группой биологически активных веществ, влияние которых на процесс гибели клетки интенсивно изучается в последние годы [23]. Известно, что фактор некроза опухолей продуцируется активированными макрофагами и Т-лимфоцитами в ответ на антигенную стимуляцию [106]. Его действие на клетку, опосредованное TNFR1, неоднозначно. На одни клетки основным эффектом TNF является активация транскрипционных факторов NF-kB и JNK (C-JUN N^-tenTiinaL kinase), ведущих к индукции провоспалитепьньк и иммуномодупирую-щих генов. В других клетках активация TNFR1 ведет к запуску программированной клеточной гибели. Следует отметить, что, в отличие от FasL TNF реже самостоятельно индуцирует апоптоз.
Фактор некроза опухолей существует в форме гомотри-мера и, соединяясь с TNFR1, индуцирует ассоциацию смертельных доменов рецептора, создавая условия для их взаимодействия с адаптерными протеинами, в роли которых кроме FADD может выступать TRADD [56]. Последний как адаптер способен опосредовать соединение с рецептором таких молекул, как TRAF2 и RIP, что ведет к активации NF-kB и JNK.
TRAF2 и RIP активируют NF-kB-индуцирующую киназу (NIK), которая, в свою очередь, воздействует на особый ки-назный комплекс, фосфорилирующий ингибитор kB (I-kB). Деградация I-kB делает возможным проникновение NF-kB в ядро и стимуляцию транскрипции генов, отвечающих за синтез интерлейкина-2, -4, g-интерферона и других цитокинов [69, 76].
Таким образом, рецепторопосредованный и перфорин-гранзимовый механизмы могут совместно или независимо друг от друга вызывать апоптоз вирусинфицированных клеток. Предполагается, что это главный способ Т-киллинга при вирусной инфекции [75].
Вирусная стратегия модуляции программы апоптотической гибели клетки
Вмешательство вирусов в танатогенную программу клеток носит разнонаправленный и подчас индивидуальный характер. Так, анализ результатов собственных исследований пока-
зал, что у пациентов с дгитегьной персистенцией вирусов клещевого энцефалита, гепатита В и С нарушена реализация апоптоза лимфоцитов крови [9, 19, 25, 27]. Обнаружено, что вирусы гриппа, клещевого энцефалита, а также а-вирусы индуцируют апоптоз в перевиваемых культурах [11, 66, 101].
В работе A.O. Буеверова и соавт. [7] приводятся данные, свидетельствующие о существенно более высоком количестве лимфоцитов и нейтрофилов периферической крови в состоянии апоптоза у больных хроническими гепатитами В и С. Рядом авторов показано прямое апоптозиндуцирующее действие вируса гепатита С на гепатоциты [61, 68, 84]. Центральную роль в индукции апоптоза этим вирусом играют его взаимодействия с рецепторными и сигналпередающими системами клетки [61]. С другой стороны, при инфекционном мононуклеозе, вызванном вирусом Эпштейна—Барра, отмечено снижение уровня ДНК-фрагментации в лейкоцитах периферической крови [33], что является показателем угнетения способности клеток к апоптотической гибели. Известен феномен защиты от апоптоза клеток, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (HIV), аденовирусами, по-лиовирусом, вирусом коровьей оспы [13, 49, 111]. Кроме того, HIV обладает способностью защищать от апоптоза инфицированные клетки, одновременно усиливая апоптоз не-зараженных клеток [13]. Полагают, что перекрестное связывание CD4-рецептюра с суперкапсидным гликопротеином HIV-1 gp120 повышает чувствительность Т-клеток к апопто-зу. В то же время инфицированные CD4+-лимфюцитыl менее чувствительны!, поскольку вирусный белок Nef обладает ан-тиапоптотической активностью [77]. Многочисленными исследованиями доказана интервенция вирусов на разных этапах программированной гибели клеток [61, 111, 118].
Вирусные белки-регуля торы
В настоящее время процесс апоптоза рассматривается как результат действия конкретной генетической программы, независящей от причины (нормальной или патологической), вызвавшей ее запуск. Об этом свидетельствует не только участие ряда генов в реализации программы гибели клеток, но и открытие специфических генов, контролирующих инициальные этапы апоптоза («гены гибели») и блокирующих апоптозную гибель («гены выживания») [4, 31, 35, 36, 89]. Применение методов индуцированного мутагенеза, молекулярного и генетического анализа позволило идентифицировать несколько генов, ответственных за апоптоз на разных его этапах. Среди них гены р53, c-fos, c-myc, c-jun, Fas, bcl-2
и другие, обеспечивающие реализацию или ингибирование программированной гибели клетки [4, 31, 89].
Члены семейства bcl-2 могут быть функционально разделены на индукторы апоптоза (Bad, Bax, Bcl-Xs, Bik, Bid, Buk) и на его ингибиторы (Bcl-2, BcI-Xl). Продукты этих генов находятся в постоянном динамическом равновесии, образуя гомо- и гетерсдимеры, что в конечном счете влияет на развитие апоптоза клетки [48, 51]. Предполагается, что белки семейства bcl-2, локализуясь в наружной мембране митохондрий, регулируют открытие мембранных каналов, через которые осуществляется выброс цитохрома С, протеазы AIF (apoptosis inducing factor). Вышеуказанные факторы способны прямо или опосредованно (например, через активацию «казнящих» каспаз) индуцировать многочисленные изменения, характерные для апоптоза, в том числе деградацию ДНК [65, 100].
