CC BY
21
свойств тканевого препарата проведены методами накожной аппликации, внутрикожного введения и конъюнктивальной пробы. Эксперимент был выполнен на кроликах с массой тела 2,2-2,4 кг, сформированных в группы опыта и контроля. При визуальной оценке слизистой оболочки глаз и состояния кожи реакции не наблюдалось. Выявлено, что аминоселетон не обладает местнораздражающими свойствами при накожной аппликации, внутрикожном введении и конъюнктивальной пробе. По результатам исследований аминоселетон отнесен к малоопасным веществам в соответствии с классификацией И.В. Березовской (2003).
PARAMETERS OF ACUTE TOXICITY AND LOCAL IRRITATING ACTION OF
AMINOSELETONE DRUG
Khokhlova N.A., Kantorovich Yu.A.
Summary
The article presents the results of the parameters of acute toxicity and local irritating action of the tissue preparation aminoceletone study. The studies of acute toxicity were conducted on the laboratory animals - mice, rats. There were no signs of neurotoxicity or other vegetative symptoms. Thus, aminoseletone showed no toxic effects in acute experiment. LD50 could not be determined, as in intragastric, subcutaneous and intraperitoneal introduction of the drug in the maximum permissible amounts and in the dose range from 3000 to 28000 mg/kg of the body weight no animal death was observed. The studies of the local irritating properties of the tissue preparation were performed by means of skin application, intradermal and conjunctival tests. The experiment was conducted on the rabbits with a body weight of 2.2-2.4 kg, formed in the group of experiment and control. No reaction was observed in visual evaluation of the eye mucosa and skin condition. It is revealed that aminoseletone has no local irritating properties when cutaneous application, subcutaneous injection and conjunctival sample. The results of the research aminoseletone related to low-hazard substances according to the classification of I. V. Berezovskaya (2003).
DOI 10.31588/2413-4201-1883-235-3-188-193
УДК 619.4.5.663
МИКОЛОГИЧЕСКИМ И МИКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКИИ АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ КОРМОВ ДЛЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ
КРАСНОДАРСКОГО КРАЯ
Шантыз А.Х. - д.в.н., вед. науч. сотр., Мирошниченко П.В. - к.в.н., ст. науч. сотр., Панфилкина Е.В. - науч. сотр., Данильченко О.Б. - к.б.н., ст. науч. сотр.
ФГБНУ «Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт»
Ключевые слова: контаминация, мониторинг микотоксины, корм, крупный рогатый скот, сезонность
Key words: contamination, monitoring of mycotoxins, feed, cattle, seasonality
В рацион жвачных животных входят комбикорма, а также грубые и сочные корма. Они способны заражаться грибами как на стадии роста входящих в их состав зерновых и трав, так и при хранении в виде сена, соломы или силоса. Грибы вырабатывают широкий спектр вторичных метаболитов для повышения своей конкурентоспособности в природе. Многие из этих
метаболитов обладают антигрибковой и антимикробной активностью [5].
Большинство проблем в животноводстве, связанных с микотоксинами, возникает вследствие загрязнения ими зерновых, а также жмыхов и шротов масличных культур, которые широко используют во всем мире в составе промышленных рационов. Практика показывает, что иссле-
дования, в основном, сосредоточены на тех «санитарных» микотоксинах, которые обычно встречаются в таких кормах. Это афлатоксин В1, охратоксин А, трихотеце-новые токсины (Т-2 токсин, Ниваленол, ДОН (вомитоксин), Роридин А...), зеарале-нон, фумонизины.
В связи с этим, проведенные мониторинговые исследования ассоциированных микотоксинов в кормах для крупного рогатого скота имеют большое значение для дальнейшего прогнозирования и разработки мер по предупреждению и снижению возникновения микотоксикозов крупного рогатого скота.
Материал и методы исследований. Научно-исследовательская работа выполнена на базе отдела эпизоотологии, микологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института -обособленного структурного подразделения ФГБНУ КНЦЗВ и животноводческих хозяйствах в соответствии с планом НИР на 2013-2017 гг. В качестве объекта исследований использовались пробы кормов, полученных из различных районов и хозяйств Краснодарского края.
