CC BY
2являются: нерегулярные диагностические исследования, несвоевременное удаление из неблагополучного стада больных и реагирующих на лейкоз животных, наличие в хозяйствах неблагоприятных стрессовых факторов, провоцирующих данную инфекцию, использование для осеменения коров быков-производителей, не обследованных на наличие ВЛКРС, нарушения ветеринар-но-санитарных правил при осуществлении оздоровительных и профилактических мероприятий и, наконец, отсутствие научно-обоснованной программы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота.
Таким образом, результаты наших ис-
следований свидетельствуют о широком распространении в животноводческих хозяйствах Дагестана лейкоза крупного рогатого скота и о тенденции к росту этой опасной инфекции. Высокая степень распространенности лейкоза установлена и в племенных хозяйствах. Вместе с тем, истинная эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в республике остается невыясненной, несмотря на разработку проекта Республиканской целевой программы «Оздоровление племенных ферм от лейкоза крупного рогатого скота на 2005-2010 гг.» и подлежащей подтверждению Правительством республики.
Н.А. Казаков
Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии РАСХН им. Я.Р.Коваленко
МИНИМАЛЬНАЯ ЗАРАЖАЮЩАЯ ДОЗА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ (A. MARGINALE, A. OVIS) ПРИ АНАПЛАЗМОЗЕ КРС И ОВЕЦ - КРИТЕРИЙ ОБЪЕКТИВНОЙ ОЦЕНКИ ИММУНОГЕННЫХ СВОЙСТВ ПРОТИВОАНАПЛАЗМОЗНЫХ АДЬЮВАНТНЫХ ИНАКТИВИРОВАННЫХ ЭМУЛЬГИРОВАННЫХ ВАКЦИН
Анаплазмоз распространен весьма широко среди домашнего рогатого скота и диких животных, филогенетически родственных домашним и представляет большой интерес для науки и практики, так как характеризуется своеобразием паразито-хозяинных взаимотношений, иммуно-био-химического и клинического проявления и причиняет значительный ущерб животноводству и дикой фауне.
Открытие и описание в первой четверти XX столетия возбудителей анаплазмоза крупного рогатого скота - Anaplasma marginale, Theiler, 1910 и A. centrale, Theiler, 1911; овец - A. ovis, Zestoquard, 1924 положило начало многочисленным исследованиям по выяснению видового состава, ареала, круга хозяев, морфологических и биологических особенностей возбудителей, определению их природы, систематического положения и патогенного воздействия на организм животных. Однако до настоящего времени анаплазмоз остается все еще недостаточно изученной болезнью животных.
Анаплазмы - типичные прокариоты, не
имеющие «истинного» ядра и других органоидов, свойственных простейшим. От вирусов они отличаются клеточной организацией и наличием в своем составе обеих нуклеиновых кислот - ДНК и РНК (Абрамов И.В., Степанова Н.И., Дьяконов Л.П., Гробов О.Ф., 1965).
По структуре анаплазмы близки к группе возбудителей пситтакоза - лимфограну-лемы - трахомы (хламидии) и риккетсиям.
Анаплазмоз - трансмиссивное заболевание, характеризующееся лихорадкой непостоянного типа, анемией, истощением.
Довольно часто анаплазмоз крупного рогатого скота и овец диагностируется в виде смешанной инвазии с бабезиедозами, тейлериозом, эперитрозоонозом (Дьяконов Л.П., 1969; Агаев А.А., 1971; Ганиев И.М., 1973; Чарыев О.Ч., 1975 и другие). При этом отмечается более тяжелое течение болезни. Кроме того, иное, более тяжелое клиническое проявление анаплазмоза отмечают в празитоценозах с гельминтными, инфекционными, вирусными болезнями.
К тому же, анаплазмоз может служить
фоновым заболеванием, т.е. анаплазмоно-сители болеют, как правило, тяжелее при внедрении возбудителей инфекционных, вирусных, гельминтных болезней.
