Литический эндофактор у микромицетов, составляющих банк культур - продуцентов аллергенов Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

УДК 615.371:632.937.16:616-056.3

ЛИТИЧЕСКИЙ ЭНДОФАКТОР У МИКРОМИЦЕТОВ, СОСТАВЛЯЮЩИХ БАНК КУЛЬТУР - ПРОДУЦЕНТОВ АЛЛЕРГЕНОВ

Журавлева Н.П. (в.н.с.)*, Елинов Н.П. (проф. кафедры), Васильева Н.В. (директор института, зав. кафедрой), Соловьева Г.И. (в.н.с.), Босак И.А. (с.н.с.)

НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург, Россия

© Коллектив авторов, 2015

Продолжено изучение литического эндофактора у селекционированных штаммов микромицетов, составляющих банк культур - аллергопро-дуцентов. Приведены собственные исследования и обзор литературы по вирусам грибов - патогенов растений и человека. Разработаны оптимальные условия для выявления литического эндофактора у изучаемых штаммов-продуцентов аллергенов: Rhizopus nigricans, Rhizomucor pusillus, Penicillium chrysogenum, P. verrucosum var. cyclopium, Cladosporium herbarum. Штаммы этих грибов изучены, наряду с контрольными штаммами Fusarium javanicum var radicicola, которые, как известно, содержат миковирус, и нами доказано симптоматически наличие в них эндовируса. Даны рекомендации по условиям хранения производственных штаммов микромицетов - аллергопродуцентов, чтобы избежать лизиса мицелия при спонтанном освобождении вирусных частиц.

Ключевые слова: вирусы микромицетов - продуцентов аллергенов и патогенов для человека, миковирусы

LYTIC ENDOFACTOR IN MICROMYCETES CONSTITUTING THE BANK OF CULTURES -PRODUCENTS OF ALLERGENS

Zhuravleva N.P. (leading scientific collaborator), Yelinov N.P. (professor of the chair),, Vasilyeva N.V. (director of institute, head of the chair), Solovjova G.I. (leading scientific collaborator), Bosak I.A. (senior scientific collaborator)

Kashkin Research Institute of Medical Mycology of North-Western State Medical University named after I.I. Mechnikov, St. Petersburg, Russia

©Collective of authors, 2015

Studying of lytic endofactor at in the selected micromycetes' strains included in bank of cultures -producents of allergens. Own data of investigation and review of literature over mycoviruses of fungi - pathogens for plants and man brought in this article. Worked out optimal conditions for reveal of lytic endofactor in examined strains of micromycetes - producents of allergergens: Rhizopus nigricans, Rhizomucor pusillus, Penicillium chrysogenum, P. verrucosum var. cyclopium, Cladosporium herbarum. Strains of these micromycetes were studied along with control strains of Fusarium javanicum var. radicicola which, as we know, contain mycovirus and have established the presence of mycovirus in them symptomatically. Recommendations on storage conditions of production strains of micromycetes - allergoproducents to avoid lysis of the mycelium in the spontaneous release of virus particles were given.

Key words: micromycetes' viruses - producents of allergens and pathogens for man, mycoviruses

ВВЕДЕНИЕ

Инвазивные грибные инфекции - это оппортунистические инфекции, как правило, у иммунокомпрометированных больных, ассоциирующиеся с высокой степенью смертности. Кроме того, эти инфекции значительно усложняются при резистентности возбудителя к применяемому антимикотиче-

Контактное лицо: Журавлева Нина Петровна, тел.: (812) 303-51-40

скому агенту. Следовательно, назрела потребность в новой терапевтической стратегии. В последних научных литературных источниках авторы рассматривают миковирус в качестве будущего агента биологического контроля за здоровьем человека [1].

Хотя ранние сообщения о миковирусах датируют 1960 г., знания исследователей о них все еще незначительны. Более того, опубликованные первоначально миковирусы - это вирусы экономически-значимых грибов, т.е. дрожжи и ми-целиальные грибы, патогенные для растений. Расширение знаний в области миковирусов патогенных грибов для человека - важное орудие будущего в сражении с инвазивными грибными инфекциями.

Ныне известно много работ по обнаружению новых ми-ковирусов фитопатогенных грибов [2- 8], относящихся к различным семействам. Как правило, во всех исследованиях выявлена ассоциация гиповирулентности фитопатогенных грибов с наличием миковируса. Однако в 2012 г. в клиниках Пакистана в 366 изолятах Aspergillus fumigatus - патогена человека найдены миковирусы различных групп - как двух, так и четырехфрагментных ds-РНк [9].