Микологические исследования проведены согласно «Методическим указаниям по выделению и количественному учету микроскопических грибов в кормах, кормовых добавках и сырье для производства кормов» (Москва, 2003 №13-502/0827), методом культивирования на специальных питательных средах. Первичное выделение грибов из кормов проводили путем посева на питательные среды в чашки Петри, с агаром Чапека и сусловым агаром. Чашки Петри с посевами инкубировали при температуре 22-25°С в течение 7-10 суток. Учет выросших колоний грибов проводили на 3, 5, 10 сутки. Все виды, намеченные к дальнейшей идентификации, изучению их токсигенных и патогенных свойств, выделяли в чистые культуры. Идентификацию грибов проводили частично в первичных посевах, а до вида после выделения в чистые культуры, используя микологические ключи в посо-
биях по определению. Определение общей токсичности проводили согласно «Методическим указаниям по определению токсичности кормов, кормовых добавок и сырья для производства кормов», «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье» [2, 3, 4]. Количественное определение Т-2 токсина, афлатоксина В1, фумонизина В1, зеараленона, охратоксина А, ДОН, в кормах проведены путем непрямого конкурентного анализа с использованием диагностических наборов, произведенных ООО «Фарматех» (г. Москва), в соответствии с методическими указаниями к наборам [1].
Результаты исследований. В исследуемый период с 2013 по 2017 годы было проведено 1103 санитарно-миколо-гических исследований проб грубых кормов, комбикормов и кормовых добавок для крупного рогатого скота.
Микологическими исследованиями на специфических питательных средах установлено, что корма и сырье для их производства в основном поражались микро-мицетами Mucor sp. в 60,88 % проб; Aspergillus sp. - 47,44 %; Pénicillium sp. -20,18 %; Fusarium sp. - 16,92 %; Candida sp. - 12,66 %; Rhizopus sp. - 2,96 %; Alternaria sp. 2,12 %; Cladosporum sp. в 1,12 % проб.
Данные о контаминации кормов для крупного рогатого скота плесневыми грибами в хозяйствах Краснодарского края за период 2013-2017 гг. представлены в таблице 1.
Нами установлены сезонные особенности контаминации проб кормов для крупного рогатого скота плесневыми грибами за 2013-2017 гг. В результате микологических исследований проб кормов крупного рогатого скота наиболее часто выделялись дрожжи - 85,71 % в июле; Mucor sp. в июле и декабре -71,43 %; Fusarium sp. - в августе - 46,15 %; Asp. flavus - 45,83 % в марте; Asp. nidulans 31,25 % в мае; Pénicillium sp. - 28,57 % в декабре; Asp. niger - 23,07 % в августе; Alternaria sp. - 12,5 % в мае. Risopus sp. выделяли только в ноябре в количестве 2,94 %.
Таблица 1 - Степень контаминации проб кормов плесневыми грибами за 2013-2017 гг., %
Вид грибов 2013 г. 2014 г. 2015 г. 2016 г. 2017 г. В среднем за 5 лет
Mucor sp. 58,0 62,0 70,0 54,1 60,3 60,88
Aspergillus sp. 38,0 42,0 56,0 60,6 40,6 47,44
Fusarium sp. 3,0 24,0 32,0 22,9 2,7 16,92
Candida sp. - 5,0 10,0 26,2 22,1 12,66
Penicillium sp. 14 20,0 34,0 9,8 23,1 20,18
Rhizopus sp. 5,0 3,0 4,0 1,6 1,2 2,96
Altemaria sp. 1,0 4,0 4,0 1,6 - 2,12
Cladosporium sp. - 2,0 2,0 1,6 - 1,12
Данные по сезонной особенности контаминации проб кормов крупного
рогатого скота плесневыми грибами графически отражены на рисунке 1.
Рисунок 1 - Зараженность кормов грибами, в среднем по месяцам за 2013-2017г., %
Анализ содержания микотоксинов в кормах для крупного рогатого скота в 2013-2017 гг., установил, что в среднем за исследуемый период Т-2 токсином было заражено 30,98 % исследованных кормов, средняя концентрация составила 0,034 мг/кг; зеараленон определялся в 11,18 % проб, средняя концентрация его составила 0,5 мг/кг; охратоксин А был найден в 8,36 % исследованных кормов, средняя концентрация его - 0,036 мг/кг; фумонизин В1 - в 3,72 % кормов, средняя концентрация -
2,122 мг/кг; афлатоксин В1 -22,6 %, средняя концентрация - 0,0113 мг/кг; дезокси-ниваленон был найден в 24,86 % кормов, средняя концентрация контаминации составила 0,458 мг/кг. Данные о содержании микотоксинов в кормах крупного рогатого скота в2013-2017 гг. представлены в таблице 2.
