CC BY
31_ ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ф
МЕТОД КЛЕТОЧНЫХ БЛОКОВ В ЦИТОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ КАРЦИНОМ ПЕЧЕНИ
С.В. СМЕТАНИНА1, О.В. СМЕТАНИНА2
1ГБУЗ НО «Нижегородский областной клинический онкологический диспансер», Нижний Новгород, Россия 2 Приволжский исследовательский медицинский университет, Нижний Новгород, Россия
Цель исследования - проанализировать возможности использования метода клеточных блоков в морфологической диагностике первичных и метастатических карцином печени; определить характерные цитоморфологические особенности различных гистотипов рака по материалу клеточных блоков.
Материал и методы. Проанализированы данные 398 цитологических исследований на материале ТИАБ (тонкоигольных аспирационных биопсий) и 106 клеточных блоков у 106 пациентов с объемными образованиями печени, проходивших обследование в поликлинике онкологического диспансера г. Нижнего Новгорода в 2016-17 гг.
Результаты. Полноценный материал для цитологического исследования при ТИАБ был получен в 95,2% (п = 101) наблюдений. В 64,8% (п = 57) наблюдений утвердительных цитологических диагнозов о наличии рака отмечена целесообразность использования остаточного материала для формирования клеточного блока.
При определении характерных цитоморфологических особенностей различных гистотипов рака по материалу клеточных блоков в 10,2% наблюдений была отмечена хорошая сохранность клеток и наличие четких цитоархитектурных признаков опухоли.
Ключевые слова: цитологическая диагностика, рак печени, клеточный блок.
Информация об авторах:
Сметанина С.В. - https://orcid.org/0000-0002-7000-5910, Сметанина О.В. - https://orcid.org/0000-0003-3141-0267
Автор, ответственный за переписку:
Сметанина С.В. - e-mail:smetanina7060@gmail.com
Как цитировать:
Сметанина С.В., Сметанина О.В. Метод клеточных блоков в цитологической диагностике карцином печени. Новости клинической цитологии России. 2019; 23(1): 5-8.
В онкологической практике проблема своевременной диагностики карцином печени имеет большую актуальность, о чем свидетельствуют высокие показатели несвоевременной диагностики первичных и метастатических процессов органа [1, 2, 3]. Это чаще всего обусловлено поздними клиническими проявлениями заболевания или отсутствием последних [3, 4].
Впервые биопсия печени была произведена немецким ученым P. Ehlrich в 1883 г. [5]. Тонкоигольная ас-пирационная биопсия (ТИАБ) для цитологического исследования впервые была использована Lucatelio в
1895 г. [6]. Первый опыт применения ТИАБ для оценки неопластических процессов печени опубликовал Lundquist А. в 1970 г. [7]. И на сегодняшний день цитологическое исследование занимает особое место в диагностике данной патологии. В силу малой инва-зивности его применение актуально, особенно, у пациентов при прогрессировании [8, 9, 10].
По данным литературы, ТИАБ под ультразвуковым контролем позволяет получать адекватный материал для цитологического исследования в 90% случаев и напрямую зависит от профессионализма врача, проводившего забор материала [11, 12, 13].
На сегодняшний день «золотым стандартом» морфологической диагностики карцином печени остается сог-биопсия [14, 15]. Однако, эта методика имеет ряд недостатков. Во-первых, существует вероятность получения неинформативного материала в случаях неблагоприятного топографо-анатомического расположения [16]. Во-вторых, отсутствует возможность одновременного многократного забора материала при получении небольшого его количества [17]. В-третьих, имеется большой риск осложнений при увеличении диаметра иглы [18].
В сравнении с сог-биопсией - ТИАБ имеет существенные преимущества. Оно заключается в возможности произвести экспресс - диагностику и, при необходимости, осуществить повторный забора материала с невысоким риском для пациента [19]. Несмотря на то, что полученный объем ткани примерно в десять раз меньше, чем при сог-биопсии, качество образца в ряде случаев выше [13, 20], т.к. при движении иглы сверху вниз во время аспирации вероятность попадания в иглу диагностического материала выше. Столбик ткани помимо эпителиального компонента содержит элементы стромы, сосудов, фиброзной ткани и т.д., тогда как при аспирации в тонкую иглу попадает только эпителиальный компонент опухоли. Таким образом, значимость цитологического метода как малоинвазивного высока, особенно в тех случаях, когда ТИАБ является единственным источником получения материала и/ или разрешающая способность гистологического исследования оказывается недостаточной.
