CC BY
239
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© Чекулаева Г.Ю., Громова З.Ф.,2014 УДК 615.1:547.562.1
МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕКОТОРЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ПАРА-АМИНОФЕНОЛА В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ И ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИЯХ
Г.Ю. Чекулаева, З.Ф. Громова Рязанский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, г. Рязань
В статье представлены материалы по разработке методики анализа парацетамола спектрометрическим методом в фармацевтической субстанции, лекарственных формах и биологических жидкостях.
Ключевые слова: парацетамол, методы анализа, спектрофотометрия в видимой области, экспресс-анализ, химико-токсикологический анализ биологической жидкости.
Фармацевтический рынок средств, применяемых для снятия симптомов простуды и гриппа представлен многочисленными препаратами, одним из компонентов которых является парацетамол. Парацетамол входит в состав лекарственных препаратов, выпускаемых в разнообразных формах: порошки («Колдрекс», «Фервекс» для детей и взрослых, «Терафлю» от гриппа и простуды), таблетки («Панадол», «Пенталгин Плюс», «Ринза» и др.), свечи («Цефекон» для детей, «Эффералган» и др.), капсулы («Солпадеин»), суспензии («Детский Панадол»), кроме того в аптеках в свободной продаже имеется парацетамол в виде таблеток [4]. Высокий спрос на данную группу средств объясняется их эффективностью при снятии жара и боли, а также тем, что указанные препараты, имея широкий спектр показаний, являются средствами безрецептурного отпуска [3]. По статистическим данным объем продаж только "Колдрекса" в 2012 году составил 1,47 млрд. рублей, «Фервекса» - 1,18 млрд. рублей, «Терафлю» - 3,8 млрд. рублей [6].
Парацетамол оказывает жаропонижающее и болеутоляющее действие. Препарат применяют самостоятельно или в сочетании с другими средствами при невралгиях, головной боли, простудных заболеваниях.
Однако при передозировке возможно поражение печени, а иногда и почек. К приему этого препарата следует с осторожностью относиться пациентам с выраженным астматическим компонентом.
Для установления факта отравления и правильного выбора метода детоксика-ции необходима разработка экспресс-методики количественного определения парацетамола в биологических жидкостях, в частности в моче.
Для количественного определения парацетамола фармакопейная статья ГФ XII издания рекомендуют метод нитри-тометрии с внешним индикатором (йод-крахмальная бумага) после кислотного гидролиза субстанции в течение одного часа, что связано с большими временными затратами [2].
Таким образом, актуальной является разработка экспрессной методики количественного определения данного лекарственного вещества, обладающей высокой чувствительностью. Она позволит провести количественное определение парацетамола не только в лекарственных формах, но и в биологических жидкостях организма человека (кровь, моча), что необходимо при химико-токсикологических исследованиях.
Целью работы является разработка унифицированной валидизированной методики количественного определения парацетамола в фармацевтической субстанции, лекарственных формах и биологических объектах.
Наличие фенольного гидроксила в структуре парацетамола указывает на возможность последнего вступать в реакции азосочетания с солями диазония с образованием азокрасителя, что и было использовано нами в настоящем исследовании.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
1. Установить количественное соотношение реагирующих веществ (парацетамола и диазореактива);
2. Осуществить выбор рабочей длинны волны;
3. Установить время устойчивости окраски азокрасителя;
4. Определить чувствительность реакции с целью возможности использования ее при химико-токсикологических исследованиях;
5. Определить диапазон подчинения продукта реакции основному закону све-топоглощения;
6. Провести количественное определение парацетамола в фармацевтической субстанции, лекарственных формах и биологических жидкостях.
В основе спектрофотометрического метода количественного определения в видимой области использована реакция спиртового раствора парацетамола с ди-азотированной сульфаниловой кислотой в кислой среде.
Материалы и методы
Все исследования проводили на фотометре КФК-3 в кюветах с толщиной оптического слоя 10мм при комнатной температуре.
В анализе использовали рабочий стандартный образец (РСО) парацетамола (ФС 42-0268-07).
