CC BY
74
УДК:618.3-06-08:577.112.385.2
КОРРЕКЦИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГЕСТОЗА ТАДАЛАФИЛОМ
М.В. ПОКРОВСКИЙ1 В.В. ГУРЕЕВ2, А.А. ДОЛЖИКОВ1 О.С. ПОЛЯНСКАЯ1,
А.С. МОСТОВОЙ3, С.А. АЛЕХИН2
1 Белгородский государственный национальный исследовательский университет
2 Курский государственный медицинский университет
3) Лаборатория психофизиологического обеспечения филиала ОАО «Концерн Росэнергоатом» «Кольская АЭС»
e-mail: pokrovskii@bsu.edu.ru
Эндотелиальная дисфункция лежит в основе развития многих сосудистых нарушений во время беременности, приводящих к развитию акушерских осложнений — позднего гестоза, фетоплацентарной недостаточности, синдрома задержки развития плода. Дисфункция эндотелия, развивающаяся у беременных, связана с уменьшенным формированием сосудорасширяющих факторов (окись азота (N0) и простациклин), что приводит к нарушению микроциркуляции в плаценте и препятствует нормальному течению беременности. N0 постоянно образуется из L-аргинина при участии N0-синтаз (еN0S) и выделяется из эндотелия. Пусковым моментом патогенеза преэклам-псии может служить повышенное содержание в эндотелиальных клетках эндогенного ингибитора N0-синтазы ассиметричного диметиларгинина (ADMA). В последние годы обнаружено, что концентрации АБМА в материнской плазме гораздо выше у женщин с преэклампсией [6] и что повышенные концентрации АБМА являются одними из предикторов данной патологии [4, 5, 6]. N0 оказывает свое действие на гладкомышечные клетки посредством активации фермента растворимой гуанилатциклазы, что сопровождается повышением уровня циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ). В результате этого наблюдается снижение внутриклеточной концентрации ионов кальция и расслабление клеток. Распад цГМФ происходит под воздействием фермента фосфодиэ-стеразы 5 типа (ФДЭ-5). Соответственно, угнетение активности ФДЭ-5 в гладкомышечных клетках сопровождается повышением количества цГМФ, что способствует вазорелаксации. Именно на данном уровне осуществляют свой эффект ингибиторы ФДЭ-5. Данный тип ФДЭ является основным в гладкомышечной ткани сосудов. Таким образом, действие этих препаратов приводит к усилению эффектов эндогенного N0, что может приводить к улучшению эндотелиальной функции.
Целью настоящей работы явилось исследование возможности коррекции экспериментального гестоза ингибитором ФДЭ-5 тадалафилом.
Методика исследования. Эксперимент выполнен на 30 белых крысах-самках линии Wistar массой 250—300 г. Неселективный блокатор N0-синтазы ^нитро-Ь-аргинин-метиловый эфир ^^АМЕ) вводили внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. в течение 7 дней (14-20 сутки беременности). На 21-е сутки беременности под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) вводили катетер в правую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Проводили сосудистые пробы на эн-дотелийзависимую вазодилатацию (ЭЗВ) — внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг — и эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНЗВ) — внутривенное
Введение АОМА-подобного агента — Ь-МАМЕ крысам вызывает блокаду МО-синтазы и приводит к патофизиологическим изменениям, подобным гестозу. Введение фармакологического агента — ингибитора фосто-диэстеразы 5 тадалафила приводит к явной коррекции патологических изменений. Результаты исследования служат предпосылкой для проведения дальнейших исследований с целью расширения показаний для их применения.
Ключевые слова: крысы, преэклампсия, Ь-МАМЕ, лечение.
введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг, с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) [2, 3]. Беременные самки были разделены на группы (n=lo): I — интактные; II — с введением L-NAME (25 мг/кг внутрибрюшинно) ежедневно с 14 по 20-е сутки беременности; III — с введением на фоне L-NAME тадалафила (0,9 мг/кг внутрижелудочно), ежедневно с 14 суток беременности; Исследование микроциркуляции в плаценте проводили с помощью оборудования компании Biopac systems: полиграф MP100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDf100C и датчиком TSD144. Регистрация результатов ЛДФ производилась программой Acqknowledge версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕ) [1]. NO-продуцирующая функция эндотелия оценивалась на основании данных содержания стабильных метаболитов NO- нитрит-ионов NOx в сыворотке крови.
