CC BY
31
© Беньковська Л. К. УДК 617-07 + 616. 36-002 Беньковська Л. К.
КОРЕКЦ1Я НЕСПЕЦИФ1ЧНИХ РЕАКЦ1Й СЕРОЛОПЧНОГД1АГНОСТИКИ
(НА МОДЕЛ1 ГЕПАТИТУ С)
Державна наукова установа «Науково-практичний центр профшактичноТ та кл^чноТ медицини ДУС УкраТни»
(м. Кив)
Зв'язок роботи з науковими програма-ми та планами. Робота виконувалась в межах заочно! асгфантури та пщготовки дисертацп за темою «Вплив антигенно! MiMiKpil на ефективнють серолопчно! дiагностики гепатиту С» на базi ДУ «1нститут епщемюлоги та iнфекцiйних хвороб iM. Л. В. Громашевського НАМН Укра!ни» у рамках науково! тематики лабоpатоpiI епщемюлоги па-рентеральних вipусних гепатитiв та В1Л-Ыфекцп «Пpихованi форми гепатитiв В i С у доноpiв кpовi та !х епiдемiологiчне значення» (№ держ. реестрацп 011U000049) та лаборатори експериментально! хiмiотеpапi! вipусних iнфекцiй «Молекулярн осно-ви конструювання пpофiлактичних та лкувальних антивipусних пpепаpатiв» (№ держ. реестрацп 0111U002004).
Вступ. 3 моменту виявлення збудника i до цього часу гепатит С (ГС) залишаеться одыею з найактуальнiших проблем в шфектологи. Вipусом гепатиту С (HCV), за оцшками вчених, iнфiковано близько 3 % населення земно! кул^ i фактично, мова йде про пандемю, яка за масштабом i кiлькiстю iнфiкованих осiб в 5 pазiв перевищуе розповсюд-ження В1Л-Ыфекцп [1]. Щоpiчно 3-4 млн. оЫб за-ражаються HCV i бтьше 350000 помирають вiд ура-жень печЫки, етiологiчно обумовлених цим вipусом [6,10,13,15].
Характерною особливiстю ГС е тривалий пеpiод (5-10-20 pокiв) мiж гострим гепатитом, який у бтьшост випадкiв, пеpебiгаe з мiнiмальною симптоматикою, i розвитком клiнiчно маыфестованого хpонiчного гепатиту, котрий, фактично, е основною KJliнiчною формою цього захворювання. Тому вкрай важливою е рання специфiчна дiагностика HCV-iнфекцi!.
На сьогодн в лабоpатоpнiй пpактицi для спе-цифiчно! дiагностики на першому етапi дослiдження визначають сумаpнi антитта проти HCV (анти-HCV) кпаЫв IgG i IgM або ттьки класу IgM методом iмунофеpментного аналiзу (1ФА) [5]. Попри високi показники чутливост i специфiчностi 1ФА, не виклю-чена можпивiсть отримання хибних результа^в те-стування, зокрема, хибно-позитивних, що суттево знижуе точнiсть специфiчно! дiагностики ГС. Голов-ним чинником хибно-позитивних результа^в вва-жають неспецифiчне зв'язування iмуноглобулiнiв
CMpoBaTKM Kpoßi 3 KOMnoHeHTaivm ¡MyHocopöeHTy TecT-CMCTeM, i nacToTa TaKMx HecneuM^iHHMx pe3y.rib-TaTiB Moxe Ko.MBaTMca y iimpoKMx Mexax, 3a.nexHo Biß rpyn oöcTexyBaHMX ociö, cTaHy Ix 3flopoB'a, iMyHHo'i cncTeMM toiio. OcTaHHiMM poKaMM aK oßMH 3 mox-.mbmx HMHHMKiB xmöhmx pe3y.bTaTiB TecTyBaHHa Ha MapKepM iH^eKöiMHMx xBopoö po3r.naflaioTb Mo.eKy-.apHy (aHTMreHHy) MiMiKpira - 0eHoMeH, io no.arae y ToToXHocTi aHTMreHHol cTpyKTypM KTliTMH pi3HMx BMßiB 3a paxyHoK roMo/ioriHHMx aMiHoKMc.oTHMx fli/iaHoK aöo KoH^opMauiMHol öyßoBM aHTMreHiB [7,8].