Недавними исследованиями установлено, что все герпе-свирусы кодируют гомологи Bcl-2, ингибирующие апоптоз. Одним из представителей таких ингибиторов апоптоза является белок KSBcl-2 герпесвируса, ассоциированного с саркомой Ка-поши, и антиатоптотический белок BHRF-1 вируса Эпштейна —Барра [62]. Уникальным свойством этого вируса является его способность регулировать активность BHRF-1 гомологом Bax, названным BALF, который обладает проапоптической активностью, но, в отличие от клеточного Bax, не может быть преобразован воздействием каспаз [45]. D.J. Roy и со-авт. [90] была выявлена повышенная экспрессия гомолога Bcl-2 гена М-ii MHV-68 в селезенке и легких мышей, зараженных мышечным герпесвирусом. В период персистенции вируса активации М-11 не отмечалось, но его мРНК продолжала присутствовать, что указывает на наличие разных механизмов защиты герпесвирусов от апоптоза в зависимости от степени активности инфекционного процесса. Увеличивает экспрессию Bcl-2 и белок HIV — Nef [77]. Сердцевинный протеин вируса гепатита С способен ингибировать агоптоз через повышение синтеза BcI-Xl [84].
Из представленного материала видно, что вирусные протеины, подобно белкам семейства Bcl-2, обладают разнообразными механизмами регуляции программированной клеточной гибели.
Влияние вирусов на рецеп торный путь апоп тоза
При изучении уровня готовности иммунокомпетентных клеток периферической крови к апоптозу в исследованиях было обнаружено увеличение абсолютного числа лимфоцитов, несущих CD95-рецептор, при клинически бессимптомной персистенции вируса клещевого энцефалита, а также
при хронических гепатитах В и С [9, 27]. M. Tanaka и соавт. [104] установлено, что прямыми агентами, индуцирующими апоптоз, являются антигены вирусов гепатитов B и C, способствующие гиперпродукции лиганда Fas. При инфекции вирусом гепатита С значительно повышена экспрессия Fas как на гепатоцитах [87], так и HCV-позитивных монону-клеарах периферической крови [87, 107]. В отношении инфекционного процесса, вызванного HIV, имеет место повышение количества Fas-рецепторов на всех CD4+-кпlетках независимо от репликации в них вируса [83]. Аденовирус способен индуцировать экспрессию Fas опосредованно через p14(ARF)-экспрессию [63]. Другие вирусы, напротив, снижают экспрессию рецепторов смерти. Так, например, клетки, инфицированные in vitro вакцинным штаммом WR-вируса (western reserve virus), резистентны к Fas-апоптозу из-за низкого уровня экспрессии Fas-рецепторов, что позволяет им избегать цитолитической активности Т-лимфоцитов [55]. Вирусный FUCE-бегок, кодируемый несколькими герпесвируса-ми, уменьшая распад прокаспазы-8 на активные субъединицы, способен предотвращать Fas-индуцированный апоптоз, не допуская таким образом активацию последующих сигнальных путей [44].
Экспрессия Fas-лиганда на поверхности мембраны во многом определяет способность клетки избегать киллерные воздействия со стороны активированных лимфоцитов (как это происходит в иммуннопривилегированных зонах), что, несомненно, является выгодным для внутриклеточного агента. Доказана роль белка Tat HIV в повышении экспрессии FasL на инфицированной клетке. Известно, что Tat оказывает действие на FasL-промотор опосредованно через связь с транскрипционными факторами семейства Egr (Early grouth factors) [115]. В соответствии с последними данными, белок HBx вируса гепатита В, связываясь с белками Egr-2 и Egr-3, также способен стимулировать экспрессию гена FasL [118].
Влияя на гены-промоторы рецепторов смерти и их ли-гандов, многие вирусы могут индуцировать синтез мутант-ных (растворимых) форм этих белков. Так, показано достоверное увеличение содержания как растворимой формы Fas-рецептора (sFas), так и растворимого Fas-лиганда (sFasL) в сыворотке крови больных гепатитами В и С [16, 17], а также уровня sFas при хронических вирусных гепатитах в стадии осложнений (гепатоцеллюлярная карцинома) [60]. Определена прямая корреляция уровня сывороточного sFas с активностью вирусного гепатита С [68]. Заслуживает внимания тот факт, что растворимые формы как рецептора Fas, так и его лиганда проявляют апоптоз-супрессив-ную активность, что в случае sFas выражено образованием
прочных связей с Fas-лигандом, грезентированным на имму-нокомпетентных клетках, и блокированием его активности, а в отношении sFasL — конкуренцией менее активного мутантного продукта с полноценным лига-дом за связывание с рецептором [102].
Передача сигнала смерти в любом случае опосредуется адаптерными молекулами, поэтому еще одним механизмом интервенции вируса в механизмы рецепторзависимого апо-птоза является влияние непосредственно на адаптерные протеины и на передачу сигнала от рецепторов к каспазам. Так, взаимодействие сердцевинного белка вируса гепатита С (HCV) с эффекторным смертельным доменом FADD усиливает апоптотический сигнал, а связывание с TRADD разрушает комплекс TNF—TNFR1, не влияя при этом на активацию NF-kb [121]. Особо следует выделить так называемые v-FLIP (virus FLICE -inhibfltcty protein), обнаруженные в клетках при инфекции герпесвирусами и поксвирусами. По мнению одних авторов, v-FLIP, связываясь с FADD и FLICE, эффективно ингибируют передачу апоптотического сигнала от всех рецепторов семейства TNF [108]. Другие авторы считают, что v-FLIP нарушают протеолиз прокаспазы-8 на активные р10- и р18-субъединицы во время Fas-индуцированной клеточной смерти [44].
Таким образом, реализация рецепторопосредованного апоптоза в условиях хронизации вирусной инфекции может быть нарушена, что способствует нарушению эффективного клиренса инфектогена.
Взаимодействие вирусов и транскрипционных факторов клетки
Программа апоптоза может быть реализована вследствие возникновения источника сигнала внутри самой клетки [6]. Примером тому является накопление нерепарированных разрывов ДНК в результате нарушения процессов репарации [4, 30]. В лаборатории молекулярной медицины СибГМУ были получены данные, подтвердившие факт повреждения клеточного генома при вирусных инфекциях. У больных хроническими гепатитами В и С, а также клещевым энцефалитом выявлялся повышенный уровень хромосомных аберраций и низкая активность эксцизионной системы репарации ДНК [19, 20, 25—28].
