CC BY
291
железом сернокислым закисным, аммонием селеновокислым, липоевой кислотой и ЭСРМ. Так, при посеве штамма 33155 вырастали очень мелкие колонии диаметром до 1 мм, а при посеве штамма 33152 количество колоний (диаметром 2 мм) с этими стимуляторами составило: 120±13,3, 134±14,8, 129±12,6, 120±8,2, 159±14,1 колонии соответственно. Статистические различия величины показателей количества колоний в указанных группах (кроме ЭСРМ) недостоверны (р>0,05).
Результаты ростовых свойств на средах из ФГСБ с добавлением аммония селеновокислого и ЭСРМ были удовлетворительными: для штамма 33155-150±11,4 и 140± 12,8 типичных колоний, а для штамма 33152140±2,9 и 159±6,2 колоний диаметром до 2 мм соответственно. При добавлении к этим основам других стимуляторов вырастали очень мелкие колонии для обоих тест-штаммов легионелл.
На контрольном легионелбакагаре вырастало для штамма 33155-100±7,1, а для штамма 33152-105±5,3 колоний диаметром 1,5 мм через 72 часа культивирования, тогда как на агаре Хоттингера роста культур не определялось в течение 5 суток.
Таким образом, среда на ФГМС со стимуляторами не уступает по биологическим показателям легионелбака-гару и соответствует требованиям к контролю питатель-
КОНСТРУИРОВАНИЕ И СРАВНИТЕЛЬНАЯ
ХАРАКТЕРИСТИКА НОВЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ЛЕГИОНЕЛЛ
Л. С. КАТУНИНА, Т. В. ТАРАН, И. А. БАЗИКОВ,
А. В. ТАРАН, Э. М. ХАТКОВ, А. Л. ГУКАСЯН
В работе представлены основные характеристики новых недорогих экспериментальных питательных сред для культивирования легионелл. Показано, что предлагаемые питательные среды обладают хорошими ростовыми свойствами и отвечают требованиям МУ 3.3.2.2124-06 к питательным средам для выделения и культивирования возбудителя легионеллеза по биологическим показателям.
Ключевые слова: питательные среды, легионел-лы, ростовые качества, культивирование
ных сред для культивирования и выделения возбудителя легионеллеза по биологическим показателям [2].
Заключение. Дешевая питательная среда, приготовленная на ФГМС со всеми взятыми в эксперимент стимуляторами, по показателям чувствительности, эффективности и критерию пригодности соответствует требованиям и не уступает легионелбакагару [2]. Это является основанием для дальнейшего изучения указанных основ и стимуляторов с целью конструирования коммерческой элективной плотной питательной среды для выделения легионелл с оформлением соответствующей документации.
Литература
1. Борисов, Л. В. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Л. В. Борисов. - М. : Медицинское информационное агенство, 2005. - С. 428-430.
2. Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза: Методические указания. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007.-35 с.
3. Патент РФ № 2283347, 10.09.2006. - Бюл. № 25.
4. Темежникова, Н. Д. Легионеллезная инфекция /
Н. Д. Темежникова, И. С. Тартаковский. - М.:ОАО «Издательство «Медицина», 2007. - 264 с.
DESIGNING AND THE COMPARATIVE
CHARACTERISTICS OF THE NEW NUTRIENT MEDIUMS FOR CULTIVATION OF LEGIONELLAS
KATUNINA L. S., TARAN T. V., BAZIKOV I. A.,
TARAN A. V., KHATKOV E. M., GUKASYAN A. L.
In the paper the basic characteristics of new inexpensive experimental nutrient mediums for cultivation of legionellas are submitted. It is shown, that the offered nutrient mediums have good growth properties and meet the requirements of МУ 3.3.2.2124-06 to nutrient mediums for isolation and cultivation of the activator of legionellas by biological parameters.
Key words: nutrient mediums, legionellas, cultivation
© Коллектив авторов, 2011 УДК 616.8-009.7+615.03
ВЛИЯНИЕ ДИОСМИНА И ГЕСПЕРИДИНА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ МИОКАРДА КРЫС ПРИ ОСТРОМ СТРЕССОРНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ
А. В. Крикова, В. Е. Новиков, А. С. Новиков Смоленская государственная медицинская академия
Крикова Анна Вячеславовна, кандидат фармацевтических наук, доцент, заведующая кафедрой управления и экономики фармации Смоленской государственной медицинской академии, соискатель кафедры фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС Смоленской государственной медицинской академии, тел.: 89203086979; e-mail: [email protected].
