CC BY
430
МЕТОДИКИ СТАНДАРТИЗАЦИИ ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ ФЕРМЕНТИРОВАННЫХ НАСТОЕК НА ПРИМЕРЕ BRYOPHYLLUM E FOLIIS FERM 33B
М.И. Волжанова, С.Н. Суслина
Кафедра общей фармацевтической и биомедицинской технологии Медицинский факультет Российский университет дружбы народов ул. Миклухо-Маклая, 8, Москва, Россия, 117198
Р.А. Байльман
ООО «Лекарственные средства ВАЛА-Р» ул. Коненкова, 11а, Москва, Россия, 127560
Целью исследования явилась разработка методик стандартизации гомеопатических матричных ферментированных настоек на примере Bryophyllum e Ыш ferm 33Ь. В частности, установлены реакции подлинности на матричную настойку BryophyUum e Мш ferm 33Ь, а также описана методика их проведения, определена оптимальная методика обнаружения биологически активных веществ в матричной настойке BryophyUum e Мш ferm 33Ь методом хроматографии в тонком слое сорбента. Установлено, что наряду с высокоэффективной жидкостной хроматографией и хроматографией в тонком слое сорбента в экспресс-анализе настоек матричных ферментированных водных в гомеопатических аптеках и контрольно-аналитических лабораториях можно использовать Steig-ЫИ как один из эффективных и экономичных методов стандартизации. На основании проведенных исследований разработаны разделы проекта фармакопейной статьи на настойку матричную ферментированную (водную) Bryophyllum e Мш ferm 33Ь для гомеопатической фармакопеи России.
В последние годы отмечается значительное возрастание интереса к гомеопатическому методу лечения, а также увеличение объемов регистрации новых гомеопатических препаратов. В отечественной фармации появился новый раздел — гомеопатическая фармация, объектом исследования которого являются гомеопатические лекарственные средства, применяемые в здравоохранении в соответствии с принципами гомеопатического метода лечения.
К приоритетным задачам гомеопатической фармации относится создание и совершенствование нормативной базы, регламентирующей изготовление и контроль качества гомеопатических лекарственных препаратов, расширение ассортимента отечественных гомеопатических лекарственных средств, а также совершенствование современных методов контроля качества и стандартизации [1].
Качество гомеопатических лекарственных средств в значительной степени обусловлено применением стандартных гомеопатических субстанций, приготовленных в соответствии с правилами GMP. Исходным сырьем для получения большинства гомеопатических лекарственных средств являются матричные настойки.
Настойки гомеопатические матричные представляют собой жидкие водноспиртовые или спиртовые извлечения из сырья растительного или животного происхождения. Настойки гомеопатические матричные получают способом мацерации или перколяции. Контроль качества настоек гомеопатических матрич-
ных заключается в количественном определении действующих веществ в них, определении подлинности и других показателей в соответствии с требованиями частной нормативной документации [2].
Наряду с методами, изложенными в фармакопейной статье «Настойки гомеопатические матричные», в Германии, Швейцарии, Швеции и других странах для приготовления настоек матричных используется метод водной экстракции из растительного сырья с ферментацией. При этом получаются настойки матричные, качественно отличающиеся по биологически активным веществам от водноспиртовых настоек.
Настойки гомеопатические матричные ферментированные представляют собой жидкие водные извлечения из свежего или высушенного лекарственного растительного сырья, получаемые ферментацией при заданных параметрах температурного режима, величины рН и других факторов.
Настойки гомеопатические водные получают путем настаивания измельченного свежего или высушенного лекарственного растительного сырья с очищенной свежеприготовленной водой при одновременном взаимодействии ферментов, микроорганизмов или молочных бактерий. При этом используются натуральный мед, лактоза, молочная сыворотка.
Качество настоек гомеопатических водных оценивают по показателям: описание, цвет, запах, подлинность, плотность, сухой остаток, рН, тяжелые металлы, микробиологическая чистота. Количественное определение биологически активных веществ в настойках определяют в соответствии с требованиями частных нормативных документов [2, 3].
Наши исследования проводились на базе гомеопатической аптеки ООО «Лекарственные средства ВАЛА-Р», которая производит гомеопатические лекарственные препараты по рецептуре и технологии немецкой фирмы «WALA-Heil-mittel GmbH».
Гомеопатические лекарственные средства фирмы «WALA-Heilmittel GmbH» изготавливаются на основе гомеопатической фармакопеи Германии с использованием естественнонаучных методов, направленных на обнаружение родства (подобия) между природными процессами как патологическими, так и здоровыми, протекающими в мире растений, животных и минералов.