В индукции программы гибели клеток с нерепарируемы-ми повреждениями генома важная роль принадлежит белку р53. Этот белок с молекулярной массой, равной 53 кДа, локализован в ядре клетки и является одним из транскрипционных факторов, повышенная экспрессия которого приводит к репрессии ряда генов, регулирующих транскрипцию и при-
частных к задержке клеточного цикла [5]. Переход на путь апоптоза под влиянием р53 осуществляется на уровне транскрипции гена Bax — представителя семейства Bd-2. В результате происходит сдвиг равновесия димеров от гетеро-димеров Bax/5cl-2 к гомодимерам Bax/5ax [31]. Кроме того, р53 повышает экспрессию генов PIG, продукты которых вызывают окислительный стресс и, как следствие, нарушение проницаемости митохондриальной мембраны [14, 36, 89].
С изменением активности р53 связана модуляция апоптоза при вирусных гепатитах. При интеграции в клеточный геном вируса гепатита В его ген НВх может формировать комплекс с р53, ингибируя таким образом его экспрессию [41]. Кроме этого, предполагается, что НВх-протеин оказывает мутационную инактивацию р53 в клеточных линиях CCL-B печени человека. Показано, что трансверсия (от AGG к AGT) в кодоне экзона 249 гена р53 проявлялась в 504 случаях у больных с гепатоцеллюлярной карциномой при хронической HBV-инфекции [98]. Белок HBx также повышает экспрессию Bax в гепатоцитах и лимфоцитах, что способствует усилению чувствительности этих клеток к апоптогенным стимулам [50].
Установлено, что продукт HIV белок Tat способен инги-бировать апоптоз, снижая уровень экспрессии р53 и повышая его для Bcl-2 [64, 67]. Герпесвирусы также продуцируют антиапоптический белок LANA (latency associated nuclear antigen), который взаимодействует с геном р53 и подавляет его транскрипционную активность [52].
Ответственным за нарушение генетического контроля клеточного цикла может стать интеграция вирусного генома в геном клетки-мишени [2, 32]. Подобными свойствами обладают ДНК-содержащие и ретровирусы [10]. Интеграция гена HBx вируса гепатита В в клеточный геном вызывает резкое повышение экспрессии мРНК и белка циклина А в клетках гепатоцеллюлярной карциномы, что является одним из пусковых моментов вирусиндуцированного канцерогенеза [120].
Эффект белка HBx на прохождение клеткой точки рестрикции клеточного цикла (G1/S) опосредуется через его взаимодействие с ингибитором серин-треониновой киназы Cdk (сydin-dependert kinase) р21. В присутствии р53 HBx активирует транскрипцию р21, что ведет к задержке клетки в фазе G1 и угнетает транскрипцию р21, если белок р53 отсутствует или находится в низких концентрациях [40, 82]. Зависимость эффекта вирусных белков от запрограммированной реакции макроорганизма частично объясняет различия в клиническом течении заболевания у HBV-инфицированных пациентов. Белок HBx активирует ингибитор циклинзависи-
мых киназ р21 в клетках гепатомы Hep3B с нефункциониру-ющим р53, инигибирует цциклин Е/СУк2-зависимое фосфорилирование гистона Н1 [86]. Более того, было показано, что при микст-инфекции HBV+HCV белки HBx и HCV-core совместно угнетают транскрипцию р21. При этом HBx и HCV-core действуют через TGF-p (trrasforming growth fac-Ьх-р^связывающий элемент и репрессию Sp1-сайта на промоторе р21 соответственно. Указанные эффекты усиливали рост и пролиферацию клеток и способствовали развитию гепатоцеллюлярной карциномы [53].
Белок HBx также активирует Ras-зависимый киназный сигнальный каскад, через который воздействует на транскрипционные факторы AP-1 и NF-kB, стимулируя синтез клеточной ДНК. При этом HBx обладает способностью выводить клетки из состояния покоя G0, стимулировать переход Gt/S и G2/M и сокращать временные промежутки между све-рочными точками [46].
В ходе эксперимента было показано, что экспрессия полного генома вируса гепатита С в гепатоцитах человека приводила к активации Cdk-сиггнального пути и к усилению пролиферации гепатоцитов. При этом воздействие РНК вируса оказалось гораздо более эффективным, чем влияние всех белковых продуктов генов HCV [112]. В то же время имеются данные, что белок HCV-core нарушает переход G1/5 в гепатоцитах. В клетках печени, экспрессирующих HCV-core, активность киназ Cdk4 и Cdk2 снижена, нарушено фосфорилирование белка ретинобластомы ^Rb) и E2F-опо-средованная транскрипция. Хотя HCV-core непосредственно не изменяет уровень экспрессии компонентов комплекса Cdk-активирующей киназы (САК) — Cdk7, циклина H и MAP1 (mitosis activating protein-1), но вызывает диссоциацию МАР1 из комплекса САК и, таким образом, угнетает его активность [81].
Белок HCV-core также способен вызывать пролиферацию Т-лимфоцитов через взаимодействие с рецептором комплемента gClqR, вызывая нарушение перехода Gi/S. В клетках, обработанных HCV-core, при митогенной стимуляции снижена экспрессия Cdk2/4 и циклинов E/D и, соответственно, нарушено фосфорилирование pRb. Кроме того, в этих клетках изменена деградация р27, являющегося негативным регулятором комплексов циклин E/Cdk2 и циклин D/Cdk4. Эти данные указывают на тот факт, что повышение стабильности р27 белком HCV-core ассоциируется с блокадой перехода Gt/S и нарушением пролиферации митоген-ак-тивированных Т-лимфоцитов [116]. Учитывая преимущественное значение Т-клеточного звена в противовирусном иммунитете, блокада пролиферации митогенактивирован-
ных Т-лимфоцитов представляется стратегическим звеном в установлении персистенции вируса гепатита С.
