CC BY
58
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ МЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ-СУПРЕССОРОВ... 69
УДК 616.19+618.11]-006.04-031.14:575.113
Т.П. Казубская1, Д. С. Ходырев2, И.В. Пронина2, В.Д. Ермилова1, Ю.Г. Паяниди1, Н.В. Чхиквадзе1,
В.Ю. Сельчук , Э.А. Брага2, В.И. Логинов2 МЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ-СУПРЕССОРОВ
В ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ ОПУХОЛЯХ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ЯИЧНИКОВ,
ВКЛЮЧАЯ ПЕРВИЧНО-МНОЖЕСТВЕННЫЕ
1ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН, Москва Государственный Научный Центр РФ ГосНИИ генетика, Москва
Контактная информация
Казубская Татьяна Павловна, д-р мед. наук, старший научный сотрудник лаборатории клинической онкогенетики НИИ клинической онкологии
Адрес: 115478, Москва, Каширское ш., 24, тел. +7(499)324-26-85 E-mail: [email protected]
Статья поступила: 29.02.2012, принята к печати 29.02.2012.
Резюме
В рамках исследования впервые проведено комплексное изучение статуса метилирования генов-супрессоров RASSF1A, RARfi2 и SEMA3B в образцах ткани опухолей молочной железы и яичников, а также прилежащей к ним гистологически нормальной ткани. Впервые установлено, что аномальное метилирование про-моторной области гена RASSF1A выявляется на доклинической стадии развития рака молочной железы и яичников, что позволит в перспективе использовать этот метод в клинической практике в качестве ранней неинвазивной диагностической методики.
Ключевые слова: рак молочной железы и яичников, первично-множественных рак, метилирование, гены RASSF1A, RARfi2 и SEMA3B..
T.P. Kazubskaya1,1.V. Khodyrev2,1.V. Pronina2, V.D. Ermilova1, J.G. Payanidi1, N.V. Chkhikvadze1, V.I. Celchuk1, E.A. Braga2, V.I. Loginov2 TUMOR SUPRESSOR GENES METHYLATION IN BREAST AND OVARIAN CARCINOMA,
INCLUDING MULTIPLE PRIMARY TUMORS
1FSBI «N.N. Blokhin RCRC» RAMS, Moscow
2Scientific Center of Russian Federation Research Institute for Genetics, Moscow Abstract
The research conducted the first comprehensive study of the methvlation status of tumor suppressor genes RASSF1A, RARB2 and SEMA3B in breast and ovarian carcinoma tissue samples, as well as in adjacent histologically normal tissue. For the first time it was found out that abnormal methylation of RASSF1A gene promoter region could be detected at the preclinical stage of breast and ovarian cancer, that would help to use this method in clinical practice as a noninvasive technique for early diagnosis.
Key words: breast and ovarian cancer, multiple primary cancers, methylation, RASSF1A, RAR@2 and SEMA3B genes.
Введение
Урбанизация и старение населения, ухудшение общей экологической ситуации, техногенные катастрофы приводят к наблюдаемому за последнее десятилетие, неуклонному росту онкологических заболеваний, включая ПМЗО [5; 7].
Под первичной множественностью опухолей в настоящее время понимают независимое возникновение и развитие у одного больного двух или более новообразований. При этом пораженными могут быть не только разные органы различных систем, но и парные органы (молочные железы, легкие и другие). В России показатель заболеваемости ПМЗО на 2005 г. составил 8,3, а на 2010 г. -11,2 на 100 000 населения, при этом, доля синхронных опухолей из них, составила 33 % [6].