Наблюдения за этими процессами в природе и лабораторных условиях позволили разработать оригинальные запатентованные методики приготовления настоек гомеопатических матричных, а также лекарственных форм из них.
«WALA» — это аббревиатура немецких слов Wдrme — Asche — Licht — Asche (Тепло — Зола — Свет — Зола), в которой фактически заключена технологическая схема производства настоек матричных ферментированных. WALA-метод — это, в первую очередь, метод получения водных (а не спиртовых) матричных настоек, которые используются для приготовления всех лекарственных форм.
Матричные настойки из растений по WALA-методу готовят, ориентируясь на жизненный ритм роста и развития растений. Метод основан на водной экстракции лекарственных субстанций из растений, в строгом соответствии с су-
точными природными ритмами, в которых растение развивается (ритмы колебания температуры, освещенности, движения, ритмы, связанные с восходом и закатом солнца). Такие матричные настойки обозначаются как настойки ferm (ферментированные).
Действие приготовленных данным методом лекарственных препаратов направлено в первую очередь на нормализацию ритмической системы организма и тем самым активацию его собственных сил, способствуя более быстрому и полному выздоровлению.
К таким препаратам можно отнести гомеопатические лекарственные средства Bryophyllum e Мш ferm D1, D3, полученные из матричной настойки Bryo-phyllum e Мш ferm 33Ь, которые применяются при истерическом неврозе, нарушении менструального цикла, предменструальном синдроме, в климактерическом периоде в виде различных гомеопатических лекарственных форм.
Актуальность данного исследования обусловлена отсутствием в отечественной гомеопатической фармации методик стандартизации настойки матричной ферментированной Bryophyllum e foliis ferm 33Ь, получаемой из свежих побегов каланхое Дегремона (Kalanchoes Daigremontianae тотш recens) и свежих побегов каланхое перистого (Kalanchoes pinnatae cormus recens, семейства тол-стянковые — Crassulaceae).
Анализ научно-исследовательских публикаций дает основание предположить, что данный вопрос остается недостаточно изученным. В частности, недостаточно изучена технология приготовления настойки матричной ферментированной (водной) Bryophyllum e Мш ferm 33Ь, не определены качественные реакции на содержание флавоноидов в настойке ферментированной матричной Bryophyl-lum e foliis ferm 33Ь, не разработаны оптимальные методики хроматографирования и системы растворителей, а также отсутствует фармакопейная статья на настойку матричную ферментированную (водную) Bryophyllum e foliis ferm 33Ь.
Полученные результаты могут быть применены в экспресс-анализе для внедрения их в дальнейшем в практику гомеопатических аптек и контрольно-аналитических лабораторий для стандартизации данной настойки матричной ферментированной (водной).
Целью нашего исследования является разработка подходов к стандартизации матричной настойки Bryophyllum e Мш ferm 33Ь.
Задачи:
1) изучение физико-химических свойств матричной настойки Bryophyllum e foliis ferm 33Ь;
2) подбор чувствительных качественных реакций и оптимальных методик хроматографирования и систем растворителей для стандартизации матричной настойки Bryophyllum e foliis ferm 33Ь;
3) изучение методики Steigbild для экспресс-анализа настоек матричных ферментированных.
В ходе исследования описан внешний вид настойки Bryophyllum e foliis ferm 33Ь — жидкость желто-коричневого цвета со слабым специфическим запахом.
Установлены реакции подлинности на матричную настойку Bryophyllum e Мш ferm 33Ь, а также описана методика их проведения:
1. Реакция с раствором натрия гидроксида 8,5%.
Смешивают 1 мл настойки и 2 мл раствора натрия гидроксида 8,5%. Должно появиться желто-коричневое окрашивание.
2. Цианидиновая проба.
К 1 мл настойки добавляют 5—7 капель концентрированной хлористовород-ной кислоты и 10—15 мг металлического Mg или Zn, через 3—5 мин. наблюдают окрашивание. Для ускорения реакции и усиления окраски рекомендуется подогреть реакционную смесь (2—3 мин.) на кипящей водяной бане. Должно появиться розовое окрашивание.
Определена оптимальная методика обнаружения биологически активных веществ в матричной настойке Bryophyllum e Мш ferm 33Ь методом хроматографии в тонком слое сорбента.
Хроматографическую камеру заполняют системой растворителей, состоящей из этилацетата, муравьиной кислоты и воды в соотношении 84:8:8. Закрывают крышкой во избежание испарения.
