Локализация антигенных детерминант в составе белка вируса гепатита D Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

(Б.Н. Левитан и др.,1993; А.В. Дедов, 1995, В. Levitan et al., 2GGG). Интересен тот факт, что у части больных выявляется Т- клеточная иммунореактивность(СО4(+)) с дельта-антигеном, причем активность ХГ-D при этом низкая, а течение более благоприятное (R. Nisini et.al., 1997). Таким образом есть свидетельства влияния на клинику ХГ-D как генотипа HDV, так и генетических особенностей макроорганизма.

Лечение ХГ-D разработано недостаточно. Показана незначительная эффективность интерферона и ламивудина (M. Haria, P. Benfeld,1995; D.T. Lau et.al.,1999). Изучаются препараты, блокирующие фосфорилирование РНК и посттрансляционную модификацию HDV, терапевтические вакцины (P.J. Chen et.al., 1997). Для лечения терминального ЦП-D с успехом применяют трансплантацию печени (D. Samuel et.al., 1995).

Б.Н. Левитан, А.В. Дедов, Астраханская государственная медицинская академия (АГМА).

ЛОКАЛИЗАЦИЯ АНТИГЕННЫХ ДЕТЕРМИНАНТ В СОСТАВЕ БЕЛКА ВИРУСА ГЕПАТИТА D.

Вирус гепатита D (HDV) является единственным членом «блуждающего» рода Deltavirus. Это высокопатогенный дефектный вирусный агент, способный реплицироваться только при наличии вируса гепатита В (HBV) или вируса гепатита североамериканских лесных сурков (A.A. Колонцов, 1998).

Вирионы HDV сферические, диаметром 28-39 нм, без поверхностных выступов. Оболочка приобретается от вируса-помощника (в случае HBV это HBsAg). Внутри располагается стабильный рибонуклеопротеиновый комплекс, образующий сферическую сердцевину диаметром 18 нм. Плавучая плотность HDV в градиенте CsCl - 1,25 г/см3. Геном состоит из единственной молекулы кольцевой негативной одноцепочечной молекулы РНК размером около 17GG нуклеотидов. Сочетание пар оснований гуанин-цитозин составляет до 6G%. Репликация происходит по механизму «катящегося кольца», генерирующего комплементарные олигомерные формы с последующим образованием мономеров через сайтспецифическое ауто каталитическое расщепление и лигирование. Комплементарную промежуточную форму называют антигеномом. Важную вспомогательную роль в репликации играют клеточные механизмы. В структуре HDV нет собственной РНК-полимеразы. Предполагают, что ее функции выполняет РНК-полимераза клетки-хозяина (С.Н. Соринсон,1998 ; М.С. Балаян, М.И. Михайлов, 1999).

Показана гетерогенность генома разных изолятов HDV (72,1-92,G% гомологии). В настоящее время известно три основных генотипа HDV. Генотип I распространен в Северной Америке, Европе, Южно-тихоокеанском регионе, на Ближнем Востоке и включает 2 субтипа: 1а (азиатский) и 1Ь (европейский и североамериканский). Генотип П характерен для Японии и северной части Тайваня. Генотип Ш распространен на территории стран Южной Америки (J.L. Casey, 1993).

Изучение последовательностей РНК разных изолятов HDV выявило 5 потенциальных открытых рамок считывания (ORP) как в геномной, так и в антигеномной цепях. Установлено, что только ORP-5 по номенклатуре Wang (ORF-2 по номенклатуре Makino), локализуемая в антигеномной цепи РНК, функциональна и кодирует - HDAg единственный

идентифицированный вирусспецифический белок (S. Makino, 1987, K.S.Wang,1987).

HDAg - высокоосновный фосфорилированный белок, существующий в двух формах, различающихся по присутствию С-концевого участка из 19 а.о. Короткая форма (195 а.о., молекулярная масса 24 кД) необходима для репликации генома; длинная форма (214 а.о., молекулярная масса 27 кД) ингибирует репликацию и участвует в сборке вирионов (М. Chao, 199G; J.S. Glenn, 1991). Синтез той или иной формы HDAg зависит от модификации геномной РНК в позиции 1G12. Замена урацила на цистеин приводит к изменению стоп-кодона UAG мРЫК на trp-кодон, в результате чего происходит присоединение 19 дополнительных аминокислот. Предполагают существование еще одного полипептида, кодируемого антигеномной цепью РНК вируса, который возникает в ходе трансляции при сдвиге рамки считывания. Однако новый антиген еще не обнаружен в экстрактах ткани инфицированной печени (Yu. E. Khudyakov, 1993).

HDAg имеет выраженную РНК-связывающую активность. Обнаружен РНК-связывающий домен в составе HDAg между 89-154 а.о. Это достаточно консервативный гидрофильный участок. Взаимодействие происходит благодаря узнаванию антигеномной вторичной структуры PHK-HDV, что определяет специфичность связывания. HDAg устойчив к нагреванию, действию кислот и нуклеаз, но разрушается в присутствии щелочей и протеаз.

С помощью синтетических пептидов в составе HDAg было выявлено несколько независимых В-клеточных эпитопов, локализованных между следующими а.о.: 2-17, 63-74, 8691, 94-1GG, 159-172, 174-195 и 197-211 (J.G. Wang, 199G). Выраженная антигенная активность

последнего синтетического пептида подтверждает, что протекание дельта-инфекции сопровождается экспрессией всего HDAg.

