CC BY
24
ребёнка
КлУчна пед1атр1я / Clinical Pediatrics
®
УДК 616.366-003.217 DOI: 10.22141/2224-0551.14.2.2019.165544
Абатуров O.G., БабичВ.Л.
ДЗ «Днпропетровська медична академя Мнстерства охорони здоров'я Укра'/ни», м. Дн!про, Укра/на
Медикаментозна модулящя активност генерацп мкроРНК при функцiональних розладах жовчного Mi/ура та сфiнктеpа Оддi в дггей
For cite: Zdorov'e Rebenka. 2019;14(2):89-95. doi: 10.22141/2224-0551.14.2.2019.165544
Резюме. Актуальтсть. Проблема функцюнальних розладiв жовчного Mixypa та сфтктера Oddi е дуже актуальною в дитячш гастроентерологп. Мета: удосконалення лкування функщональних розладiв жовчного Mixypa та сфтктера Oddi в дтей на niдставi вивчення активностi генерацп мшроРНК. Матерiали та методи. Обстежено 70 дтей 1з функщональними розладами жовчного мixypa та сфтктера Oddi. 50 пaцiентiв отримували стандартну тератю в поеднант з урсодезоксихолевою кислотою у виглядi препарату Укрлв у фоpмi суспензи, а 20пaцiентiв — стандартну тератю безурсодезоксихолевоiкислоти. До початку л^вання й тсля зактчення терапп вуахдтей проведеномолекулярно-генетичне до^дженняз ви-значеннямpiвня експресп мжроРНК-37$, мжроРНК-4311, мжроРНК-4714-3р у сироватц кpовi методом полiмеpaзноi лaнцюговоi реакцп в реальному чаа. Результати. Встановлено, що в дтей Ь функцшнальними розладами жовчного мixypa та сфтктера Oддi тсля терапп урсодезоксихолевою кислотою спостеркалися вipогiдне зниження piвнiв аспартатамтотрансферази з 34,96 ±1,31 н/л до 26,18 ± 0,97 н/л, лужно1' фос-фатази — з 507,92 ± 19,94 н/л до 359,53 ± 16,59 н/л у сироватц кpовi й тдвищення скорочувально1' функци жовчного мixypa з 23,44 ± 1,56% до 45,56 ± 1,68% (р < 0,05). Виявлено, що тсля проведення стандартноi терапп в поеднант з ypсодезоксиxолевою кислотою (Укpлiв® сyспензiя) у дтей iз функщональними розладами жовчного мixypa та сфтктера Oддi piвень експресп мжроРНК-378[ наблизився до 5,23 ± 0,70 УО, що статистично значимо вище, шж до терапп (р < 0,05). На фот проведено'!' стандартно'!' терапп як iз додаванням ypсодезоксиxолевоi кислоти, так i без не1' профыь експресп мiкpоРНК-4714-3p у сироватц кpовi обстеженш дтей 1-i та 2-i груп статистично значимо piзко знизився доpiвня 1,93 ± 0,58 УО та 1,14 ± 0,53 УО вiдповiдно (р < 0,05). Висновки. Отримат результати показали, що тд впливом урсоде-зоксиxолевоi' кислоти в дтей регресують клжко-параклжчт прояви функ^ональнш pозлaдiв жовчного мixypa та сфтктера Oддi. Виявлена уткальна властивсть ypсодезоксиxолевоi кислоти у фоpмi суспензП Укрлв впливати на актившсть генерацп мкроРНК-378/ iмшроРНК-4714-3р, ят е геннимирегуляторами клтиннux меxaнiзмiв, що впливають на експреаю гетв на посттранскрипцшному piвнi. Ключовi слова: функщональт розлади жовчного мixypa та сфтктера Оддг, мкроРНК; ypсодезоксиxо-лева кислота; дти
Вступ
На сучасному етат проблема функщональних розладiв жовчного мгхура й сфшктера Одщ (ФР ЖМ та СФО) е дуже актуальною в дитячш гастроентерологп через значну ix поширешсть i можливють переходу в оргашчну патологго бшарно^ системи [1, 2].
