CC BY
47
Методические положения
МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОЛОЖЕНИЯ ПО ПРИЖИЗНЕННОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ТРИХОЦЕФАЛ ОТ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ И ДИКИХ ПАРНОКОПЫТНЫХ (ЖВАЧНЫХ) ПО МИКРОСТРУКТУРЕ ЯИЦ (ПОД СВЕТОВЫМ МИКРОСКОПОМ)
В.Е.ПАС ЕЧНИК кандидат ветеринарных наук
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, 117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28, e-mail: vigis@ncport. ru (Одобрены секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии 18 мая 2012 г., протокол № 2)
Трихоцефалез - болезнь сельскохозяйственных (козы, овцы, крупный рогатый скот, верблюды, северные олени и др.) и диких жвачных (косуль, лосей, зубров, бизонов, маралов, изюбрей, пятнистых оленей и др.), которую регистрируют во многих странах мира, в том числе в Российской Федерации.
Болезнь протекает чаще в хронической форме у взрослых парнокопытных (жвачных), реже - в острой форме, особенно у молодняка, что может стать причиной гибели последних, если несвоевременно ставится диагноз и не проводятся лечебные и профилактические мероприятия.
У сельскохозяйственных и диких жвачных в настоящее время зарегистрировано 30 видов трихоцефал, из которых признаны валидными 27 видов.
Гибель сельскохозяйственных и диких жвачных, одомашненных и диких лосей в зоопарках Западной Европы, заповедниках и охотничьих хозяйствах Германии и России обычно отмечали при высокой интенсивности инвазии (ИИ) и при паразитировании трихоцефал видов: Trichocephalus tenuis (Chandler, 1930) в Бостонском зоологическом саду у верблюда при ИИ до 50000 экз.; T. ovis Abildgaard,1795 (Малышев К.Г.,1953) в России у одомашненных лосей при ИИ 5500 экз. и овец при ИИ 883 экз. (А.Г. Богданов,1956); T. discolor v.Linstow, 1906 у крупного рогатого скота в США и Канаде при ИИ 4740 экз. (J.L. Frechette et al.,1973).
Трихоцефалез с летальным исходом возможен и при смешанной инвазии: T. ovis + T. species + T. capreoli у крупного рогатого скота в Республике Молдова (В.Е. Пасечник, 2000); T. ovis + T. globulosa v.Linstow,1901 + T. discolor у овец в США (K.G. Powers,1961); T. ovis + T. skrjabini + T. globulosa у овец в Румынии (Gh. Olteanu, V. Lungu,1963) и т. д. Это предполагает необходимость выяснения и уточнения диагноза до вида, так как патогенность, а, следовательно, и терапевтическая доза и кратность задаваемого антигельмин-тика, будут различными при разных видах возбудителей болезни и особенно при микстинвазиях.
Прижизненно трихоцефалез сельскохозяйственных и диких жвачных может быть установлен копроовоскопией, так как яйца трихоцефал имеют достаточно характерную для рода Trichocephalus Schrank, 1788 форму бочонка с двумя пробочками на полюсах.
Величина яиц T. ovis 0,073-0,078 х 0,035-0,037 мм, в среднем 0,0725 х 0,036 мм, а T. skrjabini 0,065-0,080 х 0,035-0,040 мм, в среднем 0,0725 х 0,0375 мм, т.е. разницы в их размерах практически нет. Поэтому все исследователи ставят общий диагноз болезни - трихоцефалез. Для того, чтобы установить точный видовой диагноз необходимо провести вскрытие погибших животных и идентифицировать обнаруженных возбудителей болезни до вида.
Однако это возможно при наличии павших парнокопытных. В современных условиях ведения хозяйств, когда каждое животное на счету если это 120
племенные сельскохозяйственные или редкие и исчезающие виды диких жвачных, особенно при наличии их иногда в единичных экземплярах (бизоны, зубры, алтайские архары, олени Давида и др.), гибель каждого животного может приносить зоопаркам, циркам, заповедникам, охотничьим и фермерским хозяйствам огромные экономические убытки.
