CC BY
9
мана, бактерий группы кишечных палочек, учитываемых на среде Эндо, и энтерококков, учитываемых на среде Сланеца — Бертли и других плотных средах. В то же время установлена неприменимость капельного метода посевов при учете в почве термофилов и почвенных грибов, поскольку в данном случае не получается строго изолированных колоний.
Апробация капельного метода посевов при санитарно-микробиологи-ческих анализах почвы в полевых экспедиционных условиях показала целесообразность его применения и значительные преимущества перед общепринятым методом посева на плотные питательные среды. Особенно удобным он оказывается в экспедиционных условиях при первых посевах проб почвы, когда выбираются необходимые разведения и приходится работать с целым рядом разведений почвенных суспензий.
ЛИТЕРАТУРА Н1Пе №. Г. — г. ges. Нуй., 1969, Вс1 15, Б. 247—251.
Поступила 27/Х1 1978 г.
УДК 613.281:639.21-07:576.895.122.21.07
Кандидаты мед. наук Г. А. Глазков и А. А. Климишн, В. В. Кривенко
МЕТОД САНИТАРНО-ГЕЛЬМИНТОЛОГИ ЧЕСКОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ РЫБЫ НА НАЛИЧИЕ ЛИЧИНОК ОПИСТОРХОВ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИХ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ
Научно-исследовательский институт краевой инфекционной патологии Министерства
здравоохранения РСФСР, Тюмень
В настоящее время для проведения санитарно-гельминтологической экспертизы рыбы, пораженной метацеркариями описторхов, пользуются методами, регламентированными инструкцией «О санитарно-гельминтологической оценке зараженной личинками сибирской двуустки (возбудителя описторхоза) рыбы и ее технологической обработке на предприятиях рыбной промышленности и общественного питания», утвержденной Государственной санитарной инспекцией 5/VIII 1961 г. Рекомендуемые методы выявления метацеркариев и определения их жизнеспособности трудоемки и недостаточно эффективны, так как на основании визуального осмотра личинок описторхов и их окраски не всегда можно дать правильное заключение о жизнеспособности личинок. Биологический метод хотя и объективен, но трудоновыполним, особенно в условиях санэпидстанций.
Целью наших исследований являлось сравнение чувствительности методов выделения метацеркариев описторхов путем пептического переваривания мышечной ткани рыбы в искусственном желудочном соке и определения жизнеспособности личинок при воздействии на них различных химических веществ по сравнению с общепринятыми методами.
Для выделения метацеркариев описторхов и определения интенсивности инвазии мышечную ткань рыбы с подкожной жировой клетчаткой отделяли от костей и тщательно измельчали ножом или перемалывали в мясорубке. Навески по 10 г помещали в чашки с плоским дном и заливали в соотношении 1 : 10 искусственным желудочным соком (11 мл концентрированной соляной кислоты, 7 г пепсина, 9 г поваренной соли на 1 л воды). Банки с навесками помещали на 3 ч в термостат при температуре 36—37°С, после чего их содержимое фильтровали в стеклянные цилиндры через металлический фильтр с размером ячеек 1X1 мм. Через 15—20 мин верхний слой желудочного сока с переваренной мышечной тканью сливали, а осевших личинок переносили в чашку Петри или на часовое стекло, где подсчитывали под бинокулярным микроскопом МБС-1 при увеличении в 16 раз. Для лучшего подсчета личинок в чашку Петри наливали физиологический
раствор, делали несколько круговых движений, в результате которых ме-тацеркарии концентрировались в центре чашки, а излишки физиологического раствора с остатками мышечной ткани удаляли пипеткой. При применении данного метода из мышечной ткани выделялось в среднем 97,7± ±0,9% метацеркариев.
Дифференцирование метацеркариев описторхов с другими видами трематод, находящихся в рыбе, проводили по их короткоэлиптической форме, характерным размерам (длина 0,24—0,34 мм, ширина 0,18—0,24 мм), занимающему почти целиком заднюю часть личинки обширному экскреторному пузырю, а также по толстой соединительнотканной оболочке, внутри которой видна покрытая гиалиновой мембраной и усеянная шипиками личинка с хорошо развитыми и равными по величине ротовой и брюшной присосками. Метацеркарии описторхов, выделенные данным методом из свежей ткани рыбы, были жизнеспособны: при микроскопировании отчетливо-просматривались движение личинки и преломляющий свет экскреторный пузырь. При окраске личинок 0,3% розоловой кислотой, приготовленной на 70° спирте, цвет их не менялся. При заражении ими золотистых хомячков во всех случаях получен экспериментальный описторхоз.
Для сравнения компрессорного метода выделения метацеркариеа описторхов и выделения их в искусственном желудочном соке проведено параллельное исследование 70 различных (от 1 до 50 г) проб мышц рыбы, спонтанно инвазированной описторхом. Метацеркарии в каждой пробе сначала отыскивали и подсчитывали между двумя компрессорными стеклами, после чего каждую пробу подвергали пептическому перевариванию в искусственном желудочном соке с последующим подсчетом выделившихся личинок. При этом установлено, что количество метацеркариев, выделенных методом переваривания, в I1/2—2 раза превышало количество их, обнаруженных компрессорным методом. Следовательно, метод выявления метацеркариев путем пептического переваривания мышечной ткани рыбы чувствительнее компрессорного, что очень важно при определении интенсивности поражения рыбы.
