CC BY
56
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ГИПЕРМЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ RASSF1A... 9
УДК 618.19-006.6-079:577.21.088(470-25) Д.С. Челышева1, A.M. Бурденныи, Д. С. Ходырев3, И.В. Пронина2, И.К. Воротников4, ВД. Ермилова , В.Ю. Сельчук1, Т.П. Казубская4, Э.А. Брага2, В.И. Логинов2 ГИПЕРМЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ RASSF1A
И MGMT КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ МАРКЕРОВ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У ЖЕНЩИН МОСКОВСКОГО РЕГИОНА
1 Московский Государственный Медико-Стоматологический Университет имени А.И. Евдокимова РАМН, Москва 2Научно-Исследовательский институт общей патологии и патофизиологии, Москва 3Центр Биомедицинской технологии ФГБУ ФНКЦ ФМБА России, Москва 4ФГБНУ «Российский онкологический научный центр им. H.H. Блохина» ФАНО, Москва
Контактная информация
Казубская Татьяна Павловна, старший научный сотрудник лаборатории клинической онкогенетики НИИ КО адрес: 115478, Москва, Каширское ш., 24; тел. +7(499)324-26-85 e-mail [email protected]
Статья поступила 20.08.2014, принята к печати 09.08.2014.
Резюме
Изучено метилирование регуляторных участков генов RASSF1A и MGMT в 58 образцах больных раком молочной железы из Московского региона. Впервые показана высокая частота метилирования промоторного района гена MGMT при РМЖ (21%, 12/58). Выявлено, что частота метилирования генов RASSF1A и MGMT существенно выше у пациенток с тройным негативным фенотипом РМЖ (33 против 19% и 40 против 21% соответственно). Установлены значимые корреляции частоты метилирования обоих генов с прогрессией РМЖ (P<0,05, по Фишеру). Все эти данные позволяют рассматривать гены RASSF1A и MGMT как значимые молекулярные маркеры, которые несут информацию для выбора тактики лечения и оценки прогноза заболевания.
Ключевые слова: рак молочной железы, метилирование, ген MGMT, ген RASSF1A.
D.S. Chelysheva1, A.M. Burdennyy2, D.S. Khodyrev3,1.V. Pronina2'4,1.K. Vorotnikov4, V.D. Ermilova , V.Yu. Sel'chuk1, T.P. Kazubskay4, E.A. Braga2, V.I. Loginov2 HYPERMETHYLATION OF RASSF1A AND MGMT AS A POTENTIAL MARKER OF THE BREAST CANCER IN MOSCOW REGION WOMEN
1A.I. Evdokimov Moscow State Medical Dental University
2Research Institute of General Pathology and Pathophysiology, Moscow
3FSC Center of the Federal medical-biological Agency of Russia, Moscow; FSBSI «N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center» FASO, Moscow
Abstract
Methylation of the regulatory sites of RASSF1A and MGMT genes in 58 samples of breast cancer patients from the Moscow region was studied. A high frequency of promoter region methylation of MGMT in breast cancer (21%, 12/58) was shown for the first time. It was revealed that the frequency of methylation of RASSF1A and MGMT genes in the basal breast cancer were strongly increased (33% vs. 19% and 40% vs. 21%, respectively). A significant correlation between the frequency of methylation of both genes with the progression of breast cancer (P<0.05, by Fischer) was established. All these data allows considering these genes as significant molecular markers which carry information for choose of treatment and prognoses of disease.
Key words: breast cancer, methylation, MGMT gene, RASSF1A gene.
Введение
Рак молочной железы является наиболее частой причиной смерти от рака у женщин. Эффективность лечения РМЖ зависит от стадии заболевания, так 10-летняя выживаемость пациенток с I стадией приближается к 70 %, в то время как 5-летняя выживаемость при II и III стадиях составляет 50-60 и 30-40 % соответственно [5]. Инвазивно-протоковый и инвазивно-дольковый являются основными гистологическими типами РМЖ, которые имеют особенности клинического проявления, и как предполагается, имеют специфические молекулярные характеристики, влияющие на патогенез этого заболевания. Особая роль в патогенезе рака отводится эпигенетическим изменениям. Важнейшим механизмом эпигенетической регуляции является метилирование промоторных областей генов-
№ 3/том 13/2014
супрессоров опухолевого роста - это процесс кова-лентного присоединения метильной СН3-группы к основаниям в составе ДНК. Как оказалось, изменение статуса метилирования регуляторных районов генов-супрессоров, является характерной чертой опухолевых клеток [9]. Метилирование промоторных районов этих генов нарушает их взаимодействие с факторами транскрипции, блокируя эти участки с помощью белков, специфично связывающихся с метилированными CpG-парами (Methyl-CpG binding proteins), и, кроме того, вносит изменения в окружающий хроматин, переводя его в стабильно репрессированное состояние [8; 15; 18]. К генам-супрессорам, регулируемых метилированием, относятся RASSF1A (3р21.31) и MGMT (10q26). Белковые продукты генов RASSF1A и MGMT принимают участие в регуляции апоптоза, стабилизации микротрубочек (внутреннего скелета клетки),
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ГИПЕРМЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ RASSF1A...
прямой репарации ДНК в клетке [7; 19]. Метилирование промоторных районов генов RASSF1A и MGMT рассматривается как основной механизм подавления их супрессорной функции при онкоге-незе в опухолях разных локализаций [6; 10] . Однако опубликованные в литературе данные о метилировании этих генов при раке молочной железы противоречивы.
Настоящее исследование направлено на определение статуса метилирования CpG-островков в промоторных районах генов RASSF1A и MGMT при РМЖ и их связь с основными клинико-патологическими проявлениями РМЖ в популяции русских женщин Московского региона.
Материалы и методы
Материалом для исследования служили образцы первичных опухолей от 58 больных РМЖ из Московского региона. Все случаи рака были изучены и гистологически верифицированы анализом операционного материала в патологоанатомическом отделении РОНЦ им. H.H. Блохина и классифицированы по TNM согласно требованиям Международного противоракового союза (UICC, версия 2002 г.). Принципы отбора образцов и выделение высокомолекулярной ДНК описаны ранее [2; 3]. Исследованы парные образцы опухолевой и смежной с ней, гистологически нормальной ткани от 58 пациенток с диагнозом РМЖ (ипРМЖ и идРМЖ) гистологической структуры). В качестве дополнительного контроля использованы ткани молочной железы от 10 женщин независимой контрольной группы, не имевших злокачественных новообразований в анамнезе. Распределение больных в зависимости от стадии заболевания РМЖ и степени злокачественности представлено в табл. 1. Степень злокачественности опухоли определялась в морфологических заключениях больных и представлена в табл. 2. Би-сульфитную конверсию ДНК и МС-ПЦР проводили в модификации авторов [4]. Для анализа метилирования каждого гена использовали две пары прайме-ров, специфичных как к метилированному, так и к неметилированному аллелю (табл. 3). МС-ПЦР проводили в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 67 мМ трис-HCl, pH 8,8; 16,7 мМ (NH4)2SO4; 0,01% Tween-20; 1,5 мМ MgCl2; 0,25 мМ каждого dNTP; 10-20 нг ДНК; 25 пмоль каждого праймера; 0,5 ед. Hot Start Taq-ДНК-полимеразы («СибЭн-зим», Россия).
Праймеры, температура отжига (Тотж) и размеры продукта ПЦР приведены в таблице 3. ПЦР проводили по программе: 95 °С, 2 мин; 35 циклов {92 °С, 10 с; Тотж (табл. 3), 25 с; 72 °С, 25 с}; 72 °С, 3 мин на амплификаторе DNA Engine Dyad Cycler («Bio-Rad», США). Для каждой пары праймеров проверяли отсутствие продукта ПЦР на не конвертированной ДНК.
Образцы ДНК из лейкоцитов крови здоровых доноров использовали как контроль для неметили-рованных аллелей. В качестве позитивного контроля 100%-ного метилирования использовали препараты ДНК из лейкоцитов, обработанные метил-трансферазой SssI («СибЭнзим», Россия). Продукты ПЦР разделяли с помощью электрофореза в 10%-ном полиакриламидном геле (рис. 1).
Статистический анализ проводили с применением точного критерия Фишера. Уровень значимости принят равным 0,05. Расчеты проводили в системе для статистического анализа данных STATISTICA6.1 RUS.
Результаты и обсуждение
В работе исследована роль аберрантного метилирования в развитии инвазивно-протокового и инвазивно-долькового РМЖ. Анализ метилирования CpG-островков, расположенных в промоторных областях генов RASSF1A и MGMT, проводился с помощью МС-ПЦР. Для обоих исследованных генов обнаружены более частые случаи метилирования в образцах опухолевой ткани, чем в образцах условно нормальной ткани молочной железы. Причем при анализе полной выборки РМЖ различия статистически значимы, а именно, Р<0,05 по Фишеру, а именно - для RASSF1A Р=0,002, для MGMT Р=0,001 (табл. 4). Интересно отметить, что при раздельном анализе данных пациенток идРМЖ и ипРМЖ оказалось, что для гена RASSF1A статистически достоверное различие выявлено только у пациенток с идРМЖ (P = 0,035, табл. 4). В то же время метилирование гена MGMT было значимо более частым в опухоли по сравнению с условной нормой только у больных с ипРМЖ (P = 0,015, табл. 4).
Следует отметить, что анализ образцов ДНК тканей молочной железы десяти независимых женщин без злокачественных опухолей в анамнезе показал полное отсутствие метилирования этих генов (табл. 4). Полученные данные свидетельствуют о том, что аберрантное метилирование генов RASSF1A и MGMT вовлечено в возникновение рака молочной железы и является ранним событием в патогенезе этого заболевания.
Метилирование промоторных районов генов RASSF1A и MGMT по опубликованным данным разных авторов, противоречивы. При РМЖ они варьируют в широких пределах, от 19 до 87 % для гена RASSF1A и от 35 До17 % для гена MGMT [11; 13; 20]. Определённая в настоящем исследовании частота метилирования гена RASSF1A при РМЖ весьма близка или совпадает с данными последних публикаций [14; 17]. Интересной особенностью женщин московского региона является значительное повышение частоты метилирования гена MGMT при РМЖ до 21% по сравнению с данными (8%) аналогичной частоты при раке легкого [1].
Следует отметить, что частоты метилирования генов RASSF1A и MGMT у больных идРМЖ в данной работе определены впервые (табл. 4). Для больных ипРМЖ частоты метилирования составили 11 и 18% соответственно, что в 8 раз ниже для гена RASSF1A и в 2 раза выше для гена MGMT по сравнению с данными мировых исследований (85 и 9% соответственно) [16].
Чрезвычайно высокая гетерогенность РМЖ делает принципиально важным изучение и сопоставление молекулярно-генетических изменений и клинико-прогностических параметров этого заболевания. В данной работе были исследованы возможные корреляции между частотами метилирования генов с основными клинико-морфологичес-кими характеристиками РМЖ, такими как размер опухоли, стадия заболевания, степень дифференци-ровки опухоли и метастазирование (рис. 2). Важно и то, что частота метилирования MGMT и RASSF1A статистически значимо коррелирует с размером опухоли (Р=2*10-6 и Р=0,035, соответственно). Данная зависимость сохраняется при анализе ипРМЖ. Частота метилирования гена RASSF1A с переходом от ранних (I + II) к более поздним (III + IV) клиническим стадиям РМЖ статистически значимо увеличивается (14%, 7/50 против 50%, 4/8, P = 0,035, рис. 2).
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
10
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ГИПЕРМЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ RASSF1A... | 11
Таблица 1
Стадия
идРМЖ (абс./%) ипРМЖ(абс./%)
T1N0M0 5/,8,6% 6/10,3%
T2N0M0 4/6,9% 15/25,9%
T1N1M0 - 3/5,2%
n2n1m0 3/5,2% 10/17,2%
n2n1m1 1/1,7% -
T4N0M0 1/1,7% 3/5,2%
T3N0M0 - 1/1,7%
T3N1M0 - 1/1,7%
T3N2M0 - 2/3,4%
t4n1m0 - 1/1.7%
n4n2m0 - 1/1,7%
n4n1m1 1/1,7% -
Всего 15/25,9% 43/74,1%
Таблица 2
Распределение пациенток в зависимости от степени злокачественности опухоли_
Степень злокачественности опухоли Стадия опухолевого процесса идРМЖ/ипРМЖ
I II III IV Всего (абс.)
I -/3 1/- 4
II 4/3 2/19 -/2 30
III 1/ 4/12 1/4 1/- 23
Таблица 3
Нуклеиновые последовательности праймеров и условия МС-ПЦР___
Обозначения праймеров* Структура праймеров (5'-3') T / A ОТЖ/ Mg, MM Размер продукта п.н. Ссылка
MGMT-M F: tttcgacgttcgtaggttttcgc R: gcactcttccgaaaacgaaacg 660C/ 2,0 81 [13]
MGMT-U F: tttgtgttttgatgtttgtaggtttttgt R: aactccacactcttccaaaaacaaaac 66°C/ 2,0 93
RASSF1A-M F: gggttttgcgagagcgcg R: gctaacaaacgcgaaccg 64° С/ 1,5 169 [12]
RASSF1A-U F: ggttttgtgagagtgtgtttag R: cactaacaaacacaaaccaaac 580C/ 1,5 170
* m, methylated - специфичный к метилированному аллелю; u, unmethylated - специфичный к неметилированному аллелю.
Таблица 4
Гистологические типы РМЖ RASSF1A MGMT Доноры**
Опухоль Норма р* Опухоль Норма р*
Неуточненный 11/58, 19% 0/58, 0% 0,002 12/58, 21% 0/58, 0% 0,00097 0/10, 0%
Инвазивно-протоковый 5/44, 11% 0/44, 0% P > 0,05 8/44, 18% 0/44, 0% 0,015 0/10, 0%
Инвазивно -дольковый 6/14, 43% 0/14, 0% 0,035 4/14, 29% 0/14, 0% P > 0,05 0/10, 0%
*Р — достоверность различия частоты метилирования исследованных генов в ДНК опухоли и условно нормальной ткани того же пациента; рассчитана по Фишеру; **Доноры - образцы ДНК ткани молочной железы от 10 независимых здоровых женщин, без онкопатологии в анамнезе
Частота метилирования гена МОМТ также статистически значимо увеличивается от ранних к более поздним клиническим стадиям (8%, 4/50 против 100%, 8/8, Р = 2х10-6 (рис. 2). Отметим, что эта зависимость более чётко проявляется у гена МОМТ. Кроме того, на более поздних стадиях онкологического процесса статистически значимо увеличивается частота метилирования и гена КЛББПЛ, и гена МОМТ при анализе данных пациенток с ипРМЖ (рис. 2). Для обоих генов выявлена значимая корреляция частоты метилирования с потерей дифференцировки опухоли (рис. 2). Так, для гена МОМТ показано значимое по-
№ 3/том 13/2014
вышение частоты метилирования с потерей дифференцировки у всех больных в выборке РМЖ: в высоко- и умеренно дифференцированных опухолях - 6 (2/35) против 43% (10/23) в низкодифференцирован-ных опухолях (Р= 0,0008). Аналогичная зависимость (хотя менее достоверная) прослеживается при инва-зивно-протоковом РМЖ (Р = 0,019, см. рис. 2). Для гена ЯЛББПЛ также выявлена более значимая корреляция частоты метилирования с потерей дифференцировки опухоли при анализе полной выборки РМЖ (Р = 0,004), хотя корреляция достаточно значима и при анализе образцов ипРМЖ (Р =0,05),см. рис. 2.
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
*
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ГИПЕРМЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ RASSF1A...
Рис. 1. Амплификация продуктов МСП геиов RASSF1A и MGMT в парных (опухоль/норма - О/Н) образцах первичных опухолей РМЖ. Условия МСП и размеры продуктов приведены в материалах и методах (табл. 3) Обозначение "m" (methylated) указывает на продукт ПЦР, полученный с использованием праймеров, специфичных к метилированномуаллелю, a "u" (unmethylated) - полученный с использованием праймеров, специфичных к неметилированномуаллелю. L - продукты МСП на образце ДНК из лейкоцитов крови здоровых доноров; SssI -продукты МСП на образце ДНК из лейкоцитов здоровых доноров, обработанном мeтилтpaнcфepaзoйSssI ("Си-бЭнзим", Россия); H2O - отрицательный контроль, продукты МСП, полученные в отсутствие образца ДНК.
Рис. 2. Корреляция частоты метилирования генов ЫОЫТ и ЯА88ПА с параметрами прогрессии РМЖ и его основным гистологических подтипов: ипРМЖ - со стадией, степенью анаплазии, размером опухоли, наличием метастазов, тройным негативным фенотипом. Достоверность рассчитана с помощью теста Фишера.
№ 3/тпм 13/2014
РОССИЙСКИЙ КИОТКРАИГЛТИЧКСКИЙ ЖУРНАЛ
RRG 3 2014 inrlrl 12
15 10 2014 14'27'24
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ГИПЕРМЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ RASSF1A... 1 13
Корреляция частоты метилирования этих генов с образованием метастазов в регионарных лимфоузлах или отдаленных органах не выявлена.
Кроме того, проведено изучение изменения частоты метилирования генов КАББПА и ЫОМТ в зависимости от иммуно-гистохимического статуса опухоли.
Было показано, что в одной из самых неблагоприятно протекающих форм РМЖ, тройном негативном раке (РЭ-, РП- и ИЕЯ-2/пеи-), происходит увеличение частоты метилирования обоих генов (33 (5/15) и 40% (6/15) соответственно). Однако статистически значимое различие показано только для выборки образцов ипРМЖ (36; 4/11, против 3%; 1/33, Р = 0,01, рис. 2). Обращает на себя внимание то, что полученные результаты согласуются с данными других исследователей [12; 21].
Из полученных данных следует, что гипер-метилрование этих генов вовлечено в патогенез РМЖ и коррелирует с плохим прогнозом заболевания. Все это позволяет рассматривать гены ЯАББПА и МОМТ как молекулярные маркеры неблагоприятного прогноза [21].
Заключение
Таким образом, в настоящей работе впервые изучено метилирование промоторных районов генов МОМТ и ЯАББПА у больных РМЖ, проживающих в Московском регионе. Показана высокая частота метилирования изученных генов в эпителиальных опухолях молочной железы по сравнению с парной гистологически нормальной тканью от тех же пациенток. В проведенном исследовании выявлены значимые корреляции частоты метилирования генов ЯАББПА и МОМТ с различными клинико-морфологическими характеристиками злокачественного процесса. Впервые показана связь метилирования промоторных районов этих генов с тройным негативным фенотипом при ипРМЖ у жительниц московского региона.
Выявленные изменения метилирования ДНК, затрагивающие гены МОМТ и ЯАББПА, могут быть применены для клинической разработки современных подходов к прогнозированию и выбору тактики лечения РМЖ у пациенток московского региона.
Работа выполнена при поддержке Российского Научного Фонда - Проект № 14-15-000654.
Литература
1. Землякова В.В., Жевлова А.И., Зборовская И.Б. и др. Профиль метилирования некоторых генов-супрессоров опухолевого роста при немелкоклеточном раке легкого //Молекулярная биология. - 2003.
- T. 37, № 6. - С. 983-8.
Казубская Т.П., Ходырев Д. С., Пронина И.В. и др. Метилирование генов-супрессоров в эпителиальных опухолях молочной железы и яичников, включая первично-множественные // Российский Биотерапевтический Журнал. - 2011. - Т. 11, № 1. - С. 69-75.
Логинов В.И., Базов В.И., Ходырев Д. С. и др. Районы потенциальных генов-супрессоров эпителиальных опухолей почки, молочной железы и яичников на хромосоме 3 человека // Генетика. - 2008. - № 44. -С. 250-6.
Логинов В.И., Малюкова А.В., Серегин Ю.А. и др. Уровень метилирования гена RASSF1A в эпителиальных опухолях почки, молочной железы и яичников // Молекулярная биология. - 2004. - № 8. - С. 654-67.
Рак молочной железы. - Под ред. У.И.Чен, Э.Уордли; ред. серии А.Т.Скарин. - М: Рид Элсивер, 2009. AbouzeidH.E., Kassem A.M., Abdel Wahab A.H. et al. Promoter hypermethylation of RASSF1A, MGMT, and HIC-1 genes in benign and malignant colorectal tumors //Tumour Biol. - 2011. - 32(5). - P. 845-52. Agathanggelou A., Cooper W.N., Latif F. Role of the Ras-association domain family 1 tumor suppressor gene in human cancers // Cancer Res. - 2005. - 65(9). - P. 3497-508.
Bird A. DNA methylation patterns and epigenetic memory //Genes Dev. - 2002. - 16. - P. 6-21. Buganim Y., Rotter V. p53: balancing tumour suppression and implications for the clinic // Eur J Cancer. -2009. - 45. - P. 217-34.
Dammann R., Schagdarsurengin U., Seidel C. et al. The tumor suppressor RASSF1A in human carcinogenesis: an update //Histol Histopathol. - 2005. - 20(2). - P. 645-63.
Esteller M., Hamilton S.R., Burger P.C. et al. Inactivation of the DNA repair gene O6-methylguanine-DNA methyltransferase by promoter hypermethylation is a common event in primary human neoplasia //Cancer Res.
- 1999. - 59(4). - P. 793-7.
Feng W., Shen L., Wen S. et al. Correlation between CpG methylation profiles and hormone receptor status in breast cancers // Breast Cancer Res. - 2007. - 9. - P. 57.
Jiang Y., Cui L., Chen W.D. et al. The prognostic role of RASSF1A promoter methylation in breast cancer: a meta-analysis of published data // PLoS One. - 2012. - 7(5). - P. 36780.
Kajabova V., Smolkova B., Zmetakova I. et al. RASSF1A promoter methylation levels positively correlate with Estrogen Receptor expression in Breast Cancer patients // Transl Oncol. - 2013. - 6(3). - P. 297-304. Koutsimpelas D., Pongsapich W., Heinrich U. et al. Promoter methylation of MGMT, MLH1 and RASSF1A tumor suppressor genes in head and neck squamous cell carcinoma: pharmacological genome demethylation reduces proliferation of head and neck squamous carcinoma cells // Oncol Rep. - 2012. - 27(4). - P. 1135-41.
16. Muggerud A.A., Ronneberg J.A., Warnberg F. et al. Frequent aberrant DNA methylation of ABCB1, FOXC1, PPP2R2B and PTEN in ductal carcinoma in situ and early invasive breast cancer // Breast Cancer Res. - 2010.
- 12(1). - P. 3.
17. Pfeifer G.P., Dammann R., Tommasi S. RASSF proteins // Curr Biol. - 2010. - 20(8). - P. 344-5.
18. Prokhortchouk E., Hendrich B. Methyl-CpG binding proteins and cancer: are MeCpGs more important than MBDs // Oncogene. - 2002. - 21. - P. 5394-9.
19. Sato A., Sunayama J., Matsuda K.I. MEK-ERK signaling dictates DNA-repair gene MGMT expression and temozolomide resistance of stem-like glioblastoma cells via the MDM2-p53 axis // Stem Cells. - 2011. -29(12). - P. 1942-51.
2.
3.
4.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
№ 3/tom 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
14 | ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ГИПЕРМЕТИЛИРОВАНИЕ ГЕНОВ RASSF1A...
20. Sharma G., Mirza S., Parshad R. et al. Clinical significance of promoter hypermethylation of DNA repair genes in tumor and serum DNA in invasive ductal breast carcinoma patients // Life Sci. - 2010. - 87(3-4). - P. 83-91.
21. Xu J., Shetty P.B., Feng W. et al. Methylation of HIN-1, RASSF1A, RIL and CDH13 in breast cancer is associated with clinical characteristics, but only RASSF1A methylation is associated with outcome // BMC Cancer. - 2012. - 12. - P. 243.
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
РП - рецепторы прогестерона
РЭ - рецепторы эстрогенов
РМЖ - рак молочной железы
МС-ПЦР - анализ с использованием метилспецифичной ПЦР
ипРМЖ - инвазивно-протоковый рак молочной железы
идРМЖ - инвазивно-дольковый рак молочной железы
№ 3/том 13/2014
РОССИИСКИИ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИИ ЖУРНАЛ