С помощью иммунобпоттингга и иммунофлюоресцентно-го анализа было выявлено, что HCV-core селективно угнетает синтез и аккумуляцию некоторых ядерных белков (p21, p53, PCNA (prroliferrating cell nuclear antigen) и c-Fos) на уровне трансляции и не влияет на синтез цитоплазматических белков (РНКазы L, MEK1, 2'-5'-олигоаденилат синтетазы) [82].
H. Nguyen и соавт. [79] показали, что регуляция р21 ге-патоцитов линии HepG2 белком HCV-core является двухфазной. Экспрессия нерасщепленной формы HCV-core, состоящей из 191 аминокислотного остатка, ведет к активации р21, ингибируя активность Cdk2 и останавливая клетки на G, /G фазе цикла. Но с накоплением после процессингга 173-аминокислотной формы белка активность р21 резко снижается. Таким образом, на ранних этапах инфекции HCV-core способен избирательно модулировать клеточный цикл гепа-тоцитов через амбивалентную регуляцию ингибитора цик-линзависимых киназ р21, что является мощным оружием вируса в установлении персистенции на уровне одной клетки и всего макроорганизма.
Заключение
Обобщение данных литературы и анализ собственных результатов исследования свидетельствуют о разнообразии как триггерных факторов апоптоза, так и механизмов реализации программированной клеточной гибели. Вирусы обладают разнообразными приспособительными молекулярными свойствами, позволяющими воздействовать на те или иные ключевые моменты процесса клеточной гибели, модулируя их в соответствии с собственной стратегией выживания. Очевидно, что про- и антиапоптотические составляющие клеточных и вирусиндуцированных механизмов регуляции тесно переплетены между собой. В конечном итоге от модуляции программированной гибели клетки в условиях вирусной инфекции зависит цитопатическое действие ин-фектогена, интенсивность и эффективность элиминирующих иммунных реакций, а значит, и клинические проявления ин-фекционногго процесса. Вмешательство вирусов в процесс апоптоза представляется основополагающим при формировании хронической формы инфекции.
Изучение молекулярных основ вирусиндуцированной дизрегуляции танатогенной программы клетки в перспективе будет способствовать более глубокому пониманию патогенеза и созданию новых терапевтических и профилактиче-
ских технологий поддержания защитных систем организма в условиях хронической вирусной инфекции.
В статье приводятся результаты исследований, выполненных в рамках федеральной целевой научно-технической программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники на 2002—2006 годы» (государственные контракты №02.442.11.7004, 02.445.11.7110, 02.442.11.7276),
а также при финансовой поддержке Совета по грантам при Президенте Российской Федерации для поддержки ведущих научных школ Российской Федерации № НШ-1051.2003.4.
Литература
1.Аббасова С.Г., Липкин В.М., Трапезников Н.Н., Ку-шлинский Н.Е Система Fas-FasL в норме и при патологии // Вопр. биол., мед. и фармацевт. химии. 1999. № 3. С. 3—17.
2.Антонов П.В., Цинзерлинг В.А Современное состояние проблемы хронических и медленных нейроинфекций // Арх. патологии. 2001. № 1. С. 47—51.
3.Барышников А.Ю., Шишкин А.В. Иммунологические проблемы апоптоза. М.: Эриториал УРРС. 2002. 320 с.
4. Белушкина Н.Н., Северин С.Е Молекулярные основы патологии апоптоза //Арх. патологии. 2001. № 1. С. 51 —60.
5. Белушкина Н.Н., Хасан ХА, Северин С.Е. Молекулярные основы апоптоза // Вопр. биол., мед. и фармацевт. химии. 1998. №4. С. 15—23.
6. Бойчук С.В., Мустафин И.Г. Fas-рецептор и его роль при ато-пических заболеваниях // Иммунопопия. 2001. № 3. С. 24—29.
7.Буеверов АО., Тихонина Е.В., Москалева ЕЮ. и др. Апоптоз лимфоцитов и гранулоцитов периферической крови при хронических ИВУ- и ИСУ-инфекциях // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и кюпопроктюпюгlии. 2000. № 6. С. 33—36.
8.Дмитриева ЕВ., Москалева ЕЮ., Сгадкова Л.В., Буеве-ров А.О. Апоптоз гепатоцитов при хронических вирусных гепатитах //Иммунология. 2002. Т. 4. № 2. С. 235—236.
9. Жукова О. Б., Рязанцева Н.В., Новицкий В. В. и др. Модуляция апоптоза лимфоцитов крови как способ выживания вируса ге-пата С //Иммунология. 2005. Т. 26. № 2. С. 79—83.
10. Ивашкин В.Т., Маммаев С.Н., Буеверов АО. и др. Механизмы иммунного «ускользания» при вирусных гепатитах // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, копрологии. 2000. № 5. С. 7— 12.
11. Исаева М.П., Леонова Г.Н., Кожемяко В.Б. и др. Апоптоз как механизм цитопатического действия вируса клещевого энцефалита //Вопр. вирусологии. 1998. №4. С. 182—187.
12. Кирдей ЕГ. Иммунология. Иркутск, 2000. 232 с.
13.Ковальчук Л.В., Чередеев АН. Новые иммунопатогенетиче-ские взгляды: апоптотические иммунодефициты // Иммунология. 1998. № 6 С. 17—18.
14.Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых су-прессоров // Биохимия. 2000. Т. 65. Вып. 1. С. 5—33.
15.Маянский АН., Бурков АН., Астафьев Д.Г., Рассанов С.П. Персистенция вирусов: иммунологические и патогенетические аспекты // Клинич. медицина. 1998. № 12. С. 19—25.
16.Митрикова Л.Ц. Растворимый Fas-антиген в сыворотке крови больных острыми гепатитами В // Эпидемиология и инфекц.
болезни. 2003. № 3. С. 34—36.
17. Митрикова Л.Ц, Климова ЕА, Ющук Н.Д и да Исследование показателей Fas-зависимого апоптоза в сыворотке крови больных острыми вирусными гепатитами // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и кюпопрcжroлюии. 2003. № 2. С. 59—63.