Функщонування жовчного мгхура й сфшктера Одщ здшснюеться завдяки гуморальному впливу
секретину, холецистокшшу [3]. Регуляцiя продукцп вказаних речовин виконуеться мжроРНК [4, 5]. Mi-кроРНК (microRNA, miRNA, miR) — малi некодую-чi молекули РНК довжиною 21—23 нуклеотиди, що регулюють експресго гешв на посттранскрипцшному рiвнi шляхом РНК-штерференцИ [6]. За офь цшними даними, на сьогодш вщомо понад 2500 мь кроРНК людини й приблизно 60 % бшок-кодуючих
© «Здоров'я дитини» / «Здоровье ребенка» / «Child's Health» («idorov'e rebenka»), 2019 © Видавець Заславський О.Ю. / Издатель Заславский А.Ю. / Publisher Zaslavsky O.Yu., 2019
Для кореспонденци: Абатуров Олександр бвгенович, доктор медичних наук, професор, завщувач кафедри педетри 1 та медично!" генетики; ДЗ «Днтропетровська медична академю МОЗ УкраТни», вул. Вернадського, 9, м. Днтро, 49044, УкраТна; e-mail: [email protected]
For correspondence: Olexandr Abaturov, MD, PhD, Professor, Chief of Department of the pediatrics 1 and medical genetics, State Institution «Dnipropetrovsk Medical Academy of Ministry of Health of Ukraine», Vernadsky st., 9, Dnipro, 49044, Ukraine; e-mail: [email protected]
гешв, що виступають мiшенями для мжроРНК [7]. MiKpoPHK опосередковано беруть участь у синтезГ бГлюв, диференцiюваннi клиин, тканин [8].
Останнiми роками з'являеться все бГльше дока-3íb асощащ! посилення або пригнiчення генерацп мжроРНК Í3 порушенням функцiй жовчного мiхура й жовчовивiдного тракту й розвитком захворювань бшарно! системи [8—10], але практично не розро-бленi терапевтичш пГдходи, що дозволили б моду-лювати генерацiю мiкроРНК i, як наслщок, перебiг хвороб. Проведено всебiчний огляд Í3 пошуком ш-формацП з використанням бази даних Scopus, Web of Science, MedLine, PubMed, Google Scholar [11] i виявлено, що урсодезоксихолева кислота (УДХК) може змшювати активнiсть генерацП деяких мь кроРНК при рiзних захворюваннях гепатобшарно! системи.
Результати численних наукових дослГджень де-монструють позитивний терапевтичний вплив препарапв урсодезоксихолево! кислоти при захворюваннях гепатобшарно! системи, обумовлений гепатопротекторним, холеретичним, лiтолiтичним, антифiбротичним, антиапоптотичним, цитопротек-тивним, iмуномодулюючим ефектами [12—14]. Од-нак дотепер не визначено вплив препарапв УДХК на профГль експресГ! мiкроРНК при функцiональних розладах жовчного мГхура та сфiнктера Одад в дГгей.
Мета роботи: удосконалення лГкування функцю-нальних розладiв жовчного мГхура та сфiнктера Одад в дггей на пiдставi вивчення активностi генеращ! мi-кроРНК.
Матерiали та методи
На базi КЗ «Дншропетровська мiська дитяча клтчна лiкарня № 1» ДОР м. Дншра проведено комплексне обстеження 90 дiтей вжом вщ 4 до 13 роив. Пд час кишко-анамнестичного дослщжен-ня в 70 пацieнтiв виявляли наявнiсть клшГчних ознак функцiональних розладiв жовчного мiхура та сфiнктера Одад згщно з Римською класифiкацieю функщональних розладГв травления IV (2016) [15]. Верифжацго дiагнозу й надання медично! допомо-ги пацieнтам проводили вщповщно до наказу МОЗ Укра!ни вщ 29.01.2013 № 59 «Про затвердження унiфiкованих клшГчних протоколГв медично! допо-моги дГтям Гз захворюваннями оргашв травлення» [2]. Наукове дослГдження проводилось вщповщно до принцитв Гельсшсько! декларацГ! й за наявностГ шформовано! згоди з боку батьюв або ошкушв па-цГентГв.
ПацГенти з функщональними розладами жовчного мГхура та сфшктера Одад методом просто! рандомГзацГ! були подГленГ на двГ групи. 1-шу (осно-вну) групу становили 50 пащенив Гз функщональ-ними розладами жовчного мiхура та сфшктера ОддГ, яю отримували стандартну тератю згщно з положеннями наказу МОЗ Укра!ни вГд 29.01.2013 № 59 у поеднант з прийомом урсодезоксихолево! кислоти, що призначалася з розрахунку 10— 15 мг/кг/добу. УДХК призначали у виглящ препа-
рату Укрлiв® у формi суспензп. До 2-í групи (групи порiвняння) увiйшло 20 пацieнтiв Í3 функщональ-ними розладами жовчного мiхура та сфшктера Одщ, якi отримували стандартну тератю згщно з поло-женнями наказу МОЗ Украши вщ 29.01.2013 № 59 без призначення урсодезоксихолево! кислоти. Курс л^вання становив 4 тижш. На пiдставi динамiки скарг, об'ективних даних, результатiв бiохiмiчних, iнструментальних методiв дослiдження дiтям 1-í та 2-í груп пiсля завершення курсу комплексно! терапп проводилась оцiнка ефективностi лжування.
