МЕТОДИКА ИЗУЧЕНИЯ АЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

Таблица I

Определение возрастной группы по данным микрокалькулятора

Возраст, годы Группа Возраст, годы Группа Возраст, годы Группа

0,958—1,043 1,046—1,370 1,373—1,624 t 1,627—1,743 1,749—2,241 1 ГОД 1 год 3 мес 1 год 6 мес 1 год 9 мес 2 года 2,246—2,743 2,749—3,241 3,246—3,743 3,749—4,241 4,246—4,743 2 года 6 мес 3 года 3 года 6 мес 4 года 4 года 6 мес 4,749—5,241 5,246—5,743 5,749—6,241 6,246—6,743 6,749—7,743 5 лет 5 лет 6 мес 6 лет 6 лет 6 мес 7 лет

Таблица 2

Диапазон значений баллов физического развития

Оценка уровня развития

Границы сигнальных отклонений Балл по росту по массе тела и ОГК

М—2,05 or и ниже Af—1,05 Ох—2,0 or M±l<rR M^:I,O5ctr+2,O0r ¿И±2,05 or+3,0 or /W-f-3,05 or и выше 1 2—3 4—7 8—9 10 10 Низкий Отстает от возраста Соответствует возрасту Опережает возраст Опережает возраст Опережает возраст Дефицит массы II степени Дефицит массы I степени Нормальное » Избыток массы I степени Избыток массы II степени

15 ПА, 9 ПВ, 87 ПС; 365,25 П8; 30,6 П9;19|11|81 В/О, С/П. После останова на индикаторе 5,822. Данный ребенок относится к возрастной группе 6 лет.

Оценка развития по росту: 112| 114,45|5,37 С/П. После останова на индикаторе 5 баллов (соответствует возрасту); ИП2 — частная сигмы —£,46 соответствует возрасту; ИП1 — процент

отклонения признака от среднестатистического -2,1.

Оценка развития по массе тела: 22,5|20,28| |2,11 С/П. После останова на индикаторе 8 баллов (развитие нормальное); ИП2 — частная сигмы 1,1; развитие нормальное; ИП1—процент отклонения 11: избыточное жироотложение.

Оценка развития по ОГК: 56,5f56,64f3^05 G/П. После останова на индикаторе 5 баллов: нормальное развитие; ИП2 — частная сигмы —0,046: развитие нормальное; ИП1 — процент отклонения 0,25: развитие нормальное.

Литература

1. Гигиена детей и подростков / Под ред. В. Н. Карда-шенко. — М„ 1980,

2. Дорояснова К■ П. Роль социальных и биологических факторов в развитии ребенка. — М., 1983. — С. 28—41.

3. Митрофанова И. Г. // Гиг. исан. — 1986. — № 5. — С. 24—26.

4. Митрофанова Н. Г., Рапопорт К■ А. //Там же.— № 8. — С. 66—70.

5. Назаров С.// Наука и жизнь. — 1985. — № 12.— С. 124—125.

6. Руль Ю. В., Савицкий И. В., Базыка Д. А., Яндульская Г. //.//Гиг. и сан,—1987.-^ № 1, —С. 45-47.

7. Хвастунов Р. М. //Там же. — 1986. — № 5. — С. 35—37.

Поступила 30.03.88

УДК 614.31:579.678

М. Н. Грачева, Р. С. Волкова, Л. П. Сазонова, Т. С. Телешева,

Г. М. Шикалов

МЕТОДИКА ИЗУЧЕНИЯ АЭРОБНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ

II ММИ им. Н. И. Пирогова

Проблема профилактики пищевых отравлений в последние годы приобретает все большую актуальность, что связано с изменением этиологического фактора заболеваний. Расследования случаев пищевых отравлений пока-зАи, что нередко их причиной являются микроорганизмы рода Escherichia, Bacillus, Proteus, Aeromonas и др. При исследовании качества пищевых продуктов согласно установленным критериям [1] проводят определение общего числа микроорганизмов и количества санитар-ио-показательных микроорганизмов, хотя низ-