18. Наследникова И.О., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. и др. Поверхностная архитектоника, функциональные особенности и метаболизм лимфоцитов периферической крови при хронической герпесвирусной инфекции // Клинич. лаборатор. диагностика. 2004. № 5. С. 53—55.
19. Новицкий В.В., Жукова О.Б., Рязанцева Н.В. и др. Цитогенети-ка лимфоцитов периферической крови при хронической перси-стенции вируса клещевого энцефалита // Бол. СО РАМН. 2003. № 4. С. 34—37.
20. Новицкий В. В., Рязанцева Н.В., Наследникова И.О. и др. Хронический гепатит В: структура, метаболизм и цитогенетические особенности лимфоцитов // Эксперимент. и клинич. медицина. 2003. № 2. С. 64—67.
21. Панин Л.Е., Рязанцева Н.В., Новицкий В.В. и др. Флуоресцентное зондирование плазматической мембраны лимфоцитов и эритроцитов при персистенции вируса клещевого энцефалита: мониторирование структурных изменений // Бол. эксперим. биологии и медицины. 2003. № 8. С. 213—216.
22. Пирогова Н.П., Новицкий В.В., Карпова М.Р. и др. Фагоцитарные функции крови у больных острым клещевым энцефалитом // Бол. эксперим. биологии и медицины. 2003. № 1. С. 83—85.
23. Потапнев М.П. Апоптоз клеток иммунной системы и его регуляция цитокинами //Иммунология. 2002. №. С. 237—243.
24. Рязанцева Н.В., Белобородова Э.И., Новицкий В.В. и др. «Гематологические маски» хронического вирусного гепатита // Терапевт. арх. 2003. № 11. С. 28—31.
25. Рязанцева Н.В., Жукова О.Б., Белобородова Э.И. и др. Изменения цитогенетического статуса лимфоцитов периферической крови при хронических ИВУ- и ИСУ-инфекциях // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, копопрокгопогии. 2004. Т. 14. № 1. С. 37—40.
26. Рязанцева Н.В., Жукова О.Б, Новицкий В.В. и др. Структурные и функциональные особенности лимфоцитов у пациентов с хроническим носительством антигена вируса клещевого энцефалита // Бол. эксперим. биологии и медицины. 2002. Т. 133. № 11. С. 547—550.
27. Рязанцева Н.В., Жукова О.Б., Новицкий В.В. и др. Роль имму-нофенотипических и цитогенетических изменений лимфоцитов крови в механизмах хронизации вирусной инфекции // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2003. № 6. С. 23—27.
28. Рязанцева Н.В., Жукова О. Б., Новицкий В. В. и др. Активность ДНК-репарационной системы лимфоцитов периферической крови у пациентов с хронической вирусной персистенцией // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2003. № 6. С. 27—29.
29. Рязанцева Н.В., Панин Л.Е, Токарева Н.В и да Структурно-функциональные особенности плазматической мембраны лимфоцитов и эритроцитов при вирусных инфекциях // Сиб. мед. журн. 2003. № 3. С. 34—38.
30. Самуилов В.Д, Алешин А В., Лагунова ЕМ. Программированная клеточная гибель // Биохимия. 2000. Т. 65. Вып. 8. С. 1029 —1046.
31. Сепиашвили Р.И., Щбич М.Г., Колесникова Н.В и да Апоптоз в
иммунологических процессах // Аллергология и иммунология. 2000. Т. 1. № 1. С. 15—23.
32.Сингер М., Берг П. Гены и геномы. М.: Мир, 1998. Т. 1. 331 с.
33.Уразова О.И., Новицкий В.В., Литвинова Л.С., Помогае-ва А. П. Хромосомные нарушения, апоптоз и активность репарации ДНК в лимфоцитах периферической крови при инфекционном мононуклеозе у детей // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2002. Т. 133. № 3. С. 323—326.
34.Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А, Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. 432 с.
35.Хансон К.П. Программируемая клеточная гибель (апоптоз): молекулярные механизмы и роль в биологии и медицине // Вопр. мед. химии. 1997. Т. 43. Вып. 5. С. 402—415.
36. Чумаков П.М. Функция ггена р53: выбор между жизнью и смертью //Биохимия. 2000. Т. 65. вып. 1. С. 34—47.
37. Ярилин А. А Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. № 6. С. 10—23.
38. Ярилин АА Апоптоз: природа феномена и его роль в норме и при патологии //Актуальные проблемы патофизиологии / Под ред. Б. Б. Мороза. М.: Медицина, 2001. С. 13—56.
39. Ярилин А.А., Никонова М.Ф., Ярилина А.А. и др. Апоптоз, роль в патологии, значимость его оценки при клинико-иммунологи-ческом обследовании больных // Мед. иммунология. 2000. № 2. С. 7—16.
40. Ahn J. Y, Jung E. Y, Kwun H.J. et di. Dual effects of hepatitis B virus X protein on the regulation of cell-cycle control depending on the status of cellular p53 //J. Gen. Virol. 2002. V. 83. № 11. P. 2765— 2772.
41.ArbuthnotP., KewM Hepatitis B virus and hepatocellular carcinoma //Int. J. Exp. Pathol. 2001. V. 82. № 2. P. 77—100.
42.Arends M.J., WyiiieA.H. Apoptosis. Mechanism and role in pathology //Int. Rev. Exp. Pathol. 1991. V. 32. P. 223—254.
43. Behrmcnn I., Waiczck H, KrammerP.H. Structure of the Human APO-1 Gene // Eur. J. Immunol 1994. V. 24. № 12. P. 3057— 3062.
44. Beianger C., Gravel A., Tomoiu A. et ai. Human herpesvirus 8 viral FLICE-inhibitory protein inhibits Fas-mediated apoptosis through binding and prevention of procaspase-8 maturation // J. Hum. Virol. 2001. V. 4. № 2. P. 62—73.
