CC BY
74
УДК 618.3-06-08:577.112.385.2
КОРРЕКЦИЯ ADMA-ПОДОБНОГО ГЕСТОЗА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ С ПОМОЩЬЮ ИНГИБИТОРА АРГИНАЗЫ L-НОРВАЛИНА И ПРЕПАРАТОВ, ВХОДЯЩИХ В СТАНДАРТНУЮ СХЕМУ ЛЕЧЕНИЯ
© Гуреев В.В., Полянская О.С., Должиков А.А.
Кафедра клинической фармакологии и фармакотерапии Курского государственного медицинского университета, Курск
E-mail: produmen@yandex. ru
Моделирование экспериментального ADMA-подобного гестоза осуществляли путем введения крысам L-NAME с 14 по 20 сутки беременности. У животных наблюдалось повышение артериального давления, протеинурия, нарушение микроциркуляции в плаценте, нарушение регуляции сосудистого тонуса и деструктивные изменения в плаценте ишемического генеза. Введение L-норвалина и препаратов, входящих с стандартную терапию гестоза второй половины беременности: метилдопа и амлодипина, приводило к выраженной коррекции морфофункциональных нарушений, возникающих при моделировании экспериментального гестоза. Однако целевого уровня их эффект не достигал. Наибольший эффект наблюдался при сочетанном использовании L-норвалина и препаратов, входящих в стандартную терапию гестоза второй половины беременности. Это объясняется различными точками приложения механизма действия используемых препаратов и позволяет воздействовать на большее количество патогенетических звеньев.
Ключевые слова: крысы, преэклампсия, L-NAME, лечение.
ADMA-LIKE PRE-ECLAMPSY CORRECTION BY ARGINASE INHIBITOR L-NORVALINE
& CONVENTIONAL MEDICATIONS
Gureev V. V., Polyanskaya O.S., Dolzhikov A.A.
Clinical Pharmacology & Pharmacotherapy Department of the Kursk State Medical University, Kursk
Experimental ADMA-like pre-eclampsia model in rats was achieved by L-NAME administration from 14 to 21 pregnancy days. Blood pressure elevation, gestational proteinuria, placenta microcirculation impairing, vascular tone dysregulation, and placenta ischemic damage were observed. Endothelial protector’s admistration, L-norvaline and conventional medications (Amlodipine & Methyldopa) result in the evident correction of the pathological changes in pre-eclampsia model. Despite good results the targeted levels weren’t achieved. The maximum effect was in the mixed group (L-norvaline with conventional preeclampsia medications). This might be explained by different points of applications and allows to affect many different pathogenesis chains.
Keywords: rats, pre-eclampsia, L-NAME, treatment.
Несмотря на то что имеется современное представление о нескольких ключевых звеньях патогенеза гестоза, в последние годы наибольшее внимание уделяется эндотелиальной дисфункции [3, 15]. Плацентарная ишемия приводит к высвобождению многочисленных плацентарных факторов, которые оказывают серьёзное влияние на кровоток и регуляцию сосудистого русла [4]. Эти факторы включают в себя рецептор-1 растворимого фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) (sFlt-1), аутоантитело рецептора ангиотензина II (тип 1) (AT1-AA) и цитокины (фактор некроза опухоли (TNF-a) [16, 19], которые по очереди формируют масштабную дисфункцию эндотелия материнских сосудов [18]. Эта дисфункция проявляется в качестве усиленного образования таких факторов, как эндотелин, активные формы кислорода (ROS), тромбоксан, 20-гидроксиэйкозатетраеновая кислота (20-HETE) и повышенная чувствительность к ангиотензину II. Кроме этого, преэклампсия также связана с уменьшенным формированием сосудорасширя-
ющих факторов (окись азота (NO) и простацик-лина) [8, 9, 10]. Эти изменения в функции сосудов ведут не только к гипертензии, но и к дисфункции многих органов, особенно у женщин с ранним проявлением преэклампсии [18, 20].
В последние годы обнаружено, что концентрация асимметричного диметиларгинина (ADMA) в материнской плазме гораздо выше у женщин с преэклампсией [15] и что повышенные концентрации ADMA - один из предикторов гестоза [17, 18, 19]. ADMA является физиологическим ингибитором NO-синтазы, и поэтому его повышенное содержание в эндотелиальных клетках может служить пусковым моментом к развитию гестоза.
