CC BY
32
УДК 576.893.16:575.24
МИКРОЯДЕРНЫЙ ТЕСТ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ЛЯМБЛИОЗЕ МЫШЕЙ НА ФОНЕ ТЕРАПИИ
МЕТРОНИДАЗОЛОМ
А. В. Степанов
Витебский государственный университет, Республика Беларусь
Анализ микроядерного теста показал, что инвазия лямблиями вызывает достоверное повышение уровня эритроцитарных клеток с микроядрами в костном мозге, что свидетельствует об определенном мутагенном эфекте лямблиозной инвазии. Введение метронидазола инвазированным мышам стимулирует рост числа микроядерных клеток, снижающийся к 15-му дню наблюдения. Использование метронидазола у не зараженных животных в средних терапевтических дозах не вызывает мутагенных эффектов.
Неблагоприятное влияние вредных факторов окружающей среды на здоровье человека в индивидуальном и популяционном аспектах подтверждено научными исследованиями и медицинской практикой [2]. Существенное влияние на организм человека оказывают биологические мутагены, которые представляют опасность как с точки зрения опухолевых трансформаций, так и наследственной патологии. Это касается прежде всего продуктов жизнедеятельности патогенных простейших и гельминтов. Из паразитарных кишечных заболеваний в настоящее время чаще всего наблюдаются вспышки лямблиоза [3]. Лямблиоз - это болезнь человека и животных, вызываемая паразитирующими в тонкой кишке условно-патогенными возбудителями, характеризующаяся разнообразными проявлениями от бессимптомного носительства до тяжелых поражений различных систем и органов [5].
Одним из часто используемых препаратов, обладающих широким спектром действия в отношении патогенных простейших, является метронидазол [4]. При рассмотрении случаев устойчивости лямблий к метронидазолу установлено, что это может быть связано с токсическим действием препарата на клетки хозяина, проявляющееся мутагенным эффектом в виде хромосомных перестроек и изменений повторяемости фрагментов ДНК [7].
Целью нашей работы было изучение показателей микроядерного теста в клетках костного мозга мышей линии СВА, инвазированных лямблиями, на фоне введения метронидазола.
Методы исследований. В эксперименте было использовано 150 мышей - самцов и самок линии СВА массой 16 -18 г. Животные были разделены на четыре группы. В первую группу входили инвазированные лямблиями мыши, которые не получали лекарственных препаратов и служили инвазированным контролем. Во вторую - зараженные животные, получавшие метронидазол. Третья группа мышей не заражалась лямблиями, но получала указанный препарат. Четвертая группа состояла из не инвазированных животных и не получала метронидазола (интактный контроль).
Группы инвазированных животных заражались культурой Lamblia muris, полученной от спонтанно инвазиро-ванных мышей, в дозе 1000 цист на 1 животное. Тяжесть инвазии оценивалась путем микроскопии содержимого и соскоба тонкой кишки при вскрытии. Метронидазол вводился с 3 по 7 день от начала эксперимента в дозе 15 мг на 1 кг массы тела животного. Контрольным животным вместо препарата вводили физиологический раствор. Показатели микроядерного теста оценивались на 7, 10, и 15 дни наблюдения. Животных убивали путем растяжения спинного мозга.
Экспериментальный лямблиоз воспроизводится по методике, предложенной НИИ медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е. Н. Марциновского [1]. Микроядерный тест изучался в клетках костного мозга по методике, разработанной W. Schmid [6] с учетом рекомендаций НИИ генетики и селекции АН Республики Беларусь. Анализировали показатели полихроматофильных эритроцитов с микроядрами, нормохромато-фильных эритроцитов с микроядрами и соотношение поли- и нормохроматофильных эритроцитов в костном мозге мышей.
Было получено 300 препаратов микроядерного теста, которые анализировались при увеличении х1000 на микроскопе с оптикой Саг1 Zeizz (Iena). Просматривалось не менее 1000 клеток эритроцитарного ряда на одно животное. Статистическая и графическая обработка данных проводилась на компьютере Pentium 166 с использованием программ Word 7,0 и Excel 7,0.