45.Bel0ws D.S, Howeii H, Pearson C. et ai. Epstein-Barr virus BALF-1 is a Bcl-2-like antagonist of the herpesvirus antiapoptotic Bcl-2 proteins //J. Viral. 2002. V. 76. № 5. P. 2469—2479.
46. Benn J., Schneider R.J. Hepatitis B virus HBx protein deregulates cell cycle checkpoint controls //Proc. Nal. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. № 24. P. 11215—11219.
47. Boidin M., GondhaovT, Goittsev Y.V., Waiiadh D. Involvement of MACH, a novel MORTI/FADD-interracting protease, in Fas/APO1 and TNF receptor-induced cell death // Cell. 1996. V. 85. № 6. P. 803—815.
48. Cory S., Adams JM The Bcl2 family: regulators of the cellular life-or-death switch. Nature reviews. 2002. V. 2. P. 647—656.
49. Dbabo G, Harm J. Molecule of the month cytokine response mod-ifer a strategically deployed viral weapon // Clin. Imrumol Im-mropatho 1998. V. 86. № 2. P. 134—140.
50. Ehrmann J.Jr, Gaiuszkova D., Ehrmann J. et ai. Apoptosis-re-lated proteins Bcl-2, Bax, Fas, Fas-L and PCNA in liver biopsies of patients with chronic hepatitis B virus infection // Pathol. On-
col. Res. 2000. V. 6. № 2. P. 130-135.
51. Festjens N, Gurp M., Loo G. et cL. Bcl-2 family members as sentinels of cellular integrity and role of mitochondrial intermeembrane space proteins in apoptotic cell death. Acta Haematologica. 2004. V. 111. P. 7-27.
52.Fliborg J.Jr., Kong W, HottigerM.O. et d. p53 inhibition by the LANA protein of KSHV protects against cell death // Nature. 1999. V. 402. №6764. P. 889-894.
53.HanH.J., JungE.Y., Lee W.J, JangK.L. Cooperative repression of cydin-dependent kinase inhibitor p21 gene expression by hepatitis B virus X protein and hepatitis C virus core protein // FEBS Lett. 2002. V. 518. № 1-3. P. 169-172.
54. Hay S., Kannouiakis G. A time to kill: viral manipulation of the cell death program // J. of General Virology. 2002. V. 83. P. 15471564.
55. HeinkeleinM., Pilz S, Jassoy C. Inhibition of CD95 (Fas/Apo1)-mediated apoptosis by vaccina virus WR // Clinic. Exp. Immunol. 1996. V. 103. № 1. P. 8-14.
56. Hsu H, Xiong J, Goeddel D.V. et cL. The TN F receptor 1 -associated protein TRADD signals cell death and NF-kappa B activation // Cell. 1995. V. 81. № 4. P.495-504.
57. Hu S., Vincenz C., Ni J. et a. I-FLICE, a novel inhibitor of tumor necrosis factor receptor-1- and CD-95-induced apoptosis // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. №28. P. 17255-17257.
58. ton N. The polypeptide encoded by the cDNA for human cell surface antigen Fas can mediate apoptosis //Cell. 1991. V. 66. P. 233 -243.
59. Jenamias I., Herr I., Boehler T, Detattin K.M. TRAIL/Apo-2-ligand-in-duced apoptosis in human T cells // Eur. J. Immunol. 1998. V. 28. № 1. P. 143-152.
60. Jodo S., Kotayashi S., Kayagaki N. et cL Serum levels of soluble Fas/APO-1 (CD95) and its molecular structure in patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and other autoimmune diseases //Clin. Exp. Immunol. 1997. V. 107. P. 89-95.
61. Kdkeri G, Khalap N, Garry R. F. et al. Hepatitis C vrus protein expression induce apoptosis in HepG2 cells //Virology. 2001. V. 282. № 1. P. 26-37.
62. Kawarishi M. Anti-apoptotic function of the EBV LMP-1 and BHRF-1 proteins //Nippon. Rinsho. 1996. V. 54. № 7. P. 1845-1854.
63. Kim M Sgagias M Deng X. et a. Apoptosis induced by aden-ovirus-mediated p14ARF expression in U2OS osteosarcoma cells is assocated with increased Fas expression // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004. V. 320. № 1. P. 138-144.
64. Lauli Y., YibelUni D, Caputo A. et cL. The human immunodeficiency virus typy-1 Jat protein uhregulates Bcl-2 gene expression in jurhat T-cell lines and primary perpherial blood mononuclerar cells // Blood. 1995. V. 86. P. 3829-3834.
65. Kroemer G, Zamzan N, Susin S.A. Mitochondrial control of apoptosis //Immunol. Today. 1997. V. 18. № 1. P. 44-51.
66. Lewis J., Wesselingh S.L., GriffinD.E., Hardwick J.M. Alphavirus-induced apoptosis in human neutrophils // J. Virol. 1996. V. 70. № 3. P. 1828-1836.
67. Li C.J., Wang C, Friedman D.J., Pardee A.B. Recprocal modulation between p53 and Tat of human immunodeficiency vrus type-1 //Proc. Nal. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. № 12. P. 5461 -5464.
68. Liov S, Hayashi N, Mita E. et a. Serum level of soluble Fas antigen in chronic hepatitis C patients //J. Hepatol. 1998. V. 29. № 4. P. 517-523.
69. Liu Z.G, Hsu H, Goeddel D.V, Karin M. Dissection of TNF receptor 1 effector functions: JNK activation is not linked to apoptosis while NF-kappaB activation prevents cell death //Cell. 1996. V. 87. № 3. P. 565-576.
70.Mcrsters S.A., Sheridan J.P, Donahue C.J. et al. Apo-3, a new member of the tumor necrosis factor receptor family, contains a death domain and activates apoptosis and NF-kappa B // Curr Biol. 1996. V. 6. № 12. P.1669—1676.
