CC BY
3219. Downs, K. M. Selenium Source Effect on Broiler Carcass Characteristics, Meat Quality and Drip Loss / K. M Downs, J. B. Hess & S. F. Bilgili// Journal of Applied Animal Research. - 2000. -18(1). - р. 61.
20. Rajashree, K. Comparative study of the effects of organic selenium on hen performance and productivity of broiler breeders / K. Rajashree, T. Muthukumar & N. Karthikeyan// British Poultry Science. - 2014. - 55(3). - р. 367.
21. Sevostyanova, O Aggregate-resistant vitamin-mineral complex based on selenium; comparative effectiveness in poultry farming against the technological stress / O. Sevostyanova, V. Orobets, A. Agarkov, N. Fedota and I. Klimanovich // Int J Vet Sci. - 2020. - 9(1). - р. 141.
22. Trukhachev, V.I. Comparative Analysis Efficacy Selenium Containing Vitamin Complexes to Growing Broilers / V.I. Trukhachev, V.A. Orobets, V.S. Skripkin, O.I. Sevostyanova// Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences. - 2016. - №7. - р. 2340
УДК:619:616.98:579.873.21 DOI 10.33632/1998-698Х.2020-4-56-62
МЕТОД ИФА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К MYCOBACTERIUM BOVIS В СЫВОРОТКЕ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Спиридонов Г.Н. - доктор биологических наук, хГаффаров Х.З. - доктор ветеринарных наук, профессор, 2Гильмутдинов Р.Я. - доктор биологических наук, профессор, 1 Спиридонов А.Г. - кандидат биологических наук
7ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», (420075, г. Казань, Научный городок-2, e-mail: vnivi@mail.ru).
2ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», (420074, Казань, Сибирский тракт, 35,)
Приведены результаты исследования по разработке иммуноферментной тест-системы для определения специфических антител к Mycobacterium bovis. В качестве основных компонентов в иммуноферментной тест-системе использованы антиген, полученный из вакцинного штамма БЦЖ путем водно-фенольной экстракции, а также положительная и отрицательная к бактериям Mycobacterium bovis сыворотки крупного рогатого скота. Положительную сыворотку получили на клинически здоровых быках-продуцентах путем гипериммунизации их вакцинным штаммом БЦЖ. Проводили производственное испытание иммуноферментной тест-системы для оценки эпизоотической ситуации в 6 неблагополучных хозяйствах по туберкулезу крупного рогатого скота. Исследованиями установили, что до 92,7% положительно реагирующих на туберкулин коров из неблагополучных по туберкулезу хозяйств дают положительную реакцию в ИФА. Титры противотуберкулезных антител в сыворотке крови у них составили от 1:120 до 1:7680. При послеубойном осмотре у 18-55% животных обнаружили характерные для туберкулеза изменения во внутренних паренхиматозных органах и регионарных лимфатических узлах. При бактериологическом исследовании патологического материала от этих животных выделили вирулентные изоляты Mycobacterium bovis. Проводили исследование методом ИФА 58 проб сывороток крови, полученных от положительно реагирующих на туберкулин коров из благополучных по туберкулезу хозяйств. При этом 54 (93,1%) из них дали отрицательную реакцию, 4 пробы (6,9%) - положительную реакцию в разведениях сывороток 1:40 - 1:80. При послеубойном осмотре внутренних паренхиматозных органов и регионарных лимфатических узлов изменений, характерных для туберкулеза, не обнаружили. Провели убой 8 коров из частного сектора, положительно реагирующих на туберкулин. При послеубойном осмотре у 6 голов обнаружили дикроцелиоз. Бактериологические исследования паренхиматозных органов и лимфатических узлов, серологические исследования
сывороток крови в ИФА от всех 8 животных дали отрицательные результаты. Результаты проведенных исследований позволяют утверждать о возможности применения ИФА для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
Ключевые слова: туберкулез, крупный рогатый скот, диагностика, антиген, Mycobacterium bovis, иммуноферментный анализ.
