Конструирование и сравнительная характеристика новых питательных сред для культивирования легионелл

Катунина Людмила Семеновна; Таран Татьяна Викторовна; Базиков Игорь Александрович; Таран Александр Владимирович; Хатков Эдуард Магометович; Гукасян Арам Лаврентьевич

и ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА

КОНСТРУИРОВАНИЕ И СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НОВЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛЕГИОНЕЛЛ

Л. С. Катунина2, Т. В. Таран2, И. А. Базиков1, А. В. Таран2, Э. М. Хатков1, А. Л. Гукасян1

1 Ставропольская государственная медицинская академия

2 Научно-исследовательский противочумный институт, Ставрополь

Легионеллез (болезнь легионеров) - острое системное инфекционное заболевание, инициированное микроорганизмами рода Legionella, преимущественно видом L. pneumophila, классически проявляющее себя пневмонией, а также более легкой респираторной инфекцией (лихорадка Pontiac). Уровень заболеваемости легионеллезами в мире неуклонно растет. Клиническая диагностика легионеллезов практически невозможна из-за полиморфизма проявлений, что характерно для всех атипичных пневмоний. Это предопределяет актуальность совершенствования лабораторной диагностики указанной инфекции.

Легионеллез является типичным примером техногенных инфекций, обусловленных активным использованием в промышленности и быту циркулирующих замкнутых водных систем, источников бактериального аэрозоля [1]. Это обстоятельство определяет актуальность контроля легионелл в этих системах.

Бактериологический метод, включающий выделение чистой культуры и ее идентификацию, остается «золотым» стандартом диагностики легионеллезов. Существующие микробиологические методы диагностики легионеллезов длительны в исполнении (7-10 суток) и обладают высокой стоимостью [4]. Легионеллы не растут на простых питательных средах (агаре Хот-тингера, кровяном агаре, агаре MacConkey и др.), что связано с потребностью возбудителя в L-цистеине и в растворимом пирофосфате железа (Fe++). Для выделения возбудителя используют модификации буферного угольно-дрожжевого агара, содержащего L-цистеин, растворимый пирофосфат железа и а-кето-глутаровую кислоту (среда ВСУЕа, СЭЛ, легионелбакагар и другие).

Катунина Людмила Семеновна, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории питательных сред для культивирования микроорганизмов 1-4 групп патогенности ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора; тел.: (8652) 264005, 89197593244.

Таран Татьяна Викторовна, доктор медицинских наук, старший научный сотрудник, заведующая лабораторией питательных сред для культивирования микроорганизмов 1-4 групп патогенности ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора; тел.: (8652) 264005, 89187579061; e-mail: taran_tv@list.ru.

Базиков Игорь Александрович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии, иммунологии и вирусологии Ставропольской государственной медицинской академии; тел.: (8652) 352475,

89188664027; e-mail: bazikov@list.ru,

Таран Александр Владимирович, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории индикации микроорганизмов ФГУЗ СтавНИПЧИ Роспотребнадзора; тел.: (8652) 264005, 89187618399; e-mail: taranne@front.ru.

Хатков Эдуард Магометович, аспирант кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии Ставропольской государственной медицинской академии; врач МУЗ «Шпаковская центральная районная больница»; тел.: 89288132608.

Гукасян Арам Лаврентьевич, аспирант кафедры микробиологии, иммунологии и вирусологии Ставропольской государственной медицинской академии; главный врач МУЗ «Детская стоматологическая поликлиника № 3», тел.: 89184444438.

Однако чувствительность бактериологического метода остается недостаточно высокой, что предопределяет актуальность разработки новых питательных сред для культивирования легионелл.

Целью настоящего исследования явилось конструирование недорогих плотных питательных сред для культивирования легионелл, отвечающих требованиям современной документации [2].

