CC BY
37
3. Климова Ю.А., Волков А.А. Стадии гидронефротической трансформации почки // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. 2011. № 207. С. 285-288. - Режим доступа: http://elibrary.ru/ item. asp?id= 17041216
4. Ларионов С.В., Скорляков В.М., Волков А.А., Савина С.В. Из истории факультета ветеринарной медицины Саратовского государственного аграрного университета // Российский ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные. 2008. № 3. С. 43-44. - Режим доступа: http://elibrary.ru/item.asp?id=11653634
5. Марквелл П.И., Бриджит СМ. Заболевания нижних отделов мочевыводящих путей у кошек. Диетотерапия // WALTHAM Focus, 1999; 4: 32—33.
6. Патент на полезную модель RUS 91848 Российская Федерация, МПК A 61 D 15 00. ЗЕВНИК / Волков А.А.: заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ». - №2009132892/22; / за-явл. 01.09.2009; опубл.: 10.03.2010 Бюл. № 7 - 2 с.: ил. - Режим доступа: http://elibrary.ru/item.asp?id=18654718
Меженный П.В.
Аспирант, Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова КОНСТРУИРОВАНИЕ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ КОЛЛОИДНЫХ НОСИТЕЛЕЙ И АНТИГЕНА ВИРУСА
ЯЩУРА VP-1
Аннотация
В статье рассмотрено - конструирование препаратов на основе коллоидных носителей: золота, селена, полного адъюванта Фрейда и антигена вируса ящура VP-1. Проведены иммунобиологические исследования данных систем.
Ключевые слова: полный адъювант Фрейда, Антиген (АГ), вирус ящура VP-1, коньюгат.
Mezhenny P. V.
Postgraduate student, Saratov state agrarian university of N. I. Vavilov DESIGNING OF PREPARATIONS ON THE BASIS OF COLLOIDAL CARRIERS AND AN ANTI-GENE OF A VIRUS
OF MURRAIN DISEASE VP-1
Abstract
In article - design drugs based on colloidal carriers: gold, selenium, Freund's complete adjuvant and antigen FMD virus VP-1. Immunobiologicheskie conducted research data systems.
Keywords: Freud's full adjuvant, Antigen (AG),virus VP-1, konyyugat.
В последнее время, мировое научное сообщество заметно активизировало исследования в области иммунобиотехнологии [6,7]. Использования нано материалов, а именно коллоидных частиц и полимерных матриц стало очень актуальным [1,2,3].
Возможность доставлять в организм лекарственные средства с меньшей концентрацией активного вещества, не теряя при этом своих полезных свойств, весьма перспективна. Бесспорно, наночастицы имеют множество положительных свойств: их можно легко транспортировать, присоединять к их поверхности диагностические и терапевтические вещества, а так же иммуноактивные биомолекулы [4].
Одним из направлений в изучении адресной доставке при помощи коллоидных частиц является конструирование новых или улучшение старых вакцин [5]. Основными плюсами является: уменьшения количества антигена поступающего в организм, направленность действия и сокращения времени иммунного ответа организма.
Нами были сконструированы прототипы вакцинных препаратов на основе коллоидных частиц селена и золота (выполняющих роль нано размерного носителя). На поверхность наночастиц конъюгировали синтезированный протективный белок капсида вируса ящура VP-1, который растворяли в 0,01 М фосфатно-солевом буфере рН 7,2, до концентрации 1 мг/мл.
Для освобождения молекул антигена от ионов металлов проводили диализ водного раствора антигена в ацетатном буфере рН 4,0. К 1 мл раствора антигена добавляли 25 мкл 1 М раствор солянокислого гидразина и 6,25 мкл 1М раствора неорганических соединений селена (селенит натрия). Доводили общий объем раствора до 2 мл дистиллированной водой. Останавливали реакцию доведением рН раствора до 7,2 1М раствором гидроксида натрия (100 мкл). Препарат освобождали от низкомолекулярных соединений диализом против фосфатно-солевого буфера рН 7,2.
Получение коньюгата АГ с коллоидным золотом выполняли путем смешивания равных объемов АГ с раствором коллоидного золота.
Для проведения иммунобиологических исследований было сформировано по принципу аналогов 5 групп животных - морских свинок, по 3 головы в каждой. Иммунизацию животных проводили подкожно вдоль позвоночного столба, двукратно, с интервалом 10 дней.