Ранее в нашей лаборатории исследовался целый ряд препаратов, относящихся к различным фармакологическим группам, обладающих эндо-телиопротективной активностью при различных NO-дефицитных состояниях [1, 2, 12, 14]. Обнадеживающие результаты при коррекции эндотелиальной дисфункции, в том числе и при ADMA-
подобном гестозе, получены с использованием L-аргинина [2, 12, 14]. Данный препарат значительно снижал или полностью предупреждал развитие патофизиологических явлений. Другим перспективным фармакологическим агентом, обладающим способностью влиять на развитие морфофункциональных нарушений при гестозе, по нашему мнению, является L-норвалин, относящийся к ингибиторам аргиназ. В настоящем исследовании проведено сравнительное изучение возможности коррекции экспериментального гестоза с помощью L-норвалина, а также его комбинаций с препаратами, использующимися с стандартной фармакологической терапии гестоза - метилдопой и амлодипином.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Опыты проводились на белых беременных крысах-самках линии Wistar массой 250-300 г. Неселективный блокатор NO-синтазы N-нитро-Ь-аргинин-метиловый эфир (L-NAME) вводился внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (14-20 сутки беременности). На 21 сутки беременности под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) вводили катетер в правую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляли в правую бедренную вену. Проводили сосудистые пробы на эндо-телийзависимую вазодилатацию (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, и эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг, с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) [11]. Беременные самки были разделены на группы (n=10): I - интактные; II - с введением L-NAME ежедневно с 14 по 20 сутки беременности; III - с введением на фоне L-NAME L-норвалина (10 мг/кг, внутрижелудочно) ежедневно с 14 по 20 сутки беременности; IV - с введением на фоне L-NAME комбинации амлодипина (0,5 мг/кг) и L-норвалина (10 мг/кг) внутрижелудочно с 14 по 20 сутки беременности; V - с введением на фоне L-NAME комбинации метилдопа ((2х0,43) мг/кг/сут) и L-норвалина (10 мг/кг) внутрижелу-дочно с 14 по 20 сутки беременности. Исследование микроциркуляции в плаценте проводили с помощью оборудования компании "Biopac systems": полиграф MP100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) LDf100C и датчиком TSD144. Регистрация результатов ЛДФ производилась программой Acqknowledge версии 3.8.1, значения микроциркуляции выражались в перфузионных единицах (ПЕ) [1]. NO-
продуцирующая функция эндотелия оценивалась на основании данных содержания стабильных метаболитов NO - нитрит-ионов NOx в сыворотке крови. Беременность определяли пальпаторно на 14 сутки. Морфологическое исследование плацент проводилось вместе с имплантационным участком рога матки. Гистологические срезы после стандартной заливки материала в парафин изготавливали в строго вертикальном направлении через середину плацентарного диска с захватом всех слоев плаценты и стенки рога матки. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Изучение микропрепаратов, фотопротоколирование и морфометрию проводили на микроскопе Leica DM4000B с системой видеорегистрации и обработки изображений.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Блокада NO-синтазы, вызванная семидневным введением L-NAME, приводила к нарушению взаимоотношений вазодилатирующих и ва-зоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствовало увеличение КЭД с 1,28±0,23 у интактных беременных животных до 3,06±0,32 (р<0,05). Кроме этого, наблюдался значительный подъем систолического и диастолического артериального давления с 125,0±6,3 и 82,0±5,8 до 183,1±9,4 и 136,7±7,4 мм рт.ст. соответственно. Введение блокатора NO-синтазы приводило к значительному снижению показателя микроциркуляции в плаценте с 425,90±39,55 до 210,00±21,08 (р<0,05), а также к снижению содержания стабильных метаболитов NOх в сыворотке крови с 2,35±0,21 мкмоль/дл до 1,33±0,09 мкмоль/дл (р<0,05). При микроскопическом исследовании плаценты наблюдаются неравномерное кровенаполнения спонгиозного слоя, вакуольная дистрофия гигантского тро-фобласта, очаги некроза на границе гигантского трофобласта и децидуальной ткани, дистрофические изменения и малокровие децидуального слоя (рис. 2).