Материал и методы. В работе использованы типичные по культурально-морфологическим свойствам тест-штаммы L. pneumophila ATCC 33155 Bloomington 2, L. pneumophila ATCC 33152 Philadelphia 1, полученные из ГИСК им. Л.А.Тарасевича. Подготовку культуры тест-штаммов осуществляли согласно методическим указаниям [2]. Стимуляторы роста: аммоний селеновокислый - 0,2 мг/мл; железо сернокислое закисное - 1,0 мг/мл; липоевая кислота - 5,0 мг/мл; эмбриональный стимулятор роста микроорганизмов (ЭСрМ) [3] в разведении 1:10 - 2,0 мл. Питательные среды готовили на ферментативных гидролизатах молочной сыворотки (ФГМС), говяжьего мяса (ФГГМ), сои (ФГСБ) с добавлением L-цистеина гидрохлорида (Вектон), активированного угля марки ОУ-А 5,0 г/л; агара микробиологического (ГОСТ 17206-96) 12,0 г/л. Среды разливали во флаконы, стерилизовали при 121 °С в течение 20 мин. На свежеразлитые и просушенные пластинки исследуемых питательных сред засевали взвесь тест-штаммов легионелл в дозе 100 м.к. в 0,1 мл 0,9 % раствора хлорида натрия. Через 24120 ч. учитывали результаты [2]. Контролем служили легионелбакагар (ФгУн ГНЦПМ и Б, Оболенск) и агар Хоттингера (ТУ 9385-004-01897080-2009) (рН 6,8).

Результаты подвергали статистической обработке, используя стандартную компьютерную программу EXCELL с определением средней арифметической, средней ошибки средней арифметической, достоверности различий. Различия считали статистически значимыми при p<0,05.

Результаты и обсуждение. В результате изучения ростовых качеств питательных сред, приготовленных на ФГМС, ФГГМ и ФГСБ, установлено, что, независимо от вида используемой питательной основы и стимулятора, все среды обеспечивали через 72 ч. инкубации при 37°С рост типичных синевато-сероватых плоско-выпуклых колоний различного диаметра с гладкой поверхностью, ровными краями, голубоватых в проходящем свете.

Наибольшая чувствительность отмечена у питательных сред, приготовленных на ФГМС, где через 72 ч. инкубации вырастали типичные колонии диаметром от 2,0 до 2,5 мм в количестве, зависимом от вида стимулятора роста и используемого тест-штамма: при добавлении железа сернокислого закисного количество колоний составило 122±4,0 и 166± 11,0 (p<0,05); при добавлении аммония селеновокислого - 180±12,3 и 160±15,2 (p>0,05); липоевой кислоты - 160±13,2 и 100±2,9 (p<0,05), ЭСРМ - 120±11,5 и 160±6,8 (p<0,05) для штаммов L. pneumophila ATCC 33155 Bloomington 2 и L. pneumophila ATCC 33152 Philadelphia 1 соответственно.

Наименьшей чувствительностью обладали питательные среды, приготовленные на ФГГМ с L-цистеином,

МЕДИЦИНСКИЙ ВЕСТНИК СЕВЕРНОГО КАВКАЗА, № 3, 2011

железом сернокислым закисным, аммонием селеновокислым, липоевой кислотой и ЭСРМ. Так, при посеве штамма 33155 вырастали очень мелкие колонии диаметром до 1 мм, а при посеве штамма 33152 количество колоний (диаметром 2 мм) с этими стимуляторами составило: 120±13,3, 134±14,8, 129±12,6, 120±8,2, 159±14,1 колонии соответственно. Статистические различия величины показателей количества колоний в указанных группах (кроме ЭСРМ) недостоверны (р>0,05).

Результаты ростовых свойств на средах из ФГСБ с добавлением аммония селеновокислого и ЭСРМ были удовлетворительными: для штамма 33155-150±11,4 и 140± 12,8 типичных колоний, а для штамма 33152140±2,9 и 159±6,2 колоний диаметром до 2 мм соответственно. При добавлении к этим основам других стимуляторов вырастали очень мелкие колонии для обоих тест-штаммов легионелл.

На контрольном легионелбакагаре вырастало для штамма 33155-100±7,1, а для штамма 33152-105±5,3 колоний диаметром 1,5 мм через 72 часа культивирования, тогда как на агаре Хоттингера роста культур не определялось в течение 5 суток.

