CC BY
54
Методические положения
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРИЖИЗНЕННОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ТРИХОЦЕФАЛ ПО УЛЬТРАСТРУКТУРЕ ЯИЦ ОТ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ (=ДОМАШНИХ) И ДИКИХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ С ПОМОЩЬЮ СКАНИРУЮЩЕГО ЭЛЕКТРОННОГО МИКРОСКОПА
В.Е. ПАСЕЧНИК кандидат ветеринарных наук
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, 117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, д. 28, е-mail: vigis@ncport. ru (Одобрены секцией «Инвазионные болезни животных РАСХН» 25 сентября 2009 г., протокол № 3)
Прижизненно трихоцефалез сельскохозяйственных и диких жвачных может быть установлен копроовоскопией, так как яйца трихоцефал имеют достаточно характерную для рода: форму бочонка с двумя пробочками на полюсах.
Размер яиц Тrichocephalus (Jrichuris) ovis 0,073-0,078 х 0,035-0,037 мм, а Т. skrjabini - 0,065-0,080 х 0,035-0,040 мм, т. е. разницы в их размере нет. Метод прижизненной диагностики трихоцефал до вида по ультраструктуре яиц отсутствовал.
У жвачных животных зарегистрировано 30 видов трихоцефал, однако летальный исход вызывают Т. ovis, Т. skrjabini, Т. discolor. Окончательный видовой диагноз ставят по результатам вскрытий животных, а родовой - одним из методов копроовоскопии: флотации, седиментации, комбинированным.
Цель работы - разработка метода прижизненной дифференциальной диагностики по ультраструктуре поверхностной оболочки и пробочек яиц трихоцефал от домашних и диких жвачных с целью установления вида возбудителя.
Материалы и методы. Использовали спонтанно инвазированных три-хоцефалами 50 голов крупного рогатого скота и 25 овец и методы прижизненной диагностики: метод флотации по Фюллеборну с раствором хлорида натрия и его модификация: по Котельникову и Хренову (с раствором нитрата аммония), метод седиментации, комбинированный метод по Дарлингу.
Растворы и реактивы: фиксатор Флемминга, спирты возрастающей концентрации: 60, 70, 80, 96, 100 % и ацетон.
Оптика: стереомикроскоп, сканирующий электронный микроскоп.
В хозяйстве, стационарно неблагополучном по трихоцефалезу, зараженных животных нумеровали ушными бирками и брали из прямой кишки пробы фекалий, которые исследовали на наличие яиц трихоцефал методами копроовоскопии.
Взвесь каждой пробы, содержащей яйца паразита (небольшое количество отмытой суспензии яиц), помещали на очищенную поверхность предметного столика под стереомикроскоп, на который предварительно наносили большую каплю 80%-ного спирта. При этом яйца прилипают к поверхности столика и затем проводят проводку ацетоном. Препарат высушивают, напыляют тонким слоем тяжелых металлов (золото, палладий, платина) и исследуют под сканирующим электронным микроскопом. Яйца, попавшие в поле зрения, подвергали исследованию по разработанному нами методу с учетом ультраструктурных видовых признаков яиц трихоцефал и сопоставлением с представленными микрофотографиями гельминта. В 100 % случаев в пробах
фекалий от овец и крупного рогатого скота были выявлены яйца трихоцефал, что позволило поставить предварительный диагноз на трихоцефалез по родовым признакам (бочонковидные яйца). В последующем, используя разработанный нами метод прижизненной дифференциальной диагностики, выявили ультраструктурные видовые признаки яиц трихоцефал трех видов в пробах фекалий от овец и крупного рогатого скота:
1) Яйца Т. ovis бочонкообразные с гладкой поверхностной оболочкой. Ультраструктура поверхности пробочек на полюсах волнистая и пробочки не выступают над поверхностью оболочки яиц (рис. 1а и б);
2) Яйца Т. skrjabini бочонкообразные с двумя пробочками на полюсах. Пробочки выступают над поверхностью оболочки яйца. Поверхностная оболочка яиц ячеистая, сетчатая, завершается на полюсах бугристостью. Выступающие пробочки на полюсах имеют гранулообразное строение (вид ягоды малины) (рис. 2а и б);
3) Яйца Т. саргвоИ лимонообразной формы с выступающими пробочками на полюсах. Поверхность яиц неровная, покрыта вдавлениями и сетчатая, кроме полярных концов. Пробочки на полюсах имеют волнистую поверхность (рис. 3а и б). При убое у овец и крупного рогатого скота обнаружили имагинальных особей Т. ovis, Т. skrjabini и Т. саргвоН.
Таким образом, результаты гельминтологических вскрытий подтвердили данные, полученные при использовании предлагаемого метода прижизненного дифференциального диагноза по ультраструктуре яиц, отличающийся от известных методов исследования фекалий от жвачных: флотации, седиментации, комбинированного тем, что диагноз ставится не только до рода, но и до вида возбудителя болезни: Т. ovis, Т. skrjabini и Т. саргвоН.
Использование предлагаемого метода прижизненной дифференциальной диагностики при трихоцефалезе жвачных животных обеспечивает следующие преимущества:
- сокращает время и снижает трудоемкость исследований за счет исключения проведения измерений большого количества яиц трихоцефал;
- исключает необходимость вскрытия хозяйственно ценных животных;
- снижает финансовые затраты из-за точного установления диагноза возбудителя болезни: Т. ovis; Т. skrjabini и Т. саргвоН;
- возможность выполнения в условиях лаборатории, оснащенной сканирующим электронным микроскопом;
- обеспечивает 100%-ную точность прижизненного диагноза до вида паразита.
а б
Рис. 1. Trichuris ovis: а - поверхность наружной оболочки яиц (х 1500); б - ультраструктура пробочек на одном из полюсов яиц (х 10 000)
а б
Рис. 2. Тг1скыг18 вЩаЫт: а - поверхность наружной оболочки яиц (х 2000); б - поверхность пробочек на одном из полюсов яиц (х 20 000)
а б
Рис. 2. Тг1сНиг18 сартввИ: а - поверхность наружной оболочки яиц (х 1700); б - поверхность пробочек на одном из полюсов яиц (х 8000)
