CC BY
39Птицеводство
_ www.agroyug.ru
DOI: 10.24412/С1-33489-2020-9-66-69 УДК: 619:616.98:579
Новикова О. Б., Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства - филиал ФНЦ «ВНИТИП» РАН, заведующая отделом микробиологии, кандидат ветеринарных наук, ksuvet@mail.ru
МИКРОФЛОРА, ВЫДЕЛЯЕМАЯ ОТ ПЕРЕПЕЛОВ И КОНТРОЛЬ БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ В ПЕРЕПЕЛОВОДЧЕСКИХ ПТИЦЕХОЗЯЙСТВАХ
66
Аннотация. Нами проведены бактериологические исследования материала из перепеловодче-ских хозяйств. Спектр микрофлоры, выделяемой от перепелов достаточно широк, включает в себя более 15 видов микроорганизмов. Доминирующими являются Escherichia coli, удельный вес которой составляет - 41,2%, кокковая микрофлора, эн-теробактерии. Для профилактики бактериальных болезней птиц в промышленном птицеводстве в отделе микробиологии ВНИВИП разработана система контроля с выделением основных технологических звеньев.
Ключевые слова: перепела, бактериальные болезни, микрофлора, профилактика бактериальных болезней.
Введение. В системе видового состава птицеводческой продукции в мире особым спросом стала пользоваться продукция перепеловодческой отрасли, что вызвано высокими вкусовыми качествами яиц и мяса, быстрой воспроизводимостью продукции и окупаемостью затрат в короткий срок. Скороспелость перепелки в два раза выше, чем у пекинской утки, и в три раза выше, чем у кроликов. Полный цикл, от закладки яиц в инкубатор до первого яйца от молодой перепёлки, составляет всего 52-66 дней. В 10 дней молодняк начинает менять перо, в 25 - оперяется, в 30 - становится взрослым, а в 40-45 дней начинает нестись. Одна неделя жизни перепела соответствует 3,5 неделям жизни курицы яичной породы.
Одна из особенностей перепелиных яиц - способность к длительному хранению. При их хранении в условиях комнатной температуры может наблюдаться только некоторое усыхание содержимого яйца. Перепелиное мясо и яйцо являются диетическими продуктами питания [1].
Перепела отличаются большой энергией роста и интенсивными обменными процессами. Этим объясняется высокая чувствительность их к нарушениям белкового, витаминного и минерального питания. Чаще всего болезни перепелов происходят из-за недостатка или избытка в рационе каких-либо витаминов или минеральных веществ и из-за отравления химическими препаратами. Заразные болезни (инфекционные и инвазионные) могут возникнуть путём переноса возбудителя болезни через корм, воду, воздух (если в птичнике одновременно содержатся разные виды птиц), могут быть привнесены с пополнением стада перепелов. Из заразных болезней птиц перепела могут быть восприимчивы к Ньюкаслской болезни, орнитозу, пуллорозу, аспер-гиллёзу, колибактериозу, пастереллёзу, сальмонел-лёзу, гельминтозам и другим.
Annotation. We conducted bacteriological studies of material from quail farms. The range of microflora released from quails is quite wide, including more than 15 types of microorganisms. The dominant species are Escherichia coli, the specific weight of which is 41.2%, coccal microflora, and enterobacteria. To prevent bacterial diseases of birds in industrial poultry farming, the Department of Microbiology of VNIVIP has developed a control system with the allocation of the main technological links.
Key words: quail, bacterial diseases, microflora, prevention of bacterial diseases
По данным Татаренко Я.С. [2] перепела могут быть носителями микроорганизмов родов Streptococcus, Staphylococcus, Klebsiella, Proteus, Clostridium, Klebsiella, Escherichia coli, Salmonella, находящихся в лёгких, печени, мышечном желудке, кишечнике и мясе птицы.