В литературе, последних лет, особенно зарубежной, имеются многочисленные публикации, посвященные использованию цитологического материала для приготовления клеточного блока [21, 22]. Сейчас применение клеточных блоков - это обычная процедура в цитопатологии, имеющая большое значение как дополнение к традиционному цитологическому исследованию при изучении выпотных жидкостей.
В отечественной литературе в 2013 году впервые была представлена работа проф. Н.Н. Волченко и соав. о применении клеточных блоков из осадков серозных экссудатов и соскобов с опухоли молочной железы. [24]. В интернет - поисковых системах авторы не нашли данных о применение клеточного блока в диагностике карцином печени.
Учитывая вышеизложенное, авторами был проведен анализ возможностей применения клеточных блоков приготовленных из материала ТИАБ объемных образований печени.
Материалы и методы
В 2016-17гг. в ГБУЗ НО «Нижегородский областной клинический онкологический диспансер» проведено 398 цитологических исследований на материале ТИАБ и 106 клеточных блоках от 106 пациентов с объемными образованиями печени. Гендерное распределение было следующим: мужчин 55 (51,8%) пациентов, женщин - 51 (48,2%). Возраст пациентов варьировал от 31 до 84 лет. Большинство больных наблюдалось в возрастном интервале от 60 до 69 лет (39%).
ТИАБ для морфологической верификации объемных образований печени диаметром более 1 см выполнялись пациентам под ультразвуковым наведением с использованием аппаратов Ме^оп Лссцу1х У20 и Ме^оп Лссцу1х У10 по методике «свободной руки». ТИАБ выполнялись иглами 21С в комплекте со шприцем объемом 20 мл. Забор материала производился от центра к периферии. В солидных узлах с кистозным компонентом материал получали из солидного участка узла после эвакуации кистозного содержимого. В кистозных узлах производили только аспирацию содержимого кисты. Каждый узел пунктировали 1 раз. Количество пункций варьировало в зависимости от количества узлов. Среди всех пациентов осложнений при ТИАБ не наблюдалось. Кратковременные болевые ощущения отмечены менее чем у 2% пациентов.
Полученный при ТИАБ пункционный материал распределяли на 2 обезжиренных предметных стекла, готовили тонкие традиционные мазки, фиксируя их высушиванием. Остаток материала путем многократной аспирации шприца помещали в центрифужную или Эп-пендорф пробирку с транспортной средой в объемом 2-4 мл для последующего приготовления клеточного блока. Адекватными считались мазки, в которых определялось не менее 8 скоплений, содержащих 8-10 эпителиальных клеток. Все цитологические препараты окрашивали красителем МСС (Бю-ОрИса, Италия).
В случае обнаружения единичных комплексов карциномы в традиционных препаратах, с целью определения истинной концентрации клеток, готовили еще по 2 дополнительных монослойных мазка из клеточной взвеси на цитоцентрифуге Се1крт-11 (режимом 2000 об/мин). Из остаточного объема материала после повторного центрифугирования изготавливали клеточные блоки.
При высокой клеточности полученного материала в традиционных препаратах весь оставшийся материал, помещенный в пробирку, отправляли на изготовление клеточного блока.
Клеточные блоки готовили на желатиновой основе.
Результаты и их обсуждения
В 4,8% (п = 5) наблюдений при оценке препаратов ТИАБ материал был признан неинформативным, ввиду отсутствия эпителиального компонента в традиционных, дополнительных монослойных препаратах и в материале клеточных блоков.
В 95,2% (п = 101) наблюдений материал ТИАБ оценен как полноценный, из которых в 12,9% (п = 13) данных за злокачественный процесс не было получено ни в традиционных, ни в дополнительных монослойных, ни в препаратах, изготовленных из клеточных блоков (что не противоречило клиническим данным).
В 87,1% (п = 88) поставлен утвердительный цитологический диагноз о наличии рака. При этом, в 13,6% (п = 12) информативного материала, учитывая его низкую клеточность, для уверенности в диагнозе из клеточной суспензии, доставленной в пробирке, по. методике жидкостной цитологии готовили дополнительный препарат. Из остатка материала изготавливались клеточные блоки.