По имеющимся наблюдениям, ПМЗО могут быть одним из проявлений различных наследственных синдромов, которые являются результатом специфических наследственных мутаций, предопределяющих риск развития рака у 50% потомков, с поражением органов ассоциированных с этими
синдромами [3]. Поэтому риск развития полине-оплазии выше для лиц из наследственно отягощенных семей. Самой частой разновидностью семейных опухолевых заболеваний у женщин является наследственный рак молочной железы (РМЖ). Его вклад в общую встречаемость РМЖ составляет примерно 5 - 10 % [2]. Классически разновидности наследственного РМЖ ассоциированы также с высоким риском развития рака яичников (РЯ), поэтому в литературе обычно используется термин «синдром РМЖ/Ря» (breast-ovarian cancer syndrome). Доля наследственного РМЖ/РЯ в общей заболеваемости неоплазиями яичников ещё более заметна. Считается, что как минимум 10 - 15 % случаев РЯ можно объяснить присутствием генетических факторов [10; 15]. Установлено, что приблизительно в 20 - 30 % развитие наследственных форм РМЖ/РЯ обусловлено наличием мутаций в генах BRCA1 или BRCA2. Однако огромные усилия учёных направлены на идентификацию других генов, ответственных за развитие РМЖ и/или РЯ, которые позволили бы выявлять эти заболевания еще на доклиническом уровне.
Как и многие злокачественные опухоли, РМЖ и РЯ имеют мультифакторную природу. В их патогенезе важную роль играют онкогены и гены опухолевой супрессии. В основе инактивации генов-супрессоров опухолей и селективного роста злокачественно измененных клеток лежат генетические и эпигенетические повреждения. Генетические изменения включают точковые мутации, деле-ции, перестройки, тогда как эпигенетические изменения (метилирование) влияют на временной и пространственный контроль экспрессии гена без изменения в последовательности ДНК. Механизмом эпигенетических изменений служит обратимое присоединение метильной группы к цитозину в CG-динуклеотидах (цитозин-гуанин-динуклеотидах), расположенных в регуляторных участках генов. Это явление получило название аномального метилирования генов в опухоли. Считается, что эпигенетические нарушения при малигнизации являются наиболее ранними и могут иметь место задолго до клинической манифестации заболевания [9]. К настоящему времени установлено, что метилирование генов ассоциировано с агрессивной формой опухоли и прогрессией заболевания [2; 14; 18].
Следовательно, определение степени метилирования генов-супрессоров опухолевого роста можно использовать в качестве маркера агрессивности опухолевого процесса для прогноза течения заболевании и для коррекции терапевтической стратегии при лечении РМЖ и РЯ.
Целью работы являлся комплексный анализ метилирования генов-супрессоров RASSF1A, SEMA3B и RARfí2 и изучение роли этих генов в развитии рака молочной железы и яичников.
Материалы и методы
Парные образцы опухолевой и гистологически нормальной ткани взяты у пациенток, которые до операции не получали лучевой или химиотерапии. Выборка составила 56 образцов рака молочной железы и 50 эпителиальных опухолей яичников. Все случаи классифицировали по TNM в соответствии с требованиями Международного противоракового союза (UICC, версия 1998 г.). Для отбора образцов с высоким содержанием опухолевых клеток проводился гистологический анализ микросрезов (толщина 5 мкм) после их окрашивания эозином и гематоксилином, что позволяло получить в исследуемом материале не менее 70% опухолевых клеток. Образцы тканей хранили при -70 °С. В качестве дополнительного контроля использовали по пять образцов тканей молочной железы и яичников, полученных от доноров без онкологических заболеваний в анамнезе. ДНК из ткани выделяли по стандартной методике [4]. Работа проведена на базе Государственного Научного Центра РФ ГосНИИ генетика.