Материалы и методы. Нами в течение 13 лет были проведены бактериологические исследования материала из перепеловодческих хозяйств с целью определения спектра микрофлоры, выделяемой от перепелов. Всего было происследова-но 7 промышленных и фермерских птицехозяйств по выращиванию перепёлок двух регионов Российской Федерации - Ленинградской и Воронежской областей. В некоторых птицехозяйствах материал исследовали неоднократно.
В работе было проведено бактериологическое исследование трупов павших и вынужденно убитых (с диагностической целью) перепёлок разного возраста, перепелиных яиц, проб помёта (в т.ч. клинически здоровых особей). Всего были исследованы 151 высев от 40 голов перепелов, 50 штук яиц, 75 проб помёта.
При бактериологическом исследовании птицы высевы делали из крови сердца, лёгких, печени, желчного пузыря, селезёнки, почек, яичных фолликулов, семенников, костного мозга, тонкого (двенадцатиперстная, тощая) и толстого отделов кишечника (слепые отростки), суставов, подошв лапок. Посевы из внутренних органов и яиц производили одноразовыми стерильными стеклянными пастеровскими пипетками.
Первичные пробы исследуемого материала засевали в стерильные стеклянные пробирки с простыми питательными средами - мясопептонным бульоном (МПБ), либо с транспортной средой (при необходимости длительной транспортировки материала,
ЭФФЕКТИВНОЕ ЖИВОТНОВОДСТВО
ГЕНЕРАЛЬНЫЙ ПАРТНЕР ВЫПУСКА
более 6 ч) - тиогликолевой средой (среда для контроля стерильности). При необходимости исследования на сальмонеллёз первичные посевы также делали на среды для накопления (обогащения) сальмонелл - магниевый бульон. Для выделения кампилобактерий использовали плотную среду в чашках Петри - кровяно-угольный эритрит-агар со смесью Буцлера. Посевы инкубировали при 42 °С в микроаэрофильных условиях (содержание СО2 -10%) в течение 72-96 часов.
Первичные посевы инкубировали в термостате при t +37,5 °С в течение 24 часов. Через сутки инкубирования в термостате из первичных посевов делали пересевы на чашки Петри с плотными селективными и дифференциально-диагностическими питательными средами: для выделения кишечной микрофлоры (энтеробактерий) - среду Эндо, ксилозо-лизино дезоксихолатный агар (хСб-агар), агар МакКонки, среду Плоскирева, висмут-сульфит агар; на среды для выделения стафилококков - жел-точно-солевой агар, стафилококковый агар; на среду для выделения энтерококков - полимиксиновую среду; на мясопептонный агар (МПА) в пробирках (скошенный) или чашках Петри. Для выявления гемолиза микроорганизмов проводили посевы на колумбийский кровяной агар. Для выделения анаэробной микрофлоры, в т.ч. клостридий, использовали мясопептонный печёночный бульон с кусочками печени под вазелиновым маслом (среда Кита-Тароц-ци) и среду Вильсон-Блера.
Засеянные пробирки и чашки помещали в термостат и инкубировали при температуре t +37,5 °С в течение 18-24 часов, стафилококковый агар и висмут-сульфит агар - в течение 24-48 часов, затем проводили учёт результатов. У выросших колоний изучали морфологические, культуральные, тинкториальные, биохимические, серологические и вирулентные свойства.
При изучении морфологии колоний проводили микроскопию мазков, окрашенных по Граму. Дальнейшую межродовую и видовую дифференциацию и идентификацию кишечной микрофлоры проводили, используя схему идентификации основных видов энтеробактерий Научно-исследовательского центра фармакотерапии (НИЦФ, Санкт-Петербург), а также согласно ранее модифицированной нами (2004 г.) схеме путём изучения ферментативных и биохимических свойств культур микроорганизмов. После просмотра культур с дифференциально-диагностических сред отдельные колонии пересевали на комбинированные среды - трёхса-харный агар Олькеницкого, среду Клиглера, среду Ресселя. Ферментацию сахаров проводили путём посева культур на короткий цветной ряд и среды Гисса - глюкоза, лактоза, маннит, сахароза. Ассимиляцию цитрата натрия обнаруживали при помощи среды Симмонса. Наличие индола выявляли на МПБ с использованием реактива Эрлиха. Изучение ферментативных свойств культур энтеробактерий также проводили с помощью тест-систем для биохимической идентификации энтеробактерий (СИБ, производство Нижний Новгород), Энетротеста-24. Родовую и видовую принадлежность культур микроорганизмов устанавливали по показателям таблиц.