До початку лiкування й тсля закiнчення терапп в дiтей 1-í та 2-í груп проведено молекулярно-ге-нетичне дослщження з визначенням рiвня експре-сй мiкроРНК-378f, мiкроРНК-4311, мжроРНК-4714-3p у сироватцi кровi методом полiмеразноí ланцюгово! реакцíí в реальному час зi зворотною транскрипцieю згщно з протоколом TaqMan Gene Expression Assays у сертифжованш лабораторп вщ-дшу загально! й молекулярно! патофiзюлогii 1нсти-туту фiзiологlí iм. О.О. Богомольця НАН Украши (директор — д.м.н., професор О.О. Кришталь). Дослщження включало таю етапи:
1. Видшення тотально! РНК iз первинного мате-рiалу (сироватки кровi).
2. Видшення ДНК iз первинного матерiалу (сироватки кровi).
3. Зворотна транскрипц1я.
4. Полiмеразна ланцюгова реакцiя.
5. Рестрикцiйний аналiз.
6. Полiмеразно-ланцюгова реакцiя у реальному часi.
7. Розрахунок кшькосп молекул амплiфiкату й побудова калiбрувальноí криво'!. Приклад калiбру-вально! криво! подано на рис. 1.
Статистичний аналiз отриманих результапв проводили iз застосуванням пакета прикладних про-грам Statistica 6.1 (№ AGAR909E415822FA) за допо-могою персонального комп'ютера на базi процесора Intel Pentium 4. Залежно вщ результату перевiрки застосовувались параметричнi й непараметричш
Рисунок 1. Граф1чне зображення р1вня експресИ мкроРНК-4311 i контрольного гена
методи статистики. Вiдмiнностi м1ж ознаками, що порiвнювались, для всiх видiв аналiзу вважались статистично значущими при р < 0,05.
Результати
У сформованих нами групах спостереження за вжовою структурою статистично значимих вщ-мшностей визначено не було. Середнiй вж дiтей, якi отримували стандартну тератю в поеднант з урсодезоксихолевою кислотою (Укрлiв® суспенз1я), становив 7,82 ± 0,37 року, без урсодезоксихолево! кислоти — 9,80 ± 0,48 року (р > 0,05). За гендерною ознакою пацiенти першо! та друго! груп спостереження також не вщр1знялись (р > 0,05). Визначено, що в бшьшосп обстежених дггей (74,3 %) клiнiчнi ознаки ФР ЖМ та СФО були виявлеш повторно. Тривалють захворювання в обох групах пащенпв становила вщ 1 до 5 роюв. Отже, сформоваш групи дослiдження статистично не вiдрiзнялись i були по-рiвнянними.
С'мейна спадковсть i захворювання бшарно! системи
Визначено наявшсть захворювань гепатобшар-но! системи у родичiв обстежених дiтей. Спадкуван-ня ФР ЖМ та СФО вщбулося як по материнськш, так i по батькiвськiй лшп в обох групах спостереження з майже однаковою частотою (42 (60 %) i 36 (51,4 %) вщповщно; р > 0,05). Обтяжена спадко-вiсть за жовчнокам'яною хворобою спостерпала-ся в 7 (10 %) випадках по материнськш лшп та 10 (14,3 %) — по батьювськш лшп спорщненосп пащ-ентiв обох груп дослiдження (р > 0,05).
Таблиця 1. Результати клiнiчного дослдження дтей ¡з функцональними розладами жовчного м1хура
та сф1нктера Одд! до i тсля л '!кування, п (%)
КШШЧШ симптоми Дiти, якi отримували УДХК (n = 50) Дгги, як не отримували УДХК (n = 20)
До лiкування Шсля лшування До лжування Шсля лжування
Больовий абдом'шальний синдром
Бть у правому пщребер'!' 9 (18) - 4 (20) 6 (30)
Бть в етгастральнш дтянц та правому пщребер'! 28 (56) 2 (4)* 13 (65) -
Бть у навколопупковш дтянц 13 (26) - 3 (15) 1 (5)
Болючють у правому пщребер'! при пальпаци живота 42 (84) 7 (14)* 18 (90) 8 (40)
Позитивний симптом Кера 50 (100) 6 (12)* 20 (100) 20 (100)
Позитивний симптом Мерфi 38 (76) 6 (12)* 16 (80) 5 (25)*
Диспептичний синдром
Нудота 22 (44) - 8 (40) 3 (15)
Знижений апетит 26 (52) - 9 (45) 3 (15)*
ВЩрижка гiрким 11 (22) - 4 (20) -
Нестшш випорожнення 23 (46) - 5 (25) -
Астеновегетативний синдром
Знижена працездатнють, пщви-щена стомлюванiсть, загальна слабшсть 34 (68) 9 (18)* 14 (70) 11 (55)
Примтка: * — р < 0,05 — в1рогщна вщм1нн1сть вщ значення параметра до л'!кування.