Новиков Василий Егорович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС Смоленской государственной медицинской академии; тел.: (4812) 554722.
Новиков Александр Сергеевич, кандидат медицинских наук, доцент кафедры патологической анатомии Смоленской государственной медицинской академии, тел.: 89516900315.
Влияние стрессорных факторов на организм приводит к нарушению обмена веществ в органах и тканях, потенцировании многих заболеваний нервной, эндокринной, иммунной и сердечно-сосудистой систем организма [4]. Все перечисленные патологические процессы прямо или косвенно сопровождаются активацией свободнорадикального окисления липидов в биологических мембранах клеток со снижением функциональных возможностей органов. Оксидативный стресс приводит к окислительной инактивации NO, эндотелиальной дисфункции, нарушениям
потокозависимой дилатации артерий [5, 6]. Пе-рекисное окисление липидов (ПОЛ), в частности, играет ведущую роль в патогенезе стрессорного повреждения миокарда и связанных с ним аритмий. В связи с этим фармакологически активные вещества с антиоксидантными и антигипоксант-ными эффектами многие авторы рассматривают как перспективный класс противоаритмических и антистрессорных соединений [1]. К таким веществам можно отнести полифенольные соединения - диосмин и гесперидин. Доказано, что флавоноиды, в том числе диосмин и гесперидин, оказывают выраженное антиоксидантное, антиги-поксическое, мембраностабилизирующее, анти-ульцерогенное, антистрессорное действие. Поскольку нарушения микроциркуляции и процессы ПОЛ являются пусковым механизмом повреждения клеток при ишемических, токсических, стрес-сорных и некоторых других воздействиях, можно предположить, что диосмин и гесперидин будут обладать кардиопротективными свойствами.
Целью исследования явилось изучение влияния диосмина и гесперидина на морфо-функциональное состояние миокарда крыс при остром иммобили-зационно-болевом стрессе.
Материал и методы. Эксперименты выполнены на наркотизированных хлоралгидратом (300 мг/кг внутри-брюшинно) 42 крысах обоего пола линии Вистар массой 180-200г. Животные содержались в условиях вивария, согласно правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ Р 50258-92, ГОСТ З 51000.3-96 и 51000.4-96) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях.
Исследовались индивидуальные вещества полифе-нольной структуры: диосмин из травы вики изменчивой; гесперидин из кожуры цитрусовых (соединения предоставлены сотрудниками кафедры органической химии Пятигорской ГФА, зав. кафедрой профессор Э. Т. Оганесян). Учитывая, что индивидуальные флавоноиды плохо растворимы или трудно растворимы в воде, растворы готовили, предварительно суспендировав их с лецитином. Вводили диосмин и гесперидин внутриже-лудочно путем принудительного зондирования в дозе 30 мг/кг массы тела животного. В качестве препаратов сравнения использовали: милдронат - 100 мг/кг ци-тофлавин - 1,5 мл/кг мексидол - 50 мг/кг. Милдронат и мексидол вводили внутрижелудочно, цитофлавин -внутрибрюшинно. Диосмин, гесперидин и препараты сравнения вводили профилактически в течение семи дней до воспроизведения стресса.
В экспериментах использовали модель острого иммобилизационно-болевого стресса. Животных фиксировали за конечности на спине и за дорсальную шейную кожную складку длительностью 24 часа.
Строфантиновую модель аритмии индуцировали через час после острого стресса путем введения в яремную вену крысам строфантина К в дозе 0,5 мг/кг [2, 3]. Электрокардиограмму регистрировали во II стандартном отведении на портативном одноканальном ЭКГ аппарате Heart Mirror 1 IKO. За критерий антиаритми-ческого эффекта принимали уменьшение (в процентах) случаев летальной фибрилляции и процент предотвращения изучаемым веществом гибели животных.
После декапитации сердца животных забирали для морфо-гистологического исследования, миокард фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, подвергали стандартной гистологической проводке с заливкой в парафин и изготовлением срезов
толщиной 5-7 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. С микропрепаратов готовили микрофотограммы, используя цифровую видеокамеру и программу «Видеотест - морфология» версии 5.0.