PoöoTaMM C. n. PMÖa.Ko Ta cniBaBTopiB 6y.o ßoBeßeHo, io MiKpoopraHi3MM 3ßaTHi npoßyKy-BaTM penoBMHM, aHTMreHHo noßiÖHi aK Mix coöora, TaK i 3 nenTMßaMM ßeaKMx BipyciB. 5y.no BcTaHoB.e-ho, io oßHiera i3 B.acTMBocTeM ByrneBofloBMicHMx öiono.iMepiB, BMßi.eHMx 3 KynbTypa/ibHoro cepeßo-BM|a npM BMpoiyBaHHi MiKpoopraHi3MiB (Staphylococcus aureus, Vibrio cholera, Neisseria meningitides, Bacillus subtilus, Candida Albicans, Micobacterium tuberculosis Ta iH.) e aHTMreHHa MiMiKpia 3 nenTMßa-mm BipyciB i öaKTepiM. Abtopm Ha3Ba.M oTpMMaHi Ta oxapaKTepM3oBaHi penoBMHM «MiMiKpMHaMM» [14].
BBaxaioTb, io aHTMreHHi ßeTepMiHaHTM MiKpo-opraHi3MiB MoxyTb HaraßyBaTM aHa.oriHHi cTpyKTypM .raßMHM, aK oßMH i3 MexaHi3MiB yHMKHeHHa iMyHHol BiflnoBifli opraHi3My xa3aiHa. Ctocobho TC, ueM 0e-HoMeH 3fle6i.bmoro po3rnaflaraTb y n.aHi naToreHe-3y iH^eKöil, ayToiMyHHMx no3aneniHKoBMx ypaxeHb. A.e 3'aB.aeTbca Bce öi.bme noBißoM.eHb |oßo Bn.MBy aHTMreHHol MiMiKpil TaKox i Ha cneuM^iHHicTb cepo.oriHHMx floc.iflxeHb, 3oKpeMa, npM BMaB.eHHi aHTMTi. Ta PHK HCV b ociö i3 cynyTHbora naTo.oriera [9,11,12]. HamMMM nonepeßHiMM floc.iflxeHHaMM 6y.no noKa3aHo, io npM BM3HaneHHi B3aeMofli'i cMpo-BaToK KpoBi 3 xMÖHo-no3MTMBHMMM pe3y.bTaTaMM Te-cTyBaHHa Ha aHTM-HCV MeToßoM №A i3 MiMKpMHaMM S. aureus, M. tuberculosis Ta C. albicans, 6i.nbi±iicTb 3 hmx pearyBa.M i3 3a3HaneHMMM MiMiKpMHaMM, Ha BißMiHy Biß cMpoBaToK KpoBi 3ßopoBMx ßoHopiB, cepoHeraTMB-hmx |oßo MapKepiB iH^iKyBaHHa HCV, BI^ Ta Bipycy renaTMTy B. BMcoKa nacToTa nepexpecHMx peaKöiM b IOA 3 MiMiKpMHaMM (57,7-80,8 %) He BMKnioHae po.i ocTaHHix y 3HMxeHHi cneuM^iHHocTi pe3y.bTaTiB TecTy-BaHHa Ha aHTM-HCV [2].
Мета роботи - опрацювати можливий cnociö зняття неспециф1чно1 реакци 1ФА, на модел1 визначення антитiл до HCV за до-помогою антисироваток до мiмiкринiв St. aureus, C. albicans, M. tuberculosis.
Об'ект i методи дослщження. Сиро-ватки. Зразки сироваток крoвi, отриманих вiд пацieнтiв, якi знаходяться на диспансерному oблiкy в амбулаторно-пoлiклiнiчнoму вешены, якi пicля проведення первинних i пiдтверджyвальних дocлiджень на наявнють анти-HCV були рoзцiненi як хибно-позитивн (n = 23).