Своевременная диагностика
туберкулеза крупного рогатого скота является основным звеном в комплексе мероприятий по борьбе с этой коварной и социально опасной болезнью. В принятой системе диагностики туберкулеза имеются определенные трудности, которые обусловлены отсутствием экспресс-методов для уточнения диагноза у положительно реагирующих на туберкулин крупного рогатого скота в благополучных хозяйствах, способа обнаружения в неблагополучных стадах больных животных [4, 5]. Как известно, раннее предложенные серологические методы диагностики туберкулеза (РСК, РДСК, РНГА и др.) не нашли широкого применения из-за их низкой чувствительности и специфичности. Наибольшее признание в последние годы для диагностики инфекционных болезней получил метод иммуноферментного анализа (ИФА) [2, 3, 7]. Имеются сведения о применении этого метода и для диагностики туберкулеза [1, 6, 8, 9, 10, 11, 17, 20]. Метод ИФА, являясь экспрессивным, унифицированным методом определения антител, может обеспечить проведение массовых обследований животных с целью установления диагноза и распространения туберкулеза наряду с кожно-аллергической туберкулиновой пробой [15, 16, 18, 19].
По литературным данным при постановке ИФА разные авторы применяют различные туберкулезные антигены. Так, например, Tacco R. и соавт., 1987; Ritacco V. и соавт., 1989 в качестве антигена использовали туберкулин ППД. При этом Ritacco V. и соавт. специфические антитела обнаруживали у 90% животных (у 18 из 20) с бактериологическим подтверждением туберкулеза, в то время как 89,8% здоровых коров (44 из 49) из свободного от туберкулеза региона дали отрицательные результаты.
Moudgil и соавт., 1988;
Ходун Л.М. и соавт., 1990 применяли в ИФА антиген, полученный путем обработки микобактерий туберкулеза ультразвуком. Они утверждают, что выявление активно больных в ИФА с озвученным ультразвуком антигеном составляет до 93,49%.
Хазипов Н.З. и соавт., 1990 использовали в ИФА антигенсодержащую фракцию, полученную путем разрушения клеточных стенок микобактерий туберкулеза
диметилсульфоксидом. Испытание в условиях производства метода ИФА с использованием ДМСО-антигена показало возможность использования его в прижизненной дифференциальной диагностике туберкулеза крупного рогатого скота.
В настоящее время известны два полисахарида у Mycobacterium bovis. Растворы полисахарида I прозрачные и бесцветные. Он состоит преимущественно из маннозы и арабинозы. Дает высокий титр при реакции преципитации, но сам не может вызвать образование антител. Растворы полисахарида II опалесцирующие. Он состоит из глюкопиранозных остатков, связанных на позициях 1 и 2, и, кроме того, из остатков липидов около 8%. Этот полисахарид может вызвать образование антител, т.е. представляет собой п олноценный антиген. Дает высокие титры преципитации с лошадиной антисывороткой, а б о л ее низкие при осаждении кроличьей и человеческой антисыворотками. Оба полисахарида не обладают туберкулиновой активностью. Установлено, что тубер -кулиновые полисахариды являются хоро -шими антигенами для ряда серологических реакций - пассивной гемагглютинации, к о л ьцевой преципитации, преципитации на агаре и др.
Целю настоящих исследований явилась изыскание полисахаридно-белкового антигена и на его основе разработать тест-систему для определение специфических антител к бактериям Mycobacterium bovis в сыворотке крови крупного рогатого скота.