71. Masters S.A., Sheridan J.P, Pitti R.M. et al. A novel receptor for Apo2L/TRAIL contains a truncated death domain // Curr. Biol.
1997. V. 7. № 12. P. 1003—1006.
72.Martinez-Lorenzo M.J., ALava M.A., Gasmen S. et d. Involvement of APO2 ligand/TRAIL in activation-induced death of Jurkat and human peripheral blood T cells // Eur. J. Immunol. 1998. V. 8. № 9. P. 2714—2725.
73.McFar1ane W.M., AhmadM, SrinivasulaS.M. et a. Identification and molecular cloning of two novel receptors for the cytotoxic lig-and TRAIL //J. Biol. Chem. 1997. V. 272. №41. P. 25417—25420.
74. MongkoLscpaya J., Copier A.E., XuX.N. et cL Lymphocyte inhibitor of TRAIL (TNIF-related apopttosis-indua'ng ligand): a new receptor protecting lymphocytes from the death ligand TRAIL //J. Immunol.
1998. V. 160. № 1. P. 3—6.
75. Nagatc S. Apoptosis by death factor // Cell. 1997. V. 88. № 3. P. 355—365.
76. Nctoff G, Costanzo A., larniA et a1 Activation of SAPK/JNK by TNF Receptor 1 Through a NoncytotcKic TRAF2-Dependent Pathway //Scence. 1997. V. 275. №5297. P. 200—203.
77.NdoLo T, DhilLonN.K., Nguyen H. et a. Induction of apoptosis in mature T cells //J. Virol. 2002. V. 76. № 8. P. 3587—3595.
78. Newton K., Harris A W, Bath M.L et a. A dominant interfering mutant of FADD/MORT1 enhances deletion of autoreactive thymocytes and inhibits proliferation of mature T lymphocytes. // EMBO J. 1998. V. 17. № 3. P. 706—708.
79. Nguyen H, MudryjM., Guadalupe M., Dandekar S. Hepatitis C virus core protein expression leads to biphasic regulation of the p21 cdk inhibitor and modulation of hepatocyte cell cycle // Virology; 2003. V. 312. № 1. P. 245—253.
80. OehmA, Behrmann I., Falk W. et al. Purification and Molecular Cloning of the APO-1 Cell Surface Antigen, a Member of the Tumor Necrosis Factor/Nerve Growth Factor Receptor Superfamily // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. № 15. P. 10709—10715.
81. Ohkawa K., Ishida H., Nakarishi F. et al. Hepatitis C virus core functions as a suppressor of cyclin-dependent kinase-activating kinase and impairs cell cycle progression. // J. Biol. Chem. 2004. V. 279. № 12. P. 11719—11726.
82.Oka K, Nagano-FujiM., YoshidaI. et al. Hepatitis C virus core protein selectively inhibits synthesis and accumulation of p21/Waf1 and certain nuclear proteins //Microbiol. Immunol. 2003. V. 47. № 6. P. 429—438.
83.Oliveira Pinto L.M., Garcia S., Lecoeur H. et al. Increased sensitivity of T lymphocytes to tumor necrosis factor receptor 1 (TN-FR1)- and TNFR2-mediated apoptosis in HIV infection: relation to expression of Bcl-2 and active caspase-8 and caspase-3 // Blood. 2002. V. 99. № 5. P. 1666—1675.
84. Otsuka M., Kato N, Tarigudhi H. et al. Hepatitis C vrus core pro-ten inhibits apoptoss via enhanced Bcl-xL expression //Virology. 2002. V. 296. № 1. P.84—93.
85.Pan G, Ni J., Wei Y.F. et cL The receptor for the cytotoxic ligand
TRAIL //Scence. 1997. V. 277. №5327. P. 815—818.
86. Park U.S., Park S.K., Lee Y.I. et a, Hepatitis B vrus-X protein up-regulates the expression of p21waf1/dp1 and prolongs G1-->S transition via a p53-independent pathway in human hepatoma cells //Oncogene. 2000. V. 19. № 30. P. 3384—3394.
87. Pianko S, Patella S, Ostcpowicz G. et al. Fas-mediated hepatocyte apoptoss is increased by hepatitis C vrus infection and alcohol consumption, and may be assocated with hepatic fibrosis: mechanisms of liver cell injury in chronic hepatitis C vrus infection //J. Viral. Hepat 2001. V. 8. № 6. P. 406—413.
88.PttfR.M., MastersS.A., RuppertS. et al. Induction of apoptoss by Apo-2 ligand, a new member of the tumor necross factor cytokine family // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. № 22. P. 12687— 12690.
89.PolyakK, Xia Y., ZweierJ.L et al. The model for p53-induced apoptoss //Nature. 1997. V. 389. №6648. P. 300—305.
90.Roy D.J., Robert-Hebmann V, Hamington S. et al. Murine gamma-herpesvrus M11 gene product inhibits apoptoss and is expressed during vrus persistence // J. Virol. 2000. V. 145. № 11. P. 2411 — 2420.
91. Schneider P, Bodmer J.L., Thome M. et cL Characterization of two receptors for TRAIL //FEBS Lett. 1997. Vol. 416. P. 329—334.
92. ScreatonG.R., Mongkolscpaya J., XuX.N. et al. TRICK2, a new alternatively spliced receptor that transduces the cytotoxic signal from TRAIL //Curr. Biol. 1997. V. 7. № 9. P. 693—696.
93.Screatm G.R., Xu X.N., Olsen AL et a, LARD: a new lymphoid-specific death domain containing receptor regulated by alternative pre-mRNA spiring. // Proc. Natl. Acad. Sc. U S A. 1997. V. 94. № 9. P. 4615—4619.
94. Sheridan J.P; Marsters S.A., Ft R.M. et a, Control of TRAIL-induced apoptoss by a family of signaling and decoy receptors // Scence. 1997. V. 277. P. 818—821.
95. Shu H.B., Halpin D.R., Goeddel D.V Casper is a FADD- and cas-pase-related inducer of apoptoss // Immunity. 1997. V. 6. № 6. P. 751—763.