Чинники, що сприяють початку
або загостренню клнчного nepeöiry ФР ЖМ
та СФО в дтей
Чинниками, що сприяють початку або загостренню nepe6iry захворювання у пащенпв i3 ФР ЖМ та СФО, були порушення режиму харчування, психоемоцшне навантаження, гiподинамiчний спо-ci6 життя та наявшсть вогнищ хронiчноï шфекцп Частота реестрацИ зазначених сприяючих факторiв серед дiтей першоï й дрyгоï груп спостереження статистично не вг^знялась (р > 0,05) (рис. 2).
Рисунок 2. Чинники, що сприяють початку або загостренню клiнiчного переб'1гу функцюнальних розладв жовчного м '1хура та сфнктера Одд1 в обстежених дтей
Динамка клнчних прояв1в ФР ЖМ та СФО
На початку спостереження пащенти з ФР ЖМ та СФО основно! групи та групи порГвняння скаржжи-лися на абдомiнальний бшарний бiль рiзного сту-пеня штенсивносп, диспептичнi прояви, зниження розумово! й фiзичноï працездатностi, пiдвищення втомлюваностi. Динамжа клiнiчних проявiв у дiтей i3 ФР ЖМ та СФО на фон прийому уДхК (Укрлiв® суспензiя) порiвняно з дiтьми, якi отримували лише стандартну тератю, подана в табл. 1.
У дггей основноï групи тсля проведеноï терапИ визначено повне зникнення або статистично зна-чиме зменшення ознак больового абдомшального синдрому, повну вiдсутнiсть диспептичних проявiв i вiрогiдне зменшення симптомiв астеновегетативно-го синдрому, на той час як у пащенпв групи порГв-няння зберiгаються ознаки вищевказаних клтчних синдромiв функцiональних розладiв жовчного мГху-ра та сфiнктера Одад.
Динамка показниюв 6ioxiMi4Hoï гепатограми при ФР ЖМ та СФО
Показники бiоxiмiчноï гепатограми в дггей iз ФР ЖМ та СФО основноï групи й групи порГвняння до лжування статистично не вщрГзнялись (р > 0,05), але динамжа вказаних показниюв тсля проведення стандартноï терапИ з використанням УДХК i без ни мае вГрогщт вщмшносп (табл. 2).
При дослщженш динамiки бюх1мГчних показниюв тсля проведення комплексно! терапИ з дода-ванням УДХК (УкрлГв® суспензiя) в обстежених дь тей виявлено вГрогщно значиме зниження маркерГв
холестазу, а саме рГвня аспартатамшотрансферази й лужноï фосфатази в сироватщ кровь
Динамка скоротливост при випорожненнi жовчного м'хура при ФР ЖМ та сФо
У пащенпв обох груп на початку спостереження за даними трансабдомiнальноï ультрасонографИ за-реестровано значне зменшення динамiчноï скорот-ливосп при випорожжнент жовчного мгхура (табл. 3).
АналГз динамжи евакуаторно'ï функцИ бiлiарноï системи при ФР ЖМ та СФО до та тсля лГкування виявив вГрогщне пщвищення скорочувальноï функ-цп жовчного мгхура у дггей основноï групи тсля курсу терапИ УДХК.
Динамка експресп мкроРНК у сироватц кров '! при ФР ЖМ i СФО
Результати молекулярно-генетичного досль дження сироватки кровГ в обстежених дггей до та тсля лжування подано в табл. 4.
Так, за нашими даними, при дослщженш рГв-ня експресИ мжроРНК-378^ мжроРНК-4311, мжроРНК-4714-3р у сироватщ кровГ дгтей Гз ФР ЖМ та СФО до лжування виявлено, що показники основноï групи й групи порГвняння м1ж собою статистично не вГдрГзнялись (р > 0,05).
Кореляцшний аналГз встановив, що рГвень експресп мжроРНК-4714-3р в обстежених дгтей позитивно корелював зГ зниженням скоротливосп жовчного мГхура за даними УЗД (r = +0,36; р < 0,05).