Данные обрабатывали методом вариационной статистики с применением критериев Стьюдента (t) и X2 при 5 % уровне значимости [2, 3]. Статистическая обработка проведена на персональном компьютере с использованием программы «MS Excel». Математическая обработка включала расчеты средних арифметических значений (М); ошибок средних арифметических (±m).
Результаты и обсуждение. Результаты изучения антиаритмической активности диосмина и гесперидина отражены в таблице.
В данной постановке эксперимента введение строфантина К интактной группе животных вызывает нарушения сердечного ритма в 33,3 % случаев, в 50 % случаев - экстрасистолию и необратимую остановку сердца через 70 мин. Продолжительность жизни контрольных животных до необратимой остановки сердца при введении аритмогенного фактора достоверно снизилась относительно интактных крыс. После перенесенного стресса у контрольных животных нарушения сердечного ритма и гибель животных отмечены в 100 % случаев. В группах животных, которым осуществляли профилактическое введение диосмина и гесперидина в условиях стресса, введение строфантина К не приводило к гибели, развитие аритмий (экстрасистолий) отмечалось в 16,7 % случаев. Препарат сравнения милдронат в условиях стресса крыс на фоне введения аритмогенного фактора также не приводил к гибели животных, развитие аритмий регистрировалось в 33,3 % случаев. В группе крыс, защищенных цитофлавином, при введении аритмогенного фактора после стресса увеличивалось количество выживших животных (83,3 %), аритмии развивались в 33,3 % случаев, в том числе экстрасистолии - в 50 % случаев. Защитное действие мексидола при введении строфантина в условиях стресса заключалось в отсутствии экстрасистолий, аритмии развивались в 16,7 % случаев, процент выживших животных составил 83,3.
Таблица
Влияние диосмина и гесперидина на течение аритмии, вызванной внутривенным введением строфантина К у крыс после острого иммобилизационно-болевого стресса
Изучаемое вещество Время (мин) жизни до необратимой остановки сердца Время (мин) восстановления синусового ритма у выживших крыс
Интакт 73,3±5,7 (n=3) 86,6±20,8(п=3)
Контроль-острый иммобилизационно-болевой стресс 100,0±12,6* (n=6) 0
Диосмин (30 мг / кг) 0 103,3±28,0 (п=6)
Гесперидин (30 мг / кг) 0 91,7±30,6 (п=6)
Милдронат (100 мг / кг) 0 135,0±90,7 (п=6)
Цитофлавин (1,5 мл / кг) 130,0 (n=1) 76,0±11,4 (п=5)
Мексидол (50 мг / кг) 125,0 (n=1) 81,2±26,7 (п=5)
Примечание: достоверно по отношению к интактной группе животных; п-количество животных в группе.
При изучении гистологических препаратов структура сердечной мышцы интактных крыс не нарушена. Пучки кардиомиоцитов на продольном срезе расположены параллельными пластами, перемежающимися с тонкими интерстициальными прослойками рыхлой
соединительной ткани. Клетки миокарда одинакового диаметра, поперечная исчерченность цитоплазмы четкая. Ядра кардиомиоцитов расположены в центре клетки, не смещены, овальной формы, с четкой мембраной. Патологических включений в цитоплазме нет. Соотношение мышечной и соединительной ткани -в пределах физиологической нормы. Наблюдается некоторое полнокровие сосудов.
В миокарде животных, подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу, ядра некрупные, вытянутые, с мелкоглыбчатым хроматином. Поперечная исчерченность нечеткая. Достаточно выражены признаки фрагментации кардиомиоцитов - мышечные волокна истонченные, извитые, местами надорванные, с очагами миоцитолиза и диапедезных кровоизлияний. Сосуды микроциркуляторного русла неравномерно расширены, переполнены эритроцитами - как отдельно лежащими, так и агрегатами, то есть отмечаются явления стаза. Наблюдается нерезко выраженный интерстициальный отек, более выраженный периваскулярно.
При микроскопическом исследовании миокарда животных, подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу и введению диосмина в дозе 30 мг/ кг, клетки четко дифференцированы, сохранена поперечная исчерченность, периваскулярного отека и инфильтрации нет. Явления фрагментации практически отсутствуют (рис. 1).
