CC BY
9
УДК 615.285.7:547.2411.099:610.853-099
Н. В. Кокшарева, И. И. Ткаченко, М. Л. Зиновьева
МЕТОДИЧЕСКИЙ ПОДХОД К ИССЛЕДОВАНИЮ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ КУР ПРИ ОЦЕНКЕ ОТДАЛЕННОГО НЕЙРОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ
СОЕДИНЕНИЙ
ВНИИ гигиены и токсикологии пестицидов, полимеров и пластических масс, Киев
Известно, что ряд фосфорорганических соединений (ФОС)—триортокрезилфосфат, лептофос, хлорофос и другие, способны оказывать отдаленное нейротоксическое действие (ОНД), которое проявляется через 14—21 день после перенесенного острого отравления и характеризуется возникновением атаксии, мышечной слабости, парезов и параличей, демиелинизацией проводящих путей как в центральной, так и в периферической нервной системе [1, 5, 6]. Доказано, что наиболее удобной моделью для воспроизведения данной патологии являются птицы, в частности куры [6]. Вместе с тем в литературе не встречалось описаний информативных электрофизиологических методов, позволяющих адекватно оценить функциональное состояние периферической нервной системы кур.
В связи с этим нами разработан доступный методический подход, позволяющий выявлять локализацию поражения — изменение функционального состояния двигательных аксонов и нервно-мышечной передачи возбуждения у кур в динамике без оперативного вмешательства.
С этой целью сконструирован оригинальный станок (из плексигласа или тонкого металлического листа), при помощи которого можно на-
Рис. 1. Станок для иммобилизации кур.
О — катодный осциллограф; С\ — первый канал электронного стимулятора; С8 — второй канал. Остальные обозначения в тексте.
дежно фиксировать кур и регистрировать электрические реакции от периферических нервов и скелетных мышц птиц (рис. 1). Как видно из рис. 1, ноги курицы продевают через отверстия в боковых стенках станка и зажимают металлическими скобками на прямоугольной пластине, сверху птица также фиксируется специальной крышкой.
Критерием оценки функционального состояния периферической нервной системы кур является скорость распространения возбуждения (СРВ) по ветви малоберцового нерва (п. fibularis), ин-нервирующего мышцу (ш. adductor) II пальца ноги птицы, а также лабильность нервно-мышечной передачи.
Потенциалы действия (ПД) поступали через отводящие (Э0) и раздражающие (Эрь Эр2) электроды, изготовленные из нержавеющей стали, диаметром 0,3 мм. Такие электроды при вкалывании не вызывают существенного повреждения тканей и позволяют отводить электрические токи в хроническом, подостром и остром опыте.
СРВ (в м/с) определяли по разности латентных периодов двух ПД, вызванных в мышце супрамаксимальными импульсами длительностью 0,2 мс при раздражении ветви малоберцового нерва. Раздражающие электроды (3pi и Эр2) вкалывали в область прохождения нерва проксимально и дистально, как правило, на расстоянии 30—40 мм друг от друга. СРВ рассчитывали по
формуле v = — t где 5 — длина участка нерва
между двумя раздражающими электродами, м; Т — разность латентных периодов, с. Так, если
Рис. 2. ПД m. adductor II пальца ноги курицы на непрямое раздражение. а — ПД при раздражении через электроды Эрг (1) и Эр| (2). б — ПД при стимуляции нерва с частотой раздражения 100 Гц (/) а 250 Гц (2).
разность латентных периодов (Г) 0,7 мс (0,0007 с), расстояние (S) между раздражающими электродами 29 мм (0,029 м), то СРВ равна 41,4 м/с (рис. 2).
У контрольных кур СРВ по периферическим нервам составляет 40—50 м/с. При воздействии i классических нейропаралитических ФОС (триор-токрезилфосфат, афос) снижение СРВ (на 20— 30 % по сравнению с исходным уровнем) наблюдается уже на 6—7-е сутки и предшествует появлению видимых признаков ОНД. На фоне развития парезов и параличей (14—17-е сутки исследования) СРВ замедляется на 40—70 %, при этом развитие процесса демиелинизации в периферических нервах подтверждается морфологическими исследованиями [2, 4].