М1м1крини (продукти метабoлiзмy мiкрo-oрганiзмiв, видтеы з культурального се-редовища пюля вирощування S. aureus, M. tuberculosis та C. albicans на 5 добу куль-тивування) отримували трикратним осад-женням етанолом з подальшим кип'ятшням розчиненого осаду протягом 10 хв. [3] Очистка мiмiкринiв гельфтьтра^ею на cефадекci G-50. Зразок препарату наносили на колонку з сефа-дексом G-50 (2х30 см), попередньо врiвнoваженy фосфатним буфером, збирали фракци по 0,5 мл i аналiзyвали вмicт бшюв бiyретoвим методом.
Для визначення взаемодп антитiл у cкладi хиб-но-позитивних сироваток з мiмiкринами в лунки планше^в для 1ФА (Maxisorp, «Nunc», Даыя) вносили дocлiджyванi мiмiкрини по 2 мкг/мл в карбонатному бyферi (рН 9,6), пюля чого дотримувались загально визнаного алгоритму проведення аналiзy. Оптичну густину (ОГ) зразкiв хибно-позитивних сироваток реестрували у двохвильовому режимi (450/630нм); результати 1ФА oцiнювали за кoефiцieнтoм пoзитивнocтi (КП) - cпiввiднoшення ОГ дocлiджyванoгo зразка до ОГ вщскаючого рiвня (cut off). При значены КП >1 результат вважали позитивним.
Для отримання антитт проти мiмiкринiв St. aureus, C. albicans, M. tuberculosis були прoiмyнiзoванi крол^ породи Шиншила вагою 1,5-2 кг. Розчини мiмiкринiв кролям вводили в трете вко. Наявнicть cпецифiчних до мiмiкринiв антитiл визначали через 1 мюяць пicля iмyнiзацií. Якщо в 1ФА сироватки крoвi кроля реагу-вали з мiмiкринами у розведены, меншому за 1:100, проводили повторну iмyнiзацiю, використовуючи неповний ад'ювант Фрейнда, i через 1 тиждень по-вторювали дocлiдження [3].
Результати дослiджень та 'Гх обговорення. Для доказу участ мiмiкрiнiв у виникненнi хибно-по-зитивних реакцiй (ХПР) при виявленн анти-HCV було проведене дocлiдження 1ФА з отриманими хиб-но-позитивними сироватками (ХПС) з додаванням мiмiкринiв зi St. aureus, C. albicans та M. tuberculosis до розчину для розведення сироваток. Алгоритм дослщження полягав у наступному: до одые! лунки стрипу планшету для 1ФА вносили 100 мкл позитивного контрольного зразку, в 2 лунки - по 100 мкл негативного контрольного зразку, в Ыин - по 30 мкл блок-розчину i по 70 мкл доогмджуваних зразюв сироваток + 20 мкл розчиыв мiмiкринiв. В подальшому
Рис. 1. Вплив мiмiкринiв i3 St. aureus на значення ОГ 3pa3KiB хибно-позитивних сироваток*.
* Пpимiткa: ряд 1 - ОГ зразк1в сироваток з додаванням м1м1крину; ряд 2 -ОГ зразк1в сироваток без додавання м1м1крину; ряд 3 - вщсоток зб1льшення оптичного сигналу.
дocлiдження проводили у загально прийнятому порядку. З мiмiкринoм St. aureus дослщжували 12 сироваток, C. albicans, M. tuberculosis - по 5 сироваток у повторах.
Результат 1ФА оцЫювали за середньою величиною ОГ дослщжуваних зразюв та вщсотком збiльшення/зменшення величини оптичного сигналу. Встановлено, що додавання мiмiкринiв з St. aureus до реакцмно! сум0 пiдвищилo значення ОГ сироваток з ХПР первинного 1ФА в середньому на 21 % - вщ 5,2 до 41,9 % (рис. 1).