Таким образом, моделирование ADMA-подобной L-NAME-индуцированной преэкламп-сии в эксперименте у крыс характеризовалось выраженным повышением АД, явлениями эндотелиальной дисфункции, снижением плацентарной микроциркуляции и NO-продуцирующей функции эндотелия, деструктивными изменениями в плаценте.
Введение метилдопы в суточной дозе 0,86 мг/кг приводило к снижению артериального давления, значение которого было близко к целевому (р<0,05), но на соотношение реакций эндо-телийзависимой и эндотелийнезависимой вазоди-
Рис. 1. Строение интактной плаценты.
Примечание: А - плацента на поперечном срезе; Б - спонгиозный слой; В - слой гигантского трофобласта; Г - децидуальная ткань; Окр. гематоксилином и эозином; Микрофото; Х 200.
Рис. 2. Патологические изменения при моделировании экспериментального гестоза.
Примечание: А - Неравномерное кровенаполнение спонгиозного слоя; Б - Вакуольная дистрофия гигантского трофобласта; В - Очаги некроза на границе гигантского трофобласта и децидуальной ткани; Г - Дистрофические изменения, малокровие децидуального слоя; Окр. гематоксилином и эозином; Микрофото; Х 200.
Таблица
Результаты коррекции L-NAME-индуцированной преэклампсии у крыс (М±m; п=10)
Показатель Группа САД мм рт. ст. ДАД мм рт. ст КЭД усл. ед. Микроцир- куляция ПЕ Концентрация нитрит-ионов (NOx) мкмоль/дл
Интактные 125±6,3у 82,0±5,8у 1,28±0,23у 425,9±39,6у 2,35±0,21
L-NAME 183,1±9,4* 136,7±7,4* 3,06±0,32* 210,0±21,1* 1,33±0,09*
L-NAME + метилдопа 135,4±2,8у 101,4±3,8у 2,8±0,01* 242,6±10,9у 1,32±0,09*
L-NAME + амлодипин 165,7±6,8* 123,5±6,3* 1,48±0,21у 202,8±18,5у 1,40±0,09*
L-NAME + L-норвалин 194,5±8,3* 146,4±8,2* 1,51±0,15у 455,7±41,5у 2,10±0,14 у
L-NAME + L-норвалин+ метилдопа 120, 1±2,9у 92,4±3,3у 1,50±0,25у 394,2±25,8у 2,19±0,17*
L-NAME + L-норвалин+ амлодипин 156,3±2,0у 108,9±4,6у 1,69±0,07у 398,6±18,4у 2,11±0,17*
Примечание: САД, ДАД - систолическое и диастолическое артериальное давление (мм рт. ст.); КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции (у.е.); микроциркуляция в плаценте (Пер/ед); концентрация нитрит-ионов (ЫОх);
- р < 0,05 в сравнении с группой интактных животных; у- р < 0,05 в сравнении с группой L-NAME.
латации существенного влияния не оказывало (табл.).
В группах животных с использованием амло-дипина в дозе 0,5 мг/кг наблюдалась иная динамика исследуемых показателей. Отмечено улучшение взаимоотношений реакций эндотелийзави-симой и эндотелийнезависимой вазодилатации до уровня, статистически не отличимого от группы интактных животных (КЭД 1,48±0,21). Артериальное давление имело тенденцию к снижению, однако статистически отличимого уровня от группы нелеченых животных не достигало (табл.).
Курсовое пероральное назначения метилдопы в суточной дозе 0,86 мг/кг и амлодипина в дозе 0,5 мг/кг не предотвращало снижение микроциркуляции, вызванное моделированием L-NAME-индуцированного гестоза, и ее уровень составил 242,6±10,9 и 202,8±18,47 ПЕд соответственно, что достоверно не отличалось от значений у беременных самок с моделированием гестоза (237,5±38,2 ПЕд) и было существенно ниже значений микроциркуляции у интактных беременных крыс (425,9±39,6 ПЕд)
Обнаружено, что метилдопа в суточной дозе
0,86 мг/кг и амлодипин 0,5 мг/кг не восстанавливают уровень нитрит-ионов. При этом следует отметить, что в экспериментах, выполненных ранее в нашей лаборатории на самцах, обнаружена
аналогичная закономерность, что говорит об отсутствии у амлодипина прямого влияния на нит-ритергическую систему.