Проведено морфологическое исследование плацент вместе с имплантационным участком рога матки. Гистологические срезу после стандартной заливки материала в парафин изготавливали в строго вертикальном направлении через середину плацентарного диска с захватом всех слоев плаценты и стенки рога матки. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Изучение микропрепаратов, фотопротоколирование и морфометрию проводили на микроскопе Leica DM4000B с системой видеорегистрации и обработки изображений.
Результаты исследования. Блокада NO-синтазы, вызванная семидневным введением L-NAME, приводила к подъему систолического и диастолического артериального давления с 125,0±6,3 и 82,0±5,8 до 183,1±9,4 и 136,7±7,4 мм рт. ст. соответственно. Происходило значительное снижение показателя микроциркуляции в плаценте с 425,9±39,6 до 210,0±21,1 ПЕ (р<0,05), а также снижение содержания стабильных метаболитов МОх в сыворотке крови с 2,35±0,21 мкмоль/дл до 1,33±0,09 мкмоль/дл (р<0,05). При микроскопическом исследовании плаценты наблюдаются неравномерное кровенаполнение спонгиозного слоя, вакуольная дистрофия гигантского трофоб-ласта, очаги некроза на границе гигантского трофобласта и децидуальной ткани, дистрофические изменения и малокровие децидуального слоя (рис. 2). Кроме этого, наблюдалось нарушение взаимоотношений вазодилатирующих и вазоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствует увеличение КЭД с 1,28±0,23 у интактных беременных животных до 3,06±0,32 (р<0,05).
Таким образом, моделирование L-NAME-индуцированного гестоза в эксперименте у крыс характеризовалось выраженным повышением АД, явлениями эндотелиальной дисфункции, снижением плацентарной микроциркуляции, NO-продуцирующей функции эндотелия и ярко выраженными деструктивными изменениями в плаценте.
Длительное, в течение 7 суток, ежедневное внутрижелудочное введение тадалафила приводило к достоверно значимому (р<0,05) снижению артериального давления по отношению к группе нелеченых животных (табл. 1). Отмечалось улучшение микроциркуляции в плаценте и нормализация взаимоотношения вазодилатирующих и вазо-констрикторных реакций при коррекции экспериментального гестоза в обеих группах леченых животных.
Таблица 1
Результаты коррекции L-NAME-индуцированной преэклампсии у крыс
(п=10; M±m)
^■\,Показатель Группа САД мм рт. ст ДАД мм рт. ст КЭД усл. ед. Микроциркуляция ПЕ Концентрация нит-ритионов (NOx) мкмоль/дл
Интактные 125,0±6,3у 82,0±5,8 у 1,28±0,23 у 425,9±39,6 у 2,35±0,21
L-NAME 183,1±9,4* 136,7±7,4* 3,06±0,32* 210,0±21,1* 1,33±0,09*
L-NAME + тадалафил 149,7±2,2* 97,6±3,2* 1,85±0,о8 y 398.7±24,84 у 1,36±0,1у
Примечание: САД, ДАД — систолическое и диастолическое артериальное давление (мм рт. ст.); КЭД — коэффициент эндотелиальной дисфункции (у.ед.); микроциркуляция в плаценте (Пер/ед); концен-
трация нитрит-ионов (NOx); *-р < 0,05 в сравнении с группой интактных животных; y-р < 0,05 в сравнении с группой L-NAME.
При биохимическом исследовании сыворотки крови обнаружено, что тадала-фил не вызывал повышения уровня нитрит-ионов (1,36±0,1 мкмоль/дл).
Положительная динамика изменений при применении тадалафила выявлена и при морфологическом исследовании. Изменения в структуре плаценты и имплантаци-онного ложа были минимальными (рис. 3) и в целом картина была близка к интактной (рис. 1).
Рис. 1. Строение интактной плаценты Примечание: А — плацента на поперечном срезе; Б — спонгиозный слой;
В — слой гигантского трофобласта; Г — децидуальная ткань;
Окр. гематоксилином и эозином; Микрофото; Х 200
Обсуждение. Анализ полученных данных позволяет сделать вывод о том, что длительное, в течение 7 суток, внутрибрюшинное введение блокатора NO-синтазы L-NAME вызывает у беременных самок крыс комплекс изменений, ассоциированных с
NO-дефицитной эндотелиальной дисфункцией. На 7-е сутки развивалась выраженная гипертензия, в 3 раза увеличивался коэффициент эндотелиальной дисфункции, происходило снижение показателей плацентарной микроциркуляции и конечных метаболитов N0 в плазме. Описанный симптомокомплекс можно соотнести с развитием гестоза в клинических условиях.