Аналопчы результати щодо пщвищення оптичного сигналу ми отримали при додаванн до розчину для розведення сироваток мiмiкринiв з C. albicans -в середньому на 12,2 % - вщ 4,2 до 21 %. Додавання мiмiкринiв з M. tuberculosis мали неоднозначн результати: в двох сироватках з ХПР (№ № 1, 5) значення ОГ були зниженими на 5,3 i 3,8 %, вщповщно, а в сироватках № № 2, 3 та 4, навпаки, спостер^алось пщвищення величини ОГ вщ 1,6 до 4 % - в середньому на 2,95 %. Результати представлен на рисунках 2 i 3.
Рис. 2. Вплив мiмiкpинiв i3 C. albicans на значення ОГ зразмв хибно-позитивних сироваток*.
* Примггка: Ряд 1 - ОГ зразк1в сироваток з додаванням м1м1крину; ряд 2 - ОГ зразмв сироваток без додавання м1м1крину; ряд 3 -в1дсоток збшьшення оптичного сигналу.
Рис. 3. Вплив MiMiKpnHiB ¡з M. tuberculosis на значения ОГ зразшв хибно-позитивних сироваток*
* Пpимiтка: Ряд 1 - ОГ зразкш сироваток з додаванням MiMiKpHHy; ряд 2 - ОГ зразкш сироваток без додавання мiмiкpинy; ряд 3 - вщсоток збiльшeння або зменшення оптичного сигналу.
Таким чином, отриманий результат пщтвердив можливу участь м1м1крин1в у виникненн ХПР при тестуванн1 на анти-HCV методом 1ФА, а надлишок м1м1крин1в у блок-розчин1 призв1в до пщвищення значення оптичного сигналу 1ФА при досл1дженн1 ХПС.
Наступний етап роботи полягав у спроб1 зниження оптичного сигналу 1ФА шляхом додавання до сум1ш1 реакц1йних компонент антит1л до м1м1крин1в.
Антит1ла ми отримали пюля 1мун1зацИ крол1в, як описано у матер1алах i методах. Титр отриманих антитт визначали в 1ФА на планшетах з сорбованими в лунках мiмiкpинами з St. aureus, C. albicans i M. tuberculosis у сироватках кpолiв, розведе-них вiд 1:10 до 1:1280 (рис. 4).
Встановлено, що отриман сироват-ки кpолiв, iмyнiзованих мiмiкpинами з St. aureus та C. albicans взаeмодiяли зi сво1ми мiмiкpинами практично однаково до розве-дення 1:1280. Натомiсть сироватка кроля, iмyнiзованого розчином з M. tuberculosis, слабко взаeмодiяла з вiдповiдними м^ мiкpинами, тому в подальшому II не використовували.
На вщмЫу вщ попереднього дослiдy, замiсть блокуючого розчину для можливо-го зменшення перехресного зв'язування антитт додавали анти-мiмiкpиновi си-роватки. Для цього в лунки стрипу планшету вносили по 30 мкл сироватки кpовi iмyнiзованого розчином мiмiкpинiв кроля, а по™ - по 70 мкл доогмджуваних зразюв ХПС. Далi дослiджeння проводили згщно iнстpyкцiI тест-систем 1ФА.
Встановлено, що використання для роз-ведення доотджуваних зpазкiв сироватки кроля з високими титрами антитт проти мiмiкpинy з C. albicans сприяло зменшен-ню показника ОГ при визначенн анти-HCV
Рис. 4. Результати титрування антитiл до мiмiкpинiв у сироватц кpовi кроля, iмунiзованого розчином St. аыгеив (ряд 1), C. а1Ысапв (ряд 2), з M. tuberculosis (ряд 3).
Рис. 5. Зняття неспецифiчного зв'язування перехресно-реагу-ючих антитiл в ХПС з антитiлами проти мiмiкpину з C. albicans.
Рис. 6. Зняття неспецифiчного зв'язування перехресно реагу-ючих антитiл в ХПС з антитшами проти мiмiкpину з St. aureus.
в середньому на 30,0 % (вщ 10,4 до 63,5 %), що свщчило про деяке зняття нeспeцифiчноI взаемоди (рис. 5).