Морфологические исследования обнаружили снижение ишемических изменений в плаценте под влиянием метилдопы и амлодипина.
Обнаружено, что L-норвалин в дозе 10 мг/кг не предотвращал развитие гипертензии при L-NAME-индуцированном гестозе у беременных крыс, цифры САД и ДАД были достоверно выше соответствующих показателей интактных беременных животных во всех сериях экспериментов (табл.), но снижал КЭД до 1,51±0,15, тогда как в группе беременных самок, получавших L-NAME, он составлял 3,06±0,32. При биохимическом исследовании сыворотки крови обнаружено предотвращение снижения содержания стабильных метаболитов N0 у групп животных, леченных L-норвалином, уровень которых составил 2,10±0,14 мкмоль/дл. Курсовое назначение L-норвалина 10 мг/кг вызывало существенное улучшение микроциркуляции до средних значений 455,7±41,5 ПЕд, что было достоверно выше, чем у беременных самок с гестозом (р<0,05) (табл.).
Морфологическая картина в плаценте у животных, получавших L-норвалин, в наибольшей степени приближалась к группе интактных животных (рис. 3).
Рис. 3. Морфологическая картина плаценты при лечении экспериментального гестоза L-норвалином.
Примечание: А - Децидуальный слой: мономорфная структура, отсутствие дистрофических изменений; Б - Равномерное кровенаполнение спонгиозного слоя; В - Отсутствие дистрофических изменений трофобласта; Окр. гематоксилином и эозином; Микрофото; Х 200.
В связи с вышеизложенным в последующих исследованиях нами изучено влияние традиционных гипотензивных препаратов амлодипина (0,5 мг/кг) и метилдопы (0,86 мг/кг) в сочетанном применении их с L-норвалином при моделировании L-NAME-индуцированного гестоза у крыс.
В первую очередь обращает на себя внимание тот факт, L-норвалин, не обладая собственным гипотензивным эффектом в комбинации как с метилдопой, так и с амлодипином, потенцировал их гипотензивные эффекты. Следует обратить внимание, что наиболее эффективное снижение артериального давления по сравнению со всеми сериями экспериментов наблюдалось при сочетанном применении L-норвалина и метилдопы (табл.).
Сочетанное использование L-норвалина 10 мг/кг и метилдопа 0,86 мг/кг, L-норвалина 10 мг/кг и амлодипина 0,5 мг/кг, как представлено в табл., оказывало выраженное эндотелиопро-тективное действие на модели L-NAME-индуцированного гестоза. При этом КЭД составил 1,62±0,1 и 1,69±0,07 соответственно. При использовании L-норвалина в комбинациях с ме-тилдопой и амлодипином показатели микроциркуляции находились на уровне интактных живот-
ных и происходило практически полное восстановление концентрации нитрит-ионов в плазме крови.
Анализ полученных данных позволяет сделать вывод о том, что длительное, в течение 7 суток внутрибрюшинное введение блокатора NO-синтазы L-NAME вызывает у беременных самок крыс комплекс изменений, ассоциированных с NO-дефицитной эндотелиальной дисфункцией. На 7 сутки развивалась выраженная гипертензия, в более чем 2 раза увеличивался коэффициент эндотелиальной дисфункции, происходило снижение показателей плацентарной микроциркуляции, снижение конечных метаболитов NO в плазме и наблюдались четко выраженные морфологические изменения в плаценте при микроскопическом исследовании. Описанный симптомоком-плекс можно соотнести с развитием гестоза в клинических условиях.