За анализируемый период нами установлены ассоциации микотоксинов в кормах для крупного рогатого скота в 2013-2017 гг. За весь период исследований
из сочетаний двух токсинов чаще встречались пары: Т-2 токсина и зеараленона -
34.0 %, зеараленона и фумонизина В1 -
23.1 %, Т-2 токсин и фумонизин В1 - 20 %.
Таблица 2 - Контаминация исследованных образцов корма для крупного рогатого скота микотоксинами, процент их выделения и их средние концентрации (мг/кг) по годам исследования
Микотоксин Период исследования, г. В среднем за 5 лет
2013 2014 2015 2016 2017
% от исследованных
Т-2-токсин 12,50 42,00 47,00 27,80 25,60 30,98
Зеараленон 12,50 4,20 5,20 18,00 16,00 11,18
Охратоксин А 19,00 6,30 7,30 8,20 1,00 8,36
Фумонизин В1 6,30 4,20 5,20 1,60 1,30 3,72
Афлатоксин В1 12,50 20,80 22,80 29,50 27,40 22,60
Дезоксиниваленол 31,00 38,50 35,50 16,00 3,30 24,86
Средняя концентрация
Т-2-токсин 0,025 0,030 0,0350 0,040 0,040 0,0340
Зеараленон 0,500 0,450 0,5500 0,600 0,400 0,5000
Охратоксин А 0,030 0,040 0,0300 0,050 0,030 0,0360
Фумонизин В1 2,600 3,000 2,8000 2,200 0,010 2,1220
Афлатоксин В1 0,006 0,008 0,0075 0,005 0,030 0,0113
Дезоксиниваленол 0,280 0,980 0,1800 0,840 0,010 0,4580
Преобладали следующие сочетания трех токсинов: зеараленон, фумонизин В1 и Т-2 токсин - 23,9 %, охратоксина А, Т-2 токсина и зеараленона - 21,2 %, зеараленона, ох
ДОН - 19,9 %, зеараленона, фумонизина В1, Т-2 токсина и ДОН - 17,7 %.
Результаты микотоксикологических исследований проб кормов для крупного
затоксина А, фумонизина В1, и
рогатого скота за 2013-2017 гг.(рис.2).
Рисунок 2 - Результаты микотоксикологических исследований проб кормов для крупного рогатого скота за 2013-17 гг.
Установлены сезонные особенности контаминации кормов крупного рогатого скота микотоксинами. Максимальная контаминация кормов крупного рогатого скота токсинами Т-2 наблюдалась в августе и составила 53,85 % от исследованных проб; ДОН - 50,00 % в феврале; афлаток-
сином В-1 41,67 % в марте; зеараленоном -30,77 % в августе; охратоксином - 25,00 % в феврале; фумонизином - 18,18% в апреле.
Сезонные особенности контаминации кормов крупного рогатого скота мико-токсинами представлены на рисунке 3.
Рисунок 3 - Средний процент выделения микотоксинов в кормах по месяцам в образцах кормов за 2013-2017гг.
Заключение. Исходя из полученных данных преобладающими микотокси-нами независимо от времени года исследования, являются Т-2 токсин, зеараленон, охратоксин А, фумонизин В1, что, на наш взгляд связано с благоприятными условиями для роста и токсинообразования в регионе грибов родов Penicillium sp., Fusarium sp., Aspergillus sp., Mucor sp. как их основных продуцентов. Климатические условия Краснодарского края, благоприятствуют развитию многих грибов, чем объясняется присутствие нескольких токсинов грибов одновременно, а также их сочетания, преобладают Т-2 токсин, зеараленон, фумонизин В1, охратоксин А и ДОН в различных комбинациях. Отмеченно нарастание проб комбикормов с содержанием Т-2 токсина и охратоксина А, а также волнообразное изменение уровня зеараленона и фумонизина В1.