Родовую и видовую идентификацию культур сальмонелл устанавливали в реакции агглютинации на стекле с сыворотками диагностическими адсорбированными сальмонеллёзными поливалентной АВСОЕ и моновалентными групп О (соматические антигены) и Н (жгутиковые антигены). В работе использовали сыворотки ПЕТСАЛ производства
Санкт-Петербургского научно-исследовательского института вакцин и сывороток (НИИВС).
Идентификацию кокков проводили, используя тесты на наличие каталазы, плазмокоагулазы с плазмой кролика, лецитовиттелазы и др.
Чувствительность доминирующих видов выделенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам разных групп изучали методом дисков на среде Мюллер-Хинтона. Использовали диски с препаратами, изготовленные промышленным способом.
Результаты исследований. Результаты исследований по изучению спектра микрофлоры, выделяемой от перепёлок, представлены в диаграмме 1. Из представленных результатов следует, что среди всех видов выделенных нами микроорганизмов доминирующее место занимает кишечная палочка Escherichia coli, её удельный вес в спектре выделенной микрофлоры составляет 41,2%. Доминирующая роль Escherichia coli в инфекционной патологии птиц значительно осложняет эпизоотическую ситуацию в хозяйстве вследствие того, что зачастую кишечная палочка является фундаментом для развития смешанных инфекций, что значительно затрудняет своевременную диагностику заболевания и проведение оздоровительных и профилактических мероприятий. Во многих случаях колибактериоз является вторичным, развивается на фоне какой-либо вирусной инфекции, и правильно поставленный основной диагноз и эффективная специфическая профилактика вирусных болезней - действенный способ борьбы с колибактериозом.
Значительный процент выделения приходится на кокковую микрофлору: 28,9% - стафилококки и 5,3% - энтерококки. Из кокковой микрофлоры чаще всего выделяли следующие виды стафилококков: золотистый Staphylococcus aureus, белый Staphylococcus epidermidis и лимонно-жёлтый Staphylococcus citreus; из энтерококков - Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium. Для выявления вирулентных свойств выделенных стафилококков ставили реакцию плазмоко-агуляции с плазмой кролика.
Доля энтеробактерий составила 10,5%, отдельно мы выделили протей - 7,1%. Из семейства Enterobacteriaceae доминирующими были культуры родов Citrobacter (в т.ч. Citrobacter diversus), Klebsiella. Из протеев были выделены Proteus vulgaris и Proteus mirabilis. Видовую дифференциацию микроорганизмов рода Proteus проводили на основании результатов пробы на индол с реактивом Эрлиха или при помощи СИБ, Энтеротеста-24. Proteus vulgaris обладает положительной реакцией на индол, Proteus mirabilis - отрицательной. Превалирование протея в организме птиц нарушает микроэкологический статус, указывает на нарушение микробиоценоза кишечника, активизируется вторичная микрофлора. Высокая концентрация протеев в кишечнике является негативным фактором, который способен снизить устойчивость организма к развитию патологий желудочно-кишечного тракта. Протей сравнительно устойчив во внешней среде, хорошо переносит замораживание. Устойчив одновременно ко многим антибиотикам и дезинфицирующим веществам.
В 4,4% случаев были выделены культуры клостридий, преимущественно вида Clostridium perfringens. Большинство культур были выделены из тонкого отдела кишечника - двенадцатиперстной и тощей кишок (фото 3), а также паренхиматозных органов - печени и селезёнки. Вследствие повсеместного распространения Clostridium perfringens заселяет толстый кишечник птиц с первых дней жизни,
68
Птицеводство
www.agroyug.ru
Диаграмма 1.