Материалы и методы. Постановка ИФА осуществляли по общепринятой методике. Конъюгатом служили антитела диагностические против иммуноглобулинов быка, меченные пероксидазой. В качестве антигена использовали экстракт из вакцинного штамма БЦЖ, полученного с помощью водно -фенольной экстракции. В качестве контрольной положительной сыворотки использовали гипериммунную к Mycobacterium bovis сыворотку крупного рогатого скота, а также пул сывороток от больных туберкулезом коров, реагирующих на туберкулин, у которых при убое был обнаружен туберкулез в лимфатических узлах и внутренних паренхиматозных органах. В качестве контрольной отрицательной сыворотки
использовали пул сывороток от здоровых, не реагирующих на туберкулин коров из благополучных по туберкулезу хозяйств. Учет реакции проводили на
спектрофотометре при длине волны 490 нм. За положительный результат принимали коэффициент чувствительности (отношение оптической плотности реакции с исследуемой сывороткой и оптической плотности реакции контрольной реакции с отрицательной сывороткой) равной или более 2,0.
Объектом для исследований служил крупный рогатый скот из неблагополучных по туберкулезу скотоводческих хозяйств. В этих хозяйствах проводили исследование животных на туберкулез кожно-аллергическим методом, используя туберкулин сухой очищенный (ППД) для млекопитающих. Перед проведением туберкулинизации от всего поголовья крупного рогатого скота отбирали пробы крови для исследования в ИФА на наличие специфических антител к бактериям Mycobacterium bovis. Всех положительно реагирующих на туберкулин коров убили на мясокомбинате. При этом туши и внутренние паренхиматозные органы от этих животных подвергали тщательному патолого -анатомическому осмотру, а патологический материал - бактериологическому исследованию.
Результаты исследований. Туберкулезный антиген для постановки ИФА получали из вакцинного штамма БЦЖ путем водно-фенольной экстракции следующим образом. 10 г лиофильно высушенной микробной массы вакцинного штамма БЦЖ биофабричного производства суспендировали в 100 см3 физиологического раствора. К суспензии в эквивалентном объеме добавили 90%-ный раствор химически чистого фенола. Смесь нагревали в водяной бане при температуре 680С в течение 30 мин. Затем суспензию, остуженную при комнатной температуре, центрифугировали при 3000 об/мин. При центрифугировании смесь разделилась на 3 слоя: верхний - водный, содержащий антиген; второй - фенол; третий -остаток бактериальной массы. Водный, антигенсодержащий слой отделяли от остальных и диализировали против проточной воды (10-120С). Концентрирование полученного антигена проводили при помощи ПЭГ-6000. Стандартизацию антигена осуществляли по содержанию белка при помощи спектрофотометра СФ-46.
Положительную контрольную
сыворотку, необходимую для проведения ИФА, получали на клинически здоровых быках-продуцентах живой массой 400-450 кг путем гипериммунизации их вакцинным штаммом БЦЖ по следующей схеме. Первое введение антигена проводили в 2-х точках из расчета 1 мг сухой вакцины на 1 кг живой массы подкожно. Второе введение вакцины делали через 2 недели в той же дозе, только одну ее половину вводили подкожно, а другую -внутривенно. Перед введением основной дозы вакцины животных десенсибилизировали путем внутрикожной инъекции малой дозы вакцины за 1 ч до введения основной дозы.
Третье введение вакцины БЦЖ проводили через 2 недели после второго в той же дозе, что и при втором, по только подкожно в двух точках, с обязательной предварительной десенсибилизацией организма гиперим-мунизируемых животных. Пробное взятие крови для определения противотуберкулезных антител проводили через 2 недели после последнего введения вакцины. При обнаружении в сыворотке специфических антител в титрах 1:3200 и выше, животных обескровливали. Кровь брали в стеклянные бутыли, отстаивали ее при температуре 40С в течение 48 часов. Отделяли сыворотку от сгустков крови, фильтровали через бактериальные фильтры, проверяли ее активность в ИФА. Затем сыворотку разливали в ампулы и лиофилизировали.
Изготовили две серии антигена из вакцинного штамма БЦЖ путем водно-фенольной экстракции.