Таким образом мониторинг проб кормов в 2013-2017 гг. в Краснодарском крае свидетельствует о том, что корма для крупного рогатого скота в среднем конта-
минированы плесневыми грибами родов: Mucor sp. (60,88 %), Aspergillus sp. (47,44 %), Fusarium (16,92 %), Candida sp. (12,66 %), Penicillium sp. (20,18 %), Rhizopus sp. (2,96 %), Alternaria sp. (2,12 %), Cladosporium sp. (1,12 %). Установлено среднее содержание микотоксинов в кормах в порядке убывания: Т-2 токсин (30,98 %); дезоксиниваленон (24,86 %); афлаток-син В1 (22,6 %); зеараленон (11,18 %); охратоксин (8,36 %); фумонизин (3,72 %).
В анализируемый период исследований содержание микотоксинов в кормах для крупного рогатого скота распределялось следующим образом: в марте регистрировался высокий процент выделения Asp. flavus (45,83 % положительных проб) и афлатоксина В1 (41,67 % положительных проб), а так же Fusarium sporotrichiella -33,3 % и Т-2 токсина - 41,67 %. В июле при исследовании проб кормов определяли высокий процент Asp.flavus - 42,86 % и афлатоксина В1 - 33,3 %. В августе регистрировался высокий процент выделения Fusarium sp. - 46,15 % и Т-2 токсина, а так
же Fusarium qraminearum - 46,15 % и зеа-раленон - 30,77 %. В сентябре выделяли Asp. niger 21,43 % - и афлатоксин В1 -35,71 % положительных проб.
ЛИТЕРАТУРА:
1. ГОСТ 31653-2012 «Метод иммуноферментного определения мико-токсинов» - Москва. - 2012
2. ГОСТ 52337-2005. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности. -Введ. 2005-05-30. - М.: Стандартинформ. -2011.- 18с.
3. Методические указания по выделению и количественному учету мик-
роскопических грибов в кормах, кормовых добавках и сырье для производства кормов. № 13-5-02/0827. Утв. Департаментом ветеринарии МСХ 14.07.2003 г.
4. Методические указания по определению токсичности кормов, кормовых добавок и сырья для производства кормов в биопробе на лабораторных животных № 135-02/0795. Утв. Департаментом ветеринарии МСХ 26.06.2003 г.
5. Якимова Э.А. Видовой состав и количественное содержание микроскопических грибов в кормах и кормовом сырье для животных Биотика, 6 (7 Декабрь 2015)
МИКОЛОГИЧЕСКИЙ И МИКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ КОРМОВ ДЛЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В УСЛОВИЯХ КРАСНОДАРСКОГО
КРАЯ
Шантыз А.Х., Мирошниченко П.В., Панфилкина Е.В., Данильченко О.Б.
Резюме
Проведен мониторинг микотоксикологического состояния кормов и кормового сырья для крупного рогатого скота в хозяйствах Краснодарского края. Определена степень контаминации проб кормов плесневыми грибами и микотоксинами за период 2013-2017 гг. Изучены сезонные особенности контаминации проб кормов для крупного рогатого скота плесневыми грибами и микотоксинами. Установлен видовой состав сочетанных микотоксинов в кормах для крупного рогатого скота. Выявлены наиболее часто встречаемые сочетания микотоксинов, определены средние концентрации наиболее часто регистрируемых микотоксинов. Установлено среднее содержание микотоксинов в кормах в порядке убывания: Т-2 токсин (30,98 %); дезоксиниваленон (24,86 %); афлатоксин В1 (22,6 %); зеараленон (11,18 %); охратоксин (8,36 %); фумонизин (3,72 %).
THE MYCOLOGIC AND MYCOTOXrcOLOGICAL ANALISIS OF THE CONDITION OF FORAGES FOR CATTLE IN KRASNODAR REGION
Shantyz A.H., Miroshnichenko P.V., Panfilkina E.V., Danilchenko O.B.
Summary
It was carried out monitoring of mycototoxicological state of forages and fodder raw material for cattle in Krasnodar region. It's defined degree of mold mushrooms and mycotoxins contamination in 2013-2017. There were studied seasonal features of this contamination. It was established specific structure of combined mycotoxicosis in forage of cattle. The most often met combinations of mycotoxins are taped, average concentration of the most often recorded mycotoxins are defined. The average content of mycotoxins in sterns in decreasing order is established: T-2 toxin (30,98%); deoxynivalenol (24,86%); aflatoxin B1 (22,6%); zearalenone (11,18%); ochratoxin (8,36%); fumonisin (3,72%).