При этом в 2 из 12 наблюдений удалось получить более высокую клеточность, чем в препаратах традиционной и жидкостной цитологии, что дало возможность проведения в дальнейшем дополнительных им-муноцитохимических исследований (например, для поиска первичного очага при метастатическом поражении печени) и длительного хранения биологического материала. (вклейка 1, рис. 1, 2)
В остальных наблюдениях (10 из 12) была зафиксирована низкая клеточная плотность в материале клеточного блока, в результате чего целесообразность его дальнейшего исследования отсутствовала.
В 86,4% (п = 76) информативного материала в препаратах отмечалась различная клеточная плотность. Количество клеточных элементов в традиционных цитопрепаратах определяло необходимость приготовления дополнительных жидкостных препаратов.
В 15 из 76 информативных наблюдений отмечена недостаточно высокая клеточность. Диагностическая ценность клеточных блоков оказалась невысокой, вероятнее, по причине потери части клеток при их изготовлении.
В 6 из 76 наблюдений изготовление клеточных блоков не проводилось по объективным причинам. Уточняющую диагностику в этих случаях проводили на препаратах, приготовленных по методу жидкостной цитологии.
В 55 из 76 наблюдений информативного материала отмечалась высокая клеточность в традиционных препаратах. Без приготовления дополнительных препаратов весь остаточный материал направлялся на изготовление клеточных блоков. При оценке последних была отмечена высокая клеточная плотность материала.
Суммируя полученные данные, можно отметить, что использование материала клеточных блоков для диагностики карцином печени напрямую зависит от полноценности материала, получаемого при ТИАБ. В нашей работе в 64,8% (п = 57) случаев утвердительных цитологических заключений о наличии рака отмечена целесообразность использования остаточного материала от ТИАБ для формирования клеточного блока. Преимущество перед другими методами, заключается
в том, что при этом появляется возможность дальнейшего проведения иммуноцитохимических исследований по стандартному протоколу.
При определении характерных цитоморфологи-ческих особенностей различных гистотипов рака по материалу клеточных блоков в 10,2% наблюдений была отмечена хорошая сохранность клеток и наличие четких цитоархитектурных признаков опухоли. Это дало возможность идентификацировать ацинар-ные и папиллярные структуры в большинстве метастатических аденокарцином (АК), а так же провести дифференциальный диагноз низкодифференцирован-ных АК от неороговевающего плоскоклеточного рака. Аналогичные данные были получены и в ряде других исследований [24, 25, 26].
При просмотре традиционных цитологических препаратов была отмечена более четкая структура ядра и сохранность клеточных признаков, например - специализированных органелл (цилий на поверхности мембраны (n = 3)) - важного диагностического признака при диагностике серозного рака яичников, которые не определялись в материале клеточного блока.
При дифференцировке АК кишечного типа, особенно при метастазах низкодифференцировананных АК в 14,8% наблюдений традиционные цитологические препараты уступали материалу клеточного блока. В материале клеточных блоков были отмечены характерные признаки АК: наличие вытянутых клеток, собранных в виде палисадоподобных структур, с удлиненными по большой оси ядрами и полиморфными ядрышками. (вклейка 1, рис. 3)
Все случаи (n = 3) метастазов перстневидноклеточ-ного рака в печень имели характерный для этого типа рака признак - наличие крупной секреторной вакуоли, что позволило избежать затруднений в постановке диагноза и по традиционным препаратам, и по препаратам клеточного блока.
В ряде наблюдений (11 из 57) недостаточно выраженные признаки атипии затрудняли оценку характера процесса, при интерпретации клеточного блока, ввиду недостаточного опыта цитолога. Наибольшие затруднения при оценке патологического процесса вызвало определение степени дифференцировки гепатоцитов (5 из 11). В традиционных препаратах при пункции очагов гиперплазии отмечался выраженный клеточный и ядерный полиморфизм, от чего возникали сомнения в наличии доброкачественного (реактивного) процесса. В материале клеточного блока в данных наблюдениях клеточные и ядерные признаки (полиморфизм, структура ядра и цитоплазмы, нуклеолы) были менее выражены. Это свидетельствует о преимуществе технологии клеточных блоков перед традиционными препаратами т. к. известно, что ложноположительная интерпретация пролиферативных процессов и реактивных изменений в цитологической практике встречается чаще, чем при исследовании гистологических препаратов.