Первой группе вводили коммерческую противоящурную вакцину согласно инструкции по применению в дозе 0,5 мл.
Вторая группа - коньюгат антигена вируса ящура VP-1с коллоидным золотом и полным адъювантом Фрейда в соотношении 1:1, в дозе 1 мл.
Третья группа - коньюгат антигена вируса ящура VP-1с коллоидным золотом, в дозе 1 мл.
Четвертая группа - раствор антигена вируса ящура VP-1с полным адъювантом Фрейда в соотношении 1:1, в дозе 1 мл.
Пятая группа - коньюгат антигена вируса ящура VP-1с коллоидным селеном и полным адъювантом Фрейда в соотношении 1:1, в дозе 1 мл.
Эвтаназию морских свинок проводили через 10 дней после последней инъекции. При этом брали кровь для биохимических и иммунологических исследований. Для оценки влияния препаратов на клеточный иммунитет, определяли дыхательную активность перитонеальных макрофагов в МТТ тесте. На гуморальный иммунитет, определяли дыхательную активность лимфоцитов селезенки в МТТ тесте.
Таблица 1 - Влияние препаратов на основе коллоидных частиц и вирусного антигена на клеточный иммунитет
Группа Концентрация формазана в 1 ПКК, нг Концентрация формазана в 1 лимфоците, нг
Вакцина 16,00±7,90 1,26±0,38
Коньюгат антигена вируса ящура VP-1с коллоидным золотом и полным адъювантом Фрейда в соотношении 1: 1 8,37±2,31 1,12±0,33
Коньюгат антигена вируса ящура VP-^ коллоидным золотом 8,16±3,57 0,71±0,06
Раствор антигена вируса ящура VP-^ полным адъювантом Фрейда в соотношении 1: 1 13,71±2,44 1,02±0,07
Коньюгат антигена вируса ящура VP-1с коллоидным селеном и полным адъювантом Фрейда в соотношении 1: 1 10,37±3,94 1,10±0,30
70
В ходе проведенных исследований установлено, что в группе животных которым вводили коллоидное золото конъюгированное с антигеном дыхательная активность спленоцитов достоверно ниже, чем в остальных группах животных (табл. 1). Данный факт может свидетельствовать о том, что полный адъювант Фрейда с которым вводили антигены в 1,2,4 и 5 группах животных создает определенное депо в месте введения, тем самым способствует пролонгации эффекторной фазы иммунного ответа на введенный антиген. Наряду с этим, дыхательная активность перитонеальных макрофагов одинаковая во всех группах животных. Отклонений основных биохимических показателей не отмечается, что указывает на отсутствие отрицательного влияния вводимых препаратов на основные физиологические функции животных.
Таблица 2 - Влияние препаратов на основе коллоидных частиц и вирусного антигена на лимфоидное звено иммунитета
Г руппа Т, л/ф Тх Тс Тх/Тс Вл Ло
Вакцина 72,0±8,0 66,7±9,1 5,3±3,2 12,5±2,8 8,0±2,0 20,0±6,0
Коньюгат антигена вируса ящура УР-1с коллоидным золотом и полным адьювантом фрейда в соотношении 1:1 76,3±5,0 69,3±3,8 7,0±1,7 9,9±2,1 7,0±1,0 16,7±4,0
Коньюгат антигена вируса ящура УР-1с коллоидным золотом 72,7±5,5 64,7±7,4 8,0±2,0 8,08±3,6 8,7±1,5 18,7±4,2
Раствор антигена вируса ящура УР-1с полным адьювантом фрейда в соотношении 1: 1 70±1,4 68,5±3,5 8,5±0,7 8,06 ±5 7,5±0,7 23±2,8
Коньюгат антигена вируса ящура УР-1с коллоидным селеном и полным адьювантом фрейда в соотношении 1:1 71,7±7,6 65,3±5,9 6,3±2,1 10,31±2,8 7,3±1,5 21,0±6,2
При исследовании влияния исследуемых препаратов на лимфоидное звено иммунитета установлено, что иммунорегуляторный индекс (соотношение Тх/Тс) во всех группах животных достаточно высокий, что указывает на способность вышеприведенных систем наряду с вакциной реализовать индуктивную фазу адаптивного иммунного ответа (табл. 2). О чем свидетельствует повышение численности Т-хелперов, которые являются главной эффекторной клеточной популяцией в формировании противовирусного иммунитета, путем активации макрофагов участвующих в ликвидации вируса, а также помогают вовлечению в иммунный процесс остальных лимфоцитов для формирования специфического иммунного ответа.