Таким образом, среда на ФГМС со стимуляторами не уступает по биологическим показателям легионелбака-гару и соответствует требованиям к контролю питатель-

КОНСТРУИРОВАНИЕ И СРАВНИТЕЛЬНАЯ

ХАРАКТЕРИСТИКА НОВЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛЕГИОНЕЛЛ

Л. С. КАТУНИНА, Т. В. ТАРАН, И. А. БАЗИКОВ,

А. В. ТАРАН, Э. М. ХАТКОВ, А. Л. ГУКАСЯН

В работе представлены основные характеристики новых недорогих экспериментальных питательных сред для культивирования легионелл. Показано, что предлагаемые питательные среды обладают хорошими ростовыми свойствами и отвечают требованиям МУ 3.3.2.2124-06 к питательным средам для выделения и культивирования возбудителя легионеллеза по биологическим показателям.

Ключевые слова: питательные среды, легионел-лы, ростовые качества, культивирование

ных сред для культивирования и выделения возбудителя легионеллеза по биологическим показателям [2].

Заключение. Дешевая питательная среда, приготовленная на ФГМС со всеми взятыми в эксперимент стимуляторами, по показателям чувствительности, эффективности и критерию пригодности соответствует требованиям и не уступает легионелбакагару [2]. Это является основанием для дальнейшего изучения указанных основ и стимуляторов с целью конструирования коммерческой элективной плотной питательной среды для выделения легионелл с оформлением соответствующей документации.

Литература

1. Борисов, Л. В. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л. В. Борисов. - М. : Медицинское информационное агенство, 2005. - С. 428-430.

2. Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза: Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007.-35 с.

3. Патент РФ № 2283347, 10.09.2006. - Бюл. № 25.

4. Темежникова, Н. Д. Легионеллезная инфекция / Н. Д. Темежникова, И. С. Тартаковский. - М.:ОАО «Издательство «Медицина», 2007. - 264 с.

DESIGNING AND THE COMPARATIVE

CHARACTERISTICS OF THE NEW NUTRIENT MEDIUMS FOR CULTIVATION OF LEGIONELLAS

KATUNINA L. S., TARAN T. V., BAZIKOV I. A.,

TARAN A. V., KHATKOV E. M., GUKASYAN A. L.

In the paper the basic characteristics of new inexpensive experimental nutrient mediums for cultivation of legionellas are submitted. It is shown, that the offered nutrient mediums have good growth properties and meet the requirements of МУ 3.3.2.2124-06 to nutrient mediums for isolation and cultivation of the activator of legionellas by biological parameters.

Key words: nutrient mediums, legionellas, cultivation

ВЛИЯНИЕ ДИОСМИНА И ГЕСПЕРИДИНА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ МИОКАРДА КРЫС ПРИ ОСТРОМ СТРЕССОРНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ

А. В. Крикова, В. Е. Новиков, А. С. Новиков Смоленская государственная медицинская академия

Крикова Анна Вячеславовна, кандидат фармацевтических наук, доцент, заведующая кафедрой управления и экономики фармации Смоленской государственной медицинской академии, соискатель кафедры фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС Смоленской государственной медицинской академии, тел.: 89203086979; e-mail: anna.krikova@mail.ru.

Новиков Василий Егорович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС Смоленской государственной медицинской академии; тел.: (4812) 554722.

Новиков Александр Сергеевич, кандидат медицинских наук, доцент кафедры патологической анатомии Смоленской государственной медицинской академии, тел.: 89516900315.

Влияние стрессорных факторов на организм приводит к нарушению обмена веществ в органах и тканях, потенцировании многих заболеваний нервной, эндокринной, иммунной и сердечно-сосудистой систем организма [4]. Все перечисленные патологические процессы прямо или косвенно сопровождаются активацией свободнорадикального окисления липидов в биологических мембранах клеток со снижением функциональных возможностей органов. Оксидативный стресс приводит к окислительной инактивации N0, эндотелиальной дисфункции, нарушениям

Текст научной работы на тему «Конструирование и сравнительная характеристика новых питательных сред для культивирования легионелл»