В 2013 г. в 86 клинических изолятах Роттердама в A. fumigatus выявлены также миковирусы. Авторы отмечают, что часто миковирус, имеющий в геноме ds-РНК, имеет причину гиповирулентности гриба [10]. Следовательно, ми-ковирусы представляют интерес для будущей терапии как инструмент в сражении с грибной инфекцией.

В предыдущей нашей работе [11] мы показали наличие литического фактора у ряда микромицетов, входящих в коллекцию патогенных штаммов - продуцентов аллергенов. Внутриклеточный вирус был выявлен симптоматически в виде зон лизиса и негативных колоний на газоне ряда культур рода Aspergillus и Alternaria, в сравнении с контролем, ранее открытого нами, миковируса гриба Fusarium javanicum var. radicicola (F.j.v.r.). [12, 13]. Этот микромицет включен в наш банк производственных культур - продуцентов аллергенов, и подобраны условия его хранения от лизиса миковирусом.

Цель настоящего исследования - выявить наличие литического действия (ЛД) внутриклеточного миковируса у остальных культур микромицетов - патогенных для человека, входящих в коллекцию банка штаммов - аллергопроду-центов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объекты исследования - селекционированные штаммы микромицетов, включенные в банк культур - продуцентов аллергенов, созданных нами ранее. Для выявления миковируса (МВ) отобраны 5 культур. Названия родов, видов и номера штаммов представлены в таблице.

Изначально генезис культур был следующий: Cladosporium herbarum, Penicillium chrysogenum и Rhizopus nigricans - из коллекции музея НИИ медицинской микологии им П.Н. Кашкина СЗГМУ им. И.И. Мечникова; Penicilliumverrucosum var. cyclopium - из промывных вод бронхов больной бронхиальной астмой; Rhizomucor pusillus - от больного (из тромба легочной артерии). Контроль в опыте - Fusarium javanicum var. radicicola (F.j.v.r.), выделенный с руки больной, пораженной этим грибом, и содержащий внутриклеточный вирус, показанный нами ранее [12, 13]. Затем из популяции этих культур нами были селекционированы штаммы с маркерами типичности морфологии колоний и интенсивности прорастания спор и конидий [14-18].

Выявление МВ осуществляли в 2 этапа:

I-й этап - выявление зон лизиса мицелия на штаммах

s

при хранении на косячках с агаризованными питательными средами: Сабуро с 4% глюкозы, сусло-агар, Чапека-Докса с 2% глюкозы, вместо сахарозы (модифицировано нами) в течение 1,3,5 месяцев при постоянной концентрации агара (к.а.) 2,0% и рН среды 6.5.

II-й этап - выявление зон лизиса на гигантских колониях штаммов одних культур с использованием контроля на агаре Сабуро с 4% глюкозы с к.а. 2,0%, рН 6,5 и на сусло-агаре, к.а. 2,0%, рН 6,5; опыта на сусло-агаре, к.а. 1,4%, рН 4,5. А также штаммов других культур с контролем на агаре Чапека-Докса, к.а. 2,0%, рН 6.5, опыта - на этой среде с к.а. 1,4%, рН 4,5; контроля - на сусло-агаре с к.а. 2,0%, рН 6,5, опыта - на этой среде с к.а. 1,4%, рН 4,5.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Мы продолжили наши исследования по выявлению мико-вируса у штаммов микромицетов, составляющих банк культур продуцентов аллергенов [11]. На I этапе наблюдали ли-тическое действие (ЛД) внутриклеточного МВ при хранении штаммов грибов, приведенных в таблице.

Из таблицы следует, что на стандартных средах для роста и хранения культур ЛДМВ проявились в виде н.к., в зависимости от штамма и срока хранения. Так, на газоне штаммов C. herbarum н.к. МВ не выявлены у 1-го штамма на всех сроках хранения, у 2-го штамма редкие н.к. проявились через 5 месяцев хранения. У 3-его штамма редкие н.к. - через 3 месяца и единичные - через 5 месяцев.

На газоне P. chrysogenum у 2-х штаммов единичные н.к. наблюдали только на 5 месяце хранения. У остальных штаммов: редкие н.к. - на 3-ем месяце и единичные н.к. - на 5-ом.

