CC BY
9
УДК 576.858.07
Канд. биол. наук Р. А. Дмитриева, канд. мед. наук Т. В. Доскина
МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ КИШЕЧНЫХ И РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСОВ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сыснна АМН СССР, Москва
Присутствие в воде даже единичных вирнонов кишечных вирусов создает потенциальную опасность для здоровья населения. Это обусловливает необходимость тщательного контроля за качеством используемой воды, а также сточных вод, спускаемых в водоемы, в отношении вирусов. Необходимость проведения санитарно-вирусологического контроля воды водоемов обусловлена и тем, что бактериальные индикаторные микроорганизмы в силу меньшей устойчивости по сравнению с вирусами не обеспечивают эпидемическую безопасность воды в отношении вирусного загрязнения.
В Институте общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР были разработаны методы индикации кишечных вирусов из воды различной степени загрязнения1.
Отбор проб, их транспортировка, выделение и идентификация вирусов проводятся общепринятыми методами. Наиболее важный этап работы — концентрирование вирусов. Первичное концентрирование вирусов из водопроводной воды осуществляется на ионообменной смоле или асканите. Сорбция на асканите должна проводиться при рН исследуемой воды, равном 7,0, а на ионообменной смоле — при рН 5,5—6,0 и наличии солей хлористого кальция. Элюция в обоих случаях проводится в мясо-пептонный бульон.
Для концентрирования вирусов из речной воды рекомендуется использовать осаждение сернокислым алюминием с соблюдением следующих параметров: рН воды 5,2—6,0 и температура 19—22 °С, элюция вирусов проводится в раствор Хенкса рН 8,0—8,5.
1 Работа выполнена канд. биол. наук Н. К. Лепахиной.
Поправочные коэффициенты для количественного определения вирусов в водопроводной и речной воде при использовании различных методов концентрирования
Вой Метод концентриропании
сорбция на смол? осаждение сернокислым алюминием О н Я 5 * - X — о 9 « о я о =
А1М7-8 А В-17. ИК Ч C« Сч < ЛН-31-Г
Водопроводная 4,5 2,5 3,3 2,2 3,9 1,8
Речная (взвешен-
ных веществ
10—20 мг/л) 8,9 4,9 6.4 4,3 2.2 2,1
Речная (взвешен-
ных вещестн
40 мг/л) 19,6 II .0 14.3 3,7 2,6 2,3
Для более эффективного выделения вирусов из воды предлагается применять вторичное концентрирование, осуществляющееся с помощью осаждения полиэтиленгликолем или с использованием двух фазных водных полимерных систем (Shu-val и соавт.). Введение дополнительного этапа концентрирования в 8—9 раз повышает эффективность выделения энтеро- и аденовирусов по сравнению с таковой при одноступенчатой процедуре с одновременным сокращением объема исследуемой воды до 1 мл; эффективность выделения вирусов достигает 90%.
В связи с частичной инактивацией вирусов при концентрировании и невозможностью полного освобождения вирусных частиц из комплекса вирус — сорбент с помощью элюирующих растворов рекомендуется вводить поправочные коэффициенты для установления полного содержания вирусов в воде (см. таблицу).
Энтеровирусы, попадая с хозяйственно-бытовы-ми сточными водами в почву, адсорбируются на ее частицах, на которых может задерживаться до 99,99% вирусов. В адсорбированном состоянии вирусы могут жить сравнительно долго (более 3 мес) и сохранять свою инфекционную активность (Gerba и соавт.; Duboise и Moore). При определенных условиях наблюдается десорбция вирусов с почвенных частиц, в результате чего создается опасность загрязнения водоносного горизонта, о чем свидетельствуют данные литературы. Описаны случаи распространения кишечных инфекций, связанные с употреблением инфицированной артезианской воды (Wellings и соавт.; Walter и Rudiger). С другой стороны орошение сельскохозяйственных культур приводит к обсеменению вирусной микрофлорой не только листьев и плодов растений, но и их корней. На растениях вирусы могут сохранять инфекционную активность до 16 сут, а высокая влажность и низкие температуры способствуют и более длительному их сохранению. Следует отметить, что даже после мытья овощей водопроводной водой на листьях салата и сельдерея остается до 51 % вирусов (Konowalchuk и Speirs).
Поэтому для контроля за санитарным состоянием земледельческих полей орошения, полей фильтра ции, полей подземного орошения и т. д. разрабо таны методы выделения энтеровирусов из почвы На этапе первичной обработки с целью максималь ной десорбции вирусов с почвенных частиц реко мендуется использовать такие механические приемы, как растирание почвенной суспензии
i
в течение 5 мнн и встряхивание ее в вертикальной плоскости в течение последующих
5 мин. В качестве десорбента предлагается среда № 199 с 5% инактнвированной бычьей сыворотки.
, После центрифугирования в течение 15 мин при 4000 об/мин обработка надосадочной жидкости и | выделение вирусов производятся общепринятыми ^»етодами.
Щ Оценка чувствительности метода на различных | типах почв показала, что процент выделения зависит от типа почв. При выделении вирусов из I дерново-подзолистой почвы, серозема и чернозема процент десорбции соответственно составлял 82, 75,8 и 26,5.