У результат дослщження виявлено, що на початку спостереження середт показники рГвня екс-
Таблиця 2. Результати 6ioxiMi4Horo дослщження сироватки KpoBi в дтей iз функцональними розладами жовчного Mixypa та сфнктера Одд! до та тсля л'1кування (M ± m)
Бiохiмiчнi показники KpoBi Дгги, як отримували УДХК (n = 50) Дiти, якi не отримували УДХК (n = 20)
До лжування Шсля лiкування До лшування Шсля лiкування
Холестерин, ммоль/л 3,82 ± 0,09 3,51 ± 0,09 3,72 ± 0,15 3,51 ± 0,14
Лужна фосфатаза, н/л 507,92 ± 19,94 359,53 ± 16,59* 542,85 ± 40,95 499,50 ± 40,16
Загальний бЫрубш, мкмоль/л 12,13 ± 0,55 11,55 ± 0,39 13,93 ± 0,93 13,28 ± 0,60
Прямий бЫрубш, мкмоль/л 1,43 ± 0,11 1,35 ± 0,11 1,54 ± 0,19 1,71 ± 0,38
АсАТ, н/л 34,96 ± 1,31 26,18 ± 0,97* 28,20 ± 1,31 29,65 ± 1,66
АлАТ, н/л 18,76 ± 0,91 14,96 ± 0,64 17,35 ± 1,52 15,90 ± 1,22
Примпки: * — р < 0,05 — в'ропдна вщмннсть вщ значення параметра до лкування; АсАТ — аспартат-ам'тотрансфераза; АлАТ — аланнамнотрансфераза.
Таблиця 3. Результати динам'мноï трансабдом'/нальноï ультрасонографп в д'ией iз функцюнальними розладами жовчного м '!хура та сфнктера Одд! до та тсля л'!кування (M ± m)
Показник Д^и, якi отримували УДХК (n = 50) Дiти, якi не отримували УДХК (n = 20)
До лiкування Пiсля лiкування До лшування Шсля лiкування
Скорочувальна функ^я жовчного мiхура, % 23,44 ± 1,56 45,56 ± 1,68 * 23,75 ± 2,29 29,69 ± 2,99
Примтка: * — р < 0,05 — вiрогiдна в '1дм'1нн '1сть вд значення параметра до л'!кування.
Таблиця 4. Результати дослдження р1вня експресп м1кроРНК у сироватц кров1 в дтей ¡з функцюнальними розладами жовчного Mixypa та сфнктера Одд! до та тсля л '!кування, УО (M ± m)
PiBeHb експресп мтроРНК Дiти, якi отримували УДХК (n = 50) Д^и, якi не отримували УДХК (n = 20)
До лжування Пiсля лшування До лшування Пiсля лжування
MiKpoPHK-378f 2,02 ± 0,57 5,23 ± 0,70* 2,08 ± 0,96 4,49 ± 0,79
MiKpoPHK-4311 1,48 ± 0,35 1,17 ± 0,18 1,58 ± 0,47 1,85 ± 0,88
MiKpoPHK-4714-3p 5,56 ± 1,50 1,93 ± 0,58* 4,66 ± 1,57 1,14 ± 0,53*
Примтка: * — р < 0,05 — вipогiднa в 'щм'шшсть вщ значення параметра до л'!кування.
пресИ мжроРНК-378^ мжроРНК-4311, мжроРНК-4714-3p у сироватщ кровi в дгтей основноï групи й групи порiвняння були iдентичними, але динамжа профiлiв активностi мiкроРНК-378f й мжроРНК-4714-3p пiсля проведеноï терапИ суттево вщрГзня-лась (табл. 4). Шсля застосування стандартноï те-рапй у поеднант з прийомом yрсодезоксихолевоï кислоти (Укрлiв® суспенз1я) у дiтей iз ФР ЖМ та СФО рiвень експресп мiкроРНК-378f наблизився до 5,23 ± 0,70 УО, що статистично значимо вище, нГж до терапИ в дiтей цiеï групи (р < 0,05). Тодi як тсля проведення лише стандартноï терапп, без при-йому УДХК, рiвень експресИ мiкроРНК-378f у дiтей групи порiвняння статистично значимо не вщрГз-нявся вщ показника до терапп (р > 0,05).
Щкаво, що на фот проведеноï стандартноï те-рапИ як iз додаванням yрсодезоксихолевоï кислоти, так i без нй профгль експресп мiкроРНК-4714-3p у сироватцi кровi дiтей iз ФР ЖМ та СФО 1-ï та 2-ï груп статистично значимо рiзко знизився до рiвня 1,93 ± 0,58 УО i 1,14 ± 0,53 УО вщповщно (р < 0,05).