Особенно это актуально в современных условиях ведения животноводческих хозяйств, когда рыночные требования все больше диктуют необходимость минимального использования химических препаратов для профилактики и лечения сельскохозяйственных жвачных и получения экологически чистого продукта для питания людей.
Методические положения по прижизненной дифференциальной диагностике трихоцефал (Т. ovis, Т. skrjabini, Т. еаргвоИ) от сельскохозяйственных и диких жвачных до вида по микроструктуре яиц предназначены для использования при постановке диагноза под световым микроскопом методами копро-овоскопии (флотации, седиментации, комбинированным), при которых ставят диагноз болезни до рода (В.Е. Пасечник, патент на изобретение № 2396069).
Известны работы по микро- и ультраструктуре яиц и метод прижизненной дифференциальной диагностики трихоцефал по ультраструктуре яиц (У^. Pasechnik, 1997; В.Е. Пасечник, 1999, 2000, 2010).
Однако, данные по ультраструктуре яиц Т. ovis, Т. skrjabini, Т. еаргвоИ получены при их исследовании под сканирующим электронным микроскопом, что не всегда возможно в условиях охотничьих хозяйств, заповедников, цирков, зоопарков, ветеринарных клиник и сельскохозяйственных ферм.
Оборудование
- Холодильник;
- Центрифуга лабораторная на 12 тыс. об/мин;
- Стаканчики (мензурки) с усеченным конусом на 30 мл;
- Фильтрационные ситечки с металлической или капроновой диаметром ячеек 0,25-0,3 мм;
- Металлические петли диаметром 8-10 мм (при плотности больше 1,5 используют петли диаметром 6 мм;
- Глазные пипетки;
- Предметные стекла;
- Стеклянные палочки;
- Покровные стекла;
- Спиртовки или газовые горелки;
- Денсиметр для проверки плотности флотационного раствора;
- Микроскоп биологический (МБИ).
Растворы и реактивы
- Насыщенный раствор хлорида натрия (поваренной соли) плотностью
1,20;
- Раствор нитрата аммония (гранулированной или химически чистой аммиачной селитры) плотностью 1,3;
- Раствор нитрата натрия (натриевой селитры) плотностью 1,4;
- Раствор нитрата свинца (азотнокислого свинца) плотностью 1,5;
- 98,5%-ный раствор глицерина плотностью 1,256;
- 40%-ный раствор молочной кислоты.
Ход работы
Яйца трихоцефал, выделенные из фекалий спонтанно зараженных сельскохозяйственных или диких (зоопарковых, цирковых, охотничье-промысловых) жвачных, помещают на предметное стекло (любым из известных методов прижизненной диагностики: флотации, седиментации, комбинированным) и ставят предварительный диагноз на трихоцефалез по родо-
121
сеткой с раствора
вым признакам: бочонковидные яйца с пробочками на полюсах.
Затем яйца трихоцефал просветляют в 98,5%-ном растворе глицерина и 40%-ной молочной кислоте в соотношении 1 : 1, накрывают покровным стеклом, просматривают под микроскопом при увеличениях: x 600 и x 900 (под иммерсией), изучают микроструктуру и сравнивают ее с признаками яиц, приведенными в таблице и на микрофотографиях (рис. 1-6).
В соответствии с таблицей, если яйца трихоцефал имеют микроструктуру, которая отражена:
в 1-й колонке основных признаков микроструктуры яиц трихоцефал (рис. 1 и 2), - вид Тпскосерка1ш еаргвоИ Artjuch,1948; во 2-й колонке (рис. 3 и 4) - Т. skrjabini Baskakov,1924; в 3-й колонке (рис. 5 и 6) - Т. ovis Abildgaard, 1795.