Авторами было проведено исследование антигенной активности панели синтетических пептидов, представляющих фрагменты аминокислотной последовательности 53-68, 65-80, 5293, 167-179, 201-213 белка вируса гепатита D. Максимальное число образцов сыворотки крови, содержащих антитела классов IgG и IgM к HDV, позволяли выявлять пептиды, воспроизводящие участок 52-93 HDAg. Синтетические антигены 53-68, 65-80, 167-179, 201-213 также соотвествуют сайтам узнавания для специфических анти-HDV классов IgG и IgM, но образцов, реагировавших только с этими пептидами и не взаимодействовавших с антигенами 52-93, обнаружено не было. Таким образом, участок 52-93 является иммунодоминантным в составе HDAg. Синтетические пептиды, копирующие этот фрагмент, наиболее перспективны при конструировании тест-систем для определения антител классов IgG и IgM к вирусу гепатита D. В.К Пименов., ННИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной, Н.Новгород; Ю.А. Семилетов, Институт вирусологии им, Д,И. Ивановского РАМН, Москва.

ПОЛОВОЙ ПУТЬ ПЕРЕДАЧИ ВИРУСА ГЕПАТИТА G (GBV-C/HGV).

По образному определению английских ученых вирус гепатита G - "младший брат" вируса гепатита С (ВГС) (Drs.Susan, J. Skidmore, 1999). Оба эти вируса содержат РНК позитивной полярности и включены в семейство Flaviviridae. Однако, в отличие от ВГС, геном GHV в 5' -нетранслируемом регионе не имеет гипервариабельной зоны и, по-видимому, лишен гена, кодирующего нуклеокапсидный протеин (К. Kjyosawa, E. Tanaka, 1999).

О наличии HGV судят по РНК HGV, выявляемой при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР). В 1998 году опубликованы результаты по разработке тест-систем для выявления антител к Е2 белку HGV (анти-Е2) в ИФА. В отличие от гепатита С, когда присутствие анти-HCV в большинстве случаев указывает на циркуляцию HCV, при гепатите G обнаружение анти-Е2 не характерно для текущей HGV инфекции. Для оценки широты распространения HGV проводят определение РНК HGV и анти-Е2. Вместе с тем, строгая специфичность выявления анти-Е2 при помощи применяемых диагностических препаратов окончательно не установлена (S. Lino, et al 1999).

Результаты выявления РНК HGV и анти-Е2 в различных регионах мира и группах населения свидетельствуют о широком, но не равномерном распространении гепатита G. В странах Западной Европы позитивный результат на наличие РНК HGV в среднем регистрируется от 1 до 2 %, в анти-Е2 более чем у 5% (G. Hess, 1999). Многочисленные исследования установили, что ведущими факторами риска распространения HGV инфекции являются: внутривенная наркомания, множественные трансфузии, кокаиновая наркомания, заключение в тюрьму и высокая сексуальная активность (De Tan, A. Matsumoto et al, 1999). Среди лиц, принимающих наркотики внутривенно, РНК HGV и анти-Е2 соответственно выявляются в 4-38% и 41-85% (S.Tacke et al, 1997). Среди пациентов, получающих лечение в отделениях хронического гемодиализа, РНК HGV удается обнаружить в 3-10%, а среди больных гемофилией этот показатель колеблется от 14 до 38% (S.Lino, К. Kawasaki, et al, 1999), Высокий уровень распространения маркеров HGV среди этих групп риска подтверждает парентеральную передачу вируса гепатита G. Это положение делает провомерным постановку вопроса о реализации полового пути передачи HGV в распространении этой инфекции.

По данным Т. Persico с соавт. (1996) РНК HGV удалось идентифицировать в семенной плазме у 6 из 24 пациентов ( 25%) с наличием РНК HGV в крови. Исследование, проведенное среди 22 гетеросексуальных партнеров носителя HGV (к сожалению авторы работы не указали пол партнеров с виремией), у 36% из них также обнаружило РНК HGV (P. Halfon, M. Bourlier, et al, 1997). Филогенетический анализ изолятов HGV от супругов, проживших около 10 лет в моногамном браке и не использовавших в качестве контрацептивного средства презервативы, позволил получить доказательства гетеросексуальной передачи вируса (C.Sarrazin, W.K.Roth,1997). Вместе с тем, был отмечен низкий уровень активности полового пути передачи HGV, о чем свидетельствует отсутствие значительных различий в соотношении: HGV инфицированных женщин к HGV-позитивным мужчинам - половым партнерам (A.E.Yeo, A. Matsumoto et al, 2000).

Считается, что повышенная частота маркеров инфицирования вирусами гепатитов, передающихся с кровью, среди больных с сифилисом, гомосексуалистов и проституток свидетельствует о половом пути передачи возбудителя. По данным австралийских ученых, обследовавших пациентов из специализированного медицинского центра, среди мужчин-гомосексуалистов маркеры инфицирования HGV выявляются в 57.9%, тогда как среди мужчин - первичных доноров, ведущих гетеросексуальную половую жизнь, частота их выявления составляет 6%. Причем, выявлена прямая зависимость между количеством половых партнеров и частотой суммарного выявления РНК HGV и анти-Е2. Так, у 51.2% гомосексуалистов, у