Обговорення
У резyльтатi дослщження виявлено, що значну роль у формуванш функщональних розладiв жовчного мiхyра та сфшктера Одад вiдiграють спадковi фактори, порушення режиму харчування, психо-емоцшне навантаження, гiподинамiчний спосiб життя й наявшсть вогнищ хронiчноï шфекцИ. Те-рапевтичну корекцiю фyнкцiональних розладiв 6ï-лiарного тракту в дiтей проведено з урахуванням як причин, що викликали захворювання, так i осо-бливостей клiнiчноï симптоматики захворювання. Виражена позитивна клшчна динамiка пiсля проведення комплексноï терапп з додаванням урсо-дезоксихолево'ï кислоти (Укрлiв® суспенз1я) може свщчити про покращення реолопчних властивос-тей жовчi та зменшення концентрацИ токсичних первинних i вторинних жовчних кислот. Отримаш нами результати змш показникiв бiохiмiчноï гепа-тограми можна пояснити холеретичним впливом УДХК (Укрлiв® сyспензiя) на фiзико-хiмiчнi власти-востi жовчi зi збiльшенням ïï гiдрофiльностi. Аналiз динамiки скоротливостi жовчного мiхyра до та пiсля лжування виявив вiрогiдне пiдвищення скорочу-вально'ï функцИ жовчного мгхура в дггей основноï групи, що можливо пояснити позитивним впливом УДХК (УкрлГв® сyспензiя) на скоротливють жовчного мгхура.
Встановлено, що на початку спостереження за пащентами з функцшнальними розладами жовчного мiхyра та сфшктера Одад середш показники рГвня експресп мжроРНК-378^ мжроРНК-4311, мжроРНК-4714-3р у сироватцi кровГ в дiтей основноï групи та групи порГвняння були щен-тичними. Ми припускаемо, що рiвень експресп мжроРНК-4714-3р до лiкyвання в обох групах був асоцшований зГ зниженням скорочyвальноï функцп жовчного мГхура в дГтей Гз ФР ЖМ та СФО.
АналГз даних дослщження показав, що тсля проведеноï комплексноï терапп з урсодезоксихолевою кислотою та без нй в дггей Гз ФР ЖМ та СФО динамка профЫв експресп мжроРНК-378f i мжроРНК-4714-3р вГрогщно вщрГзнялася. ЙмовГрно, вГрогщне тдвищення рГвня експресп мiкроРНК-378f, що спостерпалося тсля курсу лГкування Гз застосуванням yрсодезоксихолевоï кислоти, сприяло вщновленню дренажу жовчь Зниження експресп мжроРНК-4714-3р, що спостерпалося тсля курсу лГкування незалежно вщ застосування yрсодезоксихолевоï кислоти, може бути обумовлене модифжащею дГети.
Висновки
1. У дгтей при функщональних розладах жовчного мгхура та сфшктера Одад пщ впливом урсодезок-сихолевоï кислоти (УкрлГв® суспенз1я) регресують прояви больового абдомшального, диспептичного й астеновегетативного синдромГв, вГрогщно змшю-ються бюхГмГчш маркери холестазу й скорочувальна функцГя жовчного мГхура.
2. Результати молекулярно-генетичних досль джень свщчать про унжальну здатшсть урсоде-зоксихолевоï кислоти у формГ суспензИ УкрлГв® впливати на актившсть генерацïï мiкроРНК-378f i мжроРНК-4714-3р, якг е генними регуляторами клгтнних мехашзмГв, що впливають на експресго гешв на посттранскрипцшному рГвш.
3. Застосування yрсодезоксихолево'ï кислоти у формГ сyспензiï УкрлГв® при лГкуванш функцю-нальних розладГв жовчного мГхура та сфшктера Одад в дгтей е обГрунтованим за рахунок ïï висо^ ефек-тивность
Конфлжт ÏHTepecÏB. Автори заявляють про вщ-сутнють конфлжту штереав при пщготовщ даноï статп.
References
1. Abaturov OE, Babich VL. The role of microRNA in diseases of the biliary system. Zdorov'e rebenka. 2017;7(12):841-847. doi: 10.22141/2224-0551.12.7.2017.116191. (in Ukrainian).
2. Babich VL. Application of ursodeoxycholic acid in the treatment of functional disorders of the biliary system. Sucasni medicni tehnologi'i. 2017;(34):64-70. (in Ukrainian).