Приготовление исследуемого раствора. В делительную воронку отмеривают 2,5 мл матричной настойки и добавляют 15 мл этилацетата, встряхивают в течение 10 минут. Отделяют органическую фазу в колбу на 50 мл с притертой пробкой. Повторяют экстракцию водной фазы 5 мл этилацетата. Органические фазы объединяют и выпаривают, присоединив колбу с объединенными органическими фазами к водоструйному насосу. Остаток растворяют в 0,5 мл этанола.
Приготовление стандарта. В колбу отмеривают 10 мл метанола, добавляют 10 мг рутозида, 10 мг гиперозида и 10 мг галловой кислоты.
На хроматографической пластине «Силикагель 60 F254 Merck» размером 20 х 20 см отмечают линию старта и микропипеткой наносят раздельно 20 мкл (0,02 мл) исследуемого раствора и 10 мкл (0,01 мл) стандарта в виде точек. Пластину помещают в вертикальную хроматографическую камеру, предварительно выстланную фильтровальной бумагой и насыщенную в течение 40 минут смесью растворителей. Когда фронт растворителей пройдет расстояние около 15 см, пластину вынимают, высушивают под вытяжным шкафом при комнатной температуре.
После удаления растворителей хроматограмму рассматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм, затем опрыскивают 1% раствором дифенилборилокси-этиламина в метаноле и 5% раствором макрогола 400 в метаноле, наблюдают в дневном свете.
На хроматограмме раствора свидетеля должны обнаруживаться зона рутози-да оранжевого цвета в нижней трети с Rf около 0,2, при переходе к средней трети зона гиперозида оранжевого цвета с Rf около 0,4 и зона галловой кислоты синего цвета с Rf около 0,9 в верхней трети.
На хроматограмме исследуемого раствора должны обнаруживаться выше уровня стандарта рутозида одна — две оранжевые зоны адсорбциис Rf около
0,25—0,35, между уровнями контрольных веществ гиперозида и галловой кислоты 2—4 бледно-желтые зоны адсорбции с И- около 0,6—0,7, выше зоны адсорбции галловой кислоты 1—2 желтоватые или голубоватые зоны адсорбции с Rf около 0,9. На уровне галловой кислоты может появляться ярко-синяя зона адсорбции.
Результаты хроматографирования флавоноидных соединений методом хроматографии в тонком слое сорбента в системе растворителей этилацетат — муравьиная кислота — вода (84:8:8) указаны в табл.
Таблица
Величины Rf , цвета зон адсорбции при хроматографировании флавоноидных соединений
Объект № зон адсорбции Rf * Цвет зон адсорбции после проявления 1% раствором дифенилборилоксиэтиламина в метаноле, 5% раствором макрогола 400 в метаноле в дневном свете
Рутозид 1 0,26 0,23 оранжевый
2 0,35 0,23 оранжевый
Гиперозид 3 0,63 0,47 бледно-желтый
4 0,78 0,47 бледно-желтый
Галловая кислота 5 0,96 0,93 желтоватый
Разработанные методики позволяют стандартизировать настойку гомеопатическую матричную Bryophyllum е Аэ1ш ferm 33Ь по флавоноидным соединениям.
Качественное и количественное определение биологически активных веществ в матричной настойке Bryophyllum е Аэ1ш ferm 33Ь можно провести при помощи хроматографии в тонком слое сорбента, высокоэффективной жидкостной хроматографии, а также используя метод Steigbi1d, широко применяемый при внутриаптечном контроле в гомеопатических аптеках Германии.
Steigbi1d (в переводе с немецкого, «картина фронта») — вид восходящей бумажной хроматографии матричных настоек, иллюстративно-творческий метод антропософского исследования, оценки качества и «жизненной силы» субстанций [4, 5].
Для получения Steigbi1d в качестве опытных образцов использовалась настойка матричная ферментированная водная Bryophy11um e Аэ1ш ferm 33Ь. Для сравнения водных и водно-спиртовых настоек использовались Bryophy11um e Аэ1ш ferm 33Ь, с одной стороны, и Bryophy11um e fo1iis 20%, Bryophy11um e fo1iis 50% — с другой. Хроматограммы опытных образцов Bryophy11um e fo1iis ferm 33Ь, Bryophy11um e fo1iis 20% и Bryophy11um e fo1iis 50% ставились непосредственно после приготовления.