Анализ метилирования промоторных районов генов RASSF1A, RARP2 и SEMA3B методом метилчувствительного рестриктазного анализа (МЧРА) с использованием набора ферментов выполнен по аналогии с методом, предложенным ранее [4]. Метод основан на способности метилчувст-вительных рестриктаз гидролизовать ДНК, не содержащую модифицированных оснований и оставлять не гидролизованными участки, содержащие 5-метилцитозин. В соответствии с рестриктной картой промоторных CpG-островков исследованных генов применяли от двух до четырех метилчувстви-тельных рестриктаз, фирмы «Fermentas»: HpalI (CCGG) HhaI (GCGC), Ssil (CCGC), и Bsh1236I
(CGCG). Расщепление ДНК рестриктазами HhaI и HpalI проводили в буфере Y, Bshl236l - в буфере R, Ssil - в буфере O, фирмы «Fermentas». В качестве матрицы для ПЦР использовали парные образцы ДНК опухолевой и условно нормальной ткани до и после обработки ферментом. В качестве контроля сохранности ДНК (К2) использовали продукт ПЦР фрагмента экзона 1 гена RARfí2 (229 п.н.), т.к. этот фрагмент не содержит участков узнавания указанных рестриктаз. Полноту расщепления образцов ДНК ферментами проверяли с помощью амплификации фрагмента гена р-3А-адаптина (445 п.н.) (К1), который содержит неметилированные участки узнавания рестриктаз HpalI, HhaI, Ssil и Bsh1236l (как в норме, так и в опухоли).
Праймеры и условия ПЦР приведены в табл. 1. ПЦР проводили в 25 мкл реакционной смеси, содержащей 67 мМ Трис-HCl, рН 9,3; 16,7 мМ (NH4)2SO4;
0,01% твин-20; 1,5-2,5 мМ MgCl2; 0,25 мМ каждого dNTP; 25 пМ каждого праймера; 1 ед. Hot Start Taq ДНК полимеразы, фирмы «СибЭнзим»; 5-20 нг ДНК пробы. Амплификацию проводили по следующей программе: 95 °С - 2 мин; 35 циклов (93 °С - 20 с, Тотж - 30 с, 72 °С - 20 с) и 72 °С - 4 мин. ПЦР проводили на ам-плификаторе Терцик (Россия). Продукты ПЦР разделяли электрофорезом в 2%-ном агарозном геле.
Статистический анализ проводился с использованием пакета прикладных программ «Statistica for Windows 6.0». При анализе достоверности полученных данных был использован точный критерий Фишера. Достоверность считалась значимой, если р<0,05 [23].
Результаты и обсуждение
Важно отметить, что клиническая информация для всех анализируемых групп больных не была известна до окончания изучения, которое показало, что из 59 изученных образцов РМЖ 12 принадлежали пациенткам с ПМЗО, а из 50 образцов РЯ - 5 были с ПМЗО, одной из которых был РЯ.
Изучение метилирования ДНК в опухолях молочной железы и яичников проводилось с использованием МЧРА, что позволило не только более полно определить долю образцов, в которых эти гены метилированы, но и оценить плотность метилирования CpG островка в каждом образце.
Анализ метилирования промоторного района гена RASSF1A при РМЖ и РЯ
На рис. 1 приведены типичные примеры анализа метилирования промоторного района гена RASSF1A с помощью мЧрА при РМЖ и РЯ.
Согласно полученным данным частота метилирования гена RASSF1A в опухолях молочной железы и яичников достоверно выше, чем в гистологически нормальной ткани (р<0,05) (табл. 2). Частота метилирования гена RASSF1A при РМЖ и РЯ составила 78 % (46/59) и 72 % (36/50) соответственно, что почти вдвое превышает литературные данные (40 %) [13]. Наблюдаемые различия в метилировании гена RASSF1A могут быть связаны главным образом с чувствительностью метода и с этнографическими особенностями исследуемых популяций. Различия в плотности метилирования CpG-пар, были менее выражены и, согласно данным МЧРА, достоверны только при раке молочной железы (р=1,0*10-7) (см. табл. 2). В то же время метилирование промоторного района гена RASSF1A в ДНК, из тканей молочной железы и яичников, полученных от пяти без онкологических заболеваний в анамнезе доноров, выявлено не было.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ МЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ-СУПРЕССОРОВ... 71
Таблица 1
Олигонуклеотидные праймеры и условия ПЦР, использованные при анализе метилирования промоторных районов генов КЛ8БЕ1А, МЛМ-Ь2 и БЕМЛЗБ методом МЧРА_______________________________________________
Mаркер ^руктура праймеров Тотж/Mg, мЫ Продукт П! IP, п.н.