При спектрофотометрическом анализе установили, что он содержит специфический белок 220-300 мкг/мл. Проводили определение полипептидного состава белка методом электрофореза на полиакриламидном геле. Установили, что белок в антигене представлен 20-25 полипептидами с молекулярной массой от 10 до 70 кд. На спектрограмме наблюдали два пика. Первый пик отмечался в области 215 нм, что характерно для полисахаридов, второй - в области 260 нм, что характерно для нуклеиновых кислот. Следовательно, полученный туберкулезный антиген представляет из себя полисахаридно-белковый комплекс с примесью нуклеиновых кислот.
Проводили определение активности туберкулезного антигена в ИФА с использованием контрольных отрицательной и положительной к вакцинному штамму БЦЖ сывороток, результаты которых приведены в таблице 1.
Таблица 1- Показатели активности полисахаридно-белкового антигена в ИФА
Разведение сывороток ОП положительной сыворотки ОП отрицательной сыворотки Коэффициент чувствительности
1:100 0,994 0,169 5,882
1:200 0,846 0,135 6,267
1:400 0,655 0,104 6,298
1:800 0,300 0,118 2,543
1:1600 0,294 0,073 4,028
1:3200 0,253 0,096 2,636
1:6400 0,222 0,091 2,440
1:12800 0,113 0,108 1,047
Из таблицы 1 видно, что туберкулезный антиген, полученный путем водно-фенольной экстракции из вакцинного штамма БЦЖ, дает положительную реакцию с контрольной положительной сывороткой в разведении 1:6400 при коэффициенте чувствительности 2,4.
Проводили определение специфичности и чувствительности метода ИФА с использованием полисахаридно-белкового антигена. При этом использовали контрольные отрицательную и положительную к Mycobacterium bovis сыворотки, сыворотки крови от больных туберкулезом животных, а также гипериммунные сыворотки к эшерихиям коли, сальмонеллам, вирусу лейкоза КРС. При этом установили, что полисахаридно-белкового антиген чувствии-телен и специфичен. Он не реагирует в ИФА с гетерологичными сыворотками крови (гипериммунными сыворотками к эшерихиям коли, сальмонеллам, вирусу лейкоза КРС), тогда как с гомологичными сыворотками (положительной к Mycobacterium bovis и от больных туберкулезом животных) дает положительную реакцию в титрах 1:400 -1:6400, с положительной сывороткой к Mycobacterium bovis - 1:6400 - 1:12800.
Проводили производственное испытание иммуноферментной тест-системы на основе полисахаридно-белкового антигена для оценки эпизоотической ситуации в 6 неблагополучных хозяйствах по туберкулезу крупного рогатого скота. Исследованиями установили, что до 92,7% положительно реагирующих на туберкулин коров (323 гол.) из неблагополучных по туберкулезу хозяйств дают положительную реакцию в ИФА. Титры противотуберкулезных антител в сыворотке крови у них составили от 1:120 до 1:7680. При послеубойном осмотре у 18-55% животных обнаружили характерные для туберкулеза изменения во внутренних паренхиматозных органах и регионарных лимфатических узлах. При бактериологическом исследовании патологического материала от этих животных
выделили вирулентные изоляты микобактерий туберкулеза.
Проводили исследование методом ИФА 58 проб сывороток крови, полученных от положительно реагирующих на туберкулин коров из благополучных по туберкулезу хозяйств. При этом 54 из них (93,1%) дали отрицательную реакцию, 4 пробы (6,9%) -положительную реакцию в разведениях сывороток 1:40 - 1:80. При послеубойном осмотре внутренних паренхиматозных органов и регионарных лимфатических узлов изменений, характерных для туберкулеза, не обнаружили.
Провели убой 8 коров из частного сектора, положительно реагирующих на туберкулин. При послеубойном осмотре у 6 голов обнаружили дикроцелиоз. Бактериологические исследования паренхиматозных органов и лимфатических узлов, серологические исследования сывороток крови в ИФА от всех 8 животных дали отрицательные результаты.
