МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ β-ТАЛАССЕМИИ В РОССИИ Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

Гематол. и трансфузиол., 2014, т. 59, № 1

полнена алло-ТКМ, 2 живы в ремиссии. Умерли 4 больных: 1 больной - в 3-м рецидиве (длительность ремиссии 9 мес) 1 больной - в ремиссии от осложнений после алло-ТКМ, 1 - от прогрессии ОПЛ, у 1 больного наступила внезапная смерть при сроке ремиссии 72 мес.

Заключение. As2O3 + ATRA в течение 60 сут с поддерживающей терапией являются более эффективным лечением рецидивов ОПЛ, чем химиотерапия. Интерферон-а + ATRA нецелесообразно использовать в лечении молекулярных и цитогенетических рецидивов ОПЛ.

Заготовка и применение аутологичных стволовых клеток у пациентов с хронической ишемией нижних конечностей

Солдатенков В.Е., Чечеткин А.В., Каргин В.Д., Волошин С.В., Бураков В.В., Глазанова Т.В., Чубукина Ж.В., Павлова И.Е., Розанова О.Е. ФГБУ Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА России, Санкт-Петербург

Ключевым элементом технологии терапевтического ан-гиогенеза у больных с хронической ишемией нижних конечностей чаще всего является заготовка и введение аутологичных стволовых клеток периферической крови (ауто-СКПК). С помощью данной технологии в 2010-2013 гг пролечены 20 больных (17 мужчин и 3 женщины). В их числе облите-рирующий атеросклероз был у 16 (80%), болезнь Бюргера -у 4 (20%), сопутствующий сахарный диабет 2-го типа - у 2 больных. Средний возраст составил 60,9 ± 7,7 года. По клиническим проявлениям ишемии (по А.В.Покровскому-Фон-тейну): IIa - IV стадии. Мобилизацию ауто-СКПК проводили с помощью гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) филграстима - 10 мкг/кг массы тела больного подкожно в течение 3 последовательных дней. Лейкоцитафе-рез выполняли на 4-й день от начала введения филграстима на аппарате Haemoneticsä MCSä + LN 900-220E, протокол PBSC, через периферический венозный доступ (кубитальная вена); антикоагуляция - стандартный раствор ACD-A, соотношение антикоагулянта к объему крови - 1:9. Время афере-за составило 72,7 ± 9,6 мин, объем сепарированной крови -

1715,7 ± 198,5 мл, объем концентрата СКПК - 48,4 ± 16,1 мл. У 2 больных аферез осложнился усилением болевого синдрома в пораженной конечности, потребовавшим введения анальгетиков. После стимуляции относительное содержание CD34+-клеток в периферической крови возрастало в среднем в 2,6 раза (0,079%), а абсолютное - в 22 раза (0,044 • 109/л против 0,002 • 109/л в группе до стимуляции;р < 0,005). Относительное содержание CD34+-клеток в лейкоцитарном концентрате составило 0,28%, что было в 3,5 раза больше, чем в периферической крови после стимуляции (0,079%). Концентрат СКПК с абсолютным содержанием 0,779 ± 0,167 • 109/л CD34+клеток, витальность 97,704 ± 0,974%.Среднее время хранения концентрата СПКП от момента окончания афереза до введения больному составило 35,3 ± 21,3 мин. Введение трансплантата (концентрат СКПК) проведено внутримышечно из 30 точек по 1 мл под контролем УЗИ. Средняя доза введения больному составила 2,337 • 107 CD34+-клеток. В сроки наблюдения до 2 лет 6 мес достигнуто клиническое улучшение у 89,7% больных, не проводилось больших ампутаций и сохранена трудоспособность у работающей группы больных.

Применение аутологичной крови в трансфузионном обеспечении плановых операций

у больных гемофилией

Солдатенков В.Е., Чечеткин А.В., Каргин В.Д., Бураков В.В., Титов А.Г. ФГБУ Российский НИИ гематологии и трансфузиологии ФМБА России, Санкт-Петербург

Введение. Применение аутологичной крови является оптимальным методом восполнения кровопотери при трансфузионном обеспечении плановых оперативных вмешательств.

Данный метод у пациентов высокого риска с наследственными коагулопатиями практически не использовался.