K1* TGCCCTCTGGACTGGAACCT CCTGAGCCCAGCCCAAGTC б О 445
K2** AGAGTTTGATGGAGTTGGGT CATTCGGTTTGGGTCAATCC б2 “C 1,5 229
RASSF1A GTAAAGCT GGCCTCCAGAAACACGG GCAGCTCAATGAGCTCAGGCTCCCC б5 “C 2,5 357
RARß2 ATTTGAAGGTTAGCAGCCCG CATTCGGTTTGGGTCAATCC 5б “C 1,5 б80
SEMA3B TTGAGAT ATTGGAGTCCACGGGTG CAGTGTTGGCCTGGAAGACCTC 5 О 450
*K1 - контроль полноты гидролиза ДНК, фрагмент гена fí-ЗА-адаптина (ID Gen Bank AF247736.2,); ** K2 - контроль сохранности ДНК, фрагмент экзона 1 гена RARfi2
Taблица 2
Частота и плотность метилирования промоторного района гена КА88Г1А при РМЖ и РЯ по данным МЧРА*
Вид рака Частота метилирования* Плотность метилирования***
Р= 5.9x10 1,0x10-7
PMЖ опухоль 4б/59, 78% 522/828, б3%
норма 21/59, 3б% 151/378, 40%
Р= 1,11x10-9 0,1415
PЯ опухоль 3б/50, 72% 37б/б48, 58%
норма 1 б/50, 12% 1 54/108, 50%
Рассчитано на сновании данных по 59 образцам РМЖ и 50 образцам РЯ. Частота метилирования - доля образцов, в которых выявлено метилирование. Плотность метилирования - доля метилированных СрО-пар локуса в группе исследованных образцов. За 100 % принято произведение числа СрО в локусе на число исследованных образцов, в которых выявлено метилирование.
Рис. 1. Применение метода МЧРА для анализа метилирования промоторного района гена RASSF1A. Электрофоретическое разделения в 2%-ном агарозном геле продуктов ПЦР ДНК до и после (+) гидролиза рестриктазой Ssii. К(—) - отрицательный контроль (в отсутствие ДНК). М- маркер с шагом 100 п.н. (100 bp DNA ladder).
Рис. 2. Схематическое изображение метилирования промоторного района гена ЯАКр2 в 5 образцах РЯ по данным МЧРА. Черный прямоугольник - метилирование выявлено, белый прямоугольник - метилирование не выявлено. Сверху позиции СрО-динуклеотидов; с левого края приведены номера образцов РЯ.
72 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ МЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ-СУПРЕССОРОВ...
Рис. 3. Особенности гена РЛРр2 при первичных опухолях РМЖ и РЯ. Достоверность рассчитана с помощью теста Фишера (Р<0.05).
А: частота метилирования промоторного
СрО-островка (образцы ДНК первичных опухолей РМЖ и РЯ).
Б: связь частоты метилирования с прогрессией опухолей.
Рис. 4 Особенности гена БЕМЛЗБ. Достоверность рассчитана с помощью теста Фишера.
А: частота метилирования дистального промоторного СрО-островка (образцы ДНК первичных опухолей РМЖ и РЯ).
Б: корреляция частоты метилирования с клинической стадией при РМЖ.
В: корреляция плотности метилирования промоторного СрО-островка со степенью анаплазии и с клинической стадией при РМЖ.
Все это позволяет считать метилирование этого гена ранним событием в патогенезе РМЖ и РЯ и может быть использовано как молекулярный маркер злокачественной трансформации. Полученные нами результаты согласуются с литературными данными, указывающими на то, что эпигенетические изменения ДНК в промоторной области гена ЕЛББПА в опухоли возникают раньше, чем структурные изменения ДНК и морфологические изменения в ткани [1; 4; 8; 17].
В нашей работе, выполненной на представительной выборке (59 образцов РМЖ и 50 РЯ), не найдено статистически достоверной зависимости частоты метилирования промоторной области гена ЕЛББПА от стадии, степени анаплазии и метаста-зирования опухолей (р=0,3-1,0, данные не приведены). Отсутствие связи с прогрессией согласуется с заключением о том, что метилирование ЕЛББПА - одно из ранних событий в патогенезе РМЖ и РЯ.