Заключение. Используя коллоидные частицы селена и золота представляется возможным создания химических вакцин. В эксперименте было подтверждено иммуногенное действия конъюгатов наночастиц селена и золота с антигеном. Установлено, что конъюгаты коллоидного селена и золота с антигеном при введении в организм животного способны формировать адекватный иммунный ответ организма при минимальных концентрациях вирусного антигена.
Литература
1. Башкирова Е.В., Путина С.Н., Волков А.А., [и др.] Конструирование инъекционной формы на основе силимарина и изучение ее биодинамических и токсикологических свойств. Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. 2013. № 08. С. 4-6. - Режим доступа: http://elibrary.ra/item.asp?id=20253696
2. Исаева А.Ю., Староверов С.А., Волков А.А. [и др.]. Изучение биологических свойств наноразмерной структуры на основе
коллоидного селена in vitro // Ветеринарная патология. 2012. № 3 (41). С.111-114. - Режим доступа:
http://elibrary.ra/item.asp?id= 18047494
3. Исаева А.Ю., Староверов С.А., Волков А.А. [и др.]. Конструирование наноразмерной структуры на основе коллоидного селена // Ветеринарная патология. 2012. № 3 (41). С. 114-117. - Режим доступа: http://elibrary.ra/item.asp?id=18047495
4. Козлов С.В., Фомин А.С., Степанов В.С. [и др.] Конструирование коллоидного комплекса селена с лактоферрином и изучение его биодинамических свойств // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. 2012. № 1. С. 27-32. - Режим доступа: http://elibrary.ru/item.asp?id=17362200
5. Меженный П.В., Староверов С.А., Волков А.А., Козлов С.В., Ласкавый В.Н., Дыкман Л.А., Исаева А.Ю. Конструирование конъюгатов коллоидного селена и коллоидного золота с белком вируса гриппа и изучение их иммуногенных свойств //Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. 2013. № 02. С. 29-32.
6. Староверов С.А., Фомин А.С., Волков А.А., [и др.] Использование фаговых мини-антител для определения концентрации ферритина в сыворотке крови животных // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. 2012. № 4. С. 3033. - Режим доступа: http://elibrary.ra/item.asp?id=18236798
7. Фомин А.С., Малинин М.Л., Василенко О.А., [и др.] Изучение механизмов токсического воздействия туберкулина PPD на клетки иммунной системы лабораторных животных // Ветеринарная патология. 2011. № 3. С. 78-84. - Режим доступа: http://elibrary.ru/item.asp?id=16920839
Меженный П.В.
Аспирант, Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова
ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ КОНЪЮГАТОВ НАНОЧАСТИЦ СЕЛЕНА И ЗОЛОТА С
АНТИГЕНОМ ВИРУСА ТГС
Аннотация
В статье представлены результаты иммуноферментного анализа после иммунизации подопытных животных разработанной нано-модифицированной вакциной против ТГС (трансмиссивного гастроэнтерита свиней), в которой использовались коллоидный селен и коллоидное золото. Изучено действие коллоидных частиц на иммунный ответ организма к вирусу ТГС.
Ключевые слова: ТГС - трансмиссивный гастроэнтерит свиней, IL-1P - интерлейкин 1 бета, IL-6 - интерлейкин 6, INF-y -интерферон гамма.
Mezhenny P. V.
Postgraduate student, Saratov state agrarian university of N. I. Vavilov STUDYING OF IMMUNOGENE ACTION OF CONJUGATES OF NANOPARTICLES OF SELENIUM AND GOLD
ABOUT A VIRUS TGS ANTI-GENOME
Abstract
The article presents the results of the immunofermental analysis after immunization of experimental animals developed nano-modified vaccine TGP (transmissible gastroenteritis ofpigs), which used the colloidal selenium and colloidal gold. The effect of colloidal particles on the immune response to the virus TGP.
Keywords: TGS - a transmissivny gastroenteritis of pigs, IL-1 p - Interlaken 1 beta, IL-6 - Interlaken 6, INF-y - interferon scale.
71