На газоне P. verrucosum var. cyclopium у 1-го штамма единичные н.к. отмечали на 5-ом месяце, у 2-го и 3-го штаммов редкие н.к. - на 3-ем и единичные н.к. - на 5-м месяце хранения.

У всех 3-х штаммов культур R. nigricans и R. pusillus редкие н.к. МВ выявили уже на 1-ом месяце хранения.

На газоне контрольной культуры F.javanicum var. radicicola ЛДМВ проявлены у всех штаммов также в зависимости от штамма и срока хранения, но намного раньше: на 1 месяце - редкие н.к., на 3 месяце - или редкие, или единичные н.к., через 5 месяцев - единичные или много н.к. МВ. Все селекционированные штаммы проявляли ЛДМВ по-разному (табл.). На музейном штамме F.j.v.r. ЛДМВ проявлялось сильнее, чем у селекционированных штаммов. Так, через 1 месяц хранения наблюдали много н.к. МВ, а на 5-ом - слившиеся н.к.

На II-ом этапе выявляли ЛДМВ на газоне гигантских колоний 6 культур микромицетов на стандартных питательных средах для хранения с к.а. 2,0% и рН 6,5 и на опытной среде - сусло-агаре с к.а. 1,4% и рН 4,5.

Таблица

Лизис мицелия при хранении селекционированных штаммов

микромицетов - продуцентов аллергенов

№ п/п Наименование микромицета № штаммов Срок хранения (мес.) Названиеага ной сре Сабуро с 4% глюкозы ризован-ды Чапека-Докса

1 Cladosporium herbarum 922/26/80/15 - // -- // -922/26/80/19 - // -- // -922/26/80/32 - // -- // - 1 3 5 1 3 5 1 3 5 + + ++

2 Pénicillium chrysogenum 1043/2/2/41 - // -- // -1043/2/2/51 - // -- // -1043/2/2/97 - // -- // -1043/2/2/99 - // -- // - 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 + ++ ++ ++ + ++

3 Pénicillium verrucosum var. cyclopium 176/92/1/36 - // -- // -176/92/1/72 - // -- // -176/92/1/101 - // -- // - 1 3 5 1 3 5 1 3 5 ++ + ++ + ++

4 Rhizopus nigricans 154/47/16 - // -- // -154/47/17 - // -- // -154/47/56 - // -- // - 1 3 5 1 3 5 1 3 5 + + ++ + + +++ + + +

5 Rhizomucor pusillus 158/13/74 - // -- // -158/13/77 - // -- // -158/13/81 - // -- // - 1 3 5 1 3 5 1 3 5 + + ++ + + + + ++ ++

6 Fusarium javani-cum var. radicicola 69/9/6 - // -- // -69/9/33 - // -- // -69/9/37 - // -- // -69/9/33/40 - // -- // -69 музейный - // -- // - 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5 + ++ ++ + ++ ++ + + ++ + + +++ +++ +++ ++++

Условные обозначения:

++++ - слившиеся негативные колонии миковируса (н.к. МВ) +++ - много н.к. МВ ; ++ - единичные н.к. МВ;

+ - редкие н.к. МВ; - - н.к. МВ отсутствуют

Рис. 1. Колонии Е javanicum уаг. ^сЫа: а - контроль: агар Сабуро с 4%> глюкозы, к.а. 2,0% рН 6,5; б - контроль: сусло агар, к.а. 2,0Уо рН 6,5; в - опыт: сусло агар, к.а. 1,4% рН 4,5 Рис.1а - колония на среде Сабуро агар с 4% глюкозы имеет полноценный рост с войлочным розовато-фиолетовым воздушным мицелием (вМ), н.к. редкие по всей поверхности колонии или отсутствуют (-; +) - контроль.

Рис.1б - колония на среде сусло-агар покрыта порошкообразным вМ серовато-желтоватого цвета, н.к. много (+++) по всей колонии, по краю колонии н.к. слившиеся, образуя слабое звездчатое кружево (+++) - контроль.

Рис.1в - колония на среде сусло-агар плоская, местами покрыта слабым вМ темно-розового цвета. Большая часть колонии (по краю и в центре) с лизированным мицелием, по всей поверхности много слившихся н.к. (++++) - опыт.