Использование для коррекции ADMA-подобного гестоза в эксперименте препаратов, входящих в стандартную схему лечения гестоза, приводило к некоторой коррекции возникающих патологических изменений. При введении центрального а2-адреностимулятора метилдопа происходило эффективное снижение артериального
давления, как систолического, так и диастолического, уменьшение протеинурии. При морфологическом исследовании плаценты и почек выявлено отсутствие деструктивных повреждений ишемического генеза, которые наблюдались в группе нелеченых животных. Нужно отметить, что механизм действия метилдопы не является NO-заинтересованным. Это подтверждается отсутствием влияния на NO-продуцирующую функцию эндотелия и взаимоотношением эндоте-лийзависимой и эндотелийнезависимой вазорелаксации. Гипотензивный эффект связан со стимуляцией центральных симпатических ядер, что приводит к уменьшению периферического тонуса сосудов. Это подтверждает утверждение о вовлечении в патологический процесс при ADMA-подобном гестозе не только NO-синтезирующей системы, но и других нейрогуморальных механизмов регуляции сосудистого тонуса.
Введение пролонгированной формы антагониста Са2+ каналов дигидропиридинового ряда амлодипина приводило к коррекции взаимоотношения эндотелийзависимых и эндотелийнезави-симых механизмов вазодилатации, уменьшению протеинурии и устранению деструктивных повреждений в плаценте и почках. Механизм действия амлодипина связан с активированием супе-роксиддисмутазы в эндотелиальных клетках, что блокирует разрушение N0 [6, 14]. Имеются литературные данные об улучшении эндотелийзави-симой вазодилатации за счет увеличения уровня N0 и увеличения уровня эндотелиальной N0-синтазы [3, 8]. Кроме того, антагонисты Са2+ оказывают ангиопротективный эффект, обусловленный снижением тока Са2+ через L-каналы.
Таким образом, введение животным препаратов, входящих в стандарты лечения гестоза, для коррекции дисфункции эндотелия при ADMA-подобном гестозе приводит к улучшению отдельных показателей и не приводит к достижению целевого уровня. Становится понятным, что дальнейший поиск подходов к коррекции основного патогенетического звена гестоза требует применения фармакологических агентов с доказанной эндотелиопротективной активностью или использования их в сочетании с препаратами, входящими в стандартную терапию.
Введение животным фармакологического агента, увеличивающего количество субстрата для синтеза N0, ингибитора аргиназы L-норвалина приводило к выраженной коррекции патологических изменений при экспериментальном ADMA-подобном гестозе. Наблюдалось восстановление взаимоотношения эндотелийзависи-мой и эндотелийнезависимой вазорелаксации, улучшение микроциркуляции в плаценте, восстановление N0-синтезирующей функции эндоте-
лия, уменьшение протеинурии. При морфологическом исследовании гистологическая картина в плацентарной ткани приближалась к таковой в группе интактных животных. Механизм действия L-норвалина объясняется его структурным сходством с орнитином, являющимся одним из продуктов метаболизма цикла мочевины. L-норвалин, ингибируя орнитинтранскарбамилазу, приводит к избыточному накоплению орнитина, который, в свою очередь, ингибирует аргиназу [15]. NOS и аргиназа конкурируют за общий субстрат, это приводит к увеличению возможности использования L-аргинина для синтеза NO. Кроме этого, L-норвалин ингибирует аргинино-сукцинатсинтазу [15], что приводит к усилению синтеза L-аргинина из цитрулина. В конечном итоге механизм действия сводится к восстановлению NO-синтезирующей функции и уменьшению дисфункции эндотелия.
Более выраженные эффекты при коррекции морфофункциональных нарушений в условии ADMA-подобного экспериментального гестоза фармакологическим агентом с доказанной эндо-телиопротективной активностью и препаратами, входящими в стандартную терапию, связаны с различными точками приложения механизма действия препаратов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Артюшкова Е.Б., Пашков Д.В., Покровский М.В. и др. Возможности фармакологической коррекции хронической ишемии конечности в эксперименте // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2008. -Т. 71, № 3. - С. 23-25.
2. Залозных Я.И., Покровская Т.Г., Кочкаров В.И. и др. Применение L-аргинина в комплексе с амло-дипином и индапамидом при экспериментальном моделировании L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции // Кубанский науч. мед. вестн. - 2007. - № 1-2. - С. 52-55.