При исследовании крупных экземпляров рыб (массой 1 кг и более)-применен упрощенный метод, который заключается в исследовании части мышечной ткани с последующим пересчетом выделенных из навески метацеркариев на всю мышечную ткань рыбы. Для того чтобы полученные результаты достоверно отражали интенсивность инвазии, мышечную ткань-перемалывали в мясорубке и полученный фарш тщательно перемешивали.. После этого 3—4 навески (общей массой не менее 1/10 всей мышечной ткани) подвергали пептическому перевариванию.
При большой интенсивности инвазии выделяются сотни, а иногда тысячи метацеркариев, в связи с чем подсчет их затруднен. Для облегчения подсчета больших количеств личинок использовали кювету из органического стекла размером 60X60X15 мм, дно которой разделено на 900 квадратов со стороной 2 мм. Выделенные и предварительно отмытые метацеркарии с небольшим количеством физиологического раствора переносили в кювету и по возможности равномерно распределяли по всему дну. После этого подсчитывали их под микроскопом МБС-1 при увеличении в 16 раз. Для более быстрого подсчета метацеркариев учитывали не во всех, а лишь в расположенных по диагоналям кюветы квадратах. Затем выполняли пересчет на общее количество клеток кюветы. Ошибка такого метода подсчета не превышала ±4—6%.
Для определения жизнеспособности личинок описторхов, выделенных из свежей мышечной ткани рыбы, на них воздействовали 0,5% раствором, пепсина и трипсина, свежеполученной и предварительно высушенной и разведенной в соотношении 1 : 1 физиологическим раствором желчыо человека. С каждым химическим реагентом проведено по 10 серий опытов. Предварительно выделенные метацеркарии (по 100 в каждом опыте) вне-большом количестве физиологического раствора помещали на часовое
стекло с последующим наслоением испытуемых растворов. Для более быстрого эксцистирования личинок их подогревали над пламенем спиртовки. Объективным критерием жизнеспособности метацеркариев являлись выход личинок и активное движение их во внешней среде.
При воздействии на метацеркарии раствором трипсина средний выход личинок составил 96,9±2,3%, свежеполученной желчью — 87,0±7,5%, раствором высушенной желчи — 83,7±7,4%, а под действием пепсина выхода личинок не наблюдалось.
Таким образом, при использовании различных химических веществ <за исключением пепсина) как реагентов для определения жизнеспособности метацеркариев во всех случаях наблюдалось эксцистирование личинок. Однако лучшие результаты получены при воздействии на них трипсина.
Для сравнения чувствительности метода определения жизнеспособности метацеркариев при воздействии на них трипсина с методом окрашивания их розоловой кислотой поставлено 10 опытов. При этом в каждый опыт отбирали по 50 метацеркариев, предварительно проверенных на жизнеспособность в пробе с раствором 0,3% розоловой кислоты и окрашенных в розовый или в слабо-розовый цвет (т. е. по этому тесту нежизнеспособных). При воздействии на них трипсина в среднем эксцистировалось 56,4±3,8% личинок, причем значительная двигательная активность наблюдалась у 58,2±4,1%.
Следовательно, метод определения жизнеспособности метацеркариев описторха с помощью трипсина чувствительнее метода окрашивания их розоловой кислотой.
Поступила 14/111 1978 г.
УДК 613.2-078
3. И. Пантюхова
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ДВУХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ РОДА PROTEUS В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
Междуреченская городская санэпидстанция
Для повышения надежности контроля пищевых продуктов широко используется комплексная бактериологическая оценка их по ряду сани-тарно-показательных микробов, в том числе и бактериям рода Proteus. При плановом исследовании определяют бактерии рода Proteus в следующих пищевых продуктах: кулинарных изделиях из рубленого мяса (РТУ 4289-48 и 4535-48, ГОСТ 4288-65) и жареной домашней птице (РТУ 4674-49), где присутствие их не допускается; в колбасных изделиях и продуктах из мяса (ГОСТ 9958-74). Колбасные изделия и мясокопчености при обнаружении в них бактерий рода Proteus (что свидетельствует о плохой термической обработке) при одновременных органолептических изменениях направляют в техническую утилизацию; в изделиях из рыбной кулинарии, в которых также недопустимо наличие бактерий рода Proteus, что является признаком плохой термической обработки; в пастеризованном молоке, сливках, молочнокислых продуктах, которые не должны содержать бактерий данного рода.
В своей работе мы использовали распространенный метод Шукевича <по Г. П. Калине и JI. Т. Комаровой). Процент положительных находок за 3 последних года (1974—1976) составил 0, 0,2 и 0,4.
Метод Шукевича имеет ряд недостатков: малый объем доступного для исследования материала, наличие в исследуемом объекте О-форм протеев (от 20 до 48%), утрачивающих способность к роению, возможность антагонистического воздействия на бактерии микроорганизмов, вносимых в кон-
