CC BY
39
УДК 616.932(471)
Г.А.Ерошенко
МОЛЕКУЛЯРНОЕ ТИПИРОВАНИЕ ШТАММОВ VIBRIO CHOLERAE НЕ 01/ НЕ 0139, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ И ДРУГИХ СТРАН СНГ ОТ БОЛЬНЫХ ЛЮДЕЙ
Российский научно-исследовательский противочумный институт «Микроб», Саратов
С помощью методов рибо- и ПЦР-типирования с использованием случайных праймеров проведено молекулярное типирование штаммов холерных вибрионов 02, 022, 041, 042, 043, 056 серогрупп, выделенных в России и других странах СНГ от больных людей. Выявлено значительное генетическое разнообразие изученных слабопатогенных штаммов V. cholerae различных серогрупп.
Появление возбудителя холеры 0139 серогруп-пы в 1992 г. в Юго-Восточной Азии показало, что не только вибрионы 01 серогруппы способны вызывать эпидемии холеры, как это считалось ранее, но и вибрионы других серогрупп могут проявлять себя в качестве этиологических агентов холеры. Это событие заставило по-иному взглянуть на эпидемический потенциал V. с1го1егае не 01, выделяемых от больных людей и из объектов внешней среды, и потребовало проведения постоянного мониторинга этих штаммов с использованием современных молекулярно-биологических методов, в том числе и методов молекулярного типирования, которые позволяют получать генетическую характеристику штаммов, дифференцировать эпидемические и неэпидемические изоляты и устанавливать источник их происхождения. В связи с этим целью нашей работы было проведение молекулярного типирования штаммов не 01/ не 0139 серогруппы, выделенных на территории Российской Федерации и других стран СНГ. В работе-использованы штаммы 02, 022, 041, 042, 043, 056 серогрупп, изолированные от больных людей в 1968-2004 гг. в Астраханской, Ростовской, Саратовской, Московской областях РФ, в Узбекистане и Туркмении. Типирование штаммов проводили на основе модифицированного метода риботипирования и ПЦР-типирования со случайными праймерами. В качестве зонда на 168 рРНК применяли продукт амплификации гена 16Б рРНК с праймерами, предложенными нами ранее [1]. В КАРБ-ПЦР применяли праймеры, использованные в-Уаззай е/ а1. [2]
Риботипирование штаммов не 01/ не 0139 серогруппы показало, что профили гибридизации с зондом на 16Б рРНК штаммов 02, 022, 041, 042, 043, 056 серогрупп значительно отличаются друг от друга, а также от штамма 569В серогруппы 01 классического биовара и, следовательно, изученные штаммы относятся к разным риботипам. Эти данные означают, что штаммы различных серогрупп, выделенные от больных людей в РФ, по-видимому, не имеют близкого генетического родства и, скорее всего, относятся к различным филогенетическим линиям вибрионов. Исключение из числа изученных штаммов составили лишь два штамма 041 серогруппы, выделенные в 1976 г. в Астрахани, которые имели одинаковый профиль гибридизации с зондом на 16Б рРНК и, следовательно, представляли один риботип. Одинаковая организация генов биосинтеза рРНК штаммов 041 серогруппы, а также единый источник их происхождения свидетельствуют о том, что эти штаммы относятся к одному и
тому же клону холерного вибриона 041 серогруппы, вызвавшего вспышку диарейного заболевания в 1976 г. в Астрахани. Поскольку методом ПЦР с использованием специфических праймеров нами установлено, что в их геноме не содержатся гены биосинтеза холерного токсина, то из этого следует, что вибрионы 041 серогруппы, выделенные в Астрахани, не обладают высоким эпидемическим потенциалом и могут вызывать лишь холероподобное заболевание. Однако в случае приобретения ими генов холерного токсина, переносимых умеренным холерным филаментозным фагом CTXphi, штаммы могут значительно повысить вирулентность. .
Данные, полученные нами с помощью метода риботипирования, были подтверждены в ПЦР с использованием случайных праймеров. ПЦР профили различных штаммов не 01/ не 0139 серогруппы, выделенных от больных людей, отличались друг от друга и от вирулентных штаммов 01 серогруппы классического и эльтор биоваров. Это подтверждает сделанный на основе риботипирования вывод о том, что изученные нами штаммы относятся к различным группам холерных вибрионов. Штаммы 041 серогруппы из Астрахани имели идентичные ПЦР профили и, следовательно, относились к одному клону холерного вибриона не 01/ не 0139 серогруппы.
Таким образом, с помощью методов молекулярного типирования выявлено значительное генетическое разнообразие изученных слабопатогенных штаммов V. cholerae различных серогрупп, выделяемых на территории России и других стран СНГ.
Работа поддержана грантом РФФИ № 05-04-48727.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1.Ерошенко Г.А., Осин А.В., Смирнова НИ.// Пробл. особо опасных инф. - Саратов, 2002. - С. 80-85. -2. Vassart G., Georges М., Monsieur R. el a\. II Science. -1987. - Vol. 235, N 4789. - P. 683-684.
G.A.Yeroshenko
Molecular Typing of Vibrio cholerae Non-01/Non-0139 Strains, Isolated from Cholera Patients in the Territory of the Russian Federation and Other CIS Countries
Russian Anti-Plague Research Institute "Microbe", Saratov
Molecular typing of cholera Vibrio strains serogroups 02, 022, 041, 042, 043, 056, isolated in Russia and other CIS countries from clinical patients was carried out using ribo- and PCR typing techniques with arbitrary primers. These weakly pathogenic V. cholerae isolates belonging to different serologic groups were found to be characterized by significant genetic diversity.
Поступила 12.10.05.