Выводы
1. Использование остаточного материала при ТИАБ способствует повышению эффективности цитологического метода исследования, особенно при отсутствии возможности произвести сог-биопсию.
2. В 64,8% (n = 57) наблюдений утвердительных цитологических заключений о наличии рака отмечена целесообразность использования остаточного материала для формирования клеточного блока.
3. Исследования показали, что метод клеточного блока с использованием 10% забуферного формалина в качестве фиксатора - воспроизводимый, недорогой, не требующий специальной подготовки.
4. В 10,2% наблюдений сохранность клеток и наличие четких архитектурных признаков опухоли чаще наблюдали в материале клеточного блока, по сравнению с материалом традиционной цитологии.
5. Методика клеточного блока позволяет архивировать клеточный материал с возможностью последующего иммуноцитохимического исследования.
6. К недостаткам клеточного блока следует отнести увеличение времени обработки материала.
Участие авторов:
Концепция и дизайн исследования - С.В.С., О.В.С. Сбор и обработка материала - С.В.С. Написание текста - С.В.С., О.В.С. Редактирование - С.В.С.
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Литература/References
1. Гарин А.М., Базин И.С. Десять наиболее распространенных злокачественных опухолей. 2-е изд. М.: МАКС Пресс, 2010. 380 с.
2. Каприн А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В. Состояние онкологической помощи населению России в 2017 году.
3. Комаров И.Г., Комов Д.В. Метастазы злокачественных опухолей без выявленного первичного очага. М.: Триада-Х. 2002. 136 с.
4. Minowada S., Okano Y., Miyazaki J., Homma Y., Kitamura T. Multidisciplinary treatment of advanced testicular tumor with bulky liver metastasis. Urol Int. 2001; 67(2): 178-80.
5. Von Frerichs FT. Uber den Diabetes. Berlin: Hirschwald: 1884.
6. Lundquist A. Fine-needle aspiration biopsy of the liver. Acta Med Scand. 1971; 520(1):1-28.
7. Lundquist A. Liver biopsy with a needle of 0.7 mm outer diameter :safety and quantitative yield. Acta Med Scand. 1970; 188: 471-74.
8. Bell D.A., Carr C.P., Szyfelbein W.M. Fine needle aspiration cytology of focal liver lesions. Results obtained with examination of both cytologic and histologic preparations. Acta Cytol. 1986; 30: 397-402.
9. Berman J.J., McNeillcirrhosis R.E. Cirrhosis with atypia. A potential pitfall in the interpretation of liver aspirates. Acta Cytol. 1988; 32: 11-14.
10. Jacobsen G.K., Gammelgaard J., Fuglo M. Coarse needle biopsy versusfine needle aspiration biopsy in the diagnosis of focal lesions of the liver. Ultrasonically guided needle biopsy in suspected hepatic malignancy. Acta Cytol. 1983; 27: 152-6.
11. Фомичёв О.М. Малоинвазивные манипуляции для диагностики и лечения злокачественных опухолей печени. Дис.... канд. мед. наук. Москва - 2004.
12. Болгова Л.С., Туганова Т.Н., Тащиев Р.К., Лобо-да В.И., Логинова Е.А. Цитологическая диагностика опухолей печени по материалам пункционных биопсий. Vopr Onkol. 2006; 52(6): 691-5.
13. Chitrakala Sugumar, Sheeba. D. A Study of Fine Needle Aspiration Cytology of Focal Liver Lesions. IJSR. 2016; 5: 10-12.11.
14. Ершов В.А., Рылло А.Г. Пункционная гистологическая и цитологическая биопсийная диагностика заболеваний печени. Вестник хирурги. 2007; 1: 78-9.
15. Абдышев А.Ш., Багрянцев В.Н., Постанова О.Ю. Современный подход к диагностике и дифференциации первичного и метастатического рака печени. Тихоокеанский медицинский журнал. 2011; 3(45): 80-2.
16. Nagel H.S., Bernardino M.E. Contrast-enhanced MR imaging of hepatic lesions treated with percutaneous ethanol ablation therapy. Radiology. 1993; 189(l): 265-70.