Сшмпр чикрофшри,
ЯЫ.М.1Ж-МЫЙ * ШШкЛогНВИ йа\ 114 ЯЫрИШ liallllKr Ш|К11&КЖ (В %)
но при нормальном протекании процесса пищеварения носительство в толстом кишечнике не вызывает заболевания, а условия в тонком кишечнике неблагоприятны для активного размножения клостридий. Поэтому здоровая птица, являясь чувствительной к заражению, не является восприимчивой к заболеванию анаэробной энтеротоксеми-ей без воздействия предрасполагающих факторов. Вспышки анаэробной энтеротоксемии возникают либо при повторном заражении контаминирован-ными кормами животного происхождения (рыбная мука и др.), либо вследствие распространения имеющихся в толстом кишечнике клостридий в тонкий отдел кишечника при какой-либо патологии (паразитарные, бактериальные, вирусные заболевания).
В 2,2% случаев были выделены культуры эпидемиологически опасной микрофлоры - сальмонелл видов Salmonella enteritidis и Salmonella gallinarum. Поэтому проблему бактериальных болезней птиц в промышленном птицеводстве следует рассматривать в двух аспектах - создания эпизоотического благополучия, охраны здоровья птиц, и обеспечения охраны здоровья людей, то есть создания эпидемического благополучия, следствием чего является производство высококачественной продукции, свободной от эпидемиологически опасной и условно-патогенной микрофлоры.
Наименьший процент выделения пришёлся на другой эпидемиологический микроорганизм -кампилобактер - 0,4 %. Кампилобактерии вида Campylobacter jejuni были выделены из групповых проб помёта птиц старшей возрастной группы -300-суточных перепелов.
Выявление доминирующей микрофлоры в каждом отдельном хозяйстве было разным, и зависело от его эпизоотической ситуации. Во всех случаях отмечали развитие смешанных инфекций, ассоциативное воздействие разных видов микроорганизмов на организм птицы.
У доминирующих видов микроорганизмов были изучены вирулентные свойства на модели заражения
перепелиных эмбрионов 7-дневного срока инкубации. В работе были использованы микроорганизмы двух видов: 7 культур Escherichia coli (серотипов 0:101, О:41, О:78, О:1) и 3 культуры Citrobacter diversus. Каждой культурой были заражены 5 эмбрионов. Дополнительно 5 эмбрионов были использованы в качестве «ложного контроля» - им был введён стерильный физиологический раствор в той же дозе, что и культуры заражающих микроорганизмов, и 5 эмбрионов были оставлены незаражёнными - чистый контроль.
Таким образом, всего в работе были использованы 60 перепелиных эмбрионов. Инкубировали перепелиное яйцо в мини-инкубаторе «Петушок». Инкубацию производили при температуре 37,5 °С в течение 17 суток. Ежедневно на протяжении всего опыта проводили овоскопирование эмбрионов. Большинство инфицированных эмбрионов пали в течение 24-72 часов заражения. Из 35 эмбрионов, заражённых культурами Escherichia coli, пало 24 эмбриона (~70%), из 15 эмбрионов, заражённых Citrobacter diversus, пали 12 эмбрионов (80%). Все павшие эмбрионы были вскрыты, из них были сделаны высевы на питательные среды. Из всех эмбрионов были выделены культуры соответствующего заражающего штамма. Эмбрионы из обеих контрольных групп оставались живыми на протяжении всего срока инкубации вплоть до вылупле-ния птенцов на 17-е сутки инкубации.
Биологическая безопасность в современном промышленном птицеводстве, в том числе перепело-водстве является одним из ключевых факторов эффективности производства. Нарушение технологии кормления и содержания, ветеринарно-санитарных правил негативно сказывается на показателях продуктивности и эпизоотическом состоянии хозяйства.