Рис. 2. Колонии R. ризШиэ: а - контроль: агар Сабуро с 4% глюкозы, к.а. 2,0% рН 6,5; б - контроль: сусло агар, к.а. 2,0% рН 6,5; в - опыт: сусло агар, к.а. 1,4% рН 4,5; г - опыт: газон сусло агар, к.а. 1,4% рН 4,5

Рис.2а - колония на среде Сабуро с 4% глюкозы имеет полноценный рост с ватообразным вМ бело-серого цвета, край неровный, н.к. редкие (+) по всей поверхности - контроль.

Рис.2б - колония на среде сусло-агар, вМ беловато-сероватого цвета, ватообразная, край неровный звездчатый, н.к. по всей поверхности, редкие (+) по краю - единичные (++) - контроль.

Рис.2в - колония на среде сусло-агар серовато-беловатого цвета в 2 раза меньше, чем на контрольной среде сусло-агар, край очень неровный покрыт слившимися н.к. (++++), по поверхности колонии много н.к. (+++) - опыт.

Рис.2г - газон гриба на среде сусло-агар. На поверхности газона гриба много н.к. (+++), половина газона полностью ли-зирована (++++) - опыт.

Рис. 3. Колонии R. nigricans: а - контроль: агар Сабуро с 4% глюкозы, к.а. 2,0%о pH 6,5; б - контроль: сусло агар, к.а. 2,0% pH 6,5; в - опыт: сусло агар, к.а. 1,4% pH 4,5 Рис.3а - колония на агаре Сабуро бело-серого цвета, пушистая, н.к. по всей поверхности единичные (++) - контроль.

Рис.3б - колония на сусло-агаре серо-черного цвета, вМ пушистый, н.к. по всей поверхности колонии много (+++), на краю колонии н.к. слившиеся, образуют зоны лизиса мицелия (++++) - контроль.

Рис.3в - колония на сусло-агаре серо-черного цвета, н.к. много (+++) по всей поверхности колонии, большая часть мицелия лизирована МВ (++++) - опыт.

Рис.5б - колония на агаре Чапека-Докса плоская с вМ бежевого цвета, край ажурный из слившихся н.к. (+++) - опыт.

Рис.5в - колония на сусло-агаре плоская, центр пуговкой, вМ в центре светло-зеленый, по всей колонии бежевый н.к. отсутствуют (-) - контроль.

Рис.5г - колония на сусло-агаре меньше в 1,5 раза контроля, н.к. отсутствуют (-) или редкие по краю колоний (+) - опыт.

Рис. 4. Колонии Н chrysogenum: а - контроль: агар Чапека Докса (модифицированный), к.а. 2,0%, рН 6,5; б - опыт, агар Чапека Докса (модифицированный) к.а. 1,4% рН 4,5; в - контроль: сусло агар, к.а. 2,0%о, рН 6,5; г - опыт: сусло агар, к.а. 1,4% рН 4,5

Рис.4а - колония на Чапека-Докса слабо радиальная-складчатая, вМ бархатистый в центре пуговкой, центр светло-зеленый, вся колония бежевого цвета, н.к. отсутствуют (-) - контроль.

Рис.4б - колония на Чапека-Докса бежевого цвета, край звездчатый, изъеденный со слабым вМ, н.к. больше по краю колонии слившиеся, образуя зону лизиса (+++) - опыт.

Рис.4в - колония на сусло-агаре слегка радиально-склад-чатая, центр выпуклый, вМ зеленовато-бежеватый, н.к. отсутствуют (-) - контроль.

Рис.4г - колония на сусло-агаре в 2 раза меньше контроля, в центре и по краям н.к. образуют пятна лизиса мицелия (+++) - опыт.

Рис. 5. Колонии Penicillium verrucosum уаг cyclopium: а - контроль: агар Чапека Докса (модифицированный), к.а. 2,0%, рН 6,5; б - опыт, агар Чапека Докса (модифицированный) к.а. 1,4% рН 4,5; в - контроль: сусло агар, к.а. 2,0%, рН 6,5; г - опыт: сусло агар, к.а. 1,4% рН 4,5 Рис.5а - колония на агаре Чапека-Докса плоская, центр пуговкой, слегка радиально-складчатая, вМ светло-зеленого цвета, край с белым вМ, н.к. отсутствуют (-) - контроль.

Рис. 6. Газон C. herbarum: а - контроль: агар Сабуро с 4% глюкозы, к.а. 2,0% рН 6,5; б - контроль: сусло агар, к.а. 2,0% рН 6,5; в -опыт: сусло агар, к.а. 1,4% рН 4,5

Рис.6а - газон гриба на агаре Сабуро, н.к. не обнаружены (-) - контроль.