Приготовление рабочего стандартного раствора: 0,0200 г (точная навеска) субстанции парацетамола помещали в мерную колбу на 10 мл, растворяли в 5 мл 95%-
ного спирта этилового, доводили спиртом до метки, хорошо перемешивали.
Статистическую обработку экспериментальных данных исследований (р = 95%) проводили с помощью программ StatSoft Statistica 6,0 Microsoft Excel с вычислением граничных значений доверительного интервала среднего результата и определением ошибки единичного определения [1].
Результаты и их обсуждение
Установлено, что взаимодействие парацетамола с диазотированной сульфа-ниловой кислотой происходит в стехио-метрических соотношениях 1:1.
Для выбора рабочей длины волны готовили спиртовой раствор парацетамола с концентрацией 0,0002г/мл. По истечении 5 минут измеряли оптическую плотность окрашенного продукта реакции при разных длинах волн, относящихся к видимой области спектра (380нм -780нм).
Спектр поглощения спиртового раствора парацетамола в видимой области имеет максимум при длине волны 565 нм. При той же длине волны проводили измерения оптической плотности испытуемых растворов и растворов сравнения.
Результаты определения устойчивости окраски во времени представлены в таблице 1. Из данных таблицы видно, что в течение 30 минут окраска оставалась устойчивой.
Для выявления линейной зависимости между концентрацией фармацевтической субстанции парацетамола и оптической плотностью продукта его реакции с диазо-реактивом готовили ряд разведений в широком диапазоне концентраций - от 0,0001 г/мл до 0,004 г/мл. Проведенные исследования позволяют сделать заключение, что в выбранном интервале концентраций парацетамола наблюдается подчинение закону Бугера-Ламберта-Бера.
На основании полученных данных была разработана следующая методика анализа парацетамола.
Методика анализа: 0,2000 г (точная навеска) парацетамола растворяют в 25 мл спирта этилового в мерной колбе вместимостью 100 мл, перемешивают и доводят спиртом объем раствора до метки (раствор А).
Таблица 1
Зависимость оптической плотности азокрасителя от времени
Объем раствора парацетамола и его концентрация, г/мл Объем добавляемых реактивов, мл Длина волны, нм Оптическая плотность
5 мин 10 мин 15 мин 20 мин 25 мин 30 мин
0,1 мл; 0,0002 г/мл 2 мл кислоты сульфаниловой, 0.5 мл раствора N¿N02, 4 мл раствора №2С03, 1 мл раствора NaOH, спирта до 10 мл 565 0,314 0,316 0,314 0,314 0,314 0,314
В мерную колбу на 10 мл вносят 2 мл 0,4%-ного раствора кислоты сульфа-ниловой, 0,5 мл свежеприготовленного раствора натрия нитрита, 0,1 мл спиртового раствора парацетамола (раствора А), 4 мл 20%-ного раствора натрия карбоната, 1 мл 20%-ного раствора натрия гид-роксида и воды очищенной до 10 мл. После перемешивания в течение 10-15 секунд измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и стандартного раствора парацетамола на спектрофотометре в максимуме поглощения при 565 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения - вода очищенная.
Относительная погрешность определения находилась в пределах точности спектрофотометрического анализа.
Минимальная концентрация парацетамола, определяемая по этой методике, составляет 0,0001 г/мл, что свидетельствует о возможности ее применения не только для анализа фармацевтических препаратов, но и для определения парацетамола в биологических объектах.
Следующим этапом исследования явилось определение содержания парацетамола в фармацевтической субстанции и лекарственной форме. Определение проводили в сравнительном аспекте с раствором стандартного образца, поскольку данный метод определения является более точным, надежным и отвечает требованиям Государственной Фармакопеи XII издания. Полученные результаты представлены в таблице 2.
Таблица 2
Результаты определения парацетамола в фармацевтической субстанции
и лекарственной форме
N° опыта Объект исследования Найдено Нормы допустимых отклонений Метрологическая характеристика
1. 99,98 Не менее 99,9%, не ХСр= 100,02
2. 3. 4. Фармацевтическая субстанция парацетамола 100,20 99,96 99,98 более 101,0% 8= 0,1009 8хср= 0,4512 е= 0, 0125
5. 99,98 е а = 100,02 ± 1,25
1. 0,494 [0,470-ь 0,530] ХСр= 0,495
2. 3. 4. Таблетки парацетамола по 0,5 г 0,494 0,497 0,494 8= 0,5530 8хср= 0,2473 е= 1,3868
5. 0,494 е а = 0,495 ± 0,19
Как следует из приведенных в таблице данных, полученные результаты укладываются в нормы допустимых отклонений.