Рис. 1. Миокард левого желудочка сердца крысы (острый иммобилизационно-болевой стресс + диосмин). Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400
В группе животных, подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу и введению ге-сперидина в дозе 30 мг/кг, микроскопическая картина идентична картине при введении диосмина - клетки четко дифференцированы, структура их сохранена, диффузного интерстициального и периваскулярного отека, фрагментации кардиомиоцитов нет (рис. 2).
При микроскопическом исследовании миокарда животных, подвергшихся острому иммобилиза-ционно-болевому стрессу и введению мексидола в дозе 50 мг/кг, морфологическая картина аналогична таковой после введения диосмина и гесперидина -клетки четко дифференцируются, признаков деструкции миоцитов, явлений отека нет.
В миокарде животных, подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу и введению ци-тофлавина в объеме 1,5 мл/кг, поперечная исчерчен-ность клеток сохранена, они четко дифференцируются, отеков, очагов деструкции кардиомиоцитов нет.
В группе животных, подвергшихся острому иммобилизационно-болевому стрессу и введению милдроната в дозе 100 мг/кг, в миокарде при микро-
скопическом исследовании мышечные волокна очаго-во истончены, имеется слабо выраженный межмышеч-ный отек, скудная периваскулярная лимфоцитарная инфильтрация. Структура клеток и мышечных пучков сохранена.
Рис. 2. Миокард левого желудочка сердца крысы (острый иммобилизационно-болевой стресс+гесперидин).
Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400
Таким образом, при остром иммобилизационно-болевом стрессе у крыс диосмин и гесперидин оказывают антиаритмическое действие на модели стро-фантиновой аритмии сердца. В миокарде отмечаются явления фрагментации кардиомиоцитов с мелкими очагами миоцитолизиса, нарушениями микроциркуляции. Применение гесперидина и диосмина нивелирует выраженность стресс-индуцированного повреждения, что проявляется в отсутствии признаков фрагментации, миоцитолиза, стазов и диапедеза эритроцитов. В сравнении с морфологическими изменениями при использовании мексидола, цитофлавина и милдроната кардиопротективный эффект сопоставим, при этом можно отметить лучшие эффекты гесперидина и диосмина, в сравнении с милдронатом, в отношении реакции микроциркуляторного русла, что проявляется в меньшей выраженности явлений стаза и интерстициального отека.
Выводы
1. Диосмин и гесперидин при профилактическом введении в условиях острого иммобилиза-ционно-болевого стресса оказываюткардиопро-тективное действие на модели строфантиновой аритмии сердца.
2. Исследование гистологических препаратов миокарда левого желудочка сердца крыс после профилактического введения диосмина и гесперидина в условиях острого иммобилизационно-болевого стресса выявило сосудистые изменения и признаки повреждения кардиомиоцитов, которые, в отличие от данных других экспериментальных групп, носят менее выраженный, очаговый характер.
Литература
1. Меерсон, Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам / Ф.З. Меерсон, М.Г Пшенникова. - М.: Медицина, 1984. -270 с.
2. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под редакцией В.П. Фисенко. - Москва, 2000. - 378 с.
3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармаколо-
гических веществ / Под общей редакцией члена-корреспондента РАМН, профессора Р.У Хабриева. - 2-изд., перераб. и доп. - М. : ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.
4. Физиология и патофизиология сердца: Пер. с англ. / Под ред. Н. Сперелакиса: В 2 т. - М. : Медицина, 1988. - 624 с.
ВЛИЯНИЕ ДИОСМИНА И ГЕСПЕРИДИНА
НА МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ
СОСТОЯНИЕ МИОКАРДА КРЫС
ПРИ ОСТРОМ СТРЕССОРНОМ ВОЗДЕЙСТВИИ
А. В. КРИКОВА, В. Е. НОВИКОВ, А. С. НОВИКОВ
Изучено влияние диосмина и гесперидина на морфо-функциональные особенности миокарда при остром иммобилизационно-болевом стрессе у крыс. Эксперименты выполнены на наркотизированных животных обоего пола массой 180-200 г. Диос-мин и гесперидин вводили внутрижелудочно в дозе 30 мг/кг массы тела. Препараты сравнения: милдро-нат - 100 мг/кг, цитофлавин - 1,5 мл/кг, мексидол -50 мг/кг. Все вещества вводили профилактически в течение семи дней до воспроизведения стресса у крыс и введения строфантина. Установлено, при остром иммобилизационно-болевом стрессе у крыс диосмин и гесперидин оказывают антиаритмическое действие на модели строфантиновой аритмии сердца. В миокарде отмечаются явления фрагментации кардиомиоцитов с мелкими очагами миоцитолизи-са, нарушениями микроциркуляции. Применение гесперидина и диосмина нивелирует выраженность стресс-индуцированного повреждения, что проявляется в отсутствии признаков фрагментации, мио-цитолиза, стазов и диапедеза эритроцитов.