Для профилактики бактериальных болезней птиц в промышленном птицеводстве в отделе микробиологии ВНИВИП (Борисенкова А.Н., Рождественская Т.Н. с соавт.) разработана целостная система контроля с выделением основных технологических звеньев. Система контроля включает в себя 11 основных положений: диагностический мониторинг (серологические и микробиологические исследования, в т.ч. прижизненный метод - бактериологические исследования групповых проб помёта и мазков из трахеи); микробиологический мониторинг вывода и выращивания цыплят; эпизоотоло-гический мониторинг; контроль с использованием эффективных антибактериальных препаратов; применение альтернативных антибиотикам препаратов (подкислители, аромабиотик, фитобиотики); патогенетическая терапия; применение пробиотиков и пребиотиков; применение средств специфической профилактики (вакцины и бактериофаги); контроль качества дезинфекции; дератизация; точки критического контроля анализа опасности (НАССР).
Фото 1. Панкреатит и дуоденит перепёлки Фото 2. Панкреатит и дуоденит перепёлки при при колибактериозе и клостридиозе. колибактериозе и клостридиозе.
ЭФФЕКТИВНОЕ ЖИВОТНОВОДСТВО
ГЕНЕРАЛЬНЫЙ ПАРТНЕР ВЫПУСКА
Фото 3. Рост культуры Clostridium perfringens, выделенной из тощей кишки перепёлки, на среде Вильсона-Блера - почернение и сильное газообразование.
В последнее время отмечается значительное повышение резистентности бактериальной микрофлоры к антимикробным препаратам, прежде всего к антибиотикам. Однако практика борьбы с бактериальными заболеваниями птиц показывает, что антибиотики не способны обеспечить полную бактериологическую безопасность и имеют ряд негативных побочных последствий, в том числе и для человека. В связи с этим в ветеринарии актуальным становится поиск и изучение альтернативных путей профилактики и лечения бактериальных болезней с использованием новых высокоактивных экологически чистых препаратов с целью снижения инфицированности патогенной и условно-патогенной микрофлорой. Такими препаратами являются, прежде всего, пробиотики на основе лактобактерий и бифидобактерий, подкислители на основе органических кислот, фитобиотики.
Заключение. Спектр микрофлоры, выделяемой от перепелов достаточно широк, включает в себя более 15 видов микроорганизмов. Доминирующими являются Escherichia coli, удельный вес которой составляет - 41,2%, кокковая микрофлора,
энтеробактерии. Также от перепёлок выделяются и эпидемиологически опасные бактерии, в т.ч. сальмонеллы и кампилобактерии. Видовой состав выделяемой микрофлоры обусловлен эпизоотической ситуацией в каждом отдельном хозяйстве, следствием чего является различное процентное соотношение доминирующих видов.
Предлагаемая нами система контроля бактериальных болезней птиц обеспечивает своевременную диагностику и проведение необходимого комплекса противоэпизоотических мероприятий как в отношении патогенной и условно-патогенной микрофлоры, так и в отношении эпидемиологически опасной. Однако положительный эффект проводимых мероприятий может быть достигнут лишь в комплексе с выполнением ветеринарно-санитарно-го режима работы хозяйства и при полном соблюдении ветеринарной и зоотехнической технологий выращивания птицы.
Работа выполнена согласно теме НИР 0599-20190025 «Усовершенствовать и разработать современные методы диагностики и создать новые препараты для контроля и профилактики болезней птиц бактериальной этиологии».
ЛИТЕРАТУРА
1. Харчук Ю. Разведение и содержание перепелов // Феникс, Ростов-на-Дону. - 2014. - 96 с.
2. Татаренко Я.С. «Микробоносительство у перепелов и эффективность комплексного препарата бактериофагов для профилактики инфекций в перепеловодстве» // Дисс. ... канд. вет. наук. - Москва. - 2019. - 161 с.