Аналопчн результати щодо зняття нeспeцифiчного зв'язування перехресно-реагуючих антитiл були отриман при пpовeдeннi дослiджeння з антиттами до мiмiкpинy з St. aureus як блокатора (рис. 6). Аналiз величини зниження нeспeцифiчного сигналу засвщчив, що у цьому дослд по-казники ОГ знизились ще бтьше, нiж у попередньому - в середньому на 63,7 % (вщ 30,7 до 96,15 %). Таким чином, у даному випадку також було доведено зняття нeспeцифiчного зв'язування перехресно-реагуючих антитiл в сироватках, що мали ХПР при виявлены анти-HCV за використання iмyнних щодо мiмiкpинy з St. aureus сироваток.
Кроляча сироватка, ¡мунна до м1м1крину з C. albicans у розведенн 1:1280, проти свого антигену в 1ФА взаeмодiяла слабше, нiж анти-мiмiкринова сироватка проти мiмiкрину з St. aureus. Найбтьший вiдсоток зниження оптичного сигналу в 1ФА, отри-маний при додаванн до дослiджуваниx сироваток антитiл до мiмiкрину з St. aureus, дозволяе припу-стити, що саме öi мiмiкрини вiдiграють бiльшу роль у зменшенн специфiчностi дослiджень щодо вияв-лення анти-HCV[4].
Незважаючи на те, що представлен результати мають попереднм характер, вважаемо, що мiмкрини з мiкроорганiзмiв, котрi широко представленi в оточуючому середови!^ (зокрема, St. aureus, C. albicans, M. tuberculosis), впливають на зниження специфiчностi дослiджень з виявлення антитт до збудникiв шфекцмних хвороб (зокрема, анти-HCV) методом 1ФА. Доказом участi мiмiкринiв в отриманн ХПР при серологiчнiй дiагностицi ГС явилось те, що додавання анти-мiмiкриновиx антитт, як блокаторiв неспецифiчного зв'язування, сприяло шпбщп
взаeмодiI неспецифiчниx антитт з бтками HCV, в той час як додавання мiмiкринiв в розчин для розве-дення сироваток збтьшувало оптичний сигнал.
Таким чином можна зробити наступи висновки:
1. Антигенна мiмiкрiя впливае на виникнен-ня неспецифiчниx результатiв 1ФА при виявленн антитiл до HCV, що пщтверджуеться пiдвищенням оптичного сигналу. 3-помiж аналiзованиx мiмiкринiв найбiльше значення в отриманн xибно-позитивниx результатiв 1ФА мали мiмiкрини з St. aureus .
2. Неспецифiчну взаeмодiю антитiл у d<T^i сироваток з ХПР частково можна зменшувати за раxу-нок блокування сайтiв зв'язування антитт з бтками HCV шляxом додавання до реакцмно! сумiшi анти-мiмiкриновиx антитiл.
Перспективи подальших дослщжень. На нашу думку, результати проведениx доогмджень свiдчать про перспективу запропонованого тдаоду у пiдвищеннi специфiчностi серологiчноI дiагностики методом 1ФА, що потребуе подалыхи фунтовниx науково-практичниx розробок.
Л1тература
1. Апросина 3. Г. Особенности течения xронического гепатита С / 3. Г. Апросина, В. В. Серов // Тер. арx. - 1995. -№ 5. - С. 77-80.
2. Беньковська Л. К. Молекулярна [^¡^^¡я та и можлива роль у виникненш xибниx результаИв тестування на анти-hcv / Л. К. Беньковська, Н. В. 1ванська, Т. А. Сергеева // Biopolymers and Cell. - 2013. - Vol. 29, № 5. - P. 406-412.
3. 1ванська Н. В. Значення антигенноУ млмпкри в серолопчшй дiагностицi В1Л-шфекци : дис.. доктора мед. наук: 03.00.06 / 1ванська Н. В. - К., 2010. - 360 с.