Анализ метилирования промоторного района гена ЯЛЯр2 при РМЖ и РЯ
Методом МЧРА с использованием 3-х метил-чувствительных рестриктаз ИраП, Ssil и Б&'И12361 суммарно тестировали 7 СрО-динуклеотидов (1, 4, 5,
6, 11, 14 и 15, рис. 2). Из них 3 Срв пары исследованы ИраП (1, 11 и 15), 4 и 14 - Б.«1 и 5 и 6 - Б8к12361.
В качестве примера на рис. 2 приведены результаты анализа метилирования 5 парных образцов ДНК РЯ.
Проведенный нами анализ показал (рис. 3, А), что частота метилирования промоторного района гена RARß2 составляет 46 % (27/59) при РМЖ и 30 % (15/50) при РЯ, и статистически достоверно отличается от таковой в гистологически нормальной ткани (р<0,05).
У пациенток с ПМЗО метилирование этого гена выявлено в 67 % (8/12) образцов с поражением молочной железы и у 80 % (4/5) - с поражением яичника. Наличие метилирования промоторной области гена RARß2 в некоторых образцах ДНК гистологически нормальной ткани молочной железы и яичников пациентов, выявляемое с частотой 2-4 % означает, что эта модификация может происходить в начале онкогенеза, предшествуя структурным изменениям в ДНК тканей пациентов. В то же время метилирование промоторного района гена RARß2 в дополнительном контроле обнаружено не было. Нами также была показана связь частоты изменения метилирования про-моторного района гена RARß2 со стадией, степенью анаплазии и размером опухоли при РМЖ (р<0,05) (рис. 3, Б). Другими авторами метилирование промо-торной области данного гена было обнаружено в предраковых образованиях, а частота метилирования возрастала с образованием злокачественных опухолей и с прогрессией заболевания [12; 16].
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ МЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ-СУПРЕССОРОВ... 73
Анализ метилирования
промоторного района гена SEMA3B
при РМЖ и РЯ
Методом МЧРА с использованием 2-х метил-чувствительных рестриктаз Hpail и Ssii было проанализировано 59 парных образцов РМЖ и 50 РЯ. Проведенный анализ показал, что метилирование гена SEMA3B выявляется в 36 % случаев РМЖ (21/59) ив 50 % образцах РЯ (25/50) (рис. 4, А). Кроме того, обнаружено, что промоторная область гена SEMA3B достоверно чаще метилирована в ДНК опухоли, чем в ДНК соответствующей гистологически нормальной ткани той же пациентки (р<0,05) и не было обнаружено в дополнительном контроле.
У пациенток с первичномножественным раком частота метилирования гена SEMA3B в 33 % (4/12) образцов с РМЖ и в 60 % (3/5) образцов с РЯ. Кроме того, показано, что промоторная область гена SEMA3B достоверно чаще метилирована в ДНК опухоли, чем в ДНК гистологически нормальной ткани молочной железы или яичников (р<0,05 по Фишеру) (рис. 4, А). В то же время, метилирование промотор-ного района гена SEMA3B в дополнительном контроле выявлено не было. Эти данные указывают на функциональное значение и специфичность метилирования промоторной области этого гена в онкогенезе изучаемых опухолей. Выявлена достоверная корреляция частоты метилирование промоторного района гена SEMA3B с клинической стадией при РМЖ (р<0,05) (рис. 4, Б). Нами рассчитана плотность метилирования CpG-островка гена SEMA3B (сумма метилированных CpG относительно суммы исследованных CpG в 21 образце ДНК первичных опухолей РМЖ и 25 образцах РЯ, в которых выявлено метилирование). Показана достоверная корреляция плотности метилирования со степенью злокачественности и стадией при РМЖ (р<10-6 по Фишеру; рис. 4, В).
Данные по метилированию гена SEMA3B ранее были получены только для немелкоклеточного рака легкого, раке печени и желчного пузыря и нейробластомы. [19; 20; 21; 22].