Результаты проведенных исследований позволяют утверждать о возможности применения ИФА с использованием полисахаридно-белкового антигена для прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
На основании полученных результатов разработан набор препаратов для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота методом ИФА, состоящий из следующих компонентов: планшеты для иммуноферментного анализа с адсорбированным антигеном бактерий Mycobacterium bovis; контрольные положительная и отрицательная сыворотки; антитела
диагностические против иммуноглобулинов быка, меченные пероксидазой; твин-20; лошадиный сывороточный альбумин; концентрированный фосфатно-солевой буферный раствор; фосфатно-цитратный буферный раствор; ортофенилендиамин; перекись водорода; 0,1М серная кислота.
Заключение. Разработана иммуно-ферментная тест-система для прижизненной
диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. Антиген, полученный из вакцинного штамма БЦЖ методом водно-фенольной экстракции, являющийся основным
компонентом тест-системы, представляет собой полисахаридно-белковый комплекс с примесью нуклеиновых кислот. Тест-система позволяет выявлять до 92,7% положительно реагирующих
на туберкулин коров (323 гол.) в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах. Установлена прямая корреляция показателей ИФА с результатами патологоанатомического осмотра, бактериологических исследований и данными кожно-аллергической туберкулиновой пробы.
Литература
1. Аракелов, А.Б. Получение антигена МРВ83 Mycobacterium bovis для диагностики туберкулеза животных методом ИФА: дис. ...канд. биол. наук / Аракелов Армен Борисович. - М., 2006. - 152 с.
2. Иванов, А.В. Разработка и испытание тест-системы для диагностики хламидиоза крупного рогатого скота методом ИФА / А.В. Иванов, В.В. Евстифеев, Ф.М. Хусаинов и др. // Ветеринарный врач. - 2011. - № 2. - С. 10.
3. Косарев, М.А. Дифференциальная серологическая диагностика бруцеллеза у крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82, и ее значение в общей системе мер борьбы с данным заболеванием / М.А. Косарев, А.М. Фомин, Г.М. Сафина и др. // Ветеринарный врач. - 2019. - № 5. -С. 23.
4. Найманов, А. Х. Микобактериальные инфекции крупного рогатого скота / А.Х. Найманов, М.И. Гулюкин. - М.: Зооветкнига, 2014. - 235 с.
5. Патент РФ № 2416428, МПК А61К39/00 C12N1/20. Способ получения антигена для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / Т.Р. Якупов, К.С. Хаертдинов, Р.А. Хамзин, И.К. Фахртдинов; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО «КГАВМ им. Н.Э. Баумана»; опубл. 20.04.2011.
6. Спиридонов, А.Г. Иммуноферментный метод диагностики анаэробной энтеротоксемии животных / А.Г. Спиридонов // Ветеринарный врач. - Казань. - 2018. - №6. - С. 26.
7. Татарчук А.Т. Методические рекомендации по дифференциальной диагностике неспецифических реакций у крупного рогатого скота при диагностическом исследовании на туберкулез / А.Т. Татарчук [и др.]. - Екатеринбург: ИРА УТК, 2004. - 24 с.
8. Хазипов, Н.З. Способ получения антигена для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота / Н.З. Хазипов, А.А. Нуруллин, В.П. Коксин, Р.П. Тюрикова // Авторское свидетельство № 1638853, 1990.
9. Хамзин, Р.А. Иммуноферментный анализ для выявления противотуберкулезных антител у крупного рогатого скота /Р.А. Хамзин, М.А. Сафин, К.Г. Идрисова // Вопросы борьбы с туберкулезом людей и животных. - Ташкент, 1990. - С. 112.
10. Ходун, Л.М. Тест-система Elisa для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота и критерии оценки результатов метода / Л.М. Ходун, Н.И. Цунская // Разработка средств и методов борьбы с туберкулезом животных. - Новосибирск, 1990. - С. 10.
11. Цунская, Н.И. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота методом ИФА / Н.И. Цунская, Л.Т. Аппельганц // Система мер борьбы с туберкулезом с.-х. животных. - Новосибирск, 1991. - С. 35.