3. Корокина Л.В., Граник В.Г., Макаров В.А. и др. Изучение эффектов синтетических доноров оксида азота при L-NAME-индуцированной эндотелиальной дисфункции // Кубанский науч. мед. вестн. -2006. - № 9. - С. 141-145.
4. Кулида Л.В., Панова И.А., Перетятко Л.П. Роль плацентарных факторов в формировании перинатальной патологии при различных ступенях гестоза // Архив патологии. - 2005. - № 1. - С. 17-25.
5. Корокина Л.В., Колесник И.М., Покровский М.В. и др. Фармакологическая коррекция L-name-индуцированного дефицита оксида азота рекомбинантным эритропоэтином // Кубанский науч. мед. вестн. - 2009. - № 9. - С. 66-69.
6. Крукиер И.И. Процессы радикалообразования в плаценте при плацентарной недостаточности // Росс. вестник акуш. и гинек. - 2004. - № 4. -С. 6-8.
7. Кулаков В.И., Мурашко Л.Е., Бурлёв В.А. Клиникобиохимические аспекты патогенеза гестозов // Акуш. и гинекол. - 1995. - № 6. - С.3-5.
8. Крукиер И.И., Погорелова Т.Н. Содержание оксида азота и эндотелина в пуповине и плодных оболочках при преждевременных родах // Успехи современного естествознания. - 2005. - № 10. - C. 164.
9. Марков X.M. О регуляции деятельности сердца системой L-аргинин-оксид азота // Патолог. физиология и эксперим. терапия. - 2003. - № 4. -С. 9—11.
10. Мозговая Е.В., Малышева О.В., Иващенко Т.Э. и др. Эндотелиальная дисфункция при гестозе. Патогенез, генетическая предрасположенность, диагностика и профилактика: Метод. рекомендации. -СПб., 2003. - 345 с.
11. Покровский М.В., Кочкаров В.И., Покровская Т.Г. и др. Методические подходы для количественной оценки развития эндотелиальной дисфункции при L-NAME-индуцированной модели дефицита оксида азота в эксперименте // Кубанский науч. мед. вестн. - 2006. - Т. 91, № 10. - С. 72-77.
12. Покровский М.В., Покровская Е.Г., Кочкаров В.И., Артюшкова Е.Б. Эндотелиопротективные эффекты L-аргинина при экспериментальном моделировании дефицита оксида азота // Эксперим. и кли-нич. фармакология. - 2008. - Т. 71. № 2. -С. 29-31.
13. Покровский М.В., Покровская Т.Г., Гуреев В.В. и др. Фармакологическая коррекция L-аргинином ADMA-ENOS-ассоциированных мишеней при
экспериментальной преэклампсии // Кубанский науч. мед. вестн. - 2010. - № 1. - С. 85-92.
14. Ming X.F., Pajapakse A.G., Carvas J.M. et al. Inhibition of S6K1 accounts partially for the antiinflammatory effects of the arginase inhibitor L-norvaline // BMC Cardiovascular Disorders. -2009. - Vol. 9, N12. - P. 1147-1203.
15. Pope A.J., Karuppiah K., Cardounel A.J. Role of the PRMT-DDAH-ADMA axis in the regulation of endothelial nitric oxide production // Pharmacol Res. -2009 - Vol. 60, N6. - P. 461-465.
16. Sasayama S., Ishii N., Ishikura F. et al. Men's Health Study: epidemiology of erectile dysfunction and cardiovascular disease // Circ. - 2003. - Vol. 67. -P. 656-659.
17. Savvidou M.D. et al. Endothelial dysfunction and raised plasma concentrations of asymmetric dime-thylarginine in pregnant women who subsequently develop pre-eclampsia // Lancet. - 2003. - Vol. 361. -P. 1511 - 1517.
18. Smith C.L. Dimethylarginine dimethylaminohydrolase activity modulates ADMA levels, VEGf expression, and cell phenotype // Biochemical & Biophysical Research Communications. - 2003. - Vol. 308. -P. 984 - 989.
19. Speer P.D. et al. Elevated asymmetric dimethylarg-inine concentrations precede clinical preeclampsia, but not pregnancies with small-for-gestational-age infants // Am J Obstet Gynecol. - 2008. - Vol. 198, N 1. -P. 112 - 117.