У мышей из группы инвазированного контроля на 7 день инвазии уровень полихроматофильных эритроцитов с микроядрами был равен 2,7+0,5%о, нормахроматофильных эритроцитов с микроядрами - 0,9+0,3%о и соотношение поли- и нормохроматофилов - 0,5+0,05. К 10 дню показатель полихроматофильных эритроцитов с микроядрами составлял 3,1+0,4%о нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами - 1,2+0,3%о и соотношение поли- и нормохроматофильных эритроцитов - 0,6+0,04. На 15 день наблюдения число полихроматофильных эритроцитов с микроядрами равнялось 2,9+0,3%о, нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами - 1,1+0,4%о и соотношение поли- и нормохро-матофильных эритроцитов осталось неизменным.
Инвазированные животные, получавшие метронидазол на 7 день инвазии, имели уровень полихрома-тофильных эритроцитов с микроядрами равный 2,5+0,4% , нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами 0,8+0,3% и соотношение поли- и нормохроматофилов - 0,5+0,04. К 10 дню наблюдения число полихроматофильных эритроцитов с микроядрами составляло 3,4+0,5% , нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами - 1,3+0,4%о и соотношение поли- и нормохроматофильных эритроцитов - 0,5+0,04. На 15 день от начала эксперимента уровень полихроматофильных эритроцитов с микроядрами был равен 3,2+0,4%о, нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами -1,2+0,3%о и соотношение поли- и нормохроматофильных эритроцитов - 0,4+0,04.
У не зараженных мышей, получавших метронидазол, уровни колебания изучаемых показателей недостоверно отличались (p>0,05) в различные сроки изучения и были равными по числу полихроматофильных эритроцитов с микроядрами 2,5+0,5%, нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами -0,8+0,2%, и соотношению поли- и нормохроматофильных эритроцитов - 0,4+0,03.
В группе мышей интактного контроля изучаемые показатели также недостоверно варьировали на протяжении трех сроков наблюдения (p>0,05). В частности, уровень полихроматофильных эритроцитов с микроядрами составлял 2,3+0,4%, нормохроматофильных эритроцитов с микроядрами -
0.7.0,3% и соотношение поли- и нормохроматофильных эритроцитов было равно - 0,4+0,04.
Таким образом, анализ полученных данных показал, что инвазия лямблиями вызывает достоверное (p<0,05) повышение уровня эритроцитарных клеток с микроядрами в костном мозге, что свидетельствует об определенном мутагенном эффекте лямблиозной инвазии. Введение метронидазола инвазиро-ванным мышам стимулирует некоторый рост числа микроядерных клеток, который снижается к 15 дню наблюдения. Использование метронидазола у не зараженных животных в средних терапевтических дозах не вызывает мутагенных эффектов.
Литература
1. Астафьев Б.А., Яроцкий Л.С., Лебедева М.Н. Экспериментальные модели паразитозов в биологии и медицине. - М.: Наука, 1989. - 279 с.
2. Серединин С.Б., Дурнев А.Д. Фармакологическая защита генома. - М.:ВИНИТИ, 1992. -162 с.
3. Andrik P., Tanmer L. Zur wasserhygienischen Relevanz von Giardia lamblia // Z. gesamte Hyg. und Grenzgeb, 1990. - 36. - i 5. - Р. 258-260.
4. Boreham P.E.L., Phillips R.E., Shepherol R.W. The sensitivity of Giardia in-testinalis to drugs in vitro // S. Antim-icrob. chemother., 1984. - 14. - 15. - Р. 449-461.
5. Mowatt Michael R., Lujan Hugo D., Gotten David B. et.ol. Developmentally regulated expression of a Giardia lamblia cyst wall protein gene // Mol. Microbiol, 1995.-i5.-P. 955-963.
6. Schimid W The micronuclens test // Mutat. Res., 1975. - Vol. 31. - 4 - P. 9-16.
7. Upcroft J.A., Upcroft P., Boreham P.F.L. Drug resistance in Giardia intestinalis // Int. J.Parasitol, 1990. - 20. - 14. -Р. 489-496.
Представлена проф. А . В. Русецким