Рис.6б - газон гриба на сусло-агаре более слабый, чем на агаре Сабуро, н.к. отсутствуют (-) - контроль.

Рис.6в - газон гриба на сусло-агаре сильно ослаблен, выросло 5 колоний гриба, н.к. отсутствуют (-) - опыт.

ОБСУЖДЕНИЕ

Исследованы 6 селекционированных культур микроми-цетов, представленных 20 штаммами и одним музейным, входящих в банк культур грибов-алллергопродуцентов, на содержание внутриклеточного миковируса. С этой целью разработаны оптимальные условия на питательных агаризо-ванных средах.

На I этапе при использовании стандартных сред для роста и хранения культур грибов ЛДМВ выявили в разной степени активности на всех штаммах, в зависимости от культуры, штамма и срока хранения микромицета. ЛДМВ не отмечали только на одном штамме - C. herbarum (табл.).

На II этапе (Рис. 1-6) - наиболее оптимальные условия для провокации внутриклеточного вируса обнаружили на гигантских колониях на сусло-агаре с к.а. 1,4% , рН среды 4,5 всех испытанных культур, а также на контрольном и музейном штаммах F.j.v.r. На стандартных средах для хранения каждой культуры с к.а. 2,0%, рН 6,5 наблюдали 1-3 месяца редкие или единичные н.к. ( +; ++), кроме штаммов р. Penicillium и Cladosporium, где н.к. МВ не выявлены. При опытных условиях на среде сусло-агар колонии у всех культур, кроме р. Cladosporium, в диаметре были в 1,5-2 раза меньше (по сравнению с колониями на стандартных средах). Как правило, у всех опытных колоний ЛДМВ проявилось в ажурном крае из слившихся н.к., особенно - на колониях зи-

гомицетов. У колоний р. Penicillium ЛДМВ менее выражено (+; ++). ЛДМВ на колониях Cladosporium не отмечали, кроме ослабленного роста при опытных условиях.

В связи с полученными результатами можно предположить, что изученные культуры плесневых, патогенных для человека грибов, возможно, все содержат вирусные частички в виде провируса. При оптимальных условиях для выявления вируса, он проявлялся в виде н.к. или зон лизиса мицелия исследованных микромицетов.

Как показано нами ранее, выявление МВ у грибов - патогенов для человека и аллергопродуцентов имеет большое значение как для фундаментальной науки, т.к. область грибной вирусологии мало изучена, так и для медицинской практики [13]. На инфекционном грибе Aspergillus fumigatus установлено, что миковирус, имеющий в геноме ds-РНК, часто является причиной гиповирулентности гриба [9, 10]. Следовательно, миковирус представляет интерес в перспективе для терапии как инструмент в борьбе с грибной инфекцией.

ВЫВОДЫ

1. Разработали симптоматическое выявление внутри-

клеточных вирусов у микромицетов, являющихся патогенами для человека и продуцентами аллергенов: Rhizomucor pusillus, Rhizopus nigricans, Penicillium chrysogenum, P. verrucosum var. cyclopium, Cladosporium herbarum. На газоне штаммов этих культур спровоцирован лизис мицелия грибов миковирусом в виде негативных колоний, в сравнении с контролем, ранее открытого нами вируса гриба Fusarium javanicum var. radicicola.

2. Даны рекомендации для сохранения банка грибов -аллергопродуцентов, содержащих внутриклеточный вирус: а) применение стандартной питательной среды для каждой культуры с концентрацией агара 2,0%; б) поддержание питательной среды с рН 6,0-6,5; в) период хранения штаммов не более 3-х месяцев при +4 °C; г) для подстраховки - использование среды сусло-агар со стандартными условиями (концентрацией агара и рН).

3. Для более глубокого изучения миковируса микромице-тов - аллергопродуцентов и патогенов для человека необходимы молекулярно-биологические исследования.

ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

I. Sande W.W.J., Lo-Ten-Foe J.R., etal., Mycoviruses: future therapeutic agents of invasive fungal infections in humans? // Eur J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2010. - Vol. 29, Is.7. - P.755-763.

2 . Xie J., JiangD., New insights into mycoviruses and exploration for the biological control of crops fungal diseases// Annu Rev.Phytopathol. -

2014. - Vol. 52. - P. 45-68.