кое микробное число не всегда характеризует степень эпидемической опасности пищевых продуктов. В этой связи возникает необходимость в идентификации всех микроорганизмов, обнаруживаемых при определении микробного числа. Их идентификация стандартными методами требует использования большого количества питательных сред и набора биохимических реакций. •'■' В наших исследованиях мы использовали схему-ключ, разработанную проф. Ю. П. Пивова-ровым и соавт. [3], которая позволяет иденти-

фицировать все микроорганизмы, способные давать рост на обычных питательных средах при исследовании микробного фона пищевого продукта. В основу кода-определителя положены показатели морфологических, культуральных и биохимических свойств микроорганизмов, приведенные в современной международной номенклатуре [2].

Для более точной и углубленной идентификации различных видов микроорганизмов применяли биохимические тесты с использованием систем индикаторных бумажных (СИБ), для межродовой дифференциации энтеробактерий — наборы А и Б, разработанные Горьковским НИИ эпидемиологии и микробиологии.

При определении грампринадлежности выделяемых штаммов применяли методику [4], согласно которой в 1—2 капли 3 % раствора едкого калия, нанесенные на предметное стекло, вносят колонию, снятую петлей с поверхности плотной питательной среды. После тщательного перемешивания петлю медленно поднимают над каплей — у грамотрицательных микроорганизмов за петлей поднимаются тяжи длиной 0,5— 2 см и более, что авторы связывают с разрушением клеток и освобождением ДНК, которая у грамотрицательных бактерий имеет вязкую структуру. Грамположительные микроорганизмы тяжей не образуют.

Подготовку проб для бактериологического исследования проводили по общепринятым методикам. Последовательность исследований может быть представлена в виде следующей схемы.

1-й день — к 5 г исходного продукта прибавляли 45 мл стерильного физиологического раствора, измельчали в гомогенизаторе при 3000 об/мин в течение 5 мин. Посев исходного материала (0,1 г продукта) и двух последующих десятикратных разведений (0,01 и 0,001 г) проводили на мясопептонный агар при рН 7,2, посевы инкубировали при 37 °С в течение 24 ч.

2-й день — изучали морфологические особенности колоний, проводили микроскопию мазков, определяли грампринадлежность и подвижность микроорганизмов. Для определения спорообразования осуществляли посев колоний на голодный агар, посевы инкубировали при 37 °С в течение 48 ч с последующим выдерживанием при температуре в течение 72 ч. Для ускорения получения результатов уже со 2-го дня инкубирования посевов проводили микроскопию мазков и, как правило, на 2—3-й день отмечали наличие спорообразования.

3-й день — проводили пересев аэробных палочек на мясопептонный агар с рН 7,2 и 4,5, а не образующих споры кокков на мясопептонный агар с 10 % №С1 для определения способности микроорганизмов расти при данных условиях.

4-й день — определяли спорообразование, изучали биохимическую активность суточных культур микроорганизмов с использованием СИБ.

Спорообразование

Каталааа

Фернлетация гл/анозо'

Подбижносгь

Рост при Ю% ЛЬС1

га-

Схема 1. Код для дифференциации аэробных кокков.

Определяли способность микроорганизмов расщеплять желатин, утилизировать крахмал, мочевину, декарбоксилировать аргинин, орнитин, лизин, дезаминировать фенилаланин, образовывать индол и сероводород. Дальнейший пересев выделенных микроорганизмов на элективные среды с целью выявления способности редуцировать нитраты и продуцировать ацетоин (реакция Фо-гес — Проскауэра). 0

5-й день — учет результатов исследования биохимической активности. Определение спорообразования.

6-й день — окончательная идентификация неспорообразующих аэробных палочек.

На схеме 1 показано, что окончательная идентификация аэробных микроорганизмов приходится на 6-й день исследования. Однако на 4—5-й день по каталазной и оксидазной активности, грампринадлежности, подвижности и предвари-

Спорообразовонис

Окраска по /раля/

ОпяхЬза

Коталаэа

Подвижного

/аз иэ

Аргинин

нге

</гилизаиия Сахаров

Рост гри рН

УЬзин

Полярные жгртани

Схема 2. Код для дифференциации грамположитель-ных и окендазоположительных грамотрицательных аэробных палочек.