4. 1ванська Н. В. Пат. 91677 UA МПК А61 39/42(2006.01) Спосiб зняття неспецифiчного зв'язування антитiл при серолопчшй дiагностицi ВШчнфекцп та гепатиту / Н. В. 1ванська, С. Л. Рибалко, Л. К. Беньковська. - С/Опубл. 10. 072014.
5. Миxайлов М. И. Лабораторная диагностика гепатита С (серологические маркеры и методы иx выявления) / М. И. Ми-xайлов // Вирусные гепатиты: достижения и перспективы. - 2001. - № 2. - С. 8-18.
6. Серов В. В. Хронический вирусный гепатит - одна из наиболее важные проблем современной медицины / В. В. Серов, 3. Г. Апросина, П. Е. Крель [и др.] // Арxив патологии. - 1989. - № 2. - С. 3-9.
7. Boshchenko Y A. Sources of heterogenity and "antigenic mimicry" among pathogenic organisms (review of literature and own data) / Y A. Boshchenko, O. A. Yurchenko, G. S. Skripchenko // J. Acad. Med. Sci. Ukraine. - 2004. - Vol. 10, № 3. -P. 446-243.
8. Damian R. T. Molecular mimicry: antigen sharing by parasite and host and its consequences / R. T. Damian // Amer. Nat. -1964. - Vol. 98, № 900. - P. 129-149.
9. Fenwick F. Immunohistochemical assessment of hepatitis C virus antigen in cholestatic hepatitis after liver transplantation / F. Fenwick, M. F. Bassendine, I. K. Agarwa [et al.] // J. Clin. Pathol. - 2006. - Vol. 59, № 2. -P. 174-178.
10. Grammaticos A. P. Hepatitis C virus infection / A. P. Grammaticos // Scr. sci. med. - 2005. - Vol. 37. - P. 25-32.
11. Gregorio G. V. Mimicry between the hepatitis C virus polyprotein and antigenic targets of nuclear and smooth muscle antibodies in chronic hepatitis C virus infection / G. V. Gregorio, K. Choudhuri, Y Me [et al.] // Clin. Exp. Immuno. l June. - 2003. - Vol. 133, № 3. - Р. 404-413.
12. Hu Y - W. Immunoglobulin mimicry by Hepatitis C Virus envelope protein E2 / Y -W. Hu, L. Rocheleau, B. Larke [et al.] // Virology. - 2005. - Vol. 332, № 2. - P. 538-549.
13. Lauer G. M. Hepatitis C Virus Infection / G. M. Lauer, D. B. Walker // N. Engl. J. Med. - 2001. - Vol. 345. - Р. 41-52.
14. Rybalko S. L. Study of an antigenic similarity between the carbohydrate-containing biopolymers of bacteria and the some viruses' peptides / S. L. Rybalko, O. V. Maksimenok, M. L. Khrostova [et al.] // The bases of the molecular-genetic sanitation of people and environment. International forum 31 May - 1 June 2005, Kyiv. - 2005. - P. 179-182.
15. WHO, Factsheet No 164, July 2012. http://goo. gl/5m3sY
УДК 617-07 + 616. 36-002
КОРЕКЦ1Я НЕСПЕЦИФ1ЧНИХ РЕАКЦ1Й СЕРОЛОГ1ЧНОТ Д1АГНОСТИКИ (НА МОДЕЛ1 ГЕПАТИТУ С) Беньковська Л. К.
Резюме. Представлен результати можливого впливу [¡[¡криыв на отримання xибно-позитивниx результа^в при серолопчнм дiагностицi. Розглянуто споЫб пщвищення точност дiагностики гепатиту С методом 1ФА шляxом зниження неспецифiчного оптичного сигналу з використанням антитт кроля до [¡[¡криыв St. aureus, C. albicans та M. tuberculosis. Обфунтована необxiднiсть проведення доотджень як сприяють пщвищенню специфiчностi серолопчноУ дiагностики i зменшенню xибниx результа^в при скринiнговиx дослiдженняx методом 1ФА.
Ключов1 слова: гепатит С, специфiчна дiагностика, xибно-позитивнi результати.
УДК 617-07 + 616. 36-002
КОРРЕКЦИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ (НА МОДЕЛИ ГЕПАТИТА С)
Беньковская Л. К.