Валидация методики показала, что данная методика не отягощена грубой и системной ошибкой, является правильной и позволяет получить воспроизводимые результаты.
Разработанная методика была применена в химико-токсикологическом исследовании парацетамола в моче в качестве биологической жидкости [5].
Были изучены условия экстракции парацетамола из водных растворов с целью их использования при разработке оптимальной методики изолирования определяемого вещества из мочи. Установлено, что максимальное количество парацетамола экстрагируется эфиром при рН=7,5 в присутствии натрия хлорида в качестве электролита. Оптимальной оказалась двукратная экстракция по 5 минут.
Для приготовления модельной смеси использовали образец мочи, полученный от здорового добровольца. При этом в течении месяца до отбора проб человек не принимал лекарств. Модельные смеси мочи готовили путем добавления к ней определенного объема стандартного спиртового раствора парацетамола с концентрацией 0,0002 г/мл. Приготовленные смеси выдерживали в течении 24 часов при комнатной температуре. Экстракцию парацетамола проводили с соблюдением условий, разработанных для водных растворов определяемого вещества. Сухой остаток, полученный после испарения эфира, исследовали спектрофотометриче-ским методом в видимой области по методике, разработанной для фармацевтической субстанции исследуемого лекарственного средства.
Результаты исследования представлены в таблице 3.
Таблица 3
Результаты количественного определения парацетамола в моче
Внесено парацетамола мкг/10 мл мочи Найдено Метрологическая характеристика
мкг %
40 29,36 73,40 XCB= 76,63%
40 32,40 81,02 S = 3,27
40 29,80 74,50 Sxср = 1,46
40 30,04 75,11 г = 5,29
40 31,65 79,12 г а= 76,63±5,29
Выводы
Разработана методика количественного определения парацетамола в фармацевтической субстанции и лекарственной форме спектрофотометрическим методом в видимой области спектра. Показана возможность использования данной методики в дальнейших химико-токсикологических исследованиях.
Литература
1. Государственная фармакопея. - 11 изд. - М.: Медицина, 1987. - Вып. 1. -334 с.
2. Государственная фармакопея Российской Федерации. - 12-е изд. - М.: Научный центр экспертизы средств
медицинского применения, 2008. -704 с.
3. Люлина С.А. Основные принципы формирования аптечного ассортимента / С.А. Люлина // Российские аптеки. - 2008. - №20. - С. 11-12.
4. Машковский М.Д. Лекарственные средств / М.Д. Машковский. - 15-е изд., перераб., исправл. и доп. - М.: РИА «Новая волна», 2007. - 1206 с.
5. Основы аналитической токсикологии / Р. Дж. Фланаган [и др.]. - М.: Медицина, 1997. - С. 363.
6. URL: http://slon/biz 1037105 ammo 1. livejournal.com.
THE METHOD OF QUANTITATIVE EVALUATION OF SOME PARA-AMINOPHENOL DERIVATIVES IB PHARMACEUTICAL AND CHEMICO-TOXICOLOGICAL INVESTIGATIONS
G.Yu. Chekulaeva, Z.F. Gromova
The materials on the development of analytical methods for paracetamol using a spectromet-ric technique in the pharmaceutical substance, medicinal forms and biological liquids are presented in the paper.
Keywords: paracetamol, analytical methods, spectrophotometry in the visible region, express analysis, chemico-toxicological analysis of biological liquid.
Чекулаева Г.Ю. - к.б.н., доц., зав. кафедрой фармацевтической и токсикологической химии ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России.
Тел.: 8(4912)25-69-95.
E-mail: rzgmu@rzgmu.ru.
Громова З.Ф. - канд. фарм. наук, доц. кафедры фармацевтической и токсикологической химии ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России.
Тел.: 8(4912)25-69-95.
E-mail: rzgmu@rzgmu.ru.