12. Moudgil, K.D. Evaluation of an enzyme immunoassay based on sonicate supernation antigens of Mycobacterium Wfor immunodiagnostic of leprosy / K.D. Moudgil, S.K. Gupta // Indian J. Lepr. 1988. -60. - №2. - P. 159.
13. Ritacco, V. Further evaluation of an indirect enzyme-linked immunosorpent assay for the diagnosis of bovine tuberculosis / V. Ritacco, B. Lopez, L. Barrera / J. Veter. Med. Ser. B. 1990, 37. - P. 19.
14. Tacco, R. Assessment of the sensitivitiand specificity of indirect enzyme-linked immunosorpent / R. Tacco, V. Kantor / J. Veter. Med. Ser. B. - 1987, vol. 34. - P. 119.
15. Иммуноферментный анализ крови при туберкулезе. Siestafit. ru analiz... immunofermentnyy... tuberkuleze.
16. ИФА на туберкулез или иммуноферментный анализ на туберкулез http://tbdoc.ru/analysis/krovi.html.
17. Патоморфологические изменения в организме животных при туберкулезе https://studfiles.net/preview/2901312/page:2.
18. Туберкулез. URL: https://vetvo.ru/tuberkulez.html
19. Туберкулез.URL:https://nsau.edu.ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/micro/tuberk.ht
m
20. [Электронный ресурс] pulmonologi.ru>tuberkulez/ifa.html.
ELISA METHOD FOR DETERMINING SPECIFIC ANTIBODIES TO MYCOBACTERIUM BOVIS IN
BLOOD SERUM OF CATTLE
'Spiridonov G.N. - Doctor of Biological Sciences, :Gaffarov Kh.Z. - Doctor of Veterinary Sciences, Professor, 2Gilmutdinov R.Ya. - Doctor of Biological Sciences, Professor, 'Spiridonov A.G. - Candidate of Biological Sciences.
1 FSBSI "Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Safety",
(420075, Kazan, Nauchny gorodok-2, e-mail: vnivi@mail.ru)
2 Kazan state Academy of veterinary medicine Bauman Institute of medicine,
(420074, Kazan, Sibirskiy trakt 35,)
The research presented the results of a study on the development of an enzyme immunoassay system for determining specific antibodies to Mycobacterium bovis. The main components of the immunoassay test system are an antigen obtained from the BCG vaccine strain by water-phenol extraction, as well as positive and negative bovine serum for Mycobacterium bovis bacteria. Positive serum was obtained on clinically healthy producing bulls by hyperimmunizing them with a BCG vaccine strain. We conducted a production test of an enzyme immunoassay system to assess the epizootic situation in 6 dysfunctional farms for bovine tuberculosis. Studies have found that up to 92.7% of cows that respond positively to tuberculin from tuberculosis-affected farms give a positive reaction in the ELISA. The titers of anti-TB antibodies in their blood serum ranged from 1: 120 to 1: 7680. During post-slaughter examination, 18-55% of animals showed changes in internal parenchymal organs and regional lymph nodes characteristic of tuberculosis. During the bacteriological study of pathological material from these animals, virulent isolates of Mycobacterium bovis were isolated. We conducted an ELISA study of 58 samples of blood serums obtained from cows that responded positively to tuberculin from tuberculosis-free farms. At the same time, 54 (93.1%) of them gave a negative reaction, 4 samples (6.9%) - a positive reaction in dilutions of serums 1:40 - 1:80. Post-mortem examination of internal parenchymal organs and regional lymph nodes did not reveal changes characteristic of tuberculosis. 8 cows from the private sector that respond positively to tuberculin were slaughtered. During post-slaughter examination, 6 heads were found to have dicroceliosis. Bacteriological studies of parenchymal organs and lymph nodes, serological studies of blood serums in ELISA from all 8 animals gave negative results. The results of the research allow us to assert the possibility of using ELISA for the lifetime diagnosis of bovine tuberculosis.