Резюме. Представлены результаты возможного влияния мимикринов на получение ложноположитель-ных результатов при серологической диагностике. Рассмотрен способ повышения точности диагностики гепатита С методом ИФА путем снижения неспецифического оптического сигнала с использованием антител кролика к мимикринам St. aureus, C. albicans и M. tuberculosis. Обоснована необходимость проведения исследований способствующих повышению специфичности серологической диагностики и уменьшению ложных результатов при скрининговых исследованиях методом ИФА.
Ключевые слова: гепатит С, специфическая диагностика, ложноположительные результаты.
UDC 617-07 + 616. 36-002
Correction of Nonspecific Reactions of Serological Diagnostics (On Hepatitis Model C)
Benkovskaya L. K.
Abstract. The article presents evidence of mimicrins participation in false-positive reactions in the detection of anti-HCV Microorganisms are capable of producing substances, that are antigenically similar, both among themselves and with some virus peptides. It was found that one of the properties of carbohydrates- containing biopolymers isolated from the culture medium during microorganisms cultivation is antigenic mimicry with peptides of viruses and bacteria. The authors named them as "mimicrins"
When add St. aureus mim^n to block-solution, the optical density (OD) of false-positive sera increased by an average of 21 % (from 5,2 to 41,9 %); when add C. albicans mim^n to solution for sera dilution, the similar results were obtained - increase the optical signal by an average of 12,2 % (from 4,2 to 21 %). Analysis of the data concerned adding M. tuberculosis mim^n revealed, that OD of two of the five false-positive sera decreased by 5,3 and 3,8 %, respectively, and OD of the other three sera contrary increased by an average of 2,95 % (from 1,6 to 4 %). The presented information confirmed, that mimicrins could participate in false-positive reactions when anti-HCV screening.
On the next the mixture of reaction components of antibodies to St. aureus, C. albicans and M. tuberculosis mimicrins was added to ELISA in order to decrease the optical signal; the antibodies were obtained after rabbits' immunization. The presence of specific antibodies to mim^n was measured 1 month after immunization. If the ELISA serum of rabbits reacted with mim^n in dilution of less than 1: 100, a second immunization was performed and repeated after 1 week of the study. The titer of obtained antibodies was determined in ELISA on plates with sorbed in holes ^н^лсг^.
These data showed, that the sera of rabbits, immunized with St. aureus and C. albicans ^н^нсг^, interacted with their m^^rins almost identically to the dilution of 1: 1280, as opposed to serum of rabbit, immunized with M. tuberculosis solution, which weakly interacted with the appropraite mimiсrines; this last serum further had not been used in the experiments.
At that stage of the study anti-mimicrine rabbit sera, instead of blocking solution, was added for possible reduction of antibody cross-linking.
It was found, that add of serum with high titers of C. albicans mimicrins antibodies contributed to the decrease of OD in the determination of anti-HCV by an average of 30,0 % (from 10,4 to 63,5 %). When adding rabbit serum with antibodies to St. aureus mimicrin as a blocker the OD decreased by an average of 63,7 % (from 30,7 to 96,15 %). Thus in both studies it has been shown the removal of non-specific binding of cross-reacting antibodies in sera, that had false-positive reactions in detecting anti-HCV The decreasing of OD by different sera varied. The rabbit serum, immune to C. albicans mimicrine in a dilution of 1: 1280, interacted with its antigen in ELISA weaker, than serum with antibodies to St. aureus mimicrins. This suggests that St. aureus mimicrins, probably, to a greater extent reduce the specificity of ELISA in detecting of anti-HCV
In our opinion, the results of the research show the perspective of the proposed approach in improving the specificity of serological diagnosis, because mimicrins of the microorganisms, which are widespread in the environment, can affect the accuracy of ELISA, which was demonstrated by the detection of antibodies to HCV
Keywords: hepatitis C, serological diagnostics, false-positive results, mimicrins.
Рецензент - проф. Лобань Г. А.
Стаття надшшла 20. 08. 2014 р.