Цель работы. В 2002-2013 гг. мы провели оценку эффективности и безопасности применения аутокрови у больных гемофилией.

Материалы и методы. Аутологичные кровь и гемоком-поненты использованы при оперативном лечении у 49 больных гемофилией. Использовали сочетание предоперационной заготовки и интраоперационной гемодилюции, реже

применяли также реинфузии дренажной крови и из операционной раны.

Результаты и обсуждение. Метод использован при оперативном лечении 49 больных гемофилией. Максимально предоперационно заготовлено до 1790 мл аутокрови от пациента, гемодилюция с заготовкой аутокрови выполнена в 39 случаях, проведены 33 предоперационных заготовки, 15 реинфузий из дренажа.

Заключение. Нарушений гемостаза вследствие применения аутологичной крови и ее компонентов не выявлено. Применение аутологичной крови и ее компонентов безопасно у больных гемофилией и позволяет повысить эффективность трансфузи-онного обеспечения планового оперативного лечения.

Молекулярно-генетическое исследование в-талассемии в России

Сурин В.Л., Демидова Е.Ю., Селиванова Д.С., Бурская В.О., Лучинина Ю.А., Колодей С.В., Цветаева Н.В. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. р-талассемия - рецессивное наследственное заболевание, обусловленное мутациями в гене р-глобина. Та-лассемические мутации имеют, как правило, древнее происхождение и являются генетическими характеристиками для различных этнических групп.

Цель работы. Определение спектра мутаций в гене Р-шобина у гетерозиготных носителей р-талассемии из России.

Материалы и методы. Определены мутации в гене Р-глобина у 90 гетерозиготных носителей р-талассемии

(малая талассемия), относящих себя к русской популяции. Выявлена 21 различная мутация, 2 из которых являются новыми и ранее в мировой популяции не встречались. Это микроинсерция CD46insG и сочетанное нарушение CD49deЮ+CD50ACT^ATT(Thr^Пe). Полученный мутационный спектр существенно отличается от опубликованного ранее (М.Сигик и соавт., 1994), в котором превалирующей была средиземноморская микроделеция CD8delAA (38,7%). В нашем ииследовании она обнаружена у 11 (12,2%) из 90 ге-

Приложение 1

терозиготных носителей р-талассемии, а наиболее распространенной оказалась замена ^8П+654С^Т - у 18 (20%), найденная в России ранее всего один раз (1,6%). Следует отметить, что эта мутация практически не встречается в Средиземноморье и очень широко распространена в Китае (21,4%), Японии (12%) и странах Юго-Восточной Азии (5,1-46,3%). Вполне вероятно, что в Россию она проникла через Дальний Восток или Среднюю Азию (аналогичный мутантный аллель был найден нами у пациента из Казахстана). Мутация CD8delAA скорее всего пришла в Россию с Ближнего Востока через Кавказ. По нашим данным, она является мажорной в Азербайджане (35,8%) и Армении (52,4%), а также в Грузии

и Дагестане (малые выборки, нет статистики). С достаточно высокой частотой встречаются в России мутации (13,3%), IVSI+110G^A (12,2%), ГУБП+745С^ (8,9%) и ^81+6Т^С (7,8%). Все они имеют средиземноморское происхождение и могли прийти на территорию России через Кавказ или Балканы. Интерес представляет мутация ГVSП+745, которая у всех российских пациентов, в отличие, например, от пациентов из Азербайджана или стран Ближнего Востока, сочетается с очень редким полиморфизмом САР+20С^Т, имеющим, вероятно, более позднее происхождение. Аналогичное сочетание до настоящего времени было найдено только в Болгарии и Испании.

Применение препарата антитромбин III при лечении тромбозов у больных хроническими

миелопролиферативными неоплазиями

Суханова Г.А., Вахрушева М.В., Колосова Л.Ю., Меликян А.Л. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. Хронические миелопролиферативные заболевания (ХМПЗ) - это обширная группа клональных Р^ позитивных и Р^негативных неоплазий (ХМПН). Венозные тромбозы различной локализации встречаются при всех формах ХМПН. Частота портальных тромбозов составляет 1020% при ХМПН и может развиваться на любой стадии заболевания. При острых портальных тромбозах рекомендуется антикоагулянтная терапия - гепарин, низкомолекулярные ге-парины (НМГ), которая приводит к полному или частичному восстановлению просвета вен у 70-80% больных, у 20-30% больных лечение оказывается неэффективным.