Ключевые слова: диосмин, гесперидин, антиоксиданты, антигипоксанты, кардиопротекторы, аритмия, стресс
5. Шевченко, О.П. Ишемическая болезнь сердца / О.П. Шевченко, О.Д. Мишнев, А.О. Шевченко, О.А. Трусов, И.Д. Сластникова.- М.: Реафарм, 2005. - 416 с.
6. Moncada, S. The L-arginine-nitric oxide pathway /
S. Moncada, A. Higgs. - N. Engl. J. Med. - 1993. -Vol. 329. - P. 2002-2012.
EFFECT OF DIOSMIN AND HESPERIDIN
ON MORPHO-FUNCTIONAL STATE
OF MYOCARDIUM
OF RATS AT ACUTE STRESS ACTION
KRIKOVA A. V., NOVIKOV V. E., NOVIKOV A. S.
The effect of diosmin and hesperidin on morpho-functional features of infarction in acute immobilization-pain stress in rats is studied. The experiments were performed on anesthetized animals of both sexes weighing 180-200g. Diosmin and hesperidin was administered intraperitoneally at a dose of 30 mg/kg of body weight. Comparators: mildronat - 100 mg/kg, cytoflavin - 1.5 ml/ kg, mexidol - 50 mg/kg. All substances were administered prophylactically for seven days prior to the stress in rats and strophanthin administration. It is determined that at acute immobilization-pain stress in rats diosmin and hesperidin give antiarrhythmic action on the model of strophanthin cardiac arrhythmia. In the myocardium the phenomenon of fragmentation of cardiomyocytes with small foci of myocytolysis, impaired microcirculation is observed. The use of hesperidin and diosmin eliminates the expression of stress-induced damage, which manifests itself in the absence of signs of fragmentation, myocytolysis, stases and diapedesis of red blood cells.
Key words: diosmin, hesperidin, antioxidants,
antihypoxants, cardioprotectors, arrhythmia, stress
© М. П. Хадарцева, 2011 УДК 615.9:616.61-616.391.0
ВЛИЯНИЕ ВНУТРИЖЕЛУДОЧНОГО И ПОДКОЖНОГО ВВЕДЕНИЯ СУЛЬФАТА КАДМИЯ НА ЭЛЕКТРОЛИТО-ВОДОВЫДЕЛИТЕЛЬНУЮ ФУНКЦИЮ ПОЧЕК ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГИПЕРВИТАМИНОЗЕ D
М. П. Хадарцева Северо-Осетинская государственная медицинская академия
Обогащение природной среды кадмием происходит в результате техногенной деятельности человека. Основными источниками загрязнения среды соединениями кадмия являются добыча и металлургия цинка, электронная и полупроводниковая промышленность, суперфосфатные удобрения, сжигание твердого и жидкого топлива (содержание кадмия в каменном угле и нефти соответственно 0,2-2 и 0,001-2мг на 1 кг топлива) [1].
Хадарцева Мадина Петровна, аспирант кафедры нормальной физиологии Северо-Осетинской государственной медицинской академии, тел. (8672)537667, 89194273071; e-mail: [email protected].
Кадмий является типичным политропным химическим агентом, способным взаимодействовать с многими структурами клетки и вызывать спектр негативных биохимических сдвигов: от ингибирования активности отдельных ферментов и ферментативных ансамблей до повреждения мембранных структур [3,5]. Одним из механизмов патологического действия кадмия на организм является его способность замещать кальций в специфических физиологических процессах. Так, кадмий вызывал усиление экскреции кальция почками и изменял процессы ремоделирования костной ткани [6]. Наличие взаимосвязи между этими двумя элементами показано на самых различных уровнях и в самых различных органах - желудочно-кишечном тракте,