Kewwords: tuberculosis, cattle, diagnostics, antigen, Mycobacterium bovis, enzyme immunoassay References
1. Arakelov, A.B. Polucheniye antigena MRV83 Mycobacterium bovis dlya diagnostiki tuberkuleza zhivotnykh metodom IFA: dis. ...kand. biol. nauk /A.B. Arakelov. M., 2006. - P. 152.
2. Ivanov, A.V. Razrabotka i ispytanie test-sistemy dlya diagnostiki hlamidioza krupnogo rogatogo skota metodom IFA / A.V. Ivanov, V.V. Evstifeev, F.M. Husainov i dr. // Veterinarnyj vrach. - 2011. - № 2. -P. 10.
3. Kosarev, M.A. Differentsial'naya serologicheskaya diagnostika brutselleza u krupnogo rogatogo skota, privitogo vaktsinoy iz shtamma 82, i yeye znacheniye v obshchey sisteme mer bor'by s dannym zabolevaniyem / M.A. Kosarev, A.M. Fomin, G.M. Safina i dr. // Veterinarnyy vrach. - 2019. - № 5. - P. 23.
4. Metodicheskiye rekomendatsii po differentsial'noy diagnostike nespetsificheskikh reaktsiy u krupnogo rogatogo skota pri diagnosticheskom issledovanii na tuberkulez / A. T. Tatarchuk [i dr.]. -Yekaterinburg: IRA UTK, 2004. - P. 24.
5. Naymanov, A. KH. Mikobakterialnyye infektsii krupnogo rogatogo skota / A.KH. Naymanov, M.I. Gulyukin. - M.: Zoovetkniga, 2014. - P. 235.
6. Patent RF № 2416428, MPK A61K39/00 S12N1/20. Sposob polucheniya antigena dlya diagnostiki tuberkuleza krupnogo rogatogo skota / T.R. Yakupov, K.S. Khayertdinov, R.A. Khamzin, I.K. Fakhrtdinov; zayavitel i patentoobladatel FGBOU VPO «KGAVM im. N.E. Baumana»; opubl. 20.04.2011.
7. Spiridonov, A.G. Immunofermentnyy metod diagnostiki anaerobnoy enterotoksemii zhivotnykh / A.G. Spiridonov // Veterinarnyy vrach. - Kazan'. - 2018. - №6. - P. 26.
8. Khazipov, N.Z. Sposob polucheniya antigena dlya diagnostiki tuberkuleza krupnogo rogatogo skota / N.Z. Khazipov, A.A. Nurullin, V.P. Koksin, R.P. Tyurikova // Avtorskoye svidetelstvo № 1638853, 1990.
9. Khamzin, R.A. Immunofermentnyy analiz dlya vyyavleniya protivotuberkuleznykh antitel u krupnogo rogatogo skota /R.A. Khamzin, M.A. Safin, K.G. Idrisova // Voprosy borby s tuberkulezom lyudey i zhivotnykh. - Tashkent, i990. - P. ii2-ii4.
10. Khodun, L.M. Test-sistema Elisa dlya diagnostiki tuberkuleza krupnogo rogatogo skota i kriterii otsenki rezul'tatov metoda / L.M. Khodun, N.I. Tsunskaya // Razrabotka sredstv i metodov borby s tuberkulezom zhivotnykh. - Novosibirsk, i990. - P. i0.
11. Tsunskaya, N.I. Diagnostika tuberkuleza krupnogo rogatogo skota metodom IFA / N.I. Tsunskaya, L.T. Appelgants // Sistema mer borby s tuberkulezom s.-kh. zhivotnykh. - Novosibirsk, i99i. - P. 35.
12. Moudgil, K.D. Evaluation of an enzyme immunoassay based on sonicate supernation antigens of Mycobacterium W for immunodiagnostic of leprosy / K.D. Moudgil, S.K. Gupta // Indian J. Lepr. i988. - 60. -№2. - P. i59.