3. Volosovec OP, Zubarenko OV, Kryvopustov SP, et al. Pediatrija (gastroenterologija ta patologija rann'ogo viku): navchal'nyj posibnyk [Pediatrics (gastroenterology and pathology of the early age): a study guide]. Odesa: Druk Pivden'; 2017. 165-180 pp. (in Ukrainian).
4. Maidannyk VG. Rome IV (2016) criteria: What is new? International Journal of Pediatrics, Obstetrics and Gynecology. 2016;10(1):8-18. (in Ukrainian).
5. Tyazhka OV, Smishchuk VV, Bryuzgina TS. Importance of bile biochemical studies as an indicator of fatty acids, phospholipids and cholesterol metabolic disorders in children with cholelithiasis. Perinatologiya i pediatriya. 2015;(61):63-67. doi: 10.15574/ PP. 2015.61.63. (in Ukrainian).
6. Ministry of Health of Ukraine. Order on January 29, 2013 № 59. On Adoption of Standardized Clinical Protocols of Medical Care for Children with Diseases of the Digestive System. Available from: http://old.moz.gov.ua/ua/portal/dn_20130129_0059.html. Accessed: January 29, 2013. (in Ukrainian).
7. Finch ML, Marquardt JU, Yeoh GC, Callus BA. Regulation of microRNAs and their role in liver development, regeneration and disease. Int JBiochem Cell Biol. 2014 Sep;54:288-303. doi: 10.1016/j. biocel.2014.04.002.
8. Kennedy I, Francis H, MengF, Glaser S, Alpini G. Diagnostic and therapeutic potentials of microRNAs in cholangiopathies. Liver Res. 2017Jun;1(1):34-41. doi: 10.1016/j.livres.2017.03.003.
9. Kopin AS, Wheeler MB, Leiter AB. Secretin: structure of the precursor and tissue distribution of the mRNA. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 Mar;87(6):2299-303.
10. Liddle RA. Regulation of cholecystokinin synthesis and secretion in rat intestine. JNutr. 1994 Aug;124(8 Suppl):1308S-1314S. doi: 10.1093/jn/124.suppl_8.1308S.
11. Otsuka M, Kishikawa T, Yoshikawa T, et al. MicroRNAs and liver disease. J Hum Genet. 2017 Jan;62(1):75-80. doi: 10.1038/ jhg.2016.53.
12. Pearson T, Caporaso JG, YellowhairM, et al. Gut microbiota changes in response to treatment with ursodeoxycholic acid (UDCA). Cancer research. 2017;77(3 Suppl):A18. doi: 10.1158/1538-7445. CRC16-A18.
13. Sakamoto T, Morishita A, Nomura T, et al. Identification of microRNA profiles associated with refractory primary biliary cirrhosis. Mol Med Rep. 2016 0ct;14(4):3350-6. doi: 10.3892/mmr.2016.5606.
14. Statistics about the current Human GENCODE: Release 27 (GRCh38.p10). Available from: https://www.gencodegenes.org/ human/release_27.html. Accessed: Jan 2017.
15. Tabibian JH, Lindor K. Ursodeoxycholic acid treatment in primary sclerosing cholangitis. In: Forman LM, editor. Primary Sclerosing Cholangitis: Current Understanding, Management, and Future Developments. Geneva, Switzerland: Springer International Publishing; 2017. 145-152pp. doi: 10.1007/978-3-319-40908-5_11.
OTpuMaHO 14.01.2019 ■
Абатуров А.Е., Бабич В.Л.