Эти морфологические отличия позволяют дифференцировать в 100 % случаев (под световым микроскопом) наиболее распространенные в Российской Федерации и в других странах мира виды трихоцефал: Т. ovis, Т. skrjabini, Т. capreoli.
Микроструктура яиц трихоцефалов от ^ сельскохозяйственных и диких^ жвачных
Микроструктурные признаки яиц трихоцефалов Trichocephalus capreoli Trichocephalus skrjabini Trichocephalus ovis
Пробочки на полюсах яиц На длинных шейках с короткими шапочками на верхушках; сильно выступающие над полюсами яиц (рис. 1-А, 4-А) Короткие шапочки на одном уровне с оболочкой яиц (рис. 2.-А, 5. -А) Широкие шапочки, слегка выступают за пределы оболочек яиц; короткие без выраженной шейки на полюсах яиц (рис. 3-А, Б, 6-А;)
1-я наружная оболочка яиц Не видна, видна шапочка - производная 1-й наружной оболочки (рис. 1, х 600); видна у полюсов: полупрозрачная, переходящая в шапочки на пробочках (рис. 4) Не видна (рис. 2, х 600) или видна как плотная и матовая на полюсах яиц (рис. 5, х 900) Нежная, тонкая, прозрачная; охватывает все яйцо; отчетливо видна лишь вблизи полюсов (рис. 6 - Е, х 900)
2-я кератизирован-ная оболочка яиц Поверхность со слабой ячеистостью (рис. 1-Ж, 4-В) Выраженная бугристость поверхности (рис. 2:1,2,3) Гладкая поверхность (рис. 3- Г; 6 - В)
Воротнички у основания пробочек Толстые и имеют более узкое основание, переходящее во 2-ю кератизированную оболочку (рис. 4-Б) Толстые и как бы обрубленные на концах (рис. 5-В) Утолщенные с пальцеобразным отростком вверху с каждой стороны пробочек (рис. 6-Б)
Зародыш У полюсов вогнут и имеет вид мелкой зернистой массы (содержимое 4-й прозрачной оболочки) (рис. 1.:Г,Д,Е; 4.: Г,Д,Е) У полюсов вогнут и имеет вид зернистой массы желто-коричневого цвета (рис. 2-Д; 5-Г,Д,Е) Заполняет все внутреннее пространство яиц (рис. 3- Д, Е), либо находится в центре яйца и имеет форму эллипса; зародышевая масса крупнозернистая с гранулами зеленого цвета (рис. 6 -Г,Д,Е)
Шейки пробочек Имеют винтообразную форму и состоят из 8 колец (рис. 4.:1,2,3,4,5,6,7,8) Имеют винтообразную форму и состоят из 6 колец (рис. 5:1,2,3,4,5,6) Имеют винтообразную форму и состоят из 5 колец, из которых 3-е по счету от апикального конца шире остальных в два раза (рис. 6:1,2,3,4,5)
Последнее кольцо 8-е кольцо выполняет роль связующего звена между основанием шейки пробо-чек и 3-й внутренней, прозрачной оболочкой зародыша (рис. 4.:8) 6-е кольцо с широким основанием выполняет роль связующего звена между основанием шейки пробочек и 3-й внутренней прозрачной оболочкой яйца (рис. 5 - 6) 5-е кольцо с широким основанием скрепляет основание шейки пробочек с 3-й внутренней, прозрачной оболочкой яйца (рис. 6- 5)
Рис. 1. Яйцо Trichocephalus _capreoli (х 600)
Рис. 2. Яйцо Trichocephalus skrjabini (х 600)_
Рис. 3. Яйцо Trichocephalus ovis (х 600)
Рис. 4. Один из полюсов яйца с пробочкой T. capreoli (х 900)
Рис. 5. Один из полюсов яйца с про-бочкой T. skrjabini (х 900)
Рис. 6. Один из полюсов яйца с пробочкой T. ovis (х 900)