Схема 3. Код для дифференциации оксидазоотрицатель-ных ферментирующих глюкозу подвижных аэробных пало-Ф чек.

тельным данным о спорообразовании можно разграничить микроорганизмы на 4 группы — спо-рообразующие палочки, кокки, оксидазоположи-тельные и оксидазоотрицательные микроорганизмы. Спорообразующие кокки составляют род Sporosarcina. Неспорообразующие кокки по ка-талазной активности и способности ферментировать глюкозу разделяются на роды Staphylococcus и Planococcus (неферментирующие глюкозу подвижные кокки) и неподвижный род Micrococcus. Каталазоотрицательные кокки по способности к росту на питательных средах с 10 % NaCl выделяют в род Aerococcus, а не способные ра-c™i на средах с NaCl — Streptococcus.

Окончательное разделение палочек по спорообразованию заканчивается только к 8-му дню исследований, однако уже на 3—4-й день можно выделить род Bacillus и Sporolactobacillus, а по каталазной активности и способности образовывать сероводород — род Listeria, Erysipelotrix и Lactobacillus. Дальнейшее разделение грамот-рицательных палочек проводится по оксидаз-ной активности, ферментации глюкозы и подвижности (схема 2). При этом ферментирующие глюкозу подвижные палочки, образующие газ из глюкозы и разлагающие лизин, составляют род Photobacterium, а не разлагающие лизин — ^romonas. Не образующие газа из глюкозы подлежат последующему разделению по неспособности декарбоксилировать аргинин (род Vibrio), а способные декарбоксилировать аргинин, не образующие сероводород, составляют род Plesiomonas. Оксидазоположительные подвижные палочки, дающие рост колоний при рН 4,5, относят к роду Acetobacter, а не дающие ро-

ста при pH 4,5 делят по наличию жгутиков: имеющие полярный жгутик — Pseudomonas. Микроорганизмы, имеющие подвижность за счет перетрихий, составляют род Alcaligenes. Неподвижные палочки этой группы, не утилизирующие Сахаров, представляют род Moraxella. Оксидазоотрицательные палочки, согласно схеме 3, также идентифицируют по подвижности и ферментации глюкозы. Род Proteus составляют микроорганизмы, дезаминирующие фенилаланин и не образующие сероводорода. Микроорганизмы рода Enterobacter не обладают способностью де-заминировать фенилаланин, но декарбоксилиру-ют аргинин, разлагают цитрат и ацетоин. Из этого семейства микроорганизмы, не разлагающие цитраты, представляют род Escherichia, а не разлагающие ацетоин дополнительно требуют постановки теста на декарбоксилирование лизина и образование индола — микроорганизмы, не образующие индола, — Salmonella, а образующие индол — Citrobacter. Микроорганизмы, ферментирующие глюкозу с образованием газа, не способные дезаминировать фенилаланин, идентифицируют по способности образовывать сероводород и разлагать сахара (сахарозу, лактозу, маннит). Род Edwardsiella образует сероводород и не разлагает маннит, Serratia разлагает цитрат и сахарозу и не разлагает лактозу, а род Hafnia не разлагает цитрат.

Род Klebsieila составляют грамотрицательные и оксидазоотрицательные неподвижные микро-

Ферментоция глюкозы

Подвижность

!аз оз глюкозы

Флюоресцирующий пиг*1внт

Пигмент

Фенилаланин

Аргинин

HZS

Щ в NO г

Цитрат

Сахароза

мочевина

■Лактоза

Индол

Крахмал

1

fe

ш

й

Схема 4. Код для дифференциации оксидазоотрица-тельных ферментирующих глюкозу неподвижных и не ферментирующих глюкозу аэробных палочек.