\Г^1 «Р'ТО
Г 7 V * *
10
Рис. 2. Патологические изменения при моделировании экспериментального гестоза Примечание: А — неравномерное кровенаполнение спонгиозного слоя; Б — вакуольная дистрофия гигантского трофобласта; В — очаги некроза на границе гигантского трофобласта и децидуальной ткани; Г — дДистрофические изменения, малокровие децидуального слоя; Окр. гематоксилином и эозином;
Микрофото; Х 200
Использование ингибитора фосфодиэстеразы 5 типа приводило к явной коррекции моделируемого патологического состояния. Это объясняется тем, что угнетение ФДЭ-5 способствует активации растворимой гуанилатциклазы и накоплению вторичного посредника — циклического 3,5 гуанозинмонофосфата (цГМФ), с чем связано сосудорасширяющее действие N0 . Накапливающийся цГМФ активирует цГМФ-зависимую протеинкиназу, а также Са2+-АТФазу, что приводит в конечном итоге ква-зодилатации.
Рис. 3. Морфологические изменения плаценты при коррекции экспериментального гестоза с помощью тадалафила: на рис. А — полная реконструкция участка плаценты, однородная структура и равномерное кровенаполнение спонгиозного слоя; Б — относительно однородная структура слоя гигантского трофобласта, отсутствие дистрофических изменений в трофобласте и децидуальном слое; В — стенка рога матки (нижняя часть рис. А) также без видимых морфологических изменений. Окр. Г+Э. Микрофото. А —х 100, Б, В- х400
Литература
1. Артюшкова, Е.Б., Возможности фармакологической коррекции хронической ишемии конечности в эксперименте / Е.Б. Артюшкова, Д.В. Пашков, М.В. Покровский и др. // Экспе-рим.иклинич. фармакология.— 2008. — Т. 71. № 3. — С.23-25.
2. Покровский, М.В., Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте / М.В. Покровский, В.И. Кочкаров, Т.Г. Покровская и др. // Кубанский науч. мед. вестн. — 2006. — № 10 (91). — С. 72-77.
3. Покровский, М.В., Фармакологическая коррекция L-аргинином «ADMA^NOS-ассоциированных мишеней» при экспериментальной преэклампсии / М.В. Покровский, Т.Г. Покровская, В.В. Гуреев и др. // Кубанский науч. мед. вестн. — 2010. — № 1. — С. 85-92.
4. Savvidou, M.D. Endothelial dysfunction and raised plasma concentrations of asymmetric dimethylarginine in pregnant women who subsequently develop pre-eclampsia / M.D. Savvidou et al. // Lancet. — 2003. — Vol. 361. — P. 1511-1517.
5. Smith, C.L. Dimethylarginine dimethylaminohydrolase activity modulates ADMA levels, VEGf expression, and cell phenotype / C.L. Smith // Biochemical & Biophysical Research Communications. — 2003. — Vol. 308. — P. 984-989.
6. Speer, P.D. Elevated asymmetric dimethylarginine concentrations precede clinical preeclampsia, but not pregnancies with small-for-gestational-age infants / P.D. Speer et al. // Am J Obstet Gynecol. — 2008. — Vol. 198. — № 1. — P. 112-117.
EXPERIMENTAL PREECLAMPSY CORRECTION BY TADALAFIL
M.V. POKROVSKY1
V.V. GUREEV2,A.A. DOLGIKOV
O.S. POLJANSJ
A.S. MOSTOVOY3, S.A. ALEHIN2
1 Belgorod National Research University
2 Kursk State Medical University
3Psychophysiological laboratory support branch of "Rosenergoatom",
"Kol’skyNPP"
e-mail: pokrovskii@bsu.edu.ru
Adminisration of ADMA-like agent leads to NO-sintase blockage and pathomorphological changes similar to preeclamp- sia. Pharmacological agent inhibitor of phosphodiesterase 5 tadalafil significantly reduce pathomorphological changes, and for differently directed changes in efficacy criteria's because dif- ferent pharmacokinetic features. Recent studies are background for future investigations and clinical adoption or broaden their indications.
Key words: rats, pre-eclampsy, L-NAME, treatment.