17. Alexopoulou D., Tsiambas E., Lambropoulou S., Kompotis K., Papaspyrou S., Karameris G.A. Morphometric andimmuno cytochemical study of a case of malignant melanoma in fine needle aspiration specimen. Cytopathology. 2004; 15(2): 48.
18. Pelloni A., Gertsch P. Risks and consequences of tumor seeding after percutaneous fine needle biopsy four diagnosis of hepatocellular carcinoma. Schweiz Med Wochenschr. 2000; 130(23): 871-7.
19. Chi-Sin Changchien, Jing-Houng Wang, Sheng-Nan Lu, Chao-Hung Hung, Chien-Hung Chen, Chuan-
Mo Lee. Liu-stain quick cytodiagnosis of ultrasound-guided fine needle aspiration in diagnosis of liver tumors. World J Gastroenterol. 2007; 13(3): 448-51.
20. Tsai Y.Y., Lu S.N., Changchien C.S., Wang J.H., Lee C.M., Eng H.L., Chang W.C. Combined cytologic and histologic diagnosis of liver tumors via one-shot aspiration. Hepatogastroenterology. 2002; 49: 644-7.
21. Bhatia P., Dey P., Uppal R., Shifa R., Srinivasan R., Nijhawan R. Cell blocks from scraping of cytology smear: comparison with conventional cell block. Acta Cytol. 2008; 52(3): 329-33.
22. Briffod M., Hacene K., Le Doussal V. Immunohisto-chemistry on cell blocks from fine-needle cytopunctures of primary breast carcinomas and lymph node metastases. Mod. Pathol. 2000; 13(8): 841-50.
23. Karnauchow P.N., Bonin R.E. «Cell-block» technique forfine needle aspiration biopsy. J. Clin. Pathol. 1982; 35: 688.
24.Thapar M., Mishra R.K., Sharma A., Goyal V., Goyal V. Critical analysis of cell block versus smear examination in effusions. J Cytol. 2009; 26: 60-64.
25. Shivakumarswamy U., Arakeri S.U., Karigowdar M.H., Yelikar B. Diagnostic utility of the cell block method versus the conventional smear study in pleural fluid cytology. J. Cytol. 2012; 29: 11-15.
26. Kumar P.V., Eqbali S., Monabati A., Talei A.R. Bull's eye (target) inclusions in neoplastic cells in malignant serous effusions. A study of 289 cases. Acta Cytol. 2000; 44: 543-6.
METHOD OF CELL BLOCKS IN CYTOLOGICAL DIAGNOSTICS OF LIVER CARCINOMAS
S.V. SMETANINA1, O.V. SMETANINA2
1 Nizhny Novgorod Regional Clinical Oncology Dispensary, Nizhny Novgorod, Russia
2 Volga Research Medical University
Objective. The aim of the study was to analyze the possibilities of using cell blocks in the morphological diagnosis of primary and metastatic liver carcinomas; to determine the characteristic cytomorphological features of various histotypes of cancer according to the material of cell blocks.
Material and methods. The data of 398 cytological studies on the material of TIAB (fine-needle aspiration biopsies) and 106 cell blocks in 106 patients with volumetric liver formations examined in the oncology clinic of Nizhny Novgorod in 2016-17 were analyzed.
Results. Complete material for cytological examination in TIAB was obtained in 95.2% (n = 101) of observations. In 64.8% (n = 57) of cases of affirmative cytological diagnoses of cancer, the expediency of using residual material to form a cell block was noted.
When determining the characteristic cytomorphological features of various histotypes of cancer according to the material of cell blocks in 10.2% of cases, good preservation of the cells and the presence of clear cytoarchitectural signs of the tumor were noted.
Keywords: cytological diagnosis, liver carcinoma, сell block.
Information about the authors:
Smetanina S.V. - https://orcid.org/0000-0002-7000-5910 Smetanina O.V. - https://orcid.org/0000-0003-3141-0267 Corresponding author: Smetanina S.V. - e-mail: smetanina7060@gmail.com
To Cite This Aarticle: Smetanina S.V. Method of cell blocks in cytological diagnostics of liver carcinomas. Russian News of Clinical Cytology. 2019; 23(1): 5-8. (In Russ.)
The authors declare no conflict of interest.