O. Ritacco, V. Further evaluation of an indirect enzyme-linked immunosorpent assay for the diagnosis of bovine tuberculosis / V. Ritacco, B. Lopez, L. Barrera / J. Veter. Med. Ser. B. i990, ЗУ. - P. i9.
14. Tacco, R. Assessment of the sensitivitiand specificity of indirect enzyme-linked immunosorpent / R. Tacco, V. Kantor / J. Veter. Med. Ser. B. - i987, vol. 34. - P. ii9.
15. Immunofermentnyy analiz krovi pri tuberkuleze. https://siestafit.ru/analiz-krovi/immunofermentnyy-analiz-krovi-pri-tuberkuleze.
16. IFA na tuberkulez ili immunofermentnyy analiz na tuberkulez http://tbdoc.ru/analysis/krovi.html.
17. Patomorfologicheskiye izmeneniya v organizme zhivotnykh pri tuberkuleze https://studfiles.net/preview/290i3i2/page:2.
18. Tuberkulez. https://vetvo.ru/tuberkulez.html.
19.Tuberkulez. https://nsau.edu.ru/images/vetfac/images/ebooks/microbiology/stu/micro/tuberk.htm.
20. Osobennosti provedeniya testa IFA na tuberkulez. https://pulmonologi.ru/tuberkulez/ifa.html.
УДК 619:615.281:636.5 DOI 10.33632/1998-698Х.2020-4-62-69
КОМПЛЕКС ХВОЙНЫЙ БАЛЬЗАМИЧЕСКИЙ ПИХТОВЫЙ ДЛЯ ДЕЗИНФЕКЦИИ
ИНКУБАЦИОННЫХ ЯИЦ
Сунцова О.А. — кандидат ветеринарных наук, Задорожная М.В. — кандидат ветеринарных наук,
Лыско С.Б. — кандидат ветеринарных наук
Сибирский научно-исследовательский институт птицеводства — филиал ФГБНУ «Омский аграрный научный центр. (644555, Омская область, Омский район, с. Морозовка, ул. 60 лет Победы, д. 1, sibniip@mail.ru)
В технологическом процессе производства птицеводческой продукции наиболее уязвимым является инкубатор, в котором благоприятные условия создаются не только для развивающегося эмбриона, но и для микроорганизмов. Задача дезинфекции предупредить накопление микрофлоры до критических показателей и не допустить перезаражения молодняка на выводе. Однако не все средства, применяемые для обработки инкубационных яиц эффективны, безопасны для будущего потомства, обслуживающего персонала и окружающей среды. Цель исследования - разработать эффективную схему дезинфекции инкубационных яиц с применением комплекса хвойного бальзамического пихтового. Исследования проводились в отделе ветеринарии сельскохозяйственной птицы СибНИИП-филиал ФГБНУ «Омский АНЦ» и в птицеводческом хозяйстве на инкубационных яйцах перепелов породы фараон. В опытах in vitro было установлено, что оптимальным является воздействие на микроорганизмы 10%-ного водного раствора комплекса хвойного бальзамического в течение 60 минут, что вызывало гибель всех тест-культур. При изучении в экспериментальных условиях разных схем применения испытуемого препарата наиболее эффективной оказалась двукратная дезинфекция инкубационных яиц, снижающая обсемененность скорлупы на 31,4-75,0%, частоту выделения стафилококков и энтерококков на 20-40%, энтеробактеров на 20%, повышающая выводимость яиц на 4,0% и вывод молодняка на 3,7%. Испытание данной схемы в производственном опыте подтвердило экспериментальные данные. Обработка инкубационных яиц перепелов 10%-ным водным раствором комплекса хвойного бальзамического пихтового перед инкубацией и на 15,5 сутки снижает микробную обсемененность скорлупы на 41,5-90,5%, повышает выводимость яиц на 3,9%, вывод перепелят на 2,7%, сохранность выведенного