В нашем исследовании применялась фильтровальная бумага (ГОСТ 12026-76), закрепленная в виде цилиндра. Цилиндр устанавливался в круглую хроматографическую камеру, в которую предварительно помещался опытный образец. Затем в камеру добавляли систему растворителей: серебра нитрат 0,25% и железа сульфат (II) 0,25%. Давали подняться фронту растворителей. Полученный Steigbi1d высушивали, исследовали при дневном свете, а также в ультрафиолетовом при длине волны 365 нм. На хроматограммах наблюдали три ос-
новных фронта. Первый фронт был расположен на расстоянии 2—3 см от основания. Второй — фронт серебра нитрата — превосходил первый на 1 см. Фронты первой и второй фазы после высушивания хроматограммы имели вид горизонтальных линий. Третий фронт — сульфата железа — имел высоту подъема около 12 см.
Полученные Steigbild свидетельствуют о наглядности данного метода при идентификации матричных настоек. Steigbild Bryophyllum e foliis ferm 33b указывает на максимальную вытяжку биологически активных веществ из побегов каланхое Дегремона. Меньшее представление о биологически активных веществах дают Steigbild Bryophyllum e foliis 20% и Steigbild Bryophyllum e foliis 50%, где в качестве сырья для приготовления настойки использовались побеги измельченные, а консервантом служил этанол 20% и 50% соответственно.
Следовательно, наряду с высокоэффективной жидкостной хроматографией и хроматографией в тонком слое сорбента в экспресс-анализе настоек матричных ферментированных водных в гомеопатических аптеках и контрольно-аналитических лабораториях можно использовать Steigbild как один из эффективных и экономичных методов стандартизации.
Таким образом, в результате исследований установлен внешний вид настойки Bryophyllum e foliis ferm 33b — жидкость желто-коричневого цвета со слабым специфическим запахом. Определены чувствительные качественные реакции на флавоноидные соединения.
Разработана методика определения подлинности настойки Bryophyllum e foliis ferm 33b методом хроматографии в тонком слое сорбента, включающая про-боподготовку путем концентрирования аликвоты с растворением сухого остатка в органической фазе (этилацетат), приготовление стандарта (рутозид, гиперозид, галловавая кислота в метаноле) и хроматографирование в системе растворителей этилацетат, муравьиная кислота, вода в соотношении 84 : 8 : 8.
Полученные методики позволяют стандартизировать настойку гомеопатическую матричную Bryophyllum e foliis ferm 33b по флавоноидным соединениям.
На основании проведенных исследований разработаны разделы проекта фармакопейной статьи на настойку матричную ферментированную (водную) Bryo-phyllum e foliis ferm 33b для гомеопатической фармакопеи России.
ЛИТЕРАТУРА
[1] Краснюк И.И., Михайлова Г.В. Фармацевтическая гомеопатия. — М.: Академия, 2005. — 272 с.
[2] Костенникова З.П., Акашкина Л.В., Островский А.З. Введение в гомеопатическую фармацию. — М.: Симилия, 2003. — 208 с.
[3] Сборник фармакопейных статей по гомеопатии / Под научной редакцией члена-корреспондента АМН, профессора Р.У. Хабриева. — М., 2005.
[4] Struh J. Grundlegende Phanomene bei der Ausbildung der Steigbildformen. Bildtypen und pharmazeutische Prozesse // Elemente der Naturwissenschaft. — 1987 — 46. — Sonder-nummer. — S. 22—35.
[5] Mandera R. Zur Metamorphose von Pflanzenorganen, Substanzenqualitaten und Bildtypen im Steigbild // Tycho de Brahejahrbuch fur Goetheanismus. — 1998 — 53. — S. 281—310.
STANDARTIZATION TECHNIQUES OF THE HOMEOPATHIC MATRIX FERMENTED TINCTURES ON EXAMPLE OF BRYOPHYLLUM E FOLIIS FERM 33B
M.I. Volzhanova, S.N. Suslina
Department of general pharmaceutical and biomedical technology Medical faculty Peoples’ Friendship University of Russia M-Maklaya str., 8, Moscow, Russia, 117198
R.A. Beilmann
OOO «Lekarstvennye sredstwa WALA-R»
Konenkova str., 11a., Moscow, Russia, 127560
The purpose of this research is the development of approaches to standartization procedure of matrix tincture Bryophyllum e foliis ferm 33b. Particularly, an optimal technique for detecting biologically active substances in Bryophyllum e foliis ferm 33b using thin layer chromatography is obtained. Most parts of pharmacopoeia clause of Russian homeopathic pharmacopoeia for matrix fermented tincture Bryophyllum e foliis ferm 33b are written on the basis of research conducted.