ГУ «Днепропетровская медицинская академия Министерства здравоохранения Украины», г. Днепр, Украина
Медикаментозная модуляция активности генерации микроРНК при функциональных расстройствах желчного пузыря и сфинктера Одди у детей
Резюме. Актуальность. Проблема функциональных расстройств желчного пузыря и сфинктера Одди является очень актуальной в детской гастроэнтерологии. Цель: усовершенствование лечения функциональных расстройств желчного пузыря и сфинктера Одди у детей на основании изучения активности генерации микроРНК. Материалы и методы. Обследовано 70 детей с функциональными расстройствами желчного пузыря и сфинктера Одди. 50 пациентов получали стандартную терапию в сочетании с урсодезоксихолевой кислотой в виде препарата Укрлив® в форме суспензии, а 20 пациентов — стандартную терапию без урсодезоксихолевой кислоты. До начала лечения и после окончания терапии у всех детей проведено молекулярно-генетическое исследование с определением уровня экспрессии микроРНК-378^ микроРНК-4311, микроРНК-4714-3р в сыворотке крови методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Результаты. Установлено, что у детей с функциональными расстройствами желчного пузыря и сфинктера Одди после терапии урсодезоксихолевой кислотой наблюдалось достоверное снижение уровней аспартатами-нотрансферазы — с 34,96 ± 1,31 н/л до 26,18 ± 0,97 н/л, щелочной фосфатазы — с 507,92 ± 19,94 н/л до 359,53 ± 16,59 н/л в сыворотке крови и повышение сократительной функции желчного пузыря с 23,44 ± 1,56 %
до 45,56 ± 1,68 % (р < 0,05). Выявлено, что после проведения стандартной терапии в сочетании с урсодезоксихо-левой кислотой (Укрлив® суспензия) у детей с функциональными расстройствами желчного пузыря и сфинктера Одди уровень экспрессии микроРНК-378f приблизился к 5,23 ± 0,70 УО, что статистически значимо выше, чем до терапии (р < 0,05). На фоне проводимой стандартной терапии как с добавлением урсодезоксихолевой кислоты, так и без нее профиль экспрессии микроРНК-4714-3р в сыворотке крови у обследованных детей 1-й и 2-й групп статистически значимо резко снизился до уровня 1,93 ± 0,58 УО и 1,14 ± 0,53 УО соответственно (р < 0,05). Выводы. Полученные результаты показали, что под влиянием урсодезоксихолевой кислоты у детей регрессируют клинико-параклинические проявления функциональных расстройств желчного пузыря и сфинктера Одди. Обнаружена уникальная способность урсодезоксихоле-вой кислоты в форме суспензии Укрлив® влиять на активность генерации микроРНК-378f и микроРНК-4714-3р, которые являются генными регуляторами клеточных механизмов, влияющих на экспрессию генов на посттранскрипционном уровне.
Ключевые слова: функциональные расстройства желчного пузыря и сфинктера Одди; микроРНК; урсодезокси-холевая кислота; дети
A.E. Abaturov, V.L. Babich
SI "Dnipropetrovsk Medical Academy of the Ministry of Health of Ukraine", Dnipro, Ukraine
Drug modulation of activity of microRNA generation in functional disorders of the gallbladder
and sphincter of Oddi in children
Abstract. Background. Functional disorders of the gallbladder and sphincter of Oddi are highly relevant in pediatric gastroenterology. The purpose of the study was to improve the treatment for functional disorders of the gallbladder and sphincter of Oddi in children based on studying the activity of microRNA generation. Materials and methods. Seventy children with functional disorders of the gallbladder and sphincter of Oddi were examined. Fifty patients received standard therapy in combination with ursodeoxycholic acid as a suspension formulation of Ukrliv®, and 20 patients received standard therapy without ursodeoxycholic acid. Prior to treatment and after the end of therapy, a molecular genetic study was carried out in all children to determine the level of microRNA-378f, microRNA-4311, microRNA-4714-3p expression in the blood serum using real time polymerase chain reaction. Results. It was found that in children with functional disorders of the gallbladder and sphincter of Oddi after the treatment with ursodeoxycholic acid, there was a probable decrease in the levels of aspartate aminotransferase from 34.96 ± 1.31 n/l to 26.18 ± 0.97 n/l, alkaline phosphatase from 507.92 ± 19.94 n/l to 359.53 ± 16.59 n/l in the blood serum and an increase in the contractile function of the gallbladder from 23.44 ± 1.56 %
to 45.56 ± 1.68 % (p < 0.05). It was found that after standard therapy in combination with ursodeoxycholic acid (Ukrliv® suspension) in children with functional disorders of the gallbladder and sphincter of Oddi, the level of microRNA-378f expression was close to 5.23 ± 0.70 c.u., which was statistically significantly higher than before therapy (p < 0.05). On the background of standard therapy with and without the addition of ursodeoxycholic acid, the expression profile of micro-RNA-4714-3p in the blood serum of the examined children from groups 1 and 2 decreased significantly sharply to the level of 1.93 ± 0.58 c.u. and 1.14 ± 0.53 c.u., respectively (p < 0.05). Conclusions. The findings showed that under the influence of ursodeoxycholic acid, clinical and paraclinical manifestations of functional disorders of the gallbladder and sphincter of Oddi in children are regressed. The unique property of ursodeoxycholic acid in the form of Ukrliv® suspension has been revealed — to affect the activity of microRNA-378f and microRNA-4714-3p generation, which are gene regulators of cellular mechanisms, that influence the gene expression at the post-transcriptional level.
Keywords: functional disorders of the gallbladder and sphincter of Oddi; microRNA; ursodeoxycholic acid; children