организмы, которые идентифицируют по способности ферментировать глюкозу с образованием газа и не декарбоксилируют аргинин (схема 4). Род Schigella ферментирует глюкозу без образования газа и декарбоксилирует аргинин, а арги-нинотрицательные микроорганизмы представляют род Yersinia, которые, кроме того, образуют сероводород и обладают способностью редуцировать нитраты в нитриты и не разлагать сахарозу, лактозу и цитрат. По неспособности ферментировать глюкозу подвижные пигментированные палочки, разлагающие крахмал, представляют род Xantomonas, неподвижные пиг-

ментобразующие — род Flavobacterium, а не образующие пигмента— Acinetobacter.

Литература

1. Калина Г. П. // Гигиенические аспекты охраны здоровья населения в условиях интенсивного развития народного хозяйства. — М., 1982. — С. 97—102.

2. Краткий определитель бактерий Берги: Пер. с англ.— М„ 1980.

3. Пивоваров Ю. П., Лапенков М. И., Меренюк Г. Определитель саннтарно-значимых микроорганизмов. Щ Кишинев, 1982.

4. Gregersen Т. // Europ. J. appl. Microbiol.— 1978.— Vol. 5. —P. 123—127.

Поступила 03.11.88

УДК 614.31:614.8761-07

О. Н. Прокофьев

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОДОЗНОЙ БЕТА-АКТИВНОСТИ СМЕСИ РАДИОНУКЛИДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ

Ленинградский НИИ радиационной гигиены Минздрава РСФСР

Наиболее доступным способом определения содержания радионуклидов в пищевых продуктах является бета-радиометрия проб. Оперативная интерпретация результата бета-радиометрии достигается в том случае, если по удельной бета-активности смеси радионуклидов в пищезом продукте можно определить уровни внутреннего облучения органов человека, потребляющего этот продукт.

Решение данной задачи облегчается при использовании изодозной бета-активности смеси радионуклидов в пищевом продукте. Изодозной является такая бета-активность смеси радионуклидов в пищевом продукте, при которой доза излучения, воздействующего на человека при выбранном режиме потребления пищевого продукта, будет равна заданному значению. Изодозная бета-активность смеси радионуклидов в пищевом продукте зависит от состава смеси, степени доступности радионуклидов для усвоения организмом человека и режима потребления пищевого продукта. Пищевой продукт, на который непосредственно попали радиоактивные вещества, считается неукрытым или недостаточно укрытым. К неукрытым пищевым продуктам относятся овощи, зелень, фрукты, зерно, загрязненные на корню или во время хранения, а также другие пищевые продукты, которые были не укрыты или недостаточно укрыты во время радиоактивных выпадений. Среди радионуклидов, образующихся при работе реактора, имеются как одиночные, так и генетически связанные в изобарной цепочке радиоактивных превращений. В пищевые продукты могут поступить главным образом радионуклиды, не имеющие радиоактивного предшественника и имеющие один радиоактивный предшественник. В общем случае кинетику удельной активности радионуклида I с одним радиоактивным предшественником {радионук-

лидом i—1) можно записать в следующем виде:

где

аг (0 =аг (0)-S; (0,

/= I

a,-, (0) Krfi

4iPr ai (0) 'M—.kt-t'

Qi2 = 4 —

a,--f (0)

U-fi

■Xi-

i-l

(2)

(3)

(4)

яг (0) Х1 иа = Хг-%у (5)

(0) и 1 (0) — удельные активности радионуклида I и его предшественника I—1 в пищевом продукте в начальный момент / = 0; за начальный принимают момент, на который определены 1 (0) и аг- (0); и Хг-1 — постоянные радиоактивного распада радионуклида £ и его предшественника радионуклида £—1, ч-1; fi — коэффициент ветвления при радиоактивном превращении радионуклида /—1 в радионуклид V, I — момент времени, на который определяется удельная активность радионуклида £ в пищевом продукте (отсчитывается от начального момента), ч. Формулы (1) — (6) можно использовать также и для описания кинетики удельной активности радионуклида, не имеющего радиоактивного предшественника. Для такого радионуклида I следует принять а<_1(0)=0. ф

Кинетику суммарной удельной бета-активно<5ти смеси радионуклидов в неукрытом пищевом продукте описывают с помощью формулы

N