Функциональное состояние нервно-мышечной передачи у кур при воздействии ФОС определяется по способности мышцы (m. adductor) воспроизводить ПД как на ритмическую (50— 300 Гц), так и одиночную стимуляцию. Условия регистрации ПД мышцы в этом случае такие же, как и при регистрации СРВ. Критерием развития блока мионевральной передачи при воздействии ФОС служит изменение амплитуды ПД мышцы по сравнению с контролем. Как видно из рис. 2, у контрольных кур мышца способна воспроизводить ПД при частоте раздражения до 250 Гц, с амплитудой 5—6 мВ. При воздействии триорто-крезилфосфата и афоса [2—4] нарушение нервно-мышечной передачи у кур наблюдается уже на 8—10-е сутки после введения препарата; на фоне развития параличей (14—21-е сутки) проведение высокочастотных импульсов (50—100
Гц) блокируется. В этом случае ПД воспроизводятся лишь на 2—3 первых стимула, после чего развивается пессимум.
Таким образом, предложенный методический подход дает возможность изучать функциональное состояние периферической нервной системы у кур в опытах in vivo на одних и тех же птицах в течение длительного времени без оперативного вмешательства. Это существенно повышает достоверность получаемых экспериментальных данных, сокращает время снятия показателей и необходимое число подопытных животных.
Данная методика позволяет оценивать степень выраженности патологического процесса в периферической нервной системе кур, выявлять локализацию поражения, ранние процессы аксональ-ной дегенерации или демиелинизирующие расстройства нервных волокон, нарушение мионевральной передачи при воздействии фосфорорга-нических соединений, обладающих отдаленным нейротоксическим действием.
Литература
1. Зильбер Ю. Д. // Актуальные вопросы промышленной токсикологии,— Л., 1970.— С. 129—145.
2. Каган Ю. С.. Кокшарева Н. В., Овсянникова Л. М. и др. // Депонир. в ВИНИТИ, № 6844—84 Деп.
3. Ковтун С. Д., Кокшарева Н. В. // Гиг. и сан.— 1980 — № 6. —С. 51—52.
4. Ткаченко И. И., Каган /О. С., Кокшарева И. В., Бадаева JI. Н.Ц Фармакол. и токсикол.— 1985,— №6.— С. 80—83.
5. Hayes W. J. Pesticides Studied in Man. — Baltimore, 1982.
6. Johnson M. /(. Il Mechanisms of Toxicity and Hazard Evaluation.— Amsterdam, 1980.— P. 27—38.
Поступила 09.07.85
УДК 614.445: [574.64:546.17
Е. Ю. Андрейко, Т. В. Струбицкая, Д. Л. Брасюк, И. В. Струбицкий
К ВОПРОСУ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АММОНИЙНЫХ И НИТРИТНЫХ ИОНОВ В ВОДЕ ВОДОЕМОВ
Львовский НИИ эпидемиологии и микробиологии
В настоящее время для количественного определения аммонийного и нитритного азота в водах различного типа, в том числе открытых водоемов, наиболее широко применяются фотометрические методы [1—5]. Стандартная методика количественного определения аммонийного азота в воде заключается в фотометрировании окрашенного комплекса, который образуется при взаимодействии сегнетовой соли и реактива Несслера с катионом аммиака. При этом исходный объем пробы 100 мл, а реактивов сегнетовой соли и Несслера по 2 мл. Общепринятый метод определения нитритного азота в воде основан на фотометрировании аддуктного комплекса нитрит-ион — реактив Грисса. Исходный объем пробы также 100 мл, а реактива Грисса 5 мл. Многолетний опыт нормирования вредных ве-
ществ в водной среде позволил нам апробировать указанные методы на более чем 150 веществах различной химической структуры. При работе с модельными водоемами малого объема (10—20 л) многократное изъятие 100 мл воды отрицательно влияет на экологический баланс системы, а длительная инкубация (30 мин) большого -объема пробы отдаляет время получения информации. Кроме того, зачастую лаборатории испытывают определенные трудности в приобретении реактивов Грисса и Несслера.
Настоящая работа является этапной в серии экспериментов по усовершенствованию методик изучения влияния ксенобиотиков на санитарный режим водоемов при гигиеническом регламентировании веществ в воде. Основная цель наших исследований — оптимизация объема отбирае-