В сложном симптомокомплексе анаплазмоза анемия - ведущий признак клинического проявления болезни. Она бывает очень глубокой; количество эритроцитов может снижаться до 2-1,5 млн/мм3 крови, гемоглобина до 4-2 г%.
Патогенез заболевания осложняется аутоантителами, вырабатываемыми селезенкой и РМС против пораженных и анти-генно измененных эритроцитов, воспринимаемых в организме больного животного иммунокомпетентными клетками как «чужеродные».
В предохранении от анаплазмоза ведущую роль, вероятнее всего, выполняют клеточно-зависимые факторы иммунитета. Иммунный ответ развивается по схеме: Т-клетки - В-лимфоцит - плазмоцит.
Постоянное присутствие антигена в организме стимулирует иммунокомпетент-ные клетки и выработку антител, которые, видимо, не играют роли в предохранении от анаплазм; антитела в большей степени влияют на развитие анемии (Carson C.C., Seles D.W., Ristic M., 1976).
Профилактика анаплазмоза основывается на недопущении распространения болезни животными - анаплазмоносителями, борьбе с переносчиками - клещами и кровососущими насекомыми, проведение лечебных мероприятий, соблюдений правил асептики и антисептики при проведении ве-теринарно-зоотехнических мероприятий, связанных с нарушением целостности кожного покрова (спиливание рогов, кастрация, взятие крови, мечение, обрезание хвостов и другие хирургические мероприятия). Особые трудности возникают в зонах, где анаплазмоз проявляется как природноочаговое заболевание, при пользовании одними и теми же пастбищными угодиями как домашними животными, так и дикими парнокопытными - анаплазмоносителями.
Поэтому протозоологи мира стремились разработать способы специфической профилактики - иммунизации.
Исследования проводились в двух направлениях:
1. Использование живых возбудителей:
а) иммунизация животных минимальной заражающей дозой - 0,01 мл крови с A. marginale (Franclin EE., Haff J.W, 1967);
б) введение животным стабилята крови с A. marginale, разведенного до 10-3 (2,6x10"9"8"7 паразитов в 1 мл крови с парази-
темией 18-30%).
Иммунизацию в том и другом случае проводили в холодное время года. Все животные выздоровели и приобрели иммунитет;
в), аттенуирование A. marginale пассажами через организм облученых овец с последующей иммунизацией крупного рогатого скота зараженными эритроцитами овец со стабилятом. Иммунитет формировался в течение трех недель, паразитемия у вакцинированных, однако, достигала 225% (в зависимости от дозы вакцины). Животные были полностью устойчивы к повторному заражению A. marginale;
г) иммунизация крупного рогатого скота малопатогенным A. centrale;
д) введение инфицированной A. marginale крови с последующей иньекцией лечебных препаратов.
Следует отметить, однако, что это направление исследований в конечном счете способствовало более широкому распространению возбудителя в природе. Так, было установлено позднее (зарубежные данные), что аттенуированные возбудители реверсировали, восстановив свои исходные биологические свойства.
Адьювантные вакцины:
а) за рубежом (США) исследования проведены с A. marginale (антигеном). В качестве адьювантов использованы легкое минеральное масло, неполный адью-вант Фрейнда;
б) в нашей стране - с A. ovis, A. marginale (антигены). В качестве адьювантов использованы: неполный адьювант Фрейн-да; легкое минеральное масло в сочетании с безводным ланолином; универсальный адьювант ВНИИ ЗЖ; маркол-52 (Франция)+эмульгатор-139. Адьювантные препараты обладали выраженными имму-ногенными свойствами, предохраняя животных от заболевания при последующем введении им инфицированной крови, а также от нападения инфицированных клещей -переносчиков возбудителя анаплазмоза.
Создание адьювантных инактивиро-ванных эмульгированных вакцин против анаплазмоза крупного рогатого скота и овец потребовало объективной оценки ре-актогенных и иммуногенных свойств этих препаратов.