Высокая частота метилирования в образцах ДНК опухолей и феномен выявления метилирования в нормальной ткани у пациентов с РМЖ и РЯ (еще до возникновения морфологических изменений) может указывать на связь метилирования гена SEMA3B с началом онкогенеза, что важно для использования этого теста в качестве маркера при комплексной диагностике рака.
Анализ метилирования генов RASSF1A,
RARß2 и SEMA3B в ПМЗО
с РМЖ и/или РЯ
Нами впервые показана значимо более высокая частота метилирования гена RASSF1A при ПМЗО в сравнении с солитарными опухолями. Так, частота метилирования промоторной области гена RASSF1A в ПМЗО при РМЖ составила 90 % (11/12). Причем у 6 пациенток, наблюдался билатеральный РМЖ, а у других 5 - одной из первых опухолей был РМЖ. Метилирование гена RASSfIA также выявлено в 90 % (4/5) среди больных с ПМЗО, у которых одной из первых опухолей был рак яичников. Для всех пациенток с ПМЗО метилирование гена RASSF1A была найдено и в гистологически нормальной ткани. Метилирование гена RARß2 выявлено в 67 % (8/12) образцов с поражением молочной железы и у 80 % (4/5) - с поражением яичника. У пациенток с первично-множественным раком частота метилирования гена SEMA3B обнаружена в 33 % (4/12) образцов с РМЖ и в 60 % (3/5) образцов с РЯ. Таким образом, показано повышение частоты метилирования в ПМЗО и с РМЖ, и с РЯ у всех 3 исследованных генов супрессоров по сравнению с данными, представленными в табл. 2 и на рис.
3, А и 4, А. Причем частота метилирования гена RARß2 при ПМЗО с РЯ была достоверно выше (р=0,0434), чем при обычном РЯ. В литературе высокая частота метилирования при первичномножественном раке также была выявлена при изучении плоскоклеточного рака полости рта [11].
Заключение
Изучение статуса метилирования генов RASSF1A, RARß2 и SeMA3B показало, что эпигенетическое изменение промоторных областей этих генов может быть одним из последовательных молекулярных изменений при РМЖ и РЯ, а метилирование RASSF1A и RARß2 коррелирует с тенденцией к развитию ПМЗО в молочной железе и яичниках. Возможно, метилирование ДНК является одной из причин возникновения ПМЗО у пациенток с РМЖ и РЯ. Выявленные особенности эпигенетических изменений генов RASSF1A, RARß2 и SEMA3B могут быть использованы, как с целью ранней диагностики РМЖ (RASSF1A), так и в качестве новых прогностических тестов (SEMA3B и RARß2), и позволят выделить группы риска больных по развитию РМЖ и РЯ, как солитарных, так и ПМЗО.
Литература
1. Брага Э.А., Киселев Л.Л., Забаровский Е.Р. От идентификации геномных полиморфизмов к диагностическим и прогностическим маркерам эпителиальных опухолей человека // Молекулярная Биология. - 2004. - 38. - С. 179-90.
2. Имянитов Е.Н., Хансон К.П. Молекулярная онкология: клинические аспекты. - Санкт-Петербург, 2007. - 211 с.
3. Казубская Т.П., Белев Н.Ф, Нефедов М.Д. и др. Клинико-генетический анализ первично множественных злокачественных новообразований //Российский онкологический журнал. - 2007. - № 2. - С. 4-9.
4. Логинов В.И., Малюкова А.В., Серегин Ю.А. и др. Уровень метилирования гена RASSF1A в эпителиальных опухолях почки, молочной железы и яичников // Молекулярная биология. - 2004. - № 38. -
С. 654-67.
5. Попова Т.Н. Федоров В.Э., Харитонов Б.С. Первично-множественные синхронные злокачественные новообразования пищеварительной системы // Медицинский альманах. - 2011. - № 5. - С. 76-9.
6. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2010 г. под ред. М.И. Давыдова, Е.М. Аксель // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. - 2011. - Т. 19 (прил. 1).
7. Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2010 году (заболеваемость и смертность). М.: ФГБУ «МНИОИ им. П. А. Герцена» Минздравсоцразвития России, 2012. - 260 с.
8. Angeloni D. Molecular analysis of deletions in human chromosome 3p21 and the role of resident cancer genes in disease // Brief. Funct. Genomic Proteomic. - 2007. - 6(1). - P. 19-39.
9. Belinsky S.A., Nikula K.J., Palmisano W.A. et al. Aberrant methylation of p16 (INK4a) is an early event in
lung cancer and potential biomarker for early diagnosis // Proc Natl Acad Sci USA. - 1998. - 95(20). - P.
11891-6.
10. Capen CC. Mechanisms of hormone-mediated carcinogenesis of the ovary // Toxicol Pathol. - 2004. -32(Suppl 2). - P. 1-5.
11. Czerninski R., Krichevsky S., Ashhab Y. et al. Promoter hypermethylation of mismatch repair genes, hMLHl and hMSH2 in oral squamous cell carcinoma // Oral Diseases Oral Dis. - 2009. - 15(3). - P. 206-13.
12. Feng W., Shen L., Wen S. et al. Correlation between CpG methylation profiles and hormone receptor status in breast cancers // Breast Cancer Res. - 2007. - 9(4). - P. 1-13.
13. Dammann R., Schagdarsurengin U., Seidel C. et al. The tumor suppressor RASSF1A in human carcinogenesis: an update // Histol Histopathol. - 2005. - 20(2). - P. 645-66.
14. Dammann R., Li C., Yoon J.H. et al. Epigenetic inactivation of a RAS association domain family protein from the lung tumour suppressor locus 3p21.3 // Nat Genet 2000. - 25. - P. 315-9.
15. Gadducci A., Cosio S., Gargini A., Genazzani A.R. Review Sex-steroid hormones, gonadotropin and ovarian carcinogenesis: a review of epidemiological and experimental data. Review// Gynecol Endocrinol. - 2004. -
4. - P. 216-28.
16. Jing F., Yuping W., Yong C. et al. CpG island methylator phenotype of multigene in serum of sporadic breast carcinoma // Tumour Biol. - 2010. - 4. - P. 321-31.
17. Kuroki T., Trapasso F., Yendamuri S. et al. Allelic loss on chromosome 3p21.3 and promoter hypermethylation of Semaphorin 3B in non-small cell lung cancer // Cancer Res. - 2003. - 63. - P. 3352-5.
18. Lerman M.I., Minna J.D. The 630-kb lung cancer homozygous deletion region on human chromosome 3p21.3: identification and evaluation of the resident candidate tumor suppressor genes. The International Lung Cancer Chromosome 3p21.3 Tumor Suppressor Gene Consortium // Cancer Res. - 2000. - 60(21). -P. 6116-33.
19. Marsit C.J., Houseman E.A.,Christensen B.C. et al. Examination of a CpG island methylator phenotype and implications of methylation profiles in solid tumors // Cancer Res. - 2006. - 66(21). - P. 10621-29.
20. Nair P.N., McArdle L., Cornell J. et al. High-resolution analysis of 3p deletion in neuroblastoma and differential methylation of the SEMA3B tumor suppressor gene // Cancer Genet. Cytogenet. - 2007. - 174. - P. 100-10.
21. Riquelme E., Tang M., Baez S. et al. Frequent epigenetic inactivation of chromosome 3p candidate tumor suppressor genes in gallbladder carcinoma // Cancer Lett. - 2007. - 250. - P. 100-6.
22. Tischoff I., Markwarth A., Witzigmann H. et al. Allele loss and epigenetic inactivation of 3p21.3 in malignant liver tumors // Int. J. Cancer. - 2005. - 115. - P. 684-9.
23. Weir B.S. Mathematical analysis of DNA sequences // Genome. - 1989. - 31(2). - P. 1093-4.
НАУЧНЫЕ ЖУРНАЛЫ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН
