Метаболические изменения в плаценте, а также мозге плодов при экспериментальной гипергомоцистеинемии Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

В результате исследования были выделены четыре группы пациенток, АОА которых значимо различались (критерий Манна - Уитни, р < 0,05): пациентки (п = 6) с синдромом пустого фолликула (АОА 7,4 ± 1,8); пациентки (п = 10) с низким качеством эмбриона и пониженной АОА (АОА 11,4 ± 2,5); пациентки (п = 10) с эмбрионом хорошего качества (АОА 21,4 ± 3,8); пациентки (п = 6) с низким качеством эмбриона и повышенной АОА (АОА 33,7 ± 2,9).

Исходя из сопоставления АОА с качеством эмбриона, можно предложить четыре области: 1) зона сильно сниженной антиокси-дантной активности (сильный оксидативный стресс, менее 10 мкМ): для этих пациенток наблюдали синдром пустого фолликула или эмбрионы плохого качества; 2) зона умеренно пониженной антиоксидантной активности (от 10 до 15 мкМ), для которой эмбрионы

также характеризовались плохим качеством; 3) зона нормальной АОА (от 15 до 30 мкМ): у этих пациенток были получены эмбрионы хорошего качества; и 4) зона повышенной АОА (более 30 мкМ, редуктивный стресс): эмбрионы плохого качества.

Выводы

Таким образом, можно предположить, что для успешного развития эмбрионов необходимо оптимальное значение антиоксидант-ной активности в фолликулярной жидкости. Как ее уменьшение (оксидативный стресс), так и увеличение (редуктивный стресс) отрицательно сказывается на качестве эмбриона и исходе ЭКО. Полученные данные находятся в соответствии с современной концепцией (по АЦагап М., 1999) о том, что для успешного развития ооцита требуется оптимальный уровень продукции свободных радикалов.

метаболические изменения в плаценте, а также мозге Плодов при экспериментальной гипергомоцистеинемии

© А.Д. Щербицкая1, Ю.П. Милютина2

1 Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова;

2 ФГБНУ «НИИ акушерства, гинекологии и репродуктологии им. Д.О. Отта», Санкт-Петербург

Актуальность проблемы

Во время внутриутробного периода развития организма формируются системы, определяющие становление механизмов приспособления к условиям внеутробной жизни. Огромное влияние на процесс адаптации к постнатальной жизни оказывает нервная система, состояние которой отражают ее медиаторы и гормоны. К патологическим факторам, способным нарушать механизмы саморегуляции и вызывать стойкие отдаленные последствия, относится пренатальная гипергомоци-стеинемия (ГГЦ). Показано, что ГГЦ матери во время беременности нарушает когнитивные функции потомства. Однако остается нерешенным вопрос, являются ли эти изменения следствием влияния материнского стресса или непосредственного воздействия гомоцистеина (ГЦ) на плод. Несмотря на то что плаценте принадлежит ключевая роль в адаптации материнского организма к беременности, росте и развитии плода, мало известно о том, какие

процессы в плаценте характеризуют ее функциональное состояние. В последнее время внимание исследователей привлекает изучение нейрегулина 1 (ЫКв1), выполняющего нейро-протекторную функцию при развитии плода и новорожденного, также установлено участие этого нейротрофического фактора во взаимоотношении организмов матери и плода.

Цель исследования

Изучить возможные механизмы нарушения формирования ЦНС плода при экспериментальной пренатальной ГГЦ путем исследования некоторых показателей функционального состояния плаценты и мозга плода.

Материалы и методы исследования

Исследование проводили на 22 половозрелых самках крыс линии Вистар. Крысы были разделены на 2 группы: 1) контрольная группа — самки, которым с 4-го дня беременности

ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ

ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017

КИ 1684-0461 ■

до родоразрешения ежедневно через зонд пе-рорально вводили воду; 2) экспериментальная группа — самки, которым ежедневно начиная с 4-го дня беременности до родоразрешения, перорально через зонд вводили метионин. У каждой самки на 14-й день беременности до и через 3 часа после введения метионина или воды осуществлялся забор крови для определения содержания норадреналина и адреналина. Содержание катехоламинов в сыворотке крови беременных крыс определяли методом иммуноферментного анализа с помощью тест-системы Cat Combi ELISA (IBL, Германия). На 20-й день беременности (Е20) у самок были извлечены плоды, плаценты и надпочечники. У плодов был произведен забор ткани мозга. Количественный анализ содержания катехоламинов в надпочечниках матерей проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимическим детектированием. Содержание каспазы 3 и везикулярного транспортера моноаминов 2 в мозге плодов оценивали с помощью имму-ноблоттинга. Содержание NRG1 в плаценте крыс, а также мозге плодов определяли им-муноферментным методом с использованием антител NRG1-ß 1 (NRG1-ß 1 ELISA Kit, RayBiotech, США). Определение удельной активности моноаминоксидазы проводили спектрофотометрически.

Результаты исследования

В мозговой ткани исследуемых эмбрионов на Е20 обнаружено повышение содержания везикулярного транспортера моноаминов 2 (37,79 ± 9,41 у. е. в контрольной группе, 80,60 ± 20,23 у. е. в опытной, р < 0,05), что указывает на то, что предпосылки к нарушению формирования катехоламинергиче-ских систем, наблюдаемые при постнатальной жизни, отмечаются еще в процессе внутриутробного развития. Однако в настоящем исследовании показано, что введение метио-нина не приводит к увеличению содержания катехоламинов в надпочечниках и сыворотке крови матерей, поэтому вышеописанные изменения вряд ли являются следствием проникновения через плаценту материнских

катехоламинов. Негативное влияние прена-тальной ГГЦ на развивающийся мозг также подтверждается полученными нами данными по увеличению содержания протеолити-ческого фермента каспазы 3 в мозге плодов (590,02 ± 41,54 у. е. в подопытной группе, 412,81 ± 48,99 у. е. у контрольных животных, р < 0,05), что указывает на усиление процессов апоптоза. На 20-й день беременности было также обнаружено достоверное снижение активности моноаминоксидазы (МАО), метаболизирующей материнские биогенные амины, у самок с ГГЦ (4,08 ± 0,43 мкМ ки-нурамина/мкг белка • ч) по сравнению с контрольными самками (5,61 ± 0,45 мкМ кину-рамина/мкг белка • ч), р < 0,05. Поскольку серотониновая сигнальная система играет важную роль в поддержании жизнедеятельности трофобластов плаценты и пролиферации клеток плода, защищая их от каспаза-3-зависимого апоптоза, снижение активности МАО может приводить к нарушению как функций самой плаценты, так и развития плода. Также наблюдается снижение содержания ЫКв1 в плаценте матерей, перенесших ГГЦ (2,31 ± 0,14 нг/мкг белка у подопытных животных, 3,01 ± 0,10 нг/мкг белка в контрольной группе крыс). Одновременно с этим отмечено повышение данного показателя в мозге эмбрионов крыс на Е20, перенесших пренатальную ГГЦ (13,8 ± 1,54 нг/мкг белка), по сравнению с контролем (8,27 ± 1,15 нг/мкг белка, р < 0,05), что, вероятно, обусловлено усилением транспорта ЫКв1 из плаценты для защиты нервной системы развивающегося плода.

Выводы

Полученные данные позволяют предположить, что наблюдаемые при внутриутробном развитии метаболические изменения в мозге плода могут быть не только обусловлены прямым воздействием ГЦ, но и возникать в результате нарушения нормального функционального состояния плаценты, в том числе ее барьерной функции, вызванного повышением содержания ГЦ в материнском организме.

■ ЖУРНАЛЪ АКУШЕРСТВА и ЖЕНСКИХЪ БОЛЪЗНЕЙ

ТОМ LXVI СПЕЦВЫПУСК 2017

ISSN 1684-0461