3 . Lin V., Zhang H., Zhao C, et.al, The complete genome sequence of a novel mycovirus from Alternaria longipes strain HN28// Arch. Virol. -

2014. - Sep.24

4 . Schoebel C. N, Zoller S, Rigling D. Detection and genetic characterisation of a novel mycovirus in Hymenoscyphus fraxineus, the causal

agent of ash dieback// Infect. Genet. Evol. - 2014. - Vol.28. - P. 78-86.

5 . Jiang V., Zhang T., Luo C, et al. Prevalence and diversity of mycoviruses infecting the plant pathogen Ustilaginoidea virens// Virus Res. -

2015. - Vol. 195. - P. 47-56.

6 . Zhong J., Lei X.H., Zhu J.Z., et.al. Detection and sequence analysis of two novel co - infecting double - strand RNA mycoviruses in

Ustilaginoidea virens // Arch. Virol. - 2014. - Vol. 159, №11. - P. 3063-70.

7 . Wang L, Jiang J., Wang Y., et. al. Hypovirulence of the phytopathogenic fungus Botryosphaeria dothidea: association with a coinfecting

chrysovirus and a partitivirus // J. Virol. - 2014. - Vol. 88, №13. - P. 7517-27.

8 . Marvelli R.A., Hobbs H.A., Li S, et al. Identification of novel double - stranded RNA mycoviruses of Fusarium virguliforme and evidence of

their effects on virulence// Arch. Virol. - 2014. - Vol. 159, №2. - P. 349-52.

9 . Bhatti M.F., JamalA., BignellE. M., et al. Incidence of ds RNA mycoviruses in a collection of Aspergillus fumigatus isolates// Mycopathologia.

- 2012. - Vol. 174, №4. - P. 323-26.

10 . Refos J.M., VonkA.G., Eadie K, et al. Double - stranded RNA mycovirus infection of Aspergillus fumigatus is not dependent on the genetic

make-up of the host // PLoS One. - 2013. - Vol. 8, №10. - P. 773-81.

II. Журавлева Н.П., Елинов Н.П., Васильева Н.В., Босак И.А. Выявление литического фактора у штаммов микромицетов - продуцентов аллергенов// Проблемы медицинской микологии. - 2013. - Т.15, №1. - С. 40-48.

12 . Журавлева Н.П., Елинов Н.П., Васильева Н.В., Семенов В.В. и др. Миковирус в клетках патогенного для человека гриба Fusarium

javanicum var. radicicola// Проблемы медицинской микологии. - 2008. - Т.10, №1. - С. 8-15.

13 . Журавлева Н.П., Елинов Н.П., Васильева Н.В. и др. Внутриклеточный миковирус. Сборник кратких описаний научных открытий.

Диплом №326. - М., 2008. - С. 13-16.

14 . Журавлева Н.П., Зуева Е.В. и др. Спонтанная изменчивость некоторых морфобиологических свойств Rhizopus nigricans Ehrenb. //

Проблемы медицинской микологии. - 2001. - Т. 3, №2. - С. 60-61.

15 . Журавлева Н.П., Соловьева Г.И. и др. Спонтанная изменчивость популяций селекционированных штаммов зигомицетов - проду-

центов микоаллергенов// Проблемы медицинской микологии. - 2003. - Т.5, №2. - С.73-74.

16 . Журавлева Н.П., Васильева Н.В., Соловьева Г.И. Спонтанная изменчивость популяций селекционированных штаммов микромице-

та Cladosporium herbarum (Pers ,)Link. - продуцентов аллергенов// Проблемы медицинской микологии. - 2007. - Т. 9, №2. - С. 56-57.

17 . Журавлева Н.П., Васильева Н.В., Чилина Г.А. и др. Спонтанная изменчивость популяций штаммов Penicillium verrucosum var.

cyclopium Samsen Stolk et Hadiok - продуцентов аллергенов// Проблемы медицинской микологии. - 2008. - Т. 10, №2. - С. 43-44.

18 . Журавлева Н.П., Васильева Н.В. и др. Естественная изменчивость популяций Penicillium chrysogenum Weste при многоступенчатой

селекции штаммов микоаллергопродуцентов// Проблемы медицинской микологии. - 2012. - Т. 14, №2. - С. 39-42.

Поступила в редакцию журнала 20.03.2015

Рецензент: А. А. Степанова .