В своих исследованиях мы исходим из оценочных категорий, применяемых к бактериальным и вирусным инфекциям - ИД50 (ID50) - 50% инфицирующая доза -минимальное количество микробных клеток или вируссодержащего материала, вызывающее поражение 50% взятых в опыт
чувствительных объектов (культуры клеток, куриные эмбрионы, восприимчивые животные) или ЦПД50 (CD50) - 50% цито-патогенная доза - минимальное количество микробных клеток или вируссодержащего материала, вызывающее цитопатогенное действие в половине взятых в опыт пробирок с культурой ткани.
Мы в своих исследованиях учитывали, однако, особенности клинического проявления анаплазмоза и, главное, процентное соотношение между числом заболевших и павших животных, т.е. процент летальности.
По нашим, и ряду других авторов, данным, летальность при анаплазмозе рогатого скота находится в пределах 10-30% и более, но она растянута во времени и часто очень длительном. Поэтому ориентиром для нас при выведении минимальной заражающей дозы возбудителя служило абортивное течение болезни, т.е. кратковременное проявление болезни в легкой форме без проявления некоторых (нередко основных симптомов): при анаплазмозе - отсутствие глубокой анемии - основного и ведущего признака болезни.
Минимальная заражающая доза возбудителя, при которой мы отмечали заболевание животных с проявлением полного симптомокомплекса, присущего анаплазмозу, - выраженной паразитемией, глубокой анемией, с последующим исхуданием заболевшего животного составила:
а) для овец - 2,5х104 А. оу1Б/животное,
б) для крс - 1,5х105 А. ша^та1е/животное.
Последующее двукратное снижение
дозы возбудителей от указанных выше (п.п. а., б.) приводило, как правило, к абортивному течению анаплазмоза:
а) 1,25х104 А. оу1Б/животное,
б) 0,75х 105 А. ша^шак/животное.
Поэтому в последующей работе при оценке иммуногенных свойств вакцины применяли, как правило, дозы возбудителей, соответствующие, по нашим данным, трем минимальным заражающим:
а) для овец - 7,5" 104 A. ovis /животное
б) для кр.рог.скота - 4,5' 105 А. marginale/ животное
Последовательность расчета заражающей дозы - 7,5х10 A. ovis /животное при оценке иммуногенных свойств вакцины против анаплазмоза овец.
Пример: количество эритроцитов в 1 мм3 - 6 786 000;
Количество эритроцитов в 100 п.з. микроскопа - 300x100 = 30 000;
Количество анаплазм в 100 п.з. микроскопа - 3;
Определим количество анаплазм в 1 мм3, составив пропорцию:
30 000 - 3 Х=6 786 000x3/30 000=678,6;
6 786 000 - х
Количество анаплазм в 1 см3 (мл) крови - 678,6x1000=678, 600.
Доза крови для заражения животных (опытных и контрольных):
75000:678,600 = 0,12 см3(мл) инфицированной крови.
Вакцины из антигенов соответственно:
A.ovis - для овец, A. marginale - для крупного рогатого скота вводили двукратно, с интервалами - 30 и 45 дней (в зависимости от применяемого адьюванта).
Напряженный иммунитет в 85% случаев формировался, в основном, к 60 дню после ревакцинации, предохранявший животных от заболевания как при контрольном введении инвазированной крови с возбудителями в указанных дозах, так и при нападении инвазированных клещей на животных при их пастбищном содержании.
УДК: 619:614.9-07 О.И. Кальницкая
Московский государственный университет прикладной биотехнологии
ПОДБОР МИКРОБНЫХ ТЕСТ-КУЛЬТУР К АНТИБИОТИКАМ
Согласно СанПиН 2.3.2.1078-01, для продовольственного сырья животного происхождения обязательна информация об использовании (или отсутствии такового) пестицидов (гексахлорциклогексана, ДДТ и его метаболитов), антибиотиков, как до-
пущенных к применению в сельском хозяйстве (гризин, бацитрацин), так и лечебных, наиболее часто используемых в ветеринарии (тетерациклиновая группа, лево-мицетин, пенициллин, стрептомицин).
Все перечисленные вещества использу-