Цель работы. Разработка методов повышения эффективности терапии тромботических осложнений при Р^ негативных ХМПН при резистентности к терапии антикоагулянтами и антиагрегантами в острой и подострый период тромбоза.

Материалы и методы. Для лечения острых и подострых портальных тромбозов мы впервые применили препарат Антитромбин III ("Бакстер", Австрия) у 5 больных с различными вариантами ХМПН (3 - с первичным миелофиброзом и 2 - с эссенциальной тромбоцитемией). Препарат применяли у больных как с низким, так и с нормальным содержанием эндогенного АТШ в сочетании с НМГ в лечебных или профилактических дозах и базовой специфической (циторедук-тивной) терапией. Препарат вводили в дозе 1000 МЕ 1 раз в 3 дня, 3-5 введений, т.е. курс лечения составлял 3000-5000 МЕ.

Результаты. Во всех случаях применения препарата Антитромбин III отмечен положительный клинический эффект, заключающийся в быстром купировании болевого синдрома, у 3 из 5 больных после первого введения, и сравнительно с рутинной терапией ранней реканализацией тромбированных сосудов (от 3 нед до 1,5-2 мес). Препарат Антитромбин III

применяли у больных, резистентных к стандартной терапии антикоагулянтами (гепарин, НМГ) и антиагрегантами. У 3 больных успешное лечение препаратом Антитромбин III проведено в подострой стадии тромбоза (через 1,5; 2 и 5 мес от начала тромбоза), т.е. на сроках, когда рутинные методы малоэффективны. По коагулологическим показателям до и после лечения препаратом Антитромбин III отмечены нормализация показателя растворимых фибрин-мономерных комплексов и D-димера и повышение уровня эндогенного АТШ.

Заключение. Анализ клинического применения препарата Антитромбин III позволяет заключить следующее:

• применение данного препарата в дозе 1000 МЕ, 3-5 введений (суммарно 3000-5000 МЕ) способствует более быстрой реканализации тромбированных вен, чем при традиционной терапии гепарином или НМГ;

• выявлена высокая клиническая эффективность на разных стадиях тромбоза, в том числе при подострых тромбозах давностью от 1,5 до 5 мес;

• продемонстрирована высокая клиническая эффективность при тромбозах, резистентных к антикоагулянтной терапии (гепарин, НМГ);

• отмечена независимость клинического эффекта от исходного уровня эндогенного АТШ в плазме;

• важна возможность применения у больных при состояниях, связанных с высоким риском кровотечений (варикоз-но-расширенные вены пищевода, язвы желудка или двенадцатиперстной кишки с кровотечениями в анамнезе), и использования его в амбулаторных условиях;

• применение данного препарата у больных ХМПЗ при лечении портальных тромбозов не препятствует проведению специфической циторедуктивной терапии и применению антикоагулянтов.

ПЦР-диагностика болезней накопления - наследственного гемохроматоза, болезней Вильсона-Коновалова

и Гоше

Февралева И.С., Лукина Е.А., Судариков А.Б. ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, Москва

Введение. Болезни накопления минеральных или органических веществ обусловлены наличием полиморфизмов в генах, кодирующих ферменты, которые участвуют в метаболизме этих веществ. Показано, что во многих случаях к накоплению железа приводят мутации C282Y, H63D и S65C в гене HFE (наследственный гемохроматоз), к накоплению меди - мутация H1069Q в гене АТР7В (болезнь Вильсона-Коновалова), к накоплению глюкоцеребрози-да - мутации N370S, ^2+1, 84GG и L444P в гене GBA (болезнь Гоше).

Цель работы. Создание тест-систем на основе ПЦР в режиме реального времени (ПЦР-РВ) для выявления наиболее часто встречающихся полиморфизмов, приводящих к возникновению наследственного гемохроматоза, болезней Вильсона-Коновалова и Гоше.

Материалы и методы. Геномную ДНК выделяли из периферической крови больных. C помощью базы данных GenBank проводили анализ последовательности ДНК в районе мутаций, на основании которого, используя программы BLAST и Primer 3, подбирали по 2 прямых праймера,