Для повышения эффективности выделения вирусов из почвы можно использовать концентрирование при помощи водных полимеров: полиглюкина (6% раствора декстрана) и полнэтиленгликоля (молекулярная масса 6000). Для этого к центрифуга-ту добавляют 20% полиглюкина, затем по каплям полиэтиленгликоль до появления стойкой мути и 1—2 капли 5 М раствора хлористого натрия. Пробы центрифугируют при 3000 об/мин в течение 30 мин, вирусы концентрируются в нижней фазе и пограничном слое, которые и используются для дальнейшего выделения вирусов на культуре ткани. Фактор концентрирования достигает в среднем 1,8—6,5 раза.
Основным источником загрязнения воздуха закрытых помещений вирусами являются больные ^!1ли вирусоноснтели. По сравнению с кишечными греспираторные вирусы менее устойчивы в условиях воздушной среды. Вирусы гриппа, парагриппа, респнраторно-синцитнальный вирус в условиях аэрозольной камеры обнаруживаются в течение периода протяженностью от нескольких минут до
6 ч. Аденовирусы и энтеровирусы могут сохранять инфекционную активность в воздухе в течение 6—24 ч, а на поверхности бытовых предметов в течение 10 дней и более (Р. А. Дмитриева).
Несмотря на незначительную устойчивость респираторных вирусов в воздухе, их постоянное поступление в помещение при кашле, чихании и разговоре больных, а также отсутствие прочного иммунитета после болезни создают опасность инфицирования, особенно для детей (в детских учреждениях, домах ребенка, больницах). Чрезвычайно велика опасность перекрестного инфицирования респираторными вирусами в детских соматических
и инфекционных больницах. По приросту антител в сыворотках больных было установлено, что за 20—30 дней пребывания в соматическом стационаре ребенок инфицируется 2—3 инфекциями.
В настоящее время известны инфицирующие дозы некоторых респираторных вирусов, установленные на добровольцах. В зависимости от патогенеза респираторной вирусной инфекции инфицирующие дозы при аэрозольном и контактном путях инфицирования для одних и тех же возбудителей различны. Так, инфицирующие дозы для вирусов Коксаки А-21, рнновнруса и аденовируса типа 4 при аэрогенном поступлении равны соответственно 30,0, 0,68 и 1,0 ИДБ0/МЛ, а при контактном — 6,0, 0,32 и 20,0 ИД ь о/мл (Couch и соавт.).
Учитывая легкость аэрогенного пути распространения вирусных инфекций, в больницах, домах ребенка и других учреждениях следует строго соблюдать санитарно-эпидемиологический режим. Необходимость выделения респираторных вирусов из воздуха возникает по эпидпоказаниям, а также при контроле за эффективностью обеззараживания воздуха и предметов обихода.
При выделении вирусов из воздуха помещений отбор проб проводится при помощи приборов ПОВ-1 или ПАБ-1 в объеме 500—1000 л одновременно в 2—3 точках помещения. Для концентрирования вирусов используются водные полимеры: 30% раствор полнэтиленгликоля и 6% раствор декстрана (полиглюкин) (Ю. Г. Вавилова, и др.), причем последний входит в состав улавливающей жидкости. В приборе ПОВ-1 используется 10 мл улавливающей жидкости, состоящей из 7 мл среды № 199, 3 мл полиглюкина, стрептомицина и пенициллина. После отбора пробы в улавливающую жидкость добавляют 30% раствор полиэтилен-гликоля до помутнения и 5 М раствор поваренной соли. Полученную взвесь встряхивают, центрифугируют, как было описано выше, или оставляют в холодильнике на сутки при 4 °С для разделения полимеров. Вирусы концентрируются в нижнем и пограничном слоях.
Предложенные методы индикации вирусов в воде, почве и воздухе просты, доступны, достаточно эффективны и могут широко использоваться в практике санитарной службы с целью санитарно-виру-сологнческого контроля за объектами окружающей среды.
ЛИТЕРАТУРА
Вавилова Ю. Г., Горев Н. Е., Смородинцев А. Л. — Вопр.
вирусол., 1972, № 5, с. 623— 625. Дмитриева Р. А. — Ж. мнкробиол., 1973, № 4, с. 21 — 25.
Couch R. В.. Cate Т. R., Douglas R. С. ct al. — Bact. , Rev., 1966. v. 30, p. 517-529.
Jbtiboise S. M., Moore В. E. — Appl. environm. Microbiol.. 1976, v. 31. p. 536—543. Gerba C. P.. Schaiberger G. E. — J. Water Pollut. Control Fed., 1975, v. 47, p. 93—103.
Konowalchuк J., Speirs J. — J. Milk a. Food Technol.,
1974, v. 37, p. 132—134. Shuvat II. J., Fattal В., Cijmbatista S. et al. — Water
Res.. 1969, v. 3, p. 225-240. Von Watter R., Rudiger St. — Z. ges. Hyg., 1977,
Bd 23, S. 461—463. Wellings F. M., Lewis A. L., Mountain C. W. et al. — Florida Sei., 1975, v. 38, p. 202-207.
Поступила 17/V 1979 r.