96. Simon H.-U. Molecular mechanisms of programmed cell death // Apoptoss. 1996. V. 1. P. 107—109.
97. Smith C.A., Farrdh T, Goodwin R. G. The TN F receptor superfamily of cellular and vrral proteins: activation, costimulation, and death // Cell. 1994. V. 76. № 6. P. 959—962.
98.Sohn S, Iatovttch-Gnoisman I., Benlimame N. et al. Retroviral expression of the hepatitis B vrus x gene promotes liver cell susceptibility to caranogen-induced site specific mutageness // Mutant. Res. 2000. V. 460. № 1. P. 17—28.
99. Suda T, Nagccta S. Purification and characterization of the Fas-lig-and that induces apoptoss // J. Exp. Med. 1994. V. 179. № 3. P. 873—877.
100. Susin S.A., Lorenzo H.K., Zamzan N. et cL. Mitochondrial release of caspase-2 and —9 during the apoptotc process // J. Exp. Med. 1999. V. 189. № 2. P. 381—394.
101. Tckz&wa T, Mdtsukawa S, Higuchi Y. et dl. Induction of programmed cell death (apoptoss) by infuenza vrus infection in tissue culture cells //J. Gen. Virol. 1993. V. 74. № 11. P. 2347—2355.
102. TnckaM.,ItaT,AdachiiM.,NagcctaS. Downregulation of Fas ligand by shedding //Nat. Med. 1998. V. 4. № 1. P. 31 —36.
103. Tcnaka M., Suda T, Nakamurd N. Fas ligand in human serum // Nature Med. 1996. V. 2. P. 317—322.
104. Tcnaka M., Suda T, Yatomi T. Lethal effect of recombinant human
Fas ligand in mice pretreated with fropobacterium asnes // J. Immunol 1997. V. 158. № 5. P. 2303-2309. ICb.Tatagtia LA, Ayres T.M, Wong G.H., Goeddel D.V. A novel domain within the 55 kd TNF receptor signals cell death // Cell 1993. V. 74. № 5. P. 845-853.
106. TatagUa L.A, Goeddel D. V. Two TNF receptors //Immunol. Today 1992. V. 13. № 5. P. 151-153.
107. Taya N, Torimoto Y., Shindo M et a. Fas-mediated apoptosis of peripheral blood mononuclear cells in patients with hepatitis C //Br. J. Haematol. 2000. V. 110. № 1. P. 89-97.
108. Thome M., Schneider P, Hofmann K et aL Viral FLICE-inhibitory proteins (FLIPs) prevent apoptosis induced by death receptors // Nature. 1997. V. 386. №6624. P. 517-524.
109. Thompson C.B. Apoptosis in the pathogenesis of diseasea // Scence. 1995. V. 267. P. 1456-1462.
110. Tokano Y, Miyake S, Kayagaki N. et al. Soluble Fas molecule in the serum of patients with systemic lupus erythematosus // J. Clin Immunol. 1996. V. 16. № 5.
P. 261 -265.
111. Tolstaya E.A., Romanova LI, KolesnikovaM.S. Apoptosis-induc-ing and apoptosis-preventing functions of poliovirus // J. Virol. 1995. V. 69. №2. P. 1181-1189.
112.Tsukiyama-Kohcm K, Tone S., Mauyama I. et al. Activation of the CKI-CDK-Rb-E2F pathway in full genome hepatitis C virus-expressing cells // J. BioL Chem 2004. V. 279. № 15. P. 14531 -14541.
113. WaczakH, Degi-EspostiMA, JohnsonR.S. et aL TRAIL-R2: a novel apoptosis-mediahng receptor for TRAI. // EMBO J. 1997. V. 16. № 17. P. 5386-5397.
114. Wiley S.R., Schooley K, Smolak P. J. et a. Identification and char-
acterization of a new member of the TNF family that induces apoptosis //Immunity 1995. V. 3. № 6. P. 73-682.
115. Yang Y, Dong B, Mittelstadt RR. et a. HIV Tat Binds Egr Proteins and Enhances Egr-dependent Transactivation of the Fas Ligand Promoter //J. BioL Chem. 2002. V. 277. № 22. P. 19482-19487.
116. Yao Z.Q., EsenVandervelde A, Ray S, Hahn Y.S. HCV core/gC1qR interaction arrests T cell cycle progression through stabilization of the cell cycle inhibitor p27Kip1 // Virology; 2003. V. 314. № 1. P. 271-282.
117. Yeh W.-C, Pompa J.L., McCurraChME FADD: essential for embryo development and signaling from some, but not all // Scence. 1998. V. 279. №5358. P. 1954-1958.
118. Yoo Y.G., Lee MO. Hepattis B Virus X Protein Induces Expression of Fas Ligand Gene through Enhancing Transcriptional Activity of Early Growth Response Factor // J. Biol. Chem. 2004. V. 279. № 35. P.36242-36249.
119. Zhang J, Cado D, Chen A. et aL Fas-mediated apoptosis and activation-induced T-cell proliferation are defective in mice lacking FADD/Mort1 //Nature. 1998. V. 392. №6673. P.296-300.
120. Zhang Y, Peng Z., Qiu G. et al. Overexpression of cyclin A in hepatocellular carcinoma and its relationship with HBx gene integration //Zhonghua Zhong Liu Za Zhi. 2002. V. 24. №4. P. 353-355.
121. Zhu N, Ware C.F, Lai MM Hepatitis C vrus core protein enhances FADD-mediated apoptosis and suppresses TRADD signaling of tumor necrosis factor receptor //Virology 2001. V. 283. № 2. P. 178-187.
122. Zonig M, Hueber AO., Evan G. p53-dependent impairment of T-cel proliferation in FADD dominant-negative transgenic mice // Curr. Biol. 1998. V. 8. № 8. P. 467-470.
nocrynmna b peqaK+io 11.04.